文摘
痛苦的记忆被认为是endopathic因素潜在的顽固的慢性疼痛。我们之前的研究表明,电针刺激(EA)可以减轻检索的痛苦记忆。本研究旨在观察EA之间的不同的效果和消炎痛(一种nonsteroid消炎药,非甾体类抗炎药)在大鼠疼痛内存模型。探讨蛋白激酶A (PKA)的关键作用在痛苦的记忆中,PKA抑制剂microinjected进前扣带皮层(ACC)在大鼠模型。我们进一步研究了环磷酸腺苷的角色(营),PKA,营地反应元件结合蛋白(分子),和营地/ PKA /分子通路痛苦记忆探索潜在的分子机制。结果表明,EA减轻痛苦记忆的检索而吲哚美辛失败了。Intra-ACC显微镜下注射的PKA抑制剂阻塞发生的痛苦记忆。EA减少了营地的激活、PKA、分子和营地的coexpression水平/ PKA和PKA / ACC的痛苦记忆分子模型大鼠,但消炎痛失败了。目前发现的关键角色在ACC PKA检索的痛苦记忆。我们建议EA在痛苦的记忆中适当的机制可能是由于部分抑制营地/ PKA / EA的分子信号通路。
1。介绍
痛苦的记忆是慢性疼痛的重要发病机制之一,参与sensory-discriminative,情绪情感和认知评价疼痛(1,2]。这是一个疼痛的疼痛特点是痛觉过敏和异常性疼痛,导致形成的记忆和痛苦的负面情绪在大脑中(3- - - - - -6]。这个过程包括收购、整合和检索的痛苦(7,8]。疼痛的感觉神经元获取和传输信号到大脑中的相关核,包括前扣带皮层(ACC),前额叶皮层、海马、杏仁核和岛叶皮质(1,9- - - - - -11),形成长期记忆的反复和持续的刺激的情感环境短期记忆。研究人员建议,环磷酸腺苷的激活(营),蛋白激酶A (PKA),营反应元件结合蛋白(分子),及其相关信号通路可以调节长期突触可塑性调节记忆存储和检索(12,13]。然而,一个清晰的理解的痛苦记忆通路ACC仍然缺乏。
营/ PKA /分子信号通路已被证明是至关重要的在记忆形成和疼痛调制(13- - - - - -15]。神经元突触可塑性的分子、神经解剖学的验证和功能水平在整个neuroaxis针对持续性痛(1]。营地的激活/ PKA /分子信号通路可以提高识别函数(16]和产生抗抑郁的作用[17)通过结构的增强海马的突触可塑性(15,18]。ACC是一个编码疼痛厌恶,因此导致疼痛调制(19,20.]。正如我们在以前的研究中,发现分子的磷酸化(p-CREB)结果在ACC痛苦记忆深刻的增加(21]。因此,我们假设痛苦记忆的途径诱发逐渐激活营地,PKA,分子在ACC和疼痛的刺激后,更持久的形式的潜在长期中枢敏化促进长期记忆形成穿过营地/ PKA /分子信号通路。
由于日益增长的重要性痛苦记忆在慢性疼痛的研究中,有必要确定措施,减轻疼痛的记忆。消炎痛常被用来治疗炎症性疼痛。然而,它的使用受到限制由于其副作用和可怜的功效。到目前为止,很少有研究吲哚美辛在痛苦的记忆中。电针刺激(EA),一种与电子针灸刺激,被广泛应用在临床设置作为慢性疼痛的止痛剂。我们以前的工作表明,EA治疗可以减轻痛苦记忆的检索(21]。虽然有些疼痛调制机制的EA镇痛的影响和吲哚美辛已经证明,他们的痛苦记忆的潜在机制仍不清楚。
在这项研究中,我们建立了一个动物疼痛内存模型使用两个注射角叉菜胶(21,22]。动物与EA和吲哚美辛治疗研究不同的影响,探索机制EA在痛苦的记忆中。我们的数据证实的有利效应的影响,并进一步提出,EA部分通过抑制营地/ PKA /分子信号通路。
2。材料和方法
2.1。主题
男性成人Sprague-Dawley老鼠(中英SIPPR / BK实验室。动物有限公司、上海、中国)重180 - 200克(6周)保持在控制室温(22°C)与12 h明暗周期和免费使用啮齿动物食物和水。所有动物实验根据美国国立卫生研究院的指导的实验室动物保健和使用(21,23]。
2.2。疼痛内存模型
如前所述(21),疼痛两个注射角叉菜胶引起的内存模型被选中来完成这项研究。第一次注射角叉菜胶放在左边的后爪足底表面通过皮下注射0.1毫升的2%角叉菜胶(西格玛化工有限公司,圣路易斯,密苏里州,美国)诱导急性炎性疼痛。14天之后恢复期,疼痛后左爪是恢复的价值。然后第二次注射角叉菜胶放入正确的后爪引起另一个痛苦。此时,左后爪,没有收到第二次注射角叉菜胶,似乎表现出疼痛的痛觉过敏。在目前的研究中,左后痛觉过敏的爪子被视为痛苦记忆的检索(21,22]。
2.3。实验设计
三个实验的设计和管理研究EA的影响和吲哚美辛在痛苦的记忆中,探索潜在的机制与营地/ PKA /分子信号通路。
在实验,所有老鼠被随机分为5组(/组):控制、模型、印度(消炎痛),EA,虚假的EA组。盐水(0.9%)、卡拉胶(2%)两次注入后爪子在14 d间隔。挪作他用的老鼠,EA和虚假的EA组服用消炎痛,EA和虚假的EA(图1)。这个实验的目的是观察不同效果的疗法在痛苦的记忆中通过检测疼痛行为反应。
在实验(图2),对ACC的部分大鼠植入不锈钢引导插管和分成2组(/组):模型+汽车集团(植入老鼠处理车辆)和模型+ H89(植入老鼠PKA抑制剂H89处理)。执行这个实验确定的角色PKA痛苦记忆的检索和EA是否也有类似的效应与H89检索痛苦记忆的部分。
在实验的潜在机制,探索EA的不同影响,消炎痛,和虚假的EA在痛苦的记忆中,正确的ACC的老鼠实验的组织都准备好了。分组是一样的实验。四10每组大鼠被进一步用于double-immunofluorescence标签和六人用于免疫印迹分析。
2.4。电针刺激
没有麻醉,治疗是应用于大鼠的EA组。在一项研究21),我们发现在双边EA治疗穴位“Zusanli”(ST36)和参比电极(差1厘米的“Zusanli”)有效影响检索的痛苦记忆。因此,我们使用相同的方法包括在这项研究穴位和EA参数。与不锈钢的针灸穴位的针刺(直径0.25毫米13毫米长度),汉斯穴位电刺激神经刺激器(lh - 202 h;华为有限公司,北京,中国)。EA的参数设置如下:2/100 Hz频率2赫兹和100赫兹之间自动转换为3 s每个刺激;方波电流输出(脉冲宽度:0.2 ms);马的强度范围1 - 2调整当地动物的肌肉收缩。治疗是在5 h, 1 - 5 d在第一次注射角叉菜胶。确认的真实性EA的影响,薄不锈钢针灸针(直径0.18毫米×13毫米长度)穿假的皮下穴位EA动物没有电刺激。的动物在他们的头上戴着黑色头罩镇静作用在EA的政府。我们没有观察到压力的迹象。为了保持一致性,模型和对照组的老鼠也戴着黑色头罩在同一时间。
2.5。行为疼痛测试
机械触诱发痛,评估的爪子撤军阈值(佩恩表的编制者),被用来评估疼痛反应。UGO-Basile动态足底触觉计(尤格37450年,米兰,意大利),用一种改进的校准·冯·弗雷丝方法(21,24,25),是由一个训练有素的侦探是盲目的实验配置。一个测量是在5分钟的间隔,总共5测量,最后4平均为佩恩表的编制者的价值。所有行为疼痛测试9点及15:00之间进行。所有大鼠进行了习惯化的环境和测试过程2天前正式实验。
2.6。药品监督管理局
H89(σ),PKA抑制剂,溶解在二甲亚砜(DMSO)和水(10μ米,DMSO溶液和水的比例是1:999)。实验大鼠模型中+ H89集团收到H89浓度的10μ通过intra-ACC米管子和大脑显微镜下注射。具体时间一样的EA管理实验。吲哚美辛(Yun彭有限公司,山西、中国)溶解在0.9%盐水和摄取了胃内的管理(3毫克/公斤)的6倍。具体的摄入时间一样的EA管理时代。
2.7。Intra-ACC管子和显微镜下注射
PKA抑制剂注入,intra-ACC管子和显微镜下注射执行之前报道(20.,26]。简单地说,老鼠在试验与7%水合氯醛麻醉(500毫克/公斤,腹腔内)和固定在一个立体定位器(RWD、生命科学有限公司,深圳,中国)。曝光后在前囱头骨,不锈钢引导插管(长约3毫米)植入根据以下坐标正确的ACC:前囱前3.2毫米,0.6毫米的右边中线,和1.5毫米以下的头骨(11,21]。然后,套管固定在头骨3螺丝和牙科丙烯酸。匕首0.5毫米超过套管插入保持它在显微镜下注射。所有的老鼠被允许至少7天才能恢复。
的intra-ACC显微镜下注射通过植入管理引导插管使用注射针(3.5毫米长),由聚乙烯管连接安装在一个100年μL汉密尔顿微量调节注射器。药物溶液的体积可以注入到ACC的老鼠模型+ H89组1μL和药物灌注的持续时间1分钟。控制,车辆包含DMSO溶液注入ACC的老鼠模型中+汽车集团。
2.8。组织准备
在18天,行为疼痛测试后,老鼠用10%水合氯醛麻醉(350毫克/公斤,腹腔内)和通过心脏穿刺灌注0.9%生理盐水。正确的ACC的老鼠被立即组织免疫印迹分析。随后,与4%多聚甲醛灌注后,整个大脑的其他老鼠收获和由浸没在同一个固定剂固定后24 h和脱水15% - -30%蔗糖梯度为免疫荧光24小时。
2.9。Double-Immunofluorescence标签
免疫荧光被用来评估水平的阵营,磷酸化的PKA (p-PKA)和p-CREB表达正确的ACC。此外,我们使用double-immunofluorescence标签来展示上述蛋白质之前的相关性描述(21]。冠状切片30μ米厚度在3.2毫米,其中包含来自前囱ACC与0.01 PB盐水洗(PBS, pH值7.4)和屏蔽5%山羊血清。组织部分在一夜之间被孵化与一只兔子anti-PKA(磷T197)抗体(p-PKA, 1: 200;美国Abcam,波士顿,MA)和鼠标anti-cAMP抗体(1:1000;Abcam)或鼠标anti-phospho-CREB (Ser133)多克隆抗体(p-CREB, 1: 200;美国微孔,Billerica的)。在PBS冲洗后,部分被孵化goat-anti-mouse Alexa萤石488 -共轭二次抗体(1:200;杰克逊免疫实验室、西树林,PA,美国)和一只山羊anti-rabbit Alexa萤石594 -共轭二次抗体(1:200;Abcam)。尼康A1R荧光信号检测的激光扫描共焦显微镜。阳性细胞数,分析了NIS AR软件元素。
2.10。免疫印迹
免疫印迹是用于检测蛋白表达水平的营地,p-PKA, p-CREB ACC的权利。组织要称重和均质里帕缓冲区(Beyotime P0013B、海门、江苏、中国)加蛋白酶抑制剂。离心后,BCA蛋白质分析工具包(Beyotime P0012S、海门、江苏、中国)是用来确定蛋白质的浓度。蛋白质样品(20μ从每组g) 10% sds - page分离和转移到聚偏二氟乙烯膜(Bio-Rad、大力神、钙、美国)。细胞膜被封锁在5%脱脂牛奶孵化与主要抗体:兔子anti-p-PKA (1: 5000;Abcam),兔子anti-p-CREB (1: 1000;微孔),兔抗β肌动蛋白(1:5000;Abcam)。然后,膜与二次孵化anti-rabbit HRP-conjugated IgG抗体(1:20000年,Abcam)。免疫反应性的乐队被使用一个可视化Immun-Star™合化学发光工具包(Bio-Rad)。每个区间的相对强度β肌动蛋白是衡量ImageQuant拉斯维加斯4000系统(通用电气医疗集团、日野、日本)和分析了ImageQuant TL软件(版本7.0,通用电气医疗集团)。
2.11。统计分析
数据表示为±SEM手段。比较不同组之间由单向、重复测量方差分析(方差分析)。事后分析,最不显著差异(LSD)和Dunnett测试被用于平等或不平等的差异,分别检查的方差的同质性测试。比较两组独立样本评价测试或paired-sample测试。所有统计分析被认为是重要的。
3所示。结果
3.1。电针刺激减轻痛苦记忆的检索模型大鼠
痛苦的内存模型,我们使用在这个实验中被基森et al。22在之前的实验中,已经成功地应用21]。佩恩表的编制者被发现后14 d间隔两个注射角叉菜胶分离的实验。首先,我们测量了佩恩表的编制者在第一次注射时间点观察EA在急性炎性疼痛的影响。正如所料,所有的组的基线值相似。4小时后注射角叉菜胶,佩恩表的编制者离开后爪的所有组除了控制与对照组相比显著降低()。治疗后,5 h和1 - 5 d后第一个连续注射角叉菜胶,佩恩表的编制者的左后爪EA和印度尼西亚组显著增加在3 d、5 d较模型组()。两组之间没有显著差异。EA组的佩恩表的编制者也与虚假的EA组相比显著增加点(5 d的时候)。与基线值相比,模型中的每个时间点的佩恩表的编制者,挪作他用,EA和虚假的EA组显著减少(),除了在EA和印度尼西亚组(图5 d的时间点3(一个))。noninjected(右)后爪显示正常和稳定水平的佩恩表的编制者值和治疗在同一时间点(图3 (b))。
(一)
(b)
(c)
(d)
接下来,我们调查的镇痛效应的preadministration EA在痛苦的记忆中通过记录左边的佩恩表的编制者在第二次注射时间点后的爪子。注意,所有组的佩恩表的编制者14 d后回到基线值区间。图3 (c)呈现不同的变化的佩恩表的编制者noninjected 5组的后爪(左)4 h, 1 d, 2 d和3 d在第二次卡拉胶注入正确的后爪。对照组的值仍然正常,而模型组表现出深刻的下降从一维到三维时间点与对照组相比)。这被认为是痛苦记忆的检索。然而,佩恩表的编制者在EA组没有降低和维护水平与对照组相似。来自印度和虚假的EA组的值也降低了。与模型相比,挪作他用,虚假的EA组,EA组显著增加的佩恩表的编制者3 d时间点()。与模型组的基线值相比,减少了佩恩表的编制者在1到3 d(观察)。类似的下降值出现在2 d和3 d挪作他用,虚假的EA组与基线值()。然而,没有明显差异值在不同的时间点在EA组。因为没有干预在第二个时间点注射,注射后爪(右)的模型中,挪作他用,EA和虚假的EA组显示显著降低佩恩表的编制者在注射后4 h值直到3 d与对照组相比,他们分开的基线值()。EA的preadministration没有影响佩恩表的编制者与模型组相比(图3 (d))。
3.2。Intra-ACC显微镜下注射的PKA抑制剂阻塞发生的痛苦记忆
关键作用的阐明PKA痛苦记忆的检索,以及探索EA治疗的潜在机制,PKA抑制剂(H89)被交在ACC intra-ACC管子和显微镜下注射。痛苦的内存模型与车辆集团成立H89组与对照组比较。实验的过程是类似的:痛苦记忆模型成立的两组老鼠和随后PKA抑制剂干预在同一时间点与EA治疗。如图4 (c),vehicle-injected老鼠面对痛苦的记忆通过减少佩恩表的编制者在左后爪3 d在第二次注射角叉菜胶管理到正确的后爪与基线相比()。H89显著抑制痛苦记忆的检索,增加佩恩表的编制者相比,该模型+汽车集团及其基线值()。在图4 (d),正确的后爪的佩恩表的编制者(第二次注射)H89-treated老鼠显示增加的3 d后,卡拉胶注入()。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.3。电针刺激减少了营地的激活、PKA,分子在ACC模型大鼠
它已经表明,营地/ PKA /分子信号通路疼痛[至关重要14,27)和记忆形成ACC (26),通过大脑神经突触可塑性可能发生。探索不同效果的EA和吲哚美辛在营地/ PKA /分子信号通路在痛苦的记忆中,我们首先检查了营地的变化,p-PKA, p-CREB蛋白表达分别在ACC通过免疫荧光和免疫印迹分析。cAMP-positive细胞的数量模型组与对照组相比显著增加()。治疗后与EA、消炎痛或虚假的EA, EA治疗深刻阳性细胞的数量减少而的模型()、印度()和虚假的EA ()组。然而,吲哚美辛和虚假的EA治疗并没有显示出这种效果(数字5(一个)- - - - - -5 (b))。
(一)
(b)
因为休息PKA和贡献最小的突触可塑性分子学习和记忆过程,考察PKA和分子的磷酸化水平。成功建立后痛苦记忆,磷酸化的PKA (p-PKA)与对照组相比,模型组明显增加()。但不是消炎痛或虚假的EA治疗后,在EA组阳性细胞的数量减少与模型()和印度尼西亚()组(数据6(一)- - - - - -6 (b))。免疫印迹结果也显示类似的趋势(图p-PKA表达式6 (c))。定量分析表明p-PKA /的相对强度β肌动蛋白显著增加在模型组与对照组相比,图6 (d))。与模型组相比,EA组显示减少p-PKA /的相对强度β肌动蛋白(,图6 (d))。
(一)
(b)
(c)
(d)
分子是记忆形成的关键核转录因子13,15]。磷酸化的分子模型组与对照组相比增加(,数据7(一)- - - - - -7 (b))。磷酸化的正数(p-CREB)分子在EA组与模型(相比明显减少)、印度()和虚假的EA ()组。吲哚美辛和虚假的EA治疗也导致p-CREB值降低(,数据7(一)- - - - - -7 (b))。免疫印迹定量分析表明,p-CREB /的相对强度β肌动蛋白增加与对照组相比,模型组(),EA治疗显著降低p-CREB /强度β肌动蛋白与模型()和印度尼西亚()组(数据7 (c)- - - - - -7 (d))。
(一)
(b)
(c)
(d)
3.4。Colocalization营地和p-PKA降低了电针刺激ACC的内存模型大鼠疼痛
接下来,我们检测到的营地和p-PKA ACC colocalization阐明阵营是否与p-PKA coexpressed疼痛内存模型和coexpression EA治疗的不同效果。Double-immunofluorescence标签与p-PKA阵营和p-PKA表明阵营与ACC的痛苦记忆模型大鼠(图8(一个))。因为阵营存在于细胞质中,但p-PKA存在于细胞质和细胞核,colocalization发生在同一个平面上,但不是在同一站点(图8 (b))。的数量与阵营和p-PKA模型中增加,印度,和虚假的EA组与对照组相比)。减少数量的阵营与观察p-PKA coexpressed EA组与模型相比,印度,和虚假的EA组()(图8 (c))。
(一)
(b)
(c)
3.5。Colocalization p-PKA和p-CREB降低了电针刺激ACC的内存模型大鼠疼痛
如上所述,p-PKA colocalization和p-CREB ACC检测观察效果的EA的coexpression p-PKA p-CREB。双标签显示p-PKA和p-CREB coexpressed ACC的核(图9(一个))。分子被激活的核ACC通过营地/ PKA信号在痛苦的记忆。图9 (b)礼物p-PKA的重叠和p-CREB colocalization在同一平面和同一地点。的colocalization p-PKA和p-CREB的模型()、印度()和虚假的EA ()组与对照组相比增加了深远的。EA治疗减少p-PKA colocalization和p-CREB与模型()、印度()和虚假的EA ()组。
(一)
(b)
(c)
4所示。讨论
本研究的主要结论是,EA可以减轻痛苦记忆两个注射角叉菜胶引起的,而吲哚美辛未能这样做。此外,痛苦记忆可以被PKA堵塞,可能表明痛苦记忆之间的关系和营地/ PKA /分子通路。EA可以抑制营地/ PKA /分子信号通路部分,但非甾体抗炎药不能。据我们所知,这是迄今为止第一项研究中,调查了不同的效果和机制的EA和非甾体抗炎药在痛苦的记忆中。
疼痛知觉是由三维组成sensory-discriminative, affective-motivational, evaluative-cognitive调节。痛苦的伤害感受激活上述三维控制系统通过集成过程痛苦记忆的形成脑核。伤害感受的sensory-discriminative和affective-motivational信息可能导致深远的过程,如识别、记忆、注意力,期望,等等。还应该注意,疼痛的感觉可能会受到痛苦记忆的影响亦然(28]。通过自上而下的操纵,信息从evaluative-cognitive调制可能对别人造成的疼痛知觉3,29日]。其实,痛苦记忆是一个复杂的感知体验。
在诊所,医生发现,痛苦的记忆伴随着复杂区域疼痛综合征(6幻痛),(30.),术后疼痛31日),和慢性疼痛的悠久历史32]。探讨有效的治疗和潜在机制的痛苦记忆,affective-motivational和evaluative-cognitive疼痛已经越来越得到研究者的关注2,3,26,28,33]。EA,一个有效的疼痛治疗被认为是一个身心疗法,有一个广泛的数据支持其镇痛作用和调节情绪障碍和记忆能力2,23,34,35]。在先前的研究中,我们发现,可以缓解痛苦记忆的检索与EA预处理,这部分归因于p-CREB的表达下调表达21]。在目前的研究中,我们的研究结果已经确定不同影响的EA和非甾体抗炎药在痛苦的记忆中。痛苦记忆的检索证明了佩恩表的编制者降低uninjected后爪在第二次注射角叉菜胶。EA阻止痛苦记忆的检索通过展示不变佩恩表的编制者的价值观,而没有非甾体抗炎药治疗。建议的机制EA在痛苦的记忆中不同于非甾体抗炎药。EA干预不仅缓解急性炎性疼痛,但也抑制痛苦记忆的检索集成在高级中枢神经系统。因此,EA优于非甾体抗炎药治疗炎性疼痛伴随着痛苦的记忆。
它表明,神经元突触可塑性促进了内存和慢性疼痛36,37]。因此,我们推断,痛苦记忆密切相关的潜在机制与神经突触可塑性和长期中枢敏感化。一些研究报道,营地/ PKA /分子信号通路非常有助于神经元突触可塑性在疼痛和记忆的过程15,27,38]。作为一个至关重要的第二信使,阵营参与不同类型的学习和记忆过程和长期突触可塑性(17,39]。年前,人们发现水平的提高在感觉神经元确实导致瞬态增强发射器释放的感觉和运动神经元之间的突触连接,这被认为是短期和长期的生化机制的变化(13,40]。一些研究表明,信号通路参与阵营参与炎症和损伤敏感(41,42]。在这里,我们研究发现cAMP-positive ACC细胞数量的增加内存模型大鼠疼痛。此外,与吲哚美辛和虚假的EA干预相比,EA治疗显示出深刻的优势减少cAMP-positive细胞的数量。总的来说,这些结果表明,营地的作用相对上游蛋白质在痛苦记忆可以被EA治疗。
因此,这将是有趣的,以确定是否减少释放营地的EA治疗会影响下游流程。报告从先前的研究已经证明,营地介导几乎所有的行动通过PKA [13,40]。营地增加细胞时,cAMP-binding PKA被释放的调节亚基催化亚基的PKA,可以使磷酸化底物(43]。1980年一个类似的实验进行催化亚基的PKA直接注入感觉神经元,发现PKA也充分提高发射机释放突触可塑性在长期记忆(13,44]。PKA活性降低了磷酸化的抑制分子(26,45]。其他研究已经表明,不同程度的情感/恐惧记忆可以被PKA不足,营/ PKA信号通路对记忆的巩固(很重要15,39]。机械触诱发痛引起的炎症和神经损伤可以通过显微镜下注射抑制PKA抑制剂(19,46]。在实验(图4)的研究中,行为测试表明,PKA抑制剂减少机械触诱发痛痛苦记忆模型。在ACC PKA的蛋白表达,这项研究的结果表明,引起的疼痛记忆PKA的磷酸化,而EA抑制这一过程。PKA抑制剂的影响表明,EA PKA抑制剂治疗也有类似的效果。
营和PKA作为重要的蛋白质形成的内存(14,17]。关于短期记忆转换到长期记忆,新蛋白质的合成是必需的(13]。分子,细胞转录因子结合营响应元素,有一个关键的角色在内存中存储(9]。分子的激活也疼痛[密切相关10,47]。PKA和其他蛋白质的磷酸化后,功能分子的转录激活因子调节疼痛,长期记忆等生理和病理过程。证据从我们先前的研究表明,分子的磷酸化疼痛的ACC内存模型大鼠显著相关检索的痛苦记忆,和EA可以影响阳性细胞的数量和活性水平的p-CREB ACC (21]。在CFA-induced慢性疼痛大鼠,在ACC磷酸化分子水平增强,这表明突触可塑性的存在有关的记忆(48,49]。CREB-mediated对刺激的反应,而下游的营地/ PKA通路,可以被PKA调制及其磷酸化。活跃p-CREB水平确实在这个研究证明p-CREB检索的痛苦记忆中起着关键作用。吲哚美辛和虚假的EA阳性细胞的数量减少到一定程度上。然而,EA治疗活性细胞的数量减少,在更大程度上分子的磷酸化水平。
验证EA治疗痛苦记忆的影响通过营地/ PKA /分子介导的信号通路;的营地和p-CREB coexpression p-PKA ACC的评估double-immunofluorescence标签。我们的研究结果表明,营地和p-PKA coexpressed细胞,但不相同的网站,因为他们不同的分布。这个结果表明,持续增加阵营诱发更长的提高发射机释放在神经元和突触连接导致催化亚基的PKA成为激活和磷酸化13]。随后,p-PKA增加传递到细胞核,转录因子分子磷酸化,激活长时记忆的形成所需的基因表达(50]。从我们的研究显示图像的coexpression p-PKA在细胞核和p-CREB网站。我们的数据表明,大量的coexpressed p-PKA营以及p-CREB增加痛苦的内存模型中,即使在条件消炎痛或虚假的EA治疗,但是EA治疗可以逆转这种效果。总之,这些结果表明,EA镇痛的影响可能通过营地/ PKA /分子介导的信号通路,导致疼痛引起的异常性疼痛的记忆。
5。结论
这项研究首次表明,EA在一只老鼠疼痛的镇痛效果的内存模型不同于非甾体抗炎药。EA有优于非甾体抗炎药治疗慢性炎性疼痛伴随着疼痛的记忆。目前的发现进一步识别出PKA ACC痛苦记忆检索中起着至关重要的作用。我们建议EA在痛苦的记忆中适当的机制可能是由于部分抑制营地/ PKA /分子信号通路由EA。因此,EA可能是首选治疗慢性疼痛引起的疼痛记忆诊所。
相互竞争的利益
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
作者的贡献
小美邵和京太阳同样co-first作家这个工作。小美邵实验设计并执行协议,数据分析,和手稿写作。京太阳进行了动物实验,分子技术和数据分析和写的手稿和参与实验的设计。Yong-Liang江和刘Bo-Yi参与实验的设计,数据分析和论文的写作。最沈进行动物实验,免疫印迹和相关分析。王方方和Jia-Ling进行动物实验,免疫荧光和相关分析。吴Jun-Ying Du和圆圆参与实验和监督行为监测。Jian-Qiao方设计的研究中,本文所描述的实验协议执行,写论文的初稿。所有作者阅读和批准最终的手稿。
确认
这项研究得到了国家自然科学基金(81574056),中国浙江省自然科学基金(LY15H270009),特殊的财政资助中国博士后科学基金会(2016 t90552),浙江省重点科技创新团队(2013 td15),类通用金融的格兰特中国博士后科学基金会(2015 m580527)和项目支持,浙江省中国Medicine-Acupuncture &推拿治疗的关键学科。