穿心莲内酯刺激成年海马神经发生

摘要

穿心莲内酯(ANDRO)是一种labdane二萜类成分andrographis paniculata.因其抗炎特性而被广泛使用。我们最近确定，ANDRO是糖原合酶激酶-3的竞争性抑制剂β（GSK-3β)， Wnt/的关键酶β连环蛋白信号级联。由于这一信号通路调节成年海马的神经发生，我们评估了ANDRO是否刺激这一过程。与年龄匹配的对照组小鼠相比，用ANDRO治疗可增加2个月和10个月小鼠的神经前体细胞增殖和海马中未成熟神经元的数量。此外，ANDRO刺激新生齿状颗粒神经元数量增加。并在APPswe/PS1ΔE9阿尔茨海默病转基因小鼠模型中评价了ANDRO的作用。在这些小鼠中，ANDRO增加了齿状回的细胞增殖和未成熟神经元的密度。随着神经发生的增加，ANDRO诱导野生型和APPswe/PS1ΔE9小鼠海马区Wnt信号通路的激活β-catenin, GSK-3的非活性形式β和参与神经发生的Wnt靶基因NeuroD1。我们的研究结果表明，安德罗能刺激成年海马的神经发生，这表明该药物可以用于治疗影响神经发生的疾病。

1.介绍

androghrapholide（andro）是哈达替代萜类的主要成分之一andrographis paniculata.［1，2，一种在亚洲广泛使用的著名药用植物。ANDRO具有广泛的生物活性，包括抗炎作用[3.- - - - - -5也显示出神经保护特性[6，7］．最近，还确定Andro可防止神经病理学变化，并改善Alzheimer疾病的Appswe /PS1ΔE9小鼠模型中的空间记忆（AD）[8］．

关于Andro的作用机制，我们最近确定它直接抑制酶糖原合酶激酶-3β（GSK-3β) [9是Wnt/的关键酶β连环蛋白信号通路。Wnt信号通路是由Wnt配体与七通跨膜受体Frizzled结合而激活的，这可能会激活典型的Wnt/β-catenin信号传导途径或非甘露甘露苷β-不依赖连环蛋白的信号级联[10］．Wnt信号级联调节神经系统的发育，也是成人神经系统中重要的调节因子，调节突触接触、神经传递和可塑性的形成[11- - - - - -13］．此外，最近的研究表明，Wnt信号通路调节成年海马中新神经元的形成。14)，这一过程被称为成人神经发生。

成人神经发生主要发生在两个脑区，侧脑室壁的室下区和海马齿状回的粒下区[15，16］．在SGZ，位于颗粒细胞层(GCL)和门部之间的神经前体细胞增殖并产生神经母细胞，这些神经母细胞成熟为颗粒细胞，融入海马回路。这些新生神经元与海马可塑性、学习和记忆有关[17- - - - - -19］．SGZ的神经发生受Wnt/控制β-catenin信号通路，调节新生神经元的增殖、分化和成熟[20.- - - - - -23， Wnt靶基因表达介导的效应[24，25］．考虑到ANDRO激活Wnt信号通路和Wnt靶基因的转录[9在本研究中，我们研究了ANDRO治疗对成年海马神经发生的影响。我们确定，在年轻和衰老的野生型小鼠中，ANDRO可以增加细胞增殖和新生成熟颗粒细胞的生成。此外，ANDRO还能增加APPswe/PS1ΔE9小鼠未成熟神经元的增殖和密度。在野生型和APPswe/PS1ΔE9小鼠中，ANDRO均增加了海马区Wnt信号通路的激活，并增加了Wnt神经元靶基因NeuroD1的表达。

2。材料和方法

２.１.动物和治疗

2个月和10个月野生型C57BL/6小鼠分别腹腔注射0.2% DMSO(对照剂)和2mg kg对照剂⁻¹ANDRO (Sigma-Aldrich)，每周3次，持续2、4或6周。7个月大的APPswe/PSEN1ΔE9(股票#004462，杰克逊实验室)被注射了2mg kg的i.p.⁻¹每周三次，共4周。5-溴-2 ' -脱氧尿苷(BrdU, Sigma-Aldrich)腹腔注射100mg kg⁻¹1到3天。所有的动物都能得到水和食物随意，在12:12小时的光/暗循环中。智利庞蒂西亚大学生物伦理委员会批准了所有涉及动物实验的程序。

２.２.灌注和Postfixation

麻醉动物100只μ.G氯胺酮+ 10μ.g甲嗪10 μ.L生理盐水/g)，然后经心脏灌注生理盐水，随后在PBS中加入4%多聚甲醛(PFA, Sigma-Aldrich)。将脑组织取出，置于装有4% PFA的PBS瓶中，在室温下放置24小时，在30%蔗糖中脱水，4°C保存至分析。

２.３.组织切片

脱水后，在低温恒温器上对12组40个连续冠状脑切片进行切片μ.m厚度（徕卡微系统），并在此前描述的多孔盘中的冰冷PBS收集[26］．每组包含5-7片覆盖整个海马的长度，因此对应于整个海马的一个代表性样本。

２.４.免疫荧光

组织切片中BrdU和神经元标记物的免疫检测如前所述[26］．使用的主要抗体有大鼠抗brdu (Abcam)，兔抗双ecortin (Cell Signaling Technology Inc.)，单克隆抗neun (Millipore, Billerica, MA, USA)，兔抗ki67 (Abcam)，山羊抗neurod1 (Santa Cruz Biotechnology, Inc.)，单克隆抗nestin (Millipore)， Alexa (Molecular Probes, Life Technologies)，使用DyLight (Abcam)结合的二抗。切片用Fluoromount-G(电子显微镜科学)安装在凝胶涂层载玻片上。

2．5．图像分析

对于定量，使用荧光显微镜（Olympus BX51，Tokyo，Japan）计算Brdu，Ki67或DCX阳性细胞如[26］．简单地说，在一组脑组织(见组织切片)的所有切片中计数的细胞总数乘以总组数来估计完整SGZ (BrdU和Ki67)或GCL (DCX)中BrdU、Ki67或DCX阳性细胞的总数。用共聚焦激光显微镜(Olympus FV 1000)分析双标记切片。使用ImageJ软件(NIH, USA)进行图像分析和z-投影。

在Appswe /psen1Δe9中，估计DCx阳性细胞的密度如先前由Lie等人描述。［20.]有一些修改。简而言之，GCl中的DCx阳性细胞串联为5-6个随机部分。NUUN免疫反应性用于测量GCL体积。通过使用imagej软件和10x目标来跟踪GCL的区域。未成熟神经元的密度表示为每体积的DCx细胞（mm^3.）牙齿gcl。

2.6。免疫印迹

海马在冰上被解剖，或者立即在液氮中冷冻，或者像前面描述的那样处理[27］．简单地说，海马在RIPA缓冲液(10 mM Tris/HCl pH 7.4, 5 mM EDTA, 1% NP-40, 1%去氧胆酸钠和1% SDS)中加入蛋白酶抑制剂混合物(1 mM PMSF, 2μ.g / mL抑肽酶,1μ.g/mL胃抑素，10μ.g/mL苯甲脒)和磷酸酶抑制剂(25 mM NaF, 100 mM Na_3.签证官₄， 1 mM EDTA, 30μ.米纳₄P₂O₇)，冷冻保存30分钟后，20000 g 4℃离心15分钟。用BCA蛋白检测试剂盒(Pierce)测定上清液中的蛋白浓度。蛋白在10% SDS/PAGE中溶解，转移到PVDF膜上，与一抗在4°C过夜，然后与过氧化物酶偶联的二抗(Pierce)孵育，并使用ECL技术(Western Lightning Plus ECL, PerkinElmer)开发。主要使用的抗体是小鼠抗β连环蛋白,兔子anti-GSK-3β，山羊抗neurod1，兔抗β-微管蛋白(全部来自Santa Cruz Biotechnology, Inc.)和rabbit anti-GSK-3βpSer9(细胞信号)。

2.7。统计分析

使用棱镜5软件（GraphPad Software Inc.）进行统计分析。使用未配对的学生评估差异的统计显着性以及;非正态分布数据采用Mann-Whitney检验进行分析。每组实验动物的数量见图示。

结果

３.１.ANDRO刺激成年小鼠SGZ细胞增殖

为了评价ANDRO对成年海马神经发生的影响，我们首先分析了药物对SGZ细胞增殖的影响。两个月大的小鼠腹腔注射2mg kg⁻¹ANDRO或vehicle为对照，每周3次，共4周。在治疗的最后一天，动物也接受i.p.注射单剂量的核苷酸类似物BrdU (100mg kg)⁻¹)，于注射后24 h处死。通过BrdU核掺入研究其对细胞增殖的影响(图)1(一))和Ki67染色(图1 (b))作为有丝分裂的标记物。BrdU免疫反应性显示，在雄性激素处理的小鼠SGZ中，BrdU阳性细胞总数显著增加(图)1(一))与对照组小鼠(对照组:1726±196,ANDRO: 2554±275;)．此外，与对照小鼠相比，用Andro治疗的小鼠中的小鼠中的Ki67阳性细胞总数显着增加（图1 (c)，对照:2,341±86,ANDRO: 3,711±344;)．这些结果表明，ANDRO能促进成年小鼠SGZ的增殖。

此外，我们评估了安德罗对10个月大小鼠细胞增殖的影响，这些小鼠的神经发生水平降低，这是由于在一些物种中观察到的与年龄相关的神经发生下降[28- - - - - -31］．这些小鼠腹腔注射2mg kg⁻¹ANDRO或vehicle为对照，每周3次，共4周;Ki67染色观察SGZ细胞增殖情况。正如预期的那样，与2个月大的小鼠相比，10个月大的小鼠ki67阳性细胞明显减少(图)1 (c)和1（d）)，且经ANDRO处理的小鼠ki67阳性细胞总数显著增加(图)1（d）， 控制：穿心莲内酯:；)．总之，这些结果表明，ANDRO增加了幼龄和老年小鼠齿状回的细胞增殖。

３．２．ANDRO增加成年小鼠海马神经前体细胞增殖

BrdU-和ki67阳性细胞数量的增加可能是由于神经祖细胞或神经母细胞增殖的增加。为了评估静止的神经祖细胞是否是ANDRO的细胞靶点，我们评估了SGZ内nestin阳性细胞的Ki67染色(图)2)．Nestin是一种中间丝，在神经祖细胞中表达，但不在神经母细胞中表达[32，33］．用2毫克kg治疗小鼠⁻¹与对照组相比，ANDRO治疗4周后Nestin+Ki67+细胞显著增加(图)2， 控制：，安德罗:1956±343;），表明该药诱导了SGZ中神经祖细胞的活化。

3.3。ANDRO增加成年小鼠齿状回的神经发生

为了评估ANDRO治疗是否能诱导成年齿状回新生神经元的产生，我们首先进行了未成熟神经元标志物双皮质素(DCX)的免疫检测。2月龄小鼠齿状回中DCX阳性的未成熟神经元密度在2 mg kg处理4周后明显增加⁻¹安德罗与注射了载体的对照组小鼠进行了比较(图)3（a）和3（b）)．DCX的免疫检测也在10个月大的小鼠中进行，得到相同的治疗（图3 (c))．与年龄依赖性的神经发生下降相一致的是，与2个月大的小鼠相比，10个月大的小鼠未成熟dcx阳性神经元的密度明显下降(对比图)3（a）和3 (c))．在10个月大的小鼠中，与注射载体溶液的对照组小鼠相比，ANDRO处理诱导GCL中dcx阳性细胞总数显著增加(图)3 (c)，对照组:1246±108,ANDRO: 2141±250;)．

为了进一步评估ANDRO是否能诱导神经发生的净增加，2个月大的小鼠被注射了2mg kg的i.p.⁻¹对照组为ANDRO或vehicle，每周3次，连续2周，然后每天i.p.注射100 mg kg⁻¹BrdU连续3天，然后继续注射2mg kg⁻¹andro或车辆每周3次额外几周（图4(一))．治疗4周后观察(图)1 (c))，经6周处理后，与对照组小鼠相比，ANDRO处理小鼠SGZ中ki67阳性细胞总数显著增加(图)4 (b)；control: 1784±86,ANDRO: 2888±152;），支持药物对细胞增殖的影响。为了评估神经发生的影响，我们通过分析成熟神经元标志物Neun的Brdu阳性细胞的总数来评估新生颗粒细胞的总数。这是通过使用Z平面部分的共聚焦显微镜评估，以评估每个BRDU阳性细胞中的NeUN染色（图4 (c)计算整个齿状回BrdU+NeuN+细胞总数[26］．与对照组小鼠相比，用ANDRO处理的小鼠GCL中BrdU+NeuN+细胞的总数显著增加(图)4 (d)， 控制：，安德罗:1023±108，)，说明ANDRO增加了齿状回中新的颗粒神经元的生成。总之，这些发现表明，ANDRO增加了成年海马的神经发生。

3.4。andro刺激wnt /β-Catenin信号通路在成年小鼠海马

我们之前发现，安德罗能抑制GSK-3的活性β［9， Wnt/的一个组成部分β-catenin信号通路，该通路激活时被抑制，从而防止其靶点的磷酸化β-连环蛋白，易位入核，激活Wnt靶基因的转录[34］．我们评估了2个月大的小鼠注射2mg kg i.p.后海马Wnt信号通路的激活情况⁻¹ANDRO或vehicle为对照，每周3次，共4周。不出所料，我们观察到β-catenin水平与对照组小鼠比较(图)5(一个))，同时GSK-3非活性成分的含量增加β丝氨酸-9残基磷酸化(图5(一个))．此外，我们评估了神经元的水平，这是胚胎和成年脑中神经发生的转录因子[35]，它以前被确定为Wnt的目标基因[24］．观察到，在服用了雄激素的小鼠海马中，NeuroD1水平显著升高(图)5 (b))．免疫染色也观察到这种增加(图)5 (c))，其中NeuroD1主要在dcx阳性细胞中观察到，如前所述[35］．综上所述，这些结果表明，ANDRO诱导了Wnt/的激活β-连环蛋白信号通路在成年小鼠海马。

3.5。Andro增加神经发生在Appswe /psen1Δe9小鼠的牙齿过滤中

最后，我们评估了Andro对神经发生在Appswe /psen1Δe9转基因小鼠模型中的作用，显示出神经发生受损的[26］．这些双转基因动物表达具有瑞典突变(K595N/M596L)的人淀粉样前体蛋白(APP)和缺失外显子9的早衰蛋白1，并表现出AD的组织病理学特征(如Aβ沉积、淀粉样斑块、星形胶质增生和tau病理)和7个月时的认知障碍[27］．我们确定，在这个年龄，动物SGZ的细胞增殖显著减少，新生细胞向dcx阳性神经母细胞分化受损[26］．7个月时给APPswe/PSEN1ΔE9小鼠腹腔注射2mg kg⁻¹ANDRO或vehicle为对照，每周3次，共4周。通过Ki67染色评估SGZ的增殖情况(图)6(一))．通过增加ki67阳性细胞数量（Appswe /psen1Δe9控制：APPswe / PSEN1ΔE9穿心莲内酯；)．此外，与接受载体注射的对照组转基因小鼠相比，用ANDRO治疗的小鼠未成熟dcx阳性神经元密度增加(图)6 (b))，提示药物诱导神经发生在APPswe/PSEN1ΔE9。

在这些小鼠中，我们还评估了Wnt靶基因Neurod1（图7(一))．正如我们之前在12个月大的转基因小鼠中观察到的[8，增加的水平β连环蛋白和GSK-3β与对照组小鼠相比，用ANDRO处理的APPswe/PSEN1ΔE9小鼠的丝氨酸-9磷酸化水平显著升高(图2)7 (b))．此外，和在野生型动物中观察到的一样(图5 (b))， ANDRO治疗诱导APPswe/PSEN1ΔE9小鼠海马区NeuroD1水平显著升高(图7 (c))．

4。讨论

在成年期间的海马在海马的新神经元已经确定在几种物种中，并且显示出有助于海马的可塑性以及包括空间学习和记忆的一些海马过程[17，19］．该过程在影响中枢神经系统（例如，AD，精神分裂症和情绪障碍）的几种病理过程中遭到损害，并且在正常衰老期间也受到影响[30.，36];例如，神经发生的减少与与这些疾病相关的认知缺陷有关;因此，寻找新的方法来刺激正常和患病大脑的这一过程是很诱人的。在此，我们对该药用植物的有效成分之一ANDRO的能力进行了评价andrographis paniculata.结果表明，在野生型小鼠和AD小鼠模型中，ANDRO可诱导成年海马齿状回的增殖和新生神经元的生成。

在成年齿状回中，位于脑门和GCL之间的神经前体细胞不断产生新的颗粒细胞。活化后，这些细胞产生过渡放大祖细胞或中间祖细胞，然后形成神经元，形成未成熟神经元，将树突延伸到GCL和分子层，并将轴突投射到CA3区域[16］．这些新生神经元将在几周内成熟，形成具有功能的齿状颗粒神经元，形成突触连接，并融入海马回路[37，38］．我们确定，ANDRO治疗4周可刺激SGZ的增殖，并增加GCL中未成熟神经元的密度。我们的结果显示，ANDRO增加了静止的神经前体细胞的激活，强烈提示这些是ANDRO活性的细胞靶点。有趣的是，在治疗开始的2个月大的小鼠和神经发生明显减少的10个月大的小鼠中，观察到了ANDRO对增殖和未成熟神经元的影响。海马神经发生的年龄依赖性衰退已在包括人类在内的不同物种中得到证实[28- - - - - -31];然而，研究表明，即使在衰老的晚期，神经发生也可以被刺激。安德罗对10个月大的小鼠的作用表明该药物能够刺激老年小鼠的神经发生。此外，我们还确定了ANDRO诱导神经发生的净增加。新生神经元表达成熟神经元标记大约需要4周[16];我们发现，ANDRO增加了表达成熟神经元标记物NeuN的新生细胞总数(在给药4周后评估)，表明该药物诱导了新生颗粒神经元总数的净增加。总之，这些发现表明，ANDRO刺激成年海马的神经发生。

ANDRO对神经发生的影响可能与抑制GSK-3有关β．我们最近发现安德罗抑制了GSK-3β通过基板竞争的行动模式[9］．有趣的是，Andro对GSK-3显示出高素质β，因为它对周期蛋白依赖性激酶5 (Cdk5)和Ca没有影响^２＋/钙调素依赖性蛋白激酶II (CaMKII)、细胞外信号调节激酶(ERK)、C - jun n端激酶(JNK)、蛋白激酶C (PKC)、Akt、酪蛋白激酶(CK)和S6激酶[9］．GSK-3刺激神经发生β有抑制作用的报道体外和在活的有机体内．GSK-3对培养成人海马前体细胞的治疗β缓蚀剂锂诱导增殖[39),在活的有机体内锂离子诱导AD小鼠海马区增殖和神经元命运规范的治疗[40］．此外，在GSK-3敲击小鼠携带突变中观察到受损的神经发生，以阻断激酶的抑制磷酸化[41[在过表达GSK-3的小鼠中β［42也显示了新生神经元的形态变化[43］．因此，ANDRO可能通过抑制GSK-3来刺激神经发生β．与ANDRO的生物学效应相关的其他机制包括抑制PI3K/Akt和NF-κβ通路(44- - - - - -46］．如前所述，我们之前确定了ANDRO对Akt活性没有影响[9，自抑制NF-κβ信号通路与成年海马神经发生受损有关[47，48]， ANDRO对神经发生的积极作用不太可能涉及这些级联反应。

如前所述，GSK-3β是wnt /的关键组成部分β-catenin信号通路，已经在一些研究中得到证实在活的有机体内调节成人出生颗粒神经元的增殖，分化和成熟的研究[20.- - - - - -22，24］．通过抑制GSK-3β， ANDRO是Wnt信号通路的有效激活剂[9］．在这里，我们确定，伴随着神经发生的患者和诱导Wnt /β-catenin信号通路在成年小鼠海马中的作用β-catenin蛋白和GSK-3非活性形式水平的增加β．此外，我们观察到先前描述的Wnt靶基因NeuroD1水平升高[24是成年神经元存活和成熟所必需的。因此，我们可能认为，ANDRO的作用可能是通过激活Wnt信号通路和表达神经原Wnt靶基因如NeuroD1介导的。有趣的是，在androi治疗的APPswe/PS1ΔE9小鼠中也观察到NeuroD1水平升高。在本AD小鼠模型中，与年龄匹配的野生型小鼠相比，SGZ增殖水平降低，神经祖细胞向神经元分化减少[26，49]，我们确定ANDRO处理诱导SGZ细胞增殖几乎增加3倍。我们在这只转基因小鼠中通过暴露于自愿转轮运动中观察到了如此强烈的细胞增殖效应[50]，这是年轻人和老年小鼠神经发生的众所周知的有效电感器[51，52］．此外，我们确定Andro治疗增加了Appswe /ps1Δe9小鼠中未成熟神经元的密度，表明药物诱导的神经发生。

5.结论

在本研究中，我们证实了该药用植物的有效成分ANDROandrographis paniculata.，刺激成人海马神经发生。此前，ANDRO在永久性脑缺血大鼠模型中显示了神经保护作用[6]及抗尼古丁引起的氧化损伤[7];此外，在APPswe/PS1ΔE9 AD小鼠模型中，ANDRO可以预防与疾病相关的神经病理改变，并改善空间记忆[8］．在这里，我们展示Andro诱导野生型和Appswe /PS1ΔE9小鼠成年海马中的新神经元的增殖和产生，提供了新的证据，以表明Andro作为治疗脑病的潜在治疗药物。

利益冲突

所有作者声明非金融竞争利益。

致谢

这项研究得到了Lorena Varela-Nallar基金会(N°1150933)和Nibaldo C. Inestrosa基金会(N°1120156)和卓越科学技术基础中心(CONICYT-PFB12/2007)的资助。

参考

1. H. Y.张，C. S.张，C. K. Kong， "胶束电动色谱法测定穿心莲中活性二萜类化合物"色谱学报A第930卷第1期1-2, 171-176页，2001。视图:出版商的网站|谷歌学者
2. A.Panossian，A. Hovhannisyan，G.Mamikonyan等，“Andrographolide的药代动力学和口服生物利用度andrographis paniculata.固定组合Kan Jang在老鼠和人类，”植物医学，第7卷，第5期5，页351-364,2000。视图:出版商的网站|谷歌学者
3. H. -W.陈，A。 -林，H.-c。Chu等，“通过PI3K / AKT信号通路的下调，”通过androhogholide抑制TNF-α诱导的炎症，“自然产品杂志第74卷第1期11, pp. 2408-2413, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
4. Y.-F。夏,B.-Q。你们Y.-D。Li等人，“穿心莲内酯通过抑制NF-来减轻炎症κ..通过p50的还原半胱氨酸62的共价修饰来激活B免疫学杂志，卷。173，没有。6，PP。4207-4217，2004。视图:出版商的网站|谷歌学者
5. S. Suebsasana, P. Pongnaratorn, J. Sattayasai, T. Arkaravichien, S. Tiamkao，和C. Aromdee，“穿心莲内酯衍生物在实验动物中的镇痛、解热、抗炎和毒性作用”，药物研究档案，第32卷，第2期9, pp. 1191 - 1200,2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
6. S. J. Chan，W.S.F. Wong，P.T. H. Wong，以及J.-S.Bian，“Andrographolide在永久性脑缺血大鼠模型中的神经保护作用”英国药理学杂志，卷。161，没有。3，pp。668-679，2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
7. S. DAS，N.Gautam，S.K. Dey，T.Maiti和S. Roy，“尼古丁诱导的毒性脑中的氧化胁迫：保护作用andrographis paniculata.Nees和维生素E，“应用生理学、营养与代谢，卷。34，不。2，pp。124-135,2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
8. F. G. Serrano, C. Tapia-Rojas, F. J. Carvajal, J. hanke, W. Cerpa，和N. C. Inestrosa，“穿心莲内酯可以减少年轻和成熟AβPPswe / PS-1老鼠。”分子神经变性， 2014年第9卷，第61条。视图:出版商的网站|谷歌学者
9. C. Tapia-Rojas，A.Schüller，C.B.Lindsay等，“Andrographolide通过致命GSK-3的非ATP竞争抑制的机制激活规范WNT信号通路。β: GSK-3自动调节β体内，”生物化学杂志，卷。466，pp。415-430，2015。视图:出版商的网站|谷歌学者
10. M. D. Gordon和R. Nusse，“Wnt信号传导：多种途径，多次受体和多种转录因子”生物化学杂志号，第281卷。32, pp. 22429-22433, 2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
11. N. C. Inestrosa和L. Varela-Nallar，“神经元分化和发育中的Wnt信号”，细胞与组织研究，卷。359，没有。1，pp。215-223,2015。视图:出版商的网站|谷歌学者
12. N. C. Inestrosa和E. Arenas，《Wnts在成人神经系统中的新角色》，神经系统科学自然评论，第11卷，第5期。2，页77-86,2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
13. P. C. Salinas和Y. Zou，“Wnt信号在神经回路组装中的作用”，神经科学年刊， vol. 31, pp. 339-358, 2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
14. L. Varela-Nallar和N. C. Inestrosa，“Wnt信号在调控成年海马神经发生中的作用”，细胞神经科学前沿2013年第7卷第100条视图:出版商的网站|谷歌学者
15. A. Alvarez-Buylla和J. M. García-Verdugo，《成人脑室下区神经发生》，神经科学杂志》上第22卷第2期3，页629-634,2002。视图:谷歌学者
16. 邓伟，“成人神经发生的机制和功能意义”，细胞第132卷第1期4，第645-660页，2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
17. J. S. Snyder, N. Kee, J. M. Wojtowicz，“成年神经发生对大鼠齿状回突触可塑性的影响”，中国神经生理学杂志第85卷第1期6，第2423-2431页，2001。视图:谷歌学者
18. L. A. Mongiat和A. F. Schinder，《成人神经发生和齿状回网络的可塑性》，欧洲神经科学杂志第33卷第3期6, pp. 1055-1061, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
19. 新神经元和新记忆:成年海马神经发生如何影响学习和记忆?神经系统科学自然评论，第11卷，第5期。5，pp。339-350,2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
20. 华盛顿特区。Lie, S. A. Colamarino, h - j。Song等人，“Wnt信号调节成年海马神经发生，”自然，第437卷，第2期。第2页，第2 - 3页，2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
21. M.-H。分泌卷曲相关蛋白3调节活动依赖的成年海马神经发生，”细胞干细胞，第12卷，第2期2, pp. 215-223, 2013。视图:出版商的网站|谷歌学者
22. D. R. M. Seib, N. S. Corsini, K. Ellwanger等，“dickkopf-1的缺失可以恢复老年神经发生，并抑制认知能力下降。”细胞干细胞，第12卷，第2期2，pp。204-214,2013。视图:出版商的网站|谷歌学者
23. E. M. Wexler, P. Andres, H. I. Kornblum, T. D. Palmer，和D. H. Geschwind，“内源性Wnt信号维持神经前体细胞的潜能，”干细胞第27卷第2期10, pp. 1130-1141, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
24. T.Kuwabara，J.Hsieh，A. muotri等，“Wnt介导的成人神经发生期间神经元的激活，”自然神经科学，第12卷，第2期9, pp. 1097-1105, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
25. O。Karalay, K. Doberauer, K. C. Vadodaria等人，“普洛斯罗相关同源盒1基因(Prox1)受典型Wnt信号调节，并在成年海马神经发生中具有阶段特异性作用，”美国国家科学院学报，卷。108，没有。14，pp。5807-5812,2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
26. A.C.Abbott，C.Casderon Toledo，F.C.Aranguiz，N.C.Strango和L.Varela-Nallar，“四氢二蛋白在野生型和Appswe /PS1ΔE9小鼠中增加了成年海马神经发生，”阿尔茨海默病杂志，卷。34，不。4，pp。873-885,2013。视图:出版商的网站|谷歌学者
27. N.C.Sinestrosa，C.Paia-Rojas，T.Grofiftith等，“四氢二蛋白是防止认知赤字，aβAppswe / PSEN1中的沉积，Tau磷酸化和Synaptotoxicity$∆$阿尔茨海默病的E9模型:对APP加工的可能影响翻译精神病学，卷。1，第2020,2010款。视图:出版商的网站|谷歌学者
28. R. Knoth, I. Singec, M. Ditter等人，“从0年到100年的寿命中，人类海马体中神经发生的小鼠特征”《公共科学图书馆•综合》，第5卷，第5期。1、文章编号e8809, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
29. H. G.Kuhn，H. Dickinson-Anson和F.H.Gage，“成年大鼠的牙齿回归中的神经发生：神经元祖细胞增殖的年龄相关降低”神经科学杂志》上，卷。16，不。6，pp。2027-2033，1996。视图:谷歌学者
30. L. Varela-Nallar, F. C. Aranguiz, A. C. Abbott, P. G. Slater, N. C. Inestrosa，《衰老和阿尔茨海默病中的成年海马神经发生》，出生缺陷研究C:今日胚胎:综述，第90卷，第5期。4，页284-296,2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
31. E. Gould，A. J.Reeves，M.Fallah，P.Tanapat，C.G.粗糙和E.Fuchs，“成年人老世界的海马神经发生，”美国国家科学院学报，卷。96，没有。9，pp。5263-5267，1999。视图:出版商的网站|谷歌学者
32. J.M. Encinas，A.Vaahtokari和G. Enikolopov，“氟西汀靶向成年大脑的早期祖细胞”，“美国国家科学院学报号，第103卷。21，页8233-8238,2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
33. G. Kronenberg, K. Reuter, B. Steiner等人，“成年海马增殖细胞的亚群对生理神经源性刺激的反应不同。”比较神经病学杂志，第467卷，第2期。4，页455-463,2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
34. H. Clevers和R. Nusse， " Wnt/β-catenin信号和疾病，“细胞，第149卷，第2期。6, pp. 1192-1205, 2012。视图:出版商的网站|谷歌学者
35. Gao Z.， K. Ure, J. L. Ables et al.，“Neurod1对于成年神经元的存活和成熟至关重要，”自然神经科学，第12卷，第2期9, pp. 1090-1092, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
36. B. Winner, Z. Kohl，和F. H. Gage，《神经退行性疾病与成人神经发生》，欧洲神经科学杂志第33卷第3期6，pp。1139-1151，2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
37. D. A. Laplagne，M.S.Pepósito，V.C.Piatti等，“在发展中的成人海马产生的神经元的功能会聚”公共科学图书馆生物学，卷。4，不。12，e409，2006年。视图:出版商的网站|谷歌学者
38. H. van Praag, A. F. Schinder, B. R. Christle, N. Toni, T. D. Palmer，和F. H. Gage，“成年海马的功能性神经发生”，自然，第415卷，第2期。6875，第1030-1034页，2002。视图:出版商的网站|谷歌学者
39. E. M. Wexler, D. H. Geschwind，和T. D. Palmer，“锂盐通过规范的Wnt通路激活调节成年海马前体细胞的发育，”分子精神病学，第13卷，第2期3，页285-292,2008。视图:谷歌学者
40. A. Fiorentini, M. C. Rosi, C. Grossi, I. Luccarini，和F. Casamenti，“锂能改善APP小鼠的海马神经发生、神经病理学和认知功能，”《公共科学图书馆•综合》，第5卷，第5期。12、Article ID e14382, 2010。视图:出版商的网站|谷歌学者
41. T.-Y.EOM和R.S.Jope，“含有糖苷合酶激酶-3的抑制抑制酶磷酸化α./β损害体内神经前体细胞增殖，“生物精神病学第66期5，第494-502页，2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
42. M. Sirerol-Piquer, P. Gomez-Ramos, F. Hernández等，“gsk3 β过表达诱导神经元死亡和齿状回的神经源性生态位缺失。”海马体第21卷第2期8, pp. 910-922, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
43. M. Llorens-Martín，A. Fuster-Matanzo，C. M. Teixeira等，“GSK-3β过度表达导致体内海马颗粒神经元的突触后密度和树突形态的可逆变化，“分子精神病学第18卷第2期4, pp. 451 - 460,2013。视图:出版商的网站|谷歌学者
44. F. Kayastha, H. Madhu, A. Vasavada，和K. Johar，“穿心菊内酯通过调节PI3K/Akt通路减少晶状体上皮细胞的增殖和迁移，”眼睛的实验研究，卷。128，pp。23-26,2014。视图:出版商的网站|谷歌学者
45. S. Kumar, H. S. Patil, P. Sharma等，“穿心莲内酯通过下调PI3激酶/Akt信号通路抑制骨桥蛋白表达和乳腺肿瘤生长，”当前分子医学，第12卷，第2期8，第952-966页，2012。视图:出版商的网站|谷歌学者
46. W.-J。陆,j j。李,D.-S。Chou等，“NF-kappa B抑制剂穿心莲内酯抑制血小板活化的新作用:内皮型一氧化氮合酶/环GMP的关键机制”，分子医学杂志，第89卷，第89期。12, pp. 1261-1273, 2011。视图:出版商的网站|谷歌学者
47. D. Widera, I. Mikenberg, M. Elvers, C. Kaltschmidt，和B. Kaltschmidt，“肿瘤坏死因子α.通过IKK/NF-诱导成体神经干细胞增殖κ..B信令，“BMC神经科学，卷。7，2006年第64号。视图:出版商的网站|谷歌学者
48. S. Denis-Donini，A. Dellarole，P. Crociara等，“成人神经发生受损，与NF-Kappab P50缺陷小鼠的短期内存缺陷相关，”神经科学杂志第28卷第2期15，第3911-3919页，2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
49. L. Varela-Nallar, M. Rojas-Abalos, A. C. Abbott, E. A. Moya, R. Iturriaga，和N. C. Inestrosa，“慢性缺氧诱导Wnt/的激活β-catenin信号通路并刺激野生型和APPswe-PS1ΔE9转基因小鼠体内海马神经发生，”细胞神经科学前沿， 2014年第8卷第17条。视图:出版商的网站|谷歌学者
50. C. Tapia-Rojas，F.Aranguiz，L.Varela-Nallar和N.C.Inestrosa，“自愿运行衰减记忆丧失，降低神经病理学变化，并在阿尔茨海默病的小鼠模型中诱导神经发生，”大脑病理学，2015年。视图:出版商的网站|谷歌学者
51. H. van Praag, G. Kempermann，和F. H. Gage，“跑步增加成年老鼠齿状回的细胞增殖和神经发生，”自然神经科学，卷。2，不。3，pp。266-270，1999。视图:出版商的网站|谷歌学者
52. H. van Praag, T. Shubert, C. Zhao, and F. H. Gage，“运动增强老年小鼠的学习能力和海马神经发生”，神经科学杂志，第25卷，第2期38，页8680-8685,2005。视图:出版商的网站|谷歌学者

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