视觉剥夺降低小鼠视觉皮层2/3层锥体神经元体GAD65点数

在不同实验条件下饲养的表达YFP的小鼠，其视觉皮质2/3层的GAD65免疫组化具有代表性。显示了正常饲养5周(A1-A4)、出生至5周黑暗饲养(B1-B4)、出生至5周黑暗饲养5周、随后暴露于3天光照(C1-C4)的小鼠的共聚焦图像。A1、B1、C1可见视觉皮层2/3层染色的单切片图像。红色显示GAD65的免疫反应性(Alexa633标记的二抗)，绿色显示锥体神经元亚群中YFP的表达。A2, B2和C2表示每个图像切片的平面。注意GAD65染色遍及切片厚度。每个切片的总厚度为20m.如图A4、B4和C4所示，白色箭头指向用于三维重建的每个图像域中的一个神经元。A3、B3和C3显示所选神经元体细胞的单面裁剪图像。使用图像分析程序Volocity (Improvision)重建20个单平面裁剪的切片堆栈，生成3D图像。在GAD65和YFP通道上对所有图像采用恒定阈值去除背景。使用图像分析软件Volocity (Improvision)丢弃未接触YFP神经元体的GAD65点，得到最终的3D图像，如A4、B4、C4所示。这些最终图像被用于量化。