文摘

客观的。Vitronectin (VTN)据报道,引发细胞pyroptosis加剧炎症在我们先前的研究。然而,VTN的功能在炎症性肠病(IBD)仍有待解决。方法。进行了实时聚合酶链反应和免疫印迹分析VTN-regulated肠道上皮细胞(IEC)通过ferroptosis分化,免疫荧光(如果),荧光素酶,染色质免疫沉淀反应被用来确定VTN-modulated ferroptosis依赖于磷酸二酯酶4 (PDE4) /蛋白激酶A (PKA) /环腺monophosphate-response元件结合蛋白(分子)级联途径。在活的有机体内实验老鼠和一个试点研究IBD患者用来证实抑制PDE4-alleviated iec ferroptosis,导致细胞分化在粘膜愈合。结果。这里,我们发现caudal-related同源框转录因子2-mediated iec分化在应对VTN受损,这是归因于增强ferroptosis以减少谷胱甘肽过氧化物酶4 (GPX4)和溶质载体家庭7成员11表达式。抑制ferroptosis在iec获救VTN在细胞分化的抑制作用。进一步分析表明,VTN引发PDE4的磷酸化,从而抑制PKA /活化分子和分子核易位,进一步减少GPX4 transactivation。内源性PKA与分子互动,这种互动是摧毁VTN刺激的反应。更重要的是,过度的分子CaCO吗₂克服了细胞促进VTN ferroptosis。最重要的是,抑制PDE4 roflumilast或双嘧达莫能缓解硫酸葡聚糖sodium-induced结肠炎小鼠和临床研究证实了如果一个试点。结论。这些发现表明,高度表达VTN中断iec分化通过PDE4-mediated ferroptosis在炎症性肠病,建议针对PDE4 IBD患者可能是一种有前途的治疗策略。

1。介绍

炎症性肠病(IBD),包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)是慢性复发和危及生命的胃肠病炎性疾病,其特征是肠道上皮细胞的损伤(iec)分化[1,2]。水平caudal-related同源框转录因子2 (CDX2)表达式被确诊为iec分化的关键在粘膜愈合,这进一步诱导mucin2 (MUC2) villin和紧密连接蛋白1表达维护肠粘膜的完整性(3- - - - - -5]。我们之前的研究已经表明之间的动态平衡环腺苷酸(营)反应元件结合蛋白(分子)-CREB-binding蛋白和核转录因子(CBP)交互κB (NF -κB) cbp复杂对肠上皮屏障,肠道炎症(至关重要1]。抑制磷酸二酯酶4 (PDE4)双嘧达莫(DIP)可能会增加CD8的丰度⁺CD39⁺T细胞在结肠粘膜,减轻肠道炎症,这是归因于PDE4抑制这一事实是众所周知的生成细胞内水平的营地,导致触发激活蛋白激酶A (PKA) /级联途径诱导分子的合成CD39 [6]。此外,大量的注意力被吸引的系列研究抑制PDE4炎症性肠病可能是一种有前途的治疗策略,包括改善肠屏障功能、肠纤维化炎症,和肠道微生物群的构成7- - - - - -11]。然而,PDE4的潜在作用/营地/ PKA信号在iec分化在IBD粘膜愈合期间保持。

Ferroptosis,一种iron-dependent监管坏死为特征的差别,对这些基因的谷胱甘肽过氧化物酶抗过氧化物酶4 (GPX4),调节间隙的活性氧(ROS),紧随其后的是脂质过氧化的积累产品或系统的抑制Xc -,一个cystineglutamate溶质组成的逆向转运载体家庭7成员11 (SLC7A11)(系统Xc -)介导的细胞外胱氨酸,谷胱甘肽(GSH)的主要前体生物合成(12]。最近,积累研究表明,炎症性肠病的发病机制与ferroptosis激活(13- - - - - -16]。ferrostatin-1,一个著名的小分子,特别是抑制ferroptosis改善TNBS-induced结肠炎通过增加GPX4表达式和减少肿瘤坏死因子-α,il - 1β信使rna, il - 6水平(17),而在体外肠上皮细胞分化模型进一步表明GPX4表达水平增加一次enterocytic期间细胞分化[18),有趣的是,发现了分子的磷酸化来启动GPX4基因转录,包括il - 10和GPX4 [19,20.),表明分子signaling-mediated ferroptosis粘膜愈合期间与IEC分化密切相关。然而,在IBD ferroptosis粘膜愈合的规定仍被阐明。

多功能糖蛋白Vitronectin (VTN),已被证明是丰富的血清、细胞外基质,和血小板,涉及在如凝血途径的规定,和膜攻击复杂(MAC)的形成,细胞粘附和迁移,通过组织重塑αvβ3和αvβ5(信号转导过程21,22]。肠纤维化特点是细胞外基质(ECM)过度积累的蛋白质在受伤的网站,如胶原蛋白、FN, VTN [23]。ECM与细胞相互作用,调节不同功能,包括增殖、迁移和分化24,25]。例如,VTN促进了hematopoietic-fated中胚层的规范和增强他从中胚层祖细胞通过一代αvβ3和αvβ5整合蛋白(26]。然而,VTN在IBD的特征是粘膜损伤的作用仍有待探讨。最近,我们的工作显示,VTN可能引发NLR家庭,pyrin域包含通过NF - 3 (NLRP3) inflammasome激活κB,导致细胞pyroptosis THP-1-derveried巨噬细胞。,我们进一步证明了VTN抑制IEC分化所指出的分化标记MUC2和CDX2下降,这是由于激活ferroptosis增强GPX4、SLC7A11表达式。抑制ferroptosis很大程度上拯救VTN的影响CDX2-mediated iec分化。机械、VTN治疗导致显著激活PDE4B / C / D,这进一步降低了磷酸化PKA /分子,导致抑制分子的核易位和GPX4 transactivation。内源性PKA与分子互动,这种互动是极大地扰乱VTN治疗的反应。更重要的是,roflumilast (Rofi),一个PDE4抑制剂,可以反向VTN的效果。最重要的是,抑制PDE4的下降或者Rofi可以缓解全身的葡聚糖硫酸酯钠(DSS)结肠炎和炎症性肠病。总的来说,这些发现提供了机制VTN-regulated IBD和定位PDE4可以改善炎症性肠病的有效治疗方法。

2。材料和方法

2.1。化学试剂、抗体

VTN (459 a。HEK293,他),RSL3 (hy - 100218 a), Ferrostatin-1 (hy - 100579)、浸渍(HY-B0312), Rofi (hy - 15455 - s2)从MedChemExpress购买(上海,中国)。抗体针对GPX4(67763 - 1 -搞笑,1:200年免疫荧光(如果),1:2000年为西方墨点法(WB)), SLC7A11 (26864 - 1 - ap, 1: 200,如果1:2000年世行),CDX2 (60243 - 1 - ig, 1: 200,如果1:2000年世行),CREB1 (12208 - 1 - ap, 1: 2000年世行),PRKACA (27398 - 1 - ap, 1: 2000年世行),α微管蛋白(66031 - 1 -搞笑,1:2000年世行)来自Proteintech公司(武汉,中国)。Phospho-CREB1 (Ser133) (WB YP0075, 1: 2000), Phospho-PKA (Thr198) (WB YP0226, 1: 2000), Phospho-PDE4 (YP0668, 1: 100,如果1:2000年世行),EpCAM(如果YM0219, 1: 200), EpCAM(如果YM6053, 1: 200)来自Immunoway研究(美国普莱诺)。抗体MUC2 (WB ab272692, 1: 2000)和PDE4 (WB ab99409, 1: 2000)来自Abcam(英国剑桥)。核纤层蛋白A / B (sc - 376248,1: 3000年世行)来自圣克鲁斯生物技术(美国德克萨斯州达拉斯)。非结合的二次抗体都是来自北京雷抗体生物技术(中国,北京)。超纯试剂都从Promega (WI麦迪逊,美国)。GPX4plasmid was purchased from Youbio (Hunan, China), siRNA was synthesized by Genepharma (Shanghai, China).

2.2。细胞培养、治疗和转染

CaCO₂和HT-29细胞线路从美国购买类型文化集合(美国马纳萨斯写明ATCC)和杜尔贝科修改鹰的培养基培养(DMEM)含10%胎牛血清的边后卫,100 U /毫升青霉素和链霉素100毫克/毫升。DMEM和的边后卫从Gibco购买(美国Thermofisher科学)。细胞保持在37°C和5%湿润孵化器有限公司₂。治疗,细胞治疗与VTN最终浓度的5μg / ml 48小时。为转染质粒,或siRNAs lipofectamine 3000 PDE4被交付到目标细胞。小干扰rna序列使用以下:PDE4A 5ʹ-CAGGAGUCGUUGGAAGUUA-3ʹ;PDE4B 5ʹ-UUAGAAGCCAUCUCACUGACAGACC-3ʹ;PDE4D 5ʹ-GAGUUCUUCUUCUUGAUAA-3ʹ[27]。

2.3。实时聚合酶链反应分析

如我们之前所述的工作(28,29日),简单地说,治疗24小时后,总RNA提取和反向转录成cDNA根据Beyozol RNA隔离设备和一体化™合成第一链cDNA工具包(GenecopoeiaTM FulenGen),分别。定量PCR (qPCR)进行了使用一体化™qPCR混合(GenecopoeiaTM FulenGen)根据制造商的指示。底漆用于本研究遵循:GPX4向前,5′-GAGGCAAGACCGAAGTAAACTAC-3′;相反,5′-CCGAACTGGTTACACGGGAA-3′;SLC7A11向前,5′-ACGGTGGTGTGTTTGCTGTCTC-3′;相反,5′-GCTGGTAGAGGAGTGTGCTTGC-3′;CDX2向前,5′-CTCGGCAGCCAAGTGAAAACCA-3′;相反,5′-GCTTTCCTCCGGATGGTGATGTA-3′;MUC2向前,5′-GAGGGCAGAACCCGAAACC-3′;相反,5′-GGCGAAGTTGTAGTCGCAGAG-3; GAPDH, forward, 5′-AACGGATTTGGTCGTATTGGG-3′, reverse, 5′-CCTGGAAGATGGTGATGGGAT-3′.

2.4。蛋白质提取和免疫印迹

总蛋白质从细胞中提取里帕裂解缓冲(Biosharp,中国)。由核核和胞质蛋白分离提取工具包(Thermofisher科学、美国)根据制造商的指示。蛋白质浓度测定用BCA蛋白质分析工具包(美国Thermofisher科学)。WB进行的一项研究[30.]。短暂、蛋白质受到来自sds - page和转入硝基转移膜与5%苗条牛奶孵化PBS / 0.05%渐变为1小时。一夜之间,主要的抗体被添加和孵化在4°C,其次是孵化与二次抗体(英国杰克逊ImmunoResearch)在室温下1小时。蛋白质是用一个增强化学发光成像(珀金埃尔默)。

2.5。活性氧的检测

DCFH-DA染色是用来检测活性氧的水平。简单地说,消化后,细胞受移植者的密度10⁵/毫升24小时允许遵守。HT-29或CaCO₂细胞治疗有或没有VTN 48小时,用PBS和孵化DCFH-DA解另一个20分钟37°C和5%的公司₂。ROS水平可视化和荧光显微镜下拍摄。

2.6。免疫荧光

如果如前所述执行(31日]。iec, CaCO₂细胞消化然后密度为0.5×10⁵一夜之间/毫升6-well板块。VTN治疗后,细胞被固定在4%多聚甲醛15分钟,permeabilized 0.5% Triton x - 100年20分钟,然后屏蔽10%山羊血清30分钟。细胞主要抗体孵育过夜在4°C。组织deparaffinized幻灯片,孵化阻断缓冲区(PBS 5%正常驴或山羊血清和0.3% Triton x - 100)在室温1小时,和染色主要抗体在一夜之间在4°C湿室在黑暗中然后孵化所需的另一个1小时二次抗体(英国杰克逊ImmunoResearch)在室温下。盖玻片被安装到玻璃幻灯片用长金试剂染色细胞核后4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)。染色细胞可视化使用激光扫描共焦荧光显微镜。

2.7。免疫沉淀反应(IP)

如我们之前所述研究[29日在治疗后,有或没有VTN 1小时,总细胞收获和溶菌产物里帕15分钟。裂解与anti-PKA孵化或非特异性免疫球蛋白(免疫球蛋白)一夜之间在4°C。珠子都用冰冷的里帕缓冲和孵化溶解产物2小时。洗脱了通过添加2 x sds - page蛋白样品缓冲和煮沸10分钟的95°C。蛋白表达是在西方墨迹化验。

2.8。荧光素酶检测

如我们之前所述的工作(32),荧光素酶报告质粒和内部控制质粒(pGL4.74) co-transfected进入细胞使用lipofectamine 3000根据制造商的指示。转染24小时后,细胞治疗有或没有VTN 24小时,萤火虫和renilla荧光素酶值测量使用Dual-Luciferase记者分析系统(Promega)。

2.9。染色质的IP

如我们之前所述研究[28,33],染色质免疫沉淀反应(芯片)试验进行的协议样本芯片(R) +工具包(磁珠)(手机信号技术,9005)与anti-CREB anti-IgG或消极的控制。沉淀dna进行了分析和量化,利用实时PCR分析以下引物(20.]:GPX4转发:5′- AAGCGAGCATGCGCAGTCGCCAA-3′;反向:5′-GGACGCGCGTCGGCTTTCCGCG-3′。

2.10。地下室隔离、文化和瀑样的一代

短暂,小肠是来自8周小鼠和纵向剖开洗冷PBS删除内容,随后跟着切割成2 - 4厘米的块,这是进一步消化使用温和的细胞分离试剂cGMP(干细胞,100 - 0485)在一个振动器在4°C 300 rpm的速度释放隐窝。过滤后70μm过滤器和离心,收集隐窝,用DPBS洗净、暂停与intestiCult™瀑样生长培养基(鼠标,干细胞,06005)。5μg / ml VTN添加观察VTN肠道瀑样代的影响。捕获后,肠道瀑样在冰冷的PBS冲洗三次,4%多聚甲醛固定,石蜡和嵌入式,切成3μ米的部分。部分deparaffinized和准备。

2.11。一个试验临床研究

根据赫尔辛基宣言,工作是医学伦理委员会批准的广州市妇女儿童医疗中心(身份证:2017021504)和临床试验(身份证:2017052401)。通知书面同意从所有参与者的法定监护人。患者在妇女和儿童的医疗中心接受研究。肠粘膜组织收集从儿童IBD治疗前后,分别后我们从患者知情同意在美国胃肠病学,医学伦理审查委员会批准的,叫科学研究委员会的广州市妇女儿童医疗中心。

2.12。DSS-Induced慢性结肠炎模型

小鼠年龄在6 - 8周美联储与饮用水含2% DSS(36000 - 50000兆瓦,议员生物医学)和浸渍处理(10毫克/公斤体重,Sigma-Aldrich)或车辆(2% DMSO溶液、10%乙醇、88%玉米油)每天两次2个月。控制小鼠接受常规的食物和水。老鼠每天监测,安乐死是否达到20%以上体重损失。

2.13。统计分析

所有统计分析使用棱镜9。每个实验进行了三个生物复制。一个示例t测试是用于分析qPCR的差异分析;乐队强度量化了t测试。分析了荧光素酶活动two-ANOVA与多个比较,其次是Bonferroni事后检测的意义。所有统计分析利用0.05水平的意义。

3所示。结果

3.1。VTN-Induced失调的肠道细胞分化

探索VTN在IBD的可能作用,一组肠道组织炎症性肠病和健康控制和DSS-induced结肠炎收集检测VTN通过如果表达水平。结果表明,与对照组相比,VTN明显积累在细胞外区域的上皮细胞标记EpCAM IBD和DSS-induced结肠炎(图1(一))。为了进一步解决VTN在肠上皮细胞分化的可能作用,CaCO₂和HT-29细胞充当有用在体外模型来描绘在IEC VTN分化的影响,这是归因于CaCO的事实₂细胞可以分化成一个enterocyte-like表型自发overconfluence(后4,34,35]。结果在CaCO qPCR表明VTN治疗₂和HT-29细胞导致CDX2和MUC2差别明显对这些基因的mRNA水平与对照组相比(图1 (b))。我们进一步研究了这些目标的表达变化在世行的蛋白质水平。CDX2蛋白水平和MUC2 HT-29和CaCO基本上阻塞₂细胞与VTN刺激后(图1 (c))。符合这一点,肠道瀑样的结果表明,肠道瀑样在应对VTN治疗受损,由从如果CDX2的表达下降(确认数据1 (d)和1 (e))。这些发现表明VTN有强大的障碍在肠上皮细胞分化中的作用。

3.2。依赖于Ferroptosis VTN破坏肠上皮屏障

Ferroptosis报道中发挥重要作用肠道crypt-derived瀑样(36),专注于我们确认造成的受损的肠道细胞分化的可能性VTN治疗归因于ferroptosis的增强。正如所料,增强ferroptosis以增加ROS水平和减少GPX4和SLC7A11表达在信使rna和蛋白质水平观察HT-29 CaCO₂细胞在VTN刺激(图2(一个)- - - - - -2 (c),图S1)。

接下来,RSL3 GPX4的抑制剂,用于检测ferroptosis IEC分化。如图2 (d)的蛋白质含量,结果表明,CDX2和MUC2表达显著减少HT-29 CaCO₂细胞与ferroptosis激活RSL3治疗后1和2μM,分别。最重要的是,在HT-29 CaCO VTN治疗₂导致细胞受损的肠道细胞分化,由Fer-1克服刺激(图2 (e));符合这一点,过度CaCO GPX4₂细胞可以在CDX2扭转VTN的抑制作用,MUC2表达和ROS水平(数字2 (f)和2 (g))。总的来说,这些发现表明VTN扰乱肠道细胞分化依赖于GPX4-mediated ferroptosis。

3.3。分子是所需VTN-Induced Ferroptosis

上述结果表明,VTN-mediated ferroptosis IEC分化中发挥了重要作用。被确诊为分子参与transactivation GPX4 [18,20.,37)进一步确定VTN-regulated GPX4-mediated ferroptosis可以归因于分子。如图3(一个),包含GPX4启动子荧光素酶记者(GPX4-luc)成立和codelivered HT-29与内部控制(pGL4.74),其次是接受或不VTN 48小时。结果表明,异位表达的主要分子增加,而VTN刺激减少GPX4 HT-29细胞启动子活动。更重要的是,过度的分子HT-29细胞逆转废除GPX4发光VTN治疗引起的。更重要的是,芯片结合qPCR分析显示,VTN治疗基本上废除了分子的结合能力GPX4基因启动子在HT-29细胞(图3 (b))。和超表达的分子HT-29克服VTN的抑制作用GPX4表达式(图3 (c))。这些结果表明分子是必不可少的VTN-mediated GPX4 transactivation。

3.4。VTN-Modulated PDE4 / PKA /级联信号分子

激活的分子对其核易位激活CREB-mediated至关重要目标基因表达(38,39),集中我们探索提取机制VTN监管CREB-mediated GPX4表达式使用一个亚细胞分离分析和immunofluorescent染色。如图4(一)- - - - - -4 (c),核分子的位置在CaCO大幅抑制₂细胞反应VTN治疗,这是归因于PDE4由VTN触发的磷酸化,导致减少PKA /分子的磷酸化。更重要的是,抑制PDE4 Rofi(20吗μ米)可以扭转VTN对分子定位的影响。最重要的是,内生PKA与分子相互作用,这种相互作用被VTN中断(图4 (d))。此外,抑制PDE4激活的抑制作用Rofi缓解VTN GPX4 SLC7A11表达,减少生产和ferroptosis ROS,进一步促进CDX2的表达(数字4 (e)和4 (f),图S1)。符合上面的,结果从肠道瀑样模型也证实肠瀑样后诱导与VTN现在Rofi刺激(图4 (g))。进一步证实,PDE4亚型(PDE4A, B, C, D)参与VTN-regulated ferroptosis iec和分化,我们击倒PDE4A, PDE4B,和PDE4D表达式HT-29小干扰rna转染细胞可以在CDX2 VTN扭转效应,MUC2, GPX4表达式;可拆卸的效率测试图S1,而PDE4C水平最小或没有(数据未显示)(图4 (h))。综上所述,这些研究结果表明VTN-modulated PDE4 / PKA /级联途径触发ferroptosis分子,从而破坏细胞分化。

3.5。抑制PDE4 Ferroptosis减轻结肠炎体内下降

上述结果显示VTN摧毁了IEC分化通过PDE4-mediated ferroptosis;接下来,我们试图确定临床批准PDE4抑制剂下降可以减轻ferroptosis,导致细胞分化。如数据所示5(一个)和5 (b)DSS-induced急性结肠炎模型,体重和结肠长度显著增加,以应对下降治疗相比,老鼠接受了DSS治疗。进一步分析显示ferroptosis明显抑制,表现为增强GPX4和SLC7A11表达式,对IEC分化,增强CDX2和MUC2表达(图5 (c))。更重要的是,一名飞行员在五IBD患者临床研究证实与内镜进行评估浸在诊所粘膜愈合的影响。受试者参加这项工作的详细信息列在表中1。浸政府很大程度上改善了粘膜愈合经内镜检查,和分数SES-CD和疾病活动指数(DAI)在治疗后显著提高(图5 (d)- - - - - -5 (f))。immunofluorescent染色证实,治疗可以促进IEC浸分化特点是CDX2和MUC2表达增加,而显著减少ferroptosis观察增强GPX4、SLC7A11表达式(图5 (g))。总的来说,我们的研究结果表明,抑制PDE4B可以通过调制ferroptosis促进粘膜愈合。

4所示。讨论

到目前为止,没有可用的功能研究VTN IEC分化在粘膜炎症性肠病的治疗。在这工作,如图5 (h),我们严格证明VTN派生的一种新的信号通路在调节肠道细胞分化在IBD PDE4-mediated ferroptosis。高度表示VTN iec导致破坏肠道细胞分化依赖于ferroptosis。机械化,VTN触发PDE4活性,导致降低阵营和抑制磷酸化PKA /分子减少GPX4 transactivation发起ferroptosis,进而废除CDX2的表达,摧毁了IEC分化。更重要的是,内生PKA与分子相互作用,这种相互作用中断在IEC VTN刺激。有趣的是,抑制PDE4的Rofi可以抵消PKA-CREB VTN对复杂的影响。最重要的是,抑制PDE4的Rofi可以挽救DSS-induced结肠炎的症状在活的有机体内,蘸政府可以减轻炎症性肠病的临床症状的临床试验研究。综上所述,这些研究结果提供了证据展示小说VTN在炎症性肠病中的作用和支持针对PDE4作为IBD患者的一种很有前途的方法。

以前的工作表明,VTN,配体αVβ3整合素,刺激增殖和抑制细胞凋亡在狭窄的CD(肠道平滑肌细胞增生40]。我们实验室表明VTN触发NLRP3 inflammasomes激活,导致THP-1-derived触发pyroptosis加剧炎症巨噬细胞(41],在目前的研究中,我们进一步显示了强大的pro-IBD VTN效应源于它能够减少SLC7A11和诱导ferroptosis GPX4表达式,这导致粘膜愈合过程中抑制CDX2-mediated细胞分化。事实上,从图的结果5 (h)GPX4和SLC7A11表达式在iec贴上EpCAM增强沿着肠道crypt-villus轴细胞分化的特征。符合这一点,抑制的ferroptosis ferrostatin-1可以挽救VTN在细胞分化的抑制作用,表明VTN-regulated iec分化依赖于ferroptosis。然而,进一步的工作是需要地址的详细机制VTN-mediated ferroptosis调节iec分化,甚至肠道屏障功能。除了ferroptosis, cuproptosis是否参与VTN-mediated受损细胞分化在IBD仍有待确认未来的工作。

营地是典型的第二信使,激活PKA /分子级联途径或被水解成AMP PDE4 [42]。最近,连续工作建议PDE4可能是一个有前途的治疗各种疾病的目标,如肾病综合征(43),急性髓系白血病(44)、特发性肺纤维化(45),心力衰竭(46),和结肠炎8]。有趣的是,PDE4的磷酸化是一个关键事件VTN-induced ferroptosis细胞分化障碍,结果证实,抑制PDE4的下降可以缓解的效果VTN在iec ferroptosis-dependent细胞分化,蘸管理局可能显著改善CDX2-mediated细胞分化在动物模型和一个试点研究。更重要的是,进一步的分析表明,PDE4B和PDE4D VTN-mediated中发挥了关键作用ferroptosis。除了ferroptosis和细胞分化,进一步的研究需要探索未来VTN在IBD的其他功能,包括肠道粘膜免疫、耐药性、肠纤维化,以及是否VTN监管的磷酸化PDE4 integrin-dependent地可以证实在接下来工作中,虽然有研究证实intergern VTN刺激激活(26,47,48]。然而,进一步的研究需要阐明机制调节VTN表达式在生理或病理条件下,甚至VTN-ferroptosis之间是否有一个积极的反馈回路。

总之,我们的数据建立了一个新颖的机制VTN触发PDE4-mediated ferroptosis摧毁IEC PDE4的分化和抑制磷酸化可能是一个有前途的治疗策略,改善肠粘膜炎症性肠病的治疗。

缩写

CDX2:	Caudal-related同源框转录因子2
CD:	克罗恩氏病
芯片:	染色质免疫沉淀反应
分子:	cAMP-response元件结合蛋白
阵营:	环腺苷酸
海关与边境保护局:	结合蛋白分子
戴:	疾病活动指数
决策支持系统:	葡聚糖硫酸酯钠
下降:	双嘧达莫
GPX4:	谷胱甘肽过氧化物酶4
谷胱甘肽:	谷胱甘肽
知识产权:	免疫沉淀反应
炎症性肠病:	炎症性肠病
如果:	免疫荧光
iec:	肠上皮细胞
MUC2:	Mucin2
麦克:	膜攻击复杂
NLRP3:	NLR家庭,pyrin域包含3
NF -κB:	核转录因子κB
PDE4:	磷酸二酯酶4
PKA:	蛋白激酶
Rofi:	Roflumilast
ROS:	活性氧
SES-CD:	简单的内窥镜得分为克罗恩病
SLC7A11:	溶质载体家庭7成员11
肿瘤坏死因子-α:	肿瘤坏死因子-α
加州大学:	溃疡性结肠炎
VTN:	Vitronectin
白平衡:	西方墨点法
ZO-1:	紧密连接蛋白1。

数据可用性

在生成的数据集和/或分析在当前研究可从相应的作者在合理的请求。

伦理批准

在赫尔辛基宣言,这项研究是医学伦理委员会审查和批准的临床伦理审查广州妇女和儿童妇女中心。

同意

患者给予书面知情同意的临床记录使用,不公开;然而,它可能是可用的合理要求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

WFX STG的构思和设计实验,WXP, LX, XHL, WJD,深圳LLG, XZ,和JHZ进行实验和分析数据分析,LLG WFX, WXP写手稿,修订后的手稿。所有作者阅读和批准最终的修订后的手稿。WXP和LX的贡献同样工作。

确认

这项工作是由中国国家自然科学基金(批准号82200607),广东基础研究和应用基础研究基金会(批准号。2020 a1515110109 2021 a1515012194 a1515010366 2023和2023 a1515030064),基础和应用研究广州市科技项目(批准号202201020631和202201020631),广东省医学科学技术研究基金(批准号A2021052)、广州医学重点学科、专业(批准号011006003)。广州小儿炎症性肠病重点实验室(批准号2023 a03j0866),国家健康委员会热带疾病预防与控制重点实验室(批准号2022 nhctdckfkt21001)。在乔治·梅森大学加强科学研究计划。

补充材料

图S1: VTN增强细胞ROS水平诱导ferroptosis(参加研究的主题的详细信息)。(补充材料)