文摘
间质炎症是肾损伤的重要病理损害机制由高尿酸血引起的。Protease-activated受体2 (PAR2)是一类目标,上游的PI3K / AKT / NF -κB通路和参与各种炎性疾病。我们在大鼠诱导高尿酸血模型由腺嘌呤和乙胺丁醇填喂法在活的有机体内实验。我们证明PAR2和PI3K / AKT / NF -κB途径表达显著调节肾组织中,大量肾间质炎性细胞浸润,肾组织损伤。治疗与AZ3451 hyperuricemic老鼠,PAR2选择性metabotropic拮抗剂,我们证明了PAR2对抗抑制PI3K / AKT / NF -κB通路和减毒管阻力指标炎性细胞也许可以扩张和渗透。磷脂代谢概要文件提供了一个完美的正常和hyperuricemic老鼠之间的分离。此外,我们还发现,AZ3451可以影响磷脂代谢。我们的工作表明PAR2可能调解hyperuricemia-mediated肾损伤通过激活PI3K / AKT / NF -κB通路。的PAR2拮抗剂AZ3451 hyperuricemia-induced炎症反应可能是一个有前途的治疗策略。
1。介绍
高尿酸血是一种代谢紊乱,血尿酸(UA)水平升高是由于嘌呤代谢的紊乱或受损UA排泄。高尿酸血会导致肾脏损害,常与慢性肾脏疾病,冠心病,高血压,糖尿病,是与贫穷疾病预后密切相关1]。尽管由于高尿酸血肾损伤的临床症状是众所周知的,并不完全了解的病理生理和分子机制。由于高尿酸血肾损伤的发病机制包括pro /抗炎失衡,尿酸盐沉积,氧化应激,肾素-血管紧张素系统激活,肾小管细胞间充质转化,系统和免疫系统疾病(2,3]。人们普遍认为高尿酸血诱发crystal-dependent肾脏炎症,与巨噬细胞重要的介质。然而,最近的研究表明,可溶性UA也可能促炎效应,独立的晶体形成的2]。可溶性UA和UA晶体可以触发炎症通过激活nod样受体蛋白3 (NLRP3)炎症性囊泡,核转录因子-κB (NF -κB)信号、迁移的巨噬细胞和其他细胞渗透和激活的肾脏,分泌肿瘤坏死因子-α(TNF -α)、单核细胞趋化蛋白1 (MCP-1)、il - 6,地震,IL-17,和其他炎症因子和趋化因子,从而进一步促进炎症细胞浸润,创建一个瀑布效应,进一步放大炎症反应(2,4- - - - - -6]。尽管现有研究尚未完全阐明UA造成的肾脏炎症损伤的病理机制,炎症和炎性细胞因子发挥着至关重要的作用。当前高尿酸血患者的护理标准是UA-lowering疗法,这主要包括黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制剂和UA再吸收抑制剂。此外,一些药物针对尿酸盐转运体1仍在临床试验(7]。然而,炎症使高尿酸血引起的肾损伤的一个重要贡献,和临床治疗方法针对炎症还没有充分的研究。
Protease-activated受体2 (PAR2), G protein-coupled受体家族成员,是人体组织中广泛表达,激活凝血酶或组织因素。它激活信号转导途径,如通过G蛋白激酶C protein-coupled系统产生各种细胞因子和炎症介质,介导炎症反应(8,9]。增加调查获得更深的见解的机制PAR2调节肾脏疾病。激活PAR2人类肾小管上皮细胞刺激组织因子的合成和分泌,诱发凝血(10,11]。此外,PAR2加剧增加炎症细胞因子在内皮细胞和足细胞在糖尿病肾病12]。Hayashi发现抑制PAR2减毒adenine-induced肾组织学损害(13]。磷脂酰肌醇的上游PAR2诱发一类目标3-kinase PI3K / AKT / NF -κB信号激活PI3K / AKT / NF -κB信号通过改变其活动和绑定pericellular环境中的化学物质(14]。然而,目前尚不清楚PAR2通过PI3K / AKT介导肾损伤/ NF -κB信号通路在hyperuricemia-induced肾损伤和抑制PAR2能否防止hyperuricemia-induced肾损伤。
我们之前的分析高尿酸血和肾损伤患者外周血发现许多脂类代谢产物潜在血浆代谢生物标记,其中大多数是参与磷脂代谢,这表明磷脂代谢可能在UA-mediated肾损伤的发病机制中发挥作用(15]。然而,精确的理解磷脂代谢组学和分子和细胞机制UA-driven肾脏炎症尚未实现。这里,我们系统地评估PAR2的作用在调节PI3K / AKT / NF -κB hyperuricemia-induced肾损伤的炎症信号通路。我们在雄性老鼠表现腺嘌呤和乙胺丁醇填喂法建立模型,高尿酸血,希望阐明的可能机制PAR2-mediated PI3K / AKT / NF -κB信号通道UA-induced肾损害的过程中。同时,我们发现血浆磷脂代谢产物基于ultraperformance液体chromatography-tandem质谱(UPLC-MS / MS)。
2。材料和方法
2.1。动物模型
健康男性的雄性sd大鼠中购买和安置在塑料笼子里(200 - 220克)。老鼠被安置在一个温度23±3°C的相对湿度为55%±15%和12小时光明/ 12小时黑暗周期。大鼠随机分为正常对照组和高尿酸血(胡)组。胃内的管理引起的大鼠高尿酸血模型结合腺嘌呤(200毫克/公斤)、乙胺丁醇(250毫克/公斤)每天4周。对照组给予等量的生理盐水。接下来,生理盐水(控制和胡组,n= 20)和PAR2拮抗剂AZ3451(1毫克/公斤,AZ3451和胡+ AZ3451组,n= 20)进一步通过腹腔内注射的日常管理(图4 - 6周1(一))。剂量的选择是基于我们的初步实验。所有程序进行了制度后,动物保健委员会指导原则和伦理委员会批准的附属深圳宝安医院(批准号BYL20180208)。
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2.2。血液和肾脏组织样本集合
最后政府在4周后血液样本收集和最终的腹腔内注射在6周(肝素钠抗凝)。收集血清样本进行生化分析。肾脏是收获和分离的冰板最后腹腔内注射后6周。肾组织被立即解剖和组织学分析浸泡在福尔马林溶液,和其他储存在−80°C进行进一步分析。安乐死是由腹腔内注射戊巴比妥(100毫克/公斤)的实验。
2.3。细胞培养和转染
人肾近端小管上皮细胞(HK-2)是从Procell采购(湖北,中国)和培养在DMEM / F12(美国UT Hyclone实验室公司,洛根)与10%的边后卫和1% penicillin-streptomycin补充37°C公司5%2的气氛。接下来,100毫升的完全培养基添加到玻璃烧瓶包含25毫克的UA粉、动摇,并在水浴中加热60°C。UA的浓度是由0.22通过无菌过滤μm过滤器,UA工作色母粒稀释比例与一个完整的媒体准备媒体720 UA的浓度μm .之后,我们使用这个UA的媒介治疗HK-2细胞。siRNA针对PAR2及其负控制核合成与Sangon生物技术(上海,中国)。的序列si-PAR2-1 5′贵港市CAG gg UAU UGG GUC ATT-3′(意义)和5′佐治亚大学CCC AAU ACC UCU GCA CTT-3′(反义);那些si-PAR2-2 5′棉酚棉酚GCC UUA UUG卦ATT 3′(意义)和5′-UUA CCA AUA gg CUU CUU CTT-3′(反义),和那些si-PAR2-3 5′亚美大陆煤层气有限公司AAA CAC UCC gg AAA UTT 3′(意义)和5′-AUU UCC UGG AGU的GUU UCU UTT-3′(反义)。此后,这些siRNAs转入HK-2细胞使用Lipofectamine 2000(美国表达载体,沃尔瑟姆,MA)根据制造商的指示。CDS PAR2区域基因植入了pCDNA3.1(+)质粒构建PAR2超表达质粒pCDNA3.1 (+) -PAR2,由怡汇源生产生物科学(湖北,中国)。pcDNA3.1 (+) / PAR2被聚乙烯亚胺是暂时性的转染到HK-2细胞。
2.4。生物化学分析
UA测定工具,肌酐(Cr)、XOD活性和血液尿素氮(BUN)测定是购自建成生物技术(中国南京)。血清UA测定酶比色法。血清铬是由肌氨酸氧化酶法。血清包水平测定脲酶的方法。血清XOD活性是由比色法。所有生化参数测定根据制造商的协议。
2.5。组织病理学和免疫组织化学分析
切除肾脏在10%福尔马林固定石蜡和嵌入。每个标本切成4μ米的部分。Hematoxylin-eosin-stained部分准备通过光学显微镜研究病理组织。病态的幻灯片被蒙蔽的方式得分。随机选择6个样本从每组病理分析,和部分数字标签没有标签组和其他信息。从每个样本被选为得分三个部分。十视觉领域被随机选中每一块探讨肾小管损伤和炎性细胞浸润。肾小管损伤肾小管上皮细胞坏死,无刷边境,和管式膨胀)是得分20 x放大根据损坏的比例小管总小管如下:1 0无损伤,< 25%,2 25% - -50%,为50% - -75%,3和4为> 75%。炎性细胞浸润在得分40×放大根据渗透区如下:1 0无损伤,< 10%,2 11% - -20%,3为21% - -30%,为31% - -40%,4和5为> 41%。切片的染色主要采用SP法和反应抗体PAR2 (Abcam,剑桥,英国;ab180953)稀释1:100稀释缓冲。 Thereafter, immunohistochemical staining with DAB and mild restaining with hematoxylin were performed. Stained images were acquired using a Nikon E100 microscope (Nikon, Tokyo, Japan).
2.6。测定PAR2, PI3K AKT, NF -κB信使rna和蛋白质含量
RevertAid第一链cDNA合成工具包(美国马热费希尔科学、沃尔瑟姆)被用来合成cDNA遵循制造商的指示。引物序列补充所示1。实时rt - PCR进行使用SYBR绿色PCR主结构,分析了利用光周期计480(罗氏诊断GmbH,曼海姆,德国)。蛋白质分离使用标准的sds - page和转移到PVDF膜。墨迹是孵化anti-PAR2 (1: 1000;美国Proteintech, Rosemont,;12160 - 1 - ap), anti-PI3K p85 (1: 5000在体外实验;1:1000在活的有机体内实验;Proteintech;60225 - 1 - ig)、anti-AKT3 (1: 1000在体外实验;1:2000在活的有机体内实验;Abcam;ab152157), anti-p-AKT (Ser473)(1: 1000年,细胞信号技术,丹弗斯,妈,美国;# 4060),anti-p-NF -κB p65 (Ser536) (1: 500;细胞信号传导技术;# 3033),anti-NF -κB p65 (1: 2000;Proteintech;10745 - 1 - ap)。Anti-GAPDH鼠单克隆抗体(1:5000;Abbkine,武汉,中国;A01020)和anti-GAPDH抗体(1:3000;Abcam;ab37168)担任加载控制物质在体外和在活的有机体内实验,分别。蛋白质是可视化使用ECL化学发光底物。
2.7。ELISA试验
细胞因子(il - 6、MCP-1 TNF浓度α,il - 1β,TGF -β1)在大鼠肾组织和细胞培养上清液测定。我们决定组织的总蛋白浓度在大鼠肾组织中使用BCA前试验。在大鼠肾组织细胞因子浓度使用细胞因子表达的内容每克组织匀浆蛋白。NGAL的浓度,KIM-1血清测定。化验用品白介素6 (il - 6)、单核细胞趋化蛋白1 (MCP-1)、肿瘤坏死因子α(肿瘤坏死因子-α)、白介素1β(il - 1β)(小学和成熟形式)和转化生长因子β1 (TGF -β1)从MlBio购买(上海,中国),而对NGAL和KIM-1买来Elabscience(武汉,中国)。我们测量il - 1β(ml037361) Pro-IL-1β(ml027415)、肿瘤坏死因子-α(ml002859)、il - 6 (ml102828) MCP-1 (ml002960), TGF -β1 (ml002856), NGAL (E-EL - R0662c),和KIM-1 (E-EL-R3019)使用双抗体夹心方法和计算浓度按照制造商的协议。
2.8。Metabonomic分析样品制备
见补充210内部标准从Sigma-Aldrich购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。磷脂的术语是描述在脂质地图网站(http://www.lipidmaps.org/)。每十内部标准(100 ng)被添加到80μL在埃普多夫管等离子体。随后,0.45毫升的去离子水添加到混合物中,当时在12000转离心5分钟在4°C。此后,收集底层和顶层受到相同的提取过程。样品收集两拔牙在CHCl重新溶解3/ CH3哦。
2.9。UHPLC-MS条件和分析
安捷伦1290 ultrahigh-performance液相色谱系统加上6470 triple-quadrupole质谱仪(美国安捷伦科技,圣克拉拉,CA)被用来分析磷脂的复杂混合物。ZORBAX Eclipse + C18(2.1×100毫米,1.8μm;安捷伦科技)列,保持温度在50°C。毛细管电压是4.0 kV(正离子模式)和3.5 kV(负离子模式)。鞘气体流被设定为11 L / min。
所有数据处理利用大众猎人软件(安捷伦科技;B.08.00)。磷脂物种的浓度计算的相对丰度相对于每个磷脂类的内部标准。
2.10。统计分析
的常态分布的连续变量是由一个示例测试Kolmogorov-Smirnov测试。提出了定量数据意味着±SD。比较两个独立的团体是由双尾未配对t测试或Mann-WhitneyU测试。组间差异分析单向方差分析(方差分析)其次是Dunnett多个比较测试。所有统计分析处理使用GraphPad棱镜8 (GraphPad软件、圣地亚哥、钙、美国),和被认为是具有统计学意义的差异 。
3所示。结果
3.1。管理与腺嘌呤和乙胺丁醇Intragastrically老鼠概括人类高尿酸血和肾的损伤
探讨肾损伤的机制由于高尿酸血,我们建立了一个高尿酸血(胡)模型由腺嘌呤和乙胺丁醇的老鼠,如前所述[16)(图1(一))。在实验中,没有动物死亡。老鼠的身体体重控制的胡锦涛组相似,老鼠(图1 (b))。腺嘌呤在大量管理可以增强XOD活性和增加UA的产量,而乙胺丁醇可以减少UA排泄,两者的结合可以导致血UA水平显著增加大鼠(17]。基线对照组大鼠血UA水平是在110年µmol / L。与对照组相比,胡组大鼠的XOD活性增强,和血UA水平增加了约2.5倍,表明腺嘌呤结合乙胺丁醇填喂法方法成功地建立了一个高尿酸血模型,符合其他研究[18,19)(图1 (c))。如图1 (c)与腺嘌呤,经过4周的填喂法结合乙胺丁醇,老鼠与血清肌酐增加显示肾脏功能受损和包子的水平。我们也测试了小说肾损伤标记KIM-1 NGAL。逐步减少血清KIM-1和NGAL水平被认为与腺嘌呤的停止和乙胺丁醇管理。此外,他染色显示不同程度的肾小管上皮细胞变性和坏死,管腔扩张,各种大小的褐色针状晶体的小管,和大量的炎症细胞浸润肾小管间质(数据1 (d)和1 (e))。
3.2。PI3K / AKT / NF -κB通路是高度调节高尿酸血鼠肾组织
PI3K / AKT / NF -κB通路在细胞代谢中起着关键作用,功能,死亡,和生存。在我们的模型中,基因和蛋白质表达的PAR2显著调节在胡大鼠肾组织(腺嘌呤处理和乙胺丁醇)相比控制(图2(一个)- - - - - -2 (c)),随后,PI3K / AKT / NF -的变化κB信号通路被发现。rt - pcr结果表明PI3K AKT, NF -κB基因表达调节的肾组织hyperuricemic老鼠相比控制(图2(一个))。西方墨点法有显著提高PI3K表达一种蛋白激酶的磷酸化和NF -κB p65 hyperuricemic大鼠肾组织的相对的控制(图2 (b))。此外,ELISA表明TNF -αil - 6, MCP-1 Pro-IL-1β,il - 1β,TGF -β1水平升高的肾组织hyperuricemic老鼠相比控制(图2 (c))。
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此外,我们对待胡锦涛老鼠PAR2选择性拮抗剂AZ3451(胡+ AZ3451集团)绑定到一个远端亚稳网站外螺旋束PAR2和防止受体活化和信号所需的结构重排20.,21]。我们发现AZ3451抑制PI3K的磷酸化,AKT, NF -κB和减少炎症的生产因素,但不影响PI3K的mRNA水平,AKT, NF -κb .(图2 (b)和2 (d))。我们认为这是因为对手绑定阻止受体激活信号所需的结构重排,但并不影响下游基因表达的信号(20.]。这项观察表明PAR2是一个重要的传感器驱动hyperuricemia-mediated炎症反应。
3.3。PAR2拮抗剂AZ3451变弱Hyperuricemia-Induced肾损伤
鉴于PAR2调节肾组织的hyperuricemic老鼠和与肾和肾组织损伤,炎症抑制PAR2抑制PI3K / AKT / NF -κB途径激活。我们进一步探讨是否PAR2拮抗剂能改善肾损伤所致高尿酸血在活的有机体内。如图3(一个),我们决定AZ3451腹腔内注射有效减毒hyperuricemia-induced肾小管扩张阻力指标炎性细胞浸润(也许可以以及人物3(一个))。肾小管损伤的半定量的得分和炎性细胞浸润表明管在胡大鼠损伤改善改善AZ3451治疗后(图3 (b))。6周后,腹腔内管理控制试剂胡集团逐步减少XOD活性和UA水平观察与腺嘌呤的停止和乙胺丁醇管理。然而,没有显著降低血清Cr和包子胡组中观察到。但我们观察到显著降低血清Cr和包子水平胡+ AZ3451组相比在胡老鼠(图3 (c))。6周后,腹腔内AZ3451政府,我们也观察到显著降低血清KIM-1和胡NGAL水平+ AZ3451组与胡锦涛集团(图3 (c))。数据显示PAR2抑制明显减轻肾损伤和间质炎症反应。
(一)
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3.4。PI3K / AKT / NF -κB通路是高度调节尿酸酸洗HK-2细胞
我们进行了在体外实验,取得了类似的结果的HK-2细胞治疗UA来验证上述结果。西方墨点法验证成功击倒和超表达PAR2(补充3)。与对照组相比,转录upregulation PAR2, PI3K, AKT, NF -κB基因和蛋白表达水平明显增加确认UA可以激活PAR2和PI3K / AKT / NF -κB通路。PAR2过表达后,我们观察到进一步upregulation PAR2, PI3K, AKT, NF -κB在HK-2细胞信使rna和蛋白质。此外,我们合成了核与PAR2击倒PAR2;UA的组合加上si-PAR2显著下调PI3K, AKT, NF -κB基因转录和蛋白表达,显著减少炎性细胞因子水平相比高尿酸血组(图4(一)- - - - - -4 (d))。上面的数据证实,干预与PAR2影响UA-mediated PI3K / AKT / NF -激活κB信号通路。
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3.5。在大鼠血浆磷脂代谢分析高尿酸血
深入理解响应在大鼠高尿酸血后,我们进行了磷脂的分析比较中磷脂分子含量高尿酸血和对照组。磷脂物种量化使用相对响应和内部标准。通过数据库搜索,共有10种磷脂和83种鼠血浆磷脂分子被确定;78种磷脂分子量化(图5(一个))。一个t以及或Mann-WhitneyU测试了78磷脂代谢产物,统计分析表明30磷脂代谢产物有一个p值小于0.05。火山图分析显示27的磷脂代谢产物p值小于0.05和多个变化大于或小于1.2倍0.8单变量分析。27磷脂代谢产物之间的差异具有统计学意义(图5 (b))。
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同时,多元统计的检测磷脂代谢产物进行了分析。根据PCA和OPLS-DA模型得分图表,两组之间有一个清晰的分离趋势,表明磷脂代谢产物的两组之间的差异具有统计学意义(图5 (c))。高尿酸血组π的水平(16:0/18:2),π(16:0/18:1),π(16:0/20:4),和π(18:0/18:2)显著增加,而那些LPC (20: 5), LPC (20: 3), LPC (20: 2), LPC (22: 6), PC (16: 0/16: 1), PC (16: 0/20: 5), PC (18: 1/18: 2), PC (18: 0/18: 1), PC (18: 2/20: 5), PC (18: 1/20: 4), PC (18: 0/20: 3), PC (20: 0/18: 2), PC (18: 1/22: 6), PC (20: 2/20: 4), PC (20: 0/20: 5), PC(22: 6/20: 4),简述(16:1),简述(20:3),PE (16: 0/18: 1)、PE (18: 0/18: 2)、PE (18: 0/20: 4), PE (20: 1/20: 4), PS(22: 22: 6)与对照组相比均有显著降低(图5 (d))。
分析PAR2拮抗剂(AZ3451)对磷脂代谢的影响,我们进行了磷脂分析比较高尿酸血组与胡锦涛+ AZ3451组在6周post-AZ3451腹腔内注射。与高尿酸血组相比,水平的LPC (14: 0), LPC (20: 5), LPC (20: 3), LPC(22: 6),和PC(18: 0/20: 3)在胡+ AZ3451组显著增加(表1)。
4所示。讨论
人们普遍认为炎症、细胞凋亡和自噬参与hyperuricemia-mediated肾损伤(2]。然而,这仍然是一个缺乏知识的分子机制和治疗靶点hyperuricemia-induced肾损伤的炎症。
我们用腺嘌呤诱导高尿酸血和乙胺丁醇填喂法,也阻力指标纤维化,也许可以引起肾小管间质炎症和如前所述[17]。我们证明PAR2和PI3K / AKT / NF -κB路径表达式是调节高尿酸血的大鼠模型,相似的结果在体外实验。我们发现AZ3451(选择性metabotropic拮抗剂PAR2)抑制PI3K / AKT的hyperuricemia-mediated激活/ NF -κB通路和减毒间质炎症反应和肾组织损伤,减少炎症反应的细胞因子的表达。与我们的结果一致,adenine-treated老鼠发现表现出严重的肾脏功能障碍,肾小管萎缩、纤维化,纤维蛋白沉积,显著增加组织因子表达和PAR2肾脏。缺乏PAR2减毒肾组织学损伤和减少与炎症相关的基因的表达水平,纤维化和氧化应激13]。累积证据强调突出的作用,PAR2在中介炎性疾病。尽管许多成就PAR2药理学,花了近25年第一PAR2抑制剂进入临床试验,并没有批准PAR2拮抗剂营销(8]。到目前为止,PAR2拮抗剂包括抑制肽,peptidomimetics, cell-penetrable pepducins,小分子和抗体。AZ3451 [22),PAR2 nonpeptide小分子拮抗剂,据报道,显著减少软骨破坏的关节内注射AZ3451 [21]。我们的工作是一种新型的探索PAR2拮抗剂AZ3451减轻肾损伤所致高尿酸血。AZ3451有更广泛的应用治疗炎症性疾病。
研究表明,激活PI3K / AKT通路启用了促炎效果和主要集中于对NF -的影响κB活动(23,24]。我们的研究结果表明,PI3K / AKT / NF -κB通路被激活hyperuricemia-induced肾损伤。升高血清尿酸盐水平(高尿酸血)是单钠尿酸盐的主要危险因素(MSU)晶体的形成25]。肾小管细胞刺激MSU晶体产生大量的趋化因子(如CXCL-12),导致巨噬细胞在肾脏的有针对性的招聘26,27]。此外,密歇根州立大学晶体强烈激活人类原发性巨噬细胞分泌促炎细胞因子il - 1等β、地震和干扰素在Src / Pyk 2 / PI3K信号通路(28]。NF -κB是一个关键的激活的炎症和的前提也是inflammasome激活和激活炎症诱导pro-IL-1 NLRP3β和NLRP3表达(29日]。密歇根州立大学通过内吞作用进入细胞,破坏溶酶体膜,并释放溶酶体组织蛋白酶到细胞质,导致NLRP3激活(30.]。最近的研究表明,可溶性UA也可能促炎效应,独立的晶体的形成。可溶性UA可以刺激激活NLRP3 inflammasome和il - 1β合成(31日]。我们的研究结果表明,PI3K / AKT的激活/ NF -κB通路hyperuricemia-induced肾损伤被AZ3451治疗,表明这个途径参与AZ3451在hyperuricemia-induced肾损伤的保护作用。
我们使用UPLC-MS / MS定量分析在大鼠血浆磷脂。有明显的差异和分子物种组成磷脂子类。27磷脂分子物种差异变化hyperuricemic老鼠,尤其是π。这些生物标志物可用于筛查、检测诊断、预测和监控hyperuricemia-induced肾损伤,但这还需要进一步的临床样本验证。π衍生品及其磷酸化是细胞内信使的水库,发挥关键作用的细胞信号转导,骨架蛋白锚定,膜蛋白激活。这个过程的核心是二磷酸磷脂酰肌醇(PIP2),它可以被磷酸化PI3K phosphatidylinositol-3, 4, 5-triphosphate(π3- - - - - -5P3, PIP3) [23,32,33]。PIP3是激活的关键信号分子PI3K / AKT途径招聘多个细胞膜蛋白激酶,包括蛋白激酶(即拉总科1 AKT和对)杀人案。AKT的下游主要因素是NF -κB,它进入核调节多个炎症基因的表达(34]。我们发现AZ3451可以影响磷脂代谢,我们揭示了一个意想不到的磷脂代谢和PAR2 hyperuricemic老鼠之间的联系。McHowat证明刺激部分在正常人类泌尿道上皮细胞导致炎症的生产或cytoprotective磷脂代谢产物(35]。PAR2激活《Gq》和磷脂酶C,说明PAR2和磷脂代谢之间的联系36,37),但确切的机制还不清楚,需要进一步的调查。
总之,我们的研究结果证实,PAR2表达显著调节hyperuricemia-induced肾损伤。此外,我们发现PI3K / AKT / NF -κB途径可能参与的过程PAR2-mediated hyperuricemic肾损伤。我们的工作提供了一个更好的理解在hyperuricemia-induced PAR2肾损伤的机制,表明PAR2拮抗剂AZ3451可能作为一种有前途的治疗策略。然而,我们的方法在高尿酸血肾损伤的研究有局限性,因为临床患者是更复杂的比简单的实验模板,和大多数人有不同基础疾病或各种伴随的并发症。因此,未来的研究应该考虑复杂的模型,如慢性肾病模型与高尿酸血或高尿酸血与急性肾损伤,这是更适合于临床病人。
数据可用性
的数据支持本研究的发现可以从相应的作者在合理的请求。
伦理批准
这项研究是经伦理委员会批准的附属深圳宝安医院。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
小路隋和停飞谢了同样的工作。
确认
这项研究是由深圳市科技计划项目,格兰特数字JCYJ20180305123730301和JCYJ20160427191440905。
补充材料
补充1。q-PCR的引物序列。补充2。内部标准用于UHPLC-MS保留时间校正。补充3。PAR2蛋白质的表达被免疫印迹检测。(补充材料)