文摘
4-Octyl itaconate (OI)是一种新型抗炎代谢物,在许多各种疾病模型产生保护作用。然而,它的功能在自身免疫性肝炎(AIH)还没有调查肝脏损伤有关。在这项研究中,我们成功地用伴刀豆球蛋白(Con)建立AIH-associated肝损伤模型。此外,我们调查的影响在Con A-induced OI肝损伤,发现OI减轻Con A-induced组织病理学损伤。OI政府降低血清丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶Con经处理的小鼠和减毒引起的巨噬细胞的浸润Con a .此外,OI有效抑制促炎细胞因子的表达,包括白细胞介素- 6 (il - 6)、肿瘤坏死因子-α(TNF -α)、移行细胞(IFN -γ),il - 1β引起反对a .此外,OI肝细胞凋亡和丙二醛水平降低,增加减少谷胱甘肽/氧化谷胱甘肽比反对A-induced肝损伤模型。此外,我们发现OI抑制欺诈A-induced体外肝细胞凋亡,而Nrf2删除消除这种影响。此外,我们管理的Nrf2抑制剂ML385 OI + Con经处理的小鼠,发现ML385消除OI体内的保护作用。此外,OI抑制欺诈A-induced激活核factor-kappa B (NF-B)和巨噬细胞的促炎细胞因子的表达。因此,OI保护小鼠免受欺诈A-induced肝损伤,可能与Nrf2激活和NF-B抑制有关。最后,我们的研究显示,OI抑制TNF -α,或者从反对上层清液经处理的RAW264.7细胞诱导肝细胞凋亡。总之,我们的研究表明,OI缓解Con A-induced肝损伤通过减少炎症反应,氧化应激和细胞凋亡。
1。介绍
急性肝炎是一种常见和严重的健康问题在全球范围内(1]。多种致病因素包括毒素、生物和自身免疫性疾病可能会导致肝脏损伤和招致重型肝炎(2- - - - - -5]。许多肝脏疾病的病理学是参与炎症反应、氧化应激、肝细胞死亡(6- - - - - -8]。Self-restricted炎症通常被认为是有利于对抗病原体和维护肝内稳态(9]。然而,过度的炎症会导致大量肝细胞凋亡/ necroptosis和导致破坏的组织架构,进一步诱发肝的损失函数(10]。自身免疫性肝炎(AIH)被认为是免疫disorder-induced肝脏损伤介导的异常激活免疫细胞和促炎介质的生产11]。伴刀豆球蛋白A - (Con)诱发肝炎也有类似的组织病理学特点,广泛用于建立AIH模型研究[12,13]。反对一个可以激活枯氏细胞(;)和促进其分泌促炎细胞因子,如肿瘤坏死因子-α(TNF -α),从而加重了炎症反应,最终导致肝损伤(14,15]。此外,;可以提高氧化应激,导致组织损伤在肝炎(16]。因此,针对巨噬细胞在肝脏治疗AIH可能是一个潜在的治疗方法。
巨噬细胞的多种生理代谢产物表现出免疫调节特性,在各种疾病模型产生保护作用。从柠檬酸,Itaconate激活巨噬细胞(最丰富的代谢产物之一17]。它产生保护作用在几个通过抑制过度炎症反应疾病炎症(18]。柠檬酸在一定刺激,首先是催化和转换为cis-aconitate aconitate水合酶2。随后,cis-aconitate转换到itaconate cis-aconitate脱羧酶。此外,4-octyl itaconate (OI) cell-permeable itaconate的导数,展品抗炎活动通过激活核factor-erythroid两个相关因子2 (Nrf2),这是一个关键的转录因子,调节多种抗氧化基因如血红素oxygenase-1 (HO-1) [19]。它可以结合抗氧化反应的基因元素——(是)像序列在他们的地区,促进消除活性氧(ROS)施加保护作用[20.]。据报道,Nrf2通过减少活性氧保护正常细胞免受DNA损伤和保护肿瘤细胞对化疗(3,21]。此外,Nrf2最近被发现的启动子区域结合interlukin-6等促炎细胞因子(il - 6)和直接抑制转录缓解炎症反应(22]。先前的研究已经证实,Nrf2激活发挥了重要作用减轻肝损伤(23,24]。例如,我们以前发现Nrf2激活减轻碳tetrachloride-induced肝脏损伤通过抑制氧化应激和炎症(24]。此外,OI减轻缺血再灌注创伤性肝损伤通过激活Nrf2通路(25]。然而,在AIH OI的影响尚未研究。
在这项研究中,我们调查的影响OI Con A-induced AIH模型,发现OI保护小鼠免受欺诈A-induced肝损伤。此外,OI政府反对A-induced AIH肝细胞死亡,减少炎症和氧化应激。可能的潜在机制涉及Nrf2信号的激活和抑制NF -κB信号。因此,我们目前的研究发现,OI AIH可能是一个潜在的治疗策略。
2。材料和方法
2.1。试剂
反对收购的西格玛奥德里奇(圣路易斯,密苏里州,美国)。地中海4-OI和ML385获得化学表达(美国)。丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和减少谷胱甘肽/氧化谷胱甘肽(GSH / GSSG)试验设备是购自南京建成生物技术研究所(中国南京)。胎牛血清和高葡萄糖杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)从Gibco购买生命技术(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德)。Murine-TNF -α从PeproTech购买(美国)。在这项研究中使用的抗体包括那些反对HO-1 (Proteintech,武汉,中国),Nrf2(手机信号技术、马、美国),伯灵顿(Proteintech,武汉,中国),bcl - 2 (Proteintech,武汉,中国),F4/80(手机信号技术、马、美国),CD4(手机信号技术、马、美国),NF -κB p65(手机信号技术、马、美国),裂解多adp核糖聚合酶(c-PARP)(手机信号技术、马、美国),3 -磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH) (Proteintech,武汉,中国),phosphor-NF -κB p65(手机信号技术、马、美国)》κB -α(手机信号技术、马、美国),和我κB -α(手机信号技术、马、美国)。肿瘤坏死因子-α、白介素、干扰素-γ,il - 1β酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自DAKEWE生物工程(中国深圳)。终端原位dUTP缺口末端标记(TUNEL)细胞凋亡测定设备和BeyoECL +获得Beyotime生物技术(上海,中国)。所有其他化学物质的分析级最高。
2.2。动物
雄性C57BL / 6小鼠(7 - 9周大,23日g)从SPF获得生物技术有限公司有限公司(中国,北京)。所有动物都保存在一个洁净室在24°C下12 h: 12 h:黑暗周期与免费的水和食物。所有动物实验动物保健和使用委员会批准的华中科技大学同济医学院。
2.3。药品监督管理局
缺点是管理通过尾静脉注射如前所述[16]。OI溶解在盐水的浓度1毫克/毫升,管理通过腹腔内注射2 h在反对政府。ML385是通过腹腔内注射两天一天一次。小鼠随机分为6组( ):(1)对照组:小鼠接受车辆(磷酸盐、PBS)在整个过程中;(2)OI组:老鼠收到OI(100毫克/公斤);(3)反对一群:老鼠收到欺诈(20毫克/公斤);(4)低剂量OI组:OI(50毫克/公斤)+反面(20毫克/公斤)组;(5)高剂量OI组:OI(100毫克/公斤)+反对(20毫克/公斤);(6)ConA + OI + ML385组:OI(50毫克/公斤)+(20毫克/公斤)+ ML385监狱(30毫克/公斤)。使用OI浓度根据先前的研究[17]。动物的肝脏和血液样本收集12 h Con治疗后,根据我们之前的研究16]。我们与戊巴比妥钠麻醉小鼠的疼痛降到最低的老鼠和收集了大约500μL通过眼球的血液。然后,血液受到高速离心分离后的血清实验。
2.4。细胞培养
小鼠巨噬细胞的细胞株RAW264.7细胞库的购买中国科学院(中国上海)。AML12是购自钟周巧鑫生物技术有限公司有限公司(上海,中国)。这两个细胞系培养与10%胎牛血清的DMEM补充。对数生长期AML12和RAW264.7细胞生长在6-well板块如前所述[24]。这些细胞被使用OI (100μ米2 h,然后接受欺诈(50μg / mL)。此后,这些细胞被收集并用于后续的实验在反对政府。随后,我们测试的影响OI的TNF -α在AML12细胞。AML12细胞治疗肿瘤坏死因子-α(100 ng / ml)和/或OI (100μ米)24 h。然后,通过流式细胞术测定细胞凋亡。coculture实验,我们对RAW264.7细胞与欺诈和/或OI 12 h和收集上层清液,添加到AML12细胞24 h。收集上清液,检测细胞因子水平。流式细胞仪是用来检测AML12细胞凋亡。
2.5。ALT和AST化验
通过离心分离血清收集血液样本的1500 g×10分钟。随后,肝酶测定的活动根据制造商的指示。
2.6。组织病理学和免疫组织化学分析分析
肝组织被收购了,一夜之间在4%多聚甲醛固定。随后,组织是嵌入在石蜡,4μ米厚的部分被削减和苏木精和伊红染色())。肝损伤评估是基于坏死区域根据标准形态标准。五个随机领域(200 x)被选中,和坏死区域使用ImageJ测量软件。免疫组织化学分析,组织部分在二甲苯脱蜡和患者使用分级醇。恢复抗原和阻断内源性过氧化物酶后,部分被封锁在5% BSA 37°C 30分钟和孵化主要抗体裂解多adp核糖聚合酶(1:200)。随后,辣根过氧化物酶(合)共轭二次抗体和3,3-diaminobenzidine tetrahydrochloride补充道,和积极的细胞被可视化。
2.7。免疫荧光染色
肝组织,部分脱蜡和加工是我们前面描述的16]。随后,主抗体F4/80(1: 200)是添加和孵化一夜之间在4°C。然后,部分被洗和孵化二级抗体(ANT030s Alexa萤石®594驴anti-Rabbit免疫球蛋白g, 1: 200)。DAPI和培养10分钟到想象添加了核。267.4原始细胞,这些细胞被洗了,在4%多聚甲醛固定了15分钟。细胞治疗0.1% trixonx - 100 10分钟和阻塞在5% BSA 2 h和孵化与抗体p65一夜之间(1:500)在4°C。然后,细胞被洗和孵化第二抗体(ANT030s Alexa萤石®594驴anti-Rabbit免疫球蛋白g, 1: 200)。DAPI孵化了5分钟显示细胞核。五个随机领域(200 x)被选中,和积极的细胞被ImageJ测量软件。
2.8。TUNEL分析
组织部分使用二甲苯脱蜡、水化和分级乙醇。随后,蛋白酶K (20μL /毫升)没有DNase添加在室温下,用PBS和部分洗。此后,TUNEL检测混合添加和孵化没有光为60分钟37°C。DAPI添加10分钟来可视化细胞核。五个随机领域(200 x)被选中,和积极的细胞被评估使用ImageJ软件。
2.9。谷胱甘肽(GSSG比率测量和MDA含量
肝组织收集和均质使用PBS ( )。收集上清液如前所述(16]。随后,谷胱甘肽(GSSG比率和MDA水平评估根据制造商的指示,分别。
2.10。ELISA试验
通过离心分离血清收购从全血1500 g×10分钟。上层清液从RAW264.7细胞收集12 h后反对治疗(50μg / mL)。随后,水平的il - 6、TNF -α干扰素-γ,il - 1β分别测量根据制造商的指示。
2.11。通过流式细胞仪检测细胞凋亡
美国APC膜联蛋白V 7-AAD (BioLegend)细胞凋亡检测设备用于检测细胞凋亡。AML12收集细胞治疗后,100年μl绑定缓冲被添加到每个管,其次是APC, 7-AAD试剂,孵化了25分钟。
2.12。RNA干扰
AML12细胞种植在6-well盘子和培养,直到融合达到40 - 50%。培养基是没有抗生素的培养基所取代。的核序列Nrf2是5 - - - - - -GCTCGCATTGATCCGAGATAT-3 。转染了使用Lipofectamine®6000 (Beyotime、上海、中国)根据推荐的指令。然后,培养基被替换为一个完整的媒介,和细胞用于后续实验。
2.13。免疫印迹
总蛋白提取使用里帕溶解产物(# R0278,σ)根据制造商的指示。BCA蛋白质分析工具包(Beyotime、上海、中国)被用来测量蛋白质浓度根据制造商的指示。等量的蛋白质被加载到钠十二烷基sulphate-polyacrylamide凝胶电泳、免疫印迹是如前所述执行(24]。主要抗体HO-1 (1: 1000), Nrf2(1: 1000),伯灵顿(1:1000),bcl - 2 (1: 1000), NF -κB p65 (1: 1000), c-PARP (1: 1000), GAPDH (1: 2000), phosphor-NF -κB p65 (1: 1000)》κB -α(1:1000),和我κB -α(1:1000)。HRP-conjugated二级抗体被用来检测荧光使用BeyoECL + (24]。
2.14。统计分析
所有的数据都表示为 。 价值由单向方差分析计算,其次是图基的事后考验。 被认为是具有统计学意义。所有统计分析使用GraphPad棱镜8。
3所示。结果
3.1。OI对Con A-Induced肝损伤小鼠的影响
在数据显示1(一)和1 (b),反对注射造成明显的组织病理学损伤。五个随机选择字段,坏死区域被ImageJ测量软件。坏死面积在50毫克/公斤OI治疗组低于反对的一群。然而,剂量100毫克/公斤OI最显著降低坏死区。此外,监狱的ALT和AST水平显著升高,50毫克/公斤和100毫克/公斤OI治疗剂量降低ALT和AST(人物的活动1 (c)和1 (d))。随后,我们发现了ALT AST比,发现各组之间没有明显差别(图1 (e))。
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3.2。负面影响的OI治疗浸润的巨噬细胞和细胞因子的生产
F4/80肝巨噬细胞是一种广泛使用的标记(26]。我们发现欺诈治疗后F4/80-positive细胞浸润增加。然而,OI政府显著降低F4/80-positive细胞(数据的数量2(一个)和2 (b))。我们标记CD4+与CD4 T淋巴细胞的数量,发现CD4 fluorescence-positive细胞Con组显著增加,而4-OI减毒这种变化(数据2 (c)和2 (d))。此外,ELISA检测表明,反对政府TNF的含量明显升高α、白介素、干扰素-γ,il - 1β,而OI政府明显降低肿瘤坏死因子的水平α、白介素、干扰素-γ,il - 1β(数据2 (e)- - - - - -2 (h))。此外,OI治疗仅改变无论是F4/80, cd4阳性细胞数量和TNF的表达α、白介素、干扰素-γ,il - 1β。
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3.3。OI减毒Con经处理的小鼠肝细胞死亡和氧化应激
肝细胞死亡是经常用来评估肝损伤的程度。采用TUNEL染色检测细胞凋亡的反对A-induced肝损伤模型。此外,c-PARP被认为是细胞凋亡的标志反对A-induced肝损伤(16]。我们发现反对政府的数量显著增加TUNEL和c-PARP-positive细胞在肝组织(数字3(一个)- - - - - -3 (d))与对照组相比。然而,OI政府明显下降的数量TUNEL和反对c-PARP-positive细胞经处理的老鼠。此外,谷胱甘肽(GSSG比率是主要的细胞的氧化还原状态的动态指标,和MDA含量是一种常见的指数评价膜脂质过氧化作用[27]。我们测量了谷胱甘肽(GSSG率和肝组织MDA含量评估氧化应激,发现GSH / GSSG比率显著降低在反对经处理的老鼠。然而,OI政府明显增加了谷胱甘肽(GSSG比例Con经处理的小鼠(图3 (e))。此外,反对治疗后MDA含量显著增加,显著降低了后续OI治疗后(图3 (f))。
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3.4。OI抑制激活Nrf2 AML12细胞的凋亡
PARP乳沟促进细胞分裂和细胞凋亡可以用作标记(28]。伯灵顿是一个关键组成部分线粒体应激细胞凋亡(29日]。bcl - 2对其凋亡功能通过抑制线粒体细胞色素的释放(30.]。在这项研究中,反对增加c-PARP的表达和伯灵顿在AML12细胞抑制bcl - 2的表达。然而,OI治疗显著降低c-PARP的表达和伯灵顿,同时增加凋亡bcl - 2(数据的表达4(一)- - - - - -4 (d))。核实如果Nrf2相关的保护作用,我们使用了特定的siRNA击倒Nrf2 AML12细胞中表达,和siNC被用作控制。Con治疗下,OI显著增加Nrf2及其目标基因的表达HO-1 Nrf2的存在。然而,Nrf2表达被抑制后,bcl - 2的表达与OI管理局(没有增加的数字4 (e)- - - - - -4 (h))。
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3.5。保护作用的OI被ML385抑制
我们使用ML385,特定Nrf2抑制剂,来评估OI的保护作用是否与Nrf2 AIH的激活模式。如数据所示5(一个)- - - - - -5 (f)OI Con经处理的小鼠产生保护作用,包括减少c-PARP TUNEL-positive细胞,和ALT和AST的活动。然而,ML385政府反对+ OI-treated老鼠c-PARP——TUNEL-positive细胞的数量增加和ALT和AST的活性。此外,OI政府明显增加谷胱甘肽(GSSG率和减少MDA水平Con经处理的老鼠。然而,GSH / GSSG比率下降,MDA含量增加ML385 +一个+ OI组与反对+ OI组(数字5 (g)和5 (h))。
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3.6。OI抑制促炎介质的激活NF-B和表达,促进了Nrf2 / HO-1信号通路
巨噬细胞活化导致肝损伤在反对A-induced AIH模型和与NF-B激活和促炎如TNF的表达α、il - 6和干扰素-γ。我们的研究结果显示,反对核易位和磷酸化的提升NF-B p65(数字6(一)和6 (b))和我的磷酸化κB -α(图6 (b))和肿瘤坏死因子的生产——增加α、il - 6和干扰素-γ(数据6 (f)- - - - - -6 (h)在RAW264.7细胞)。我们发现OI抑制Con A-induced核易位和磷酸化NF-B p65(数字6(一)和6 (b))和我的磷酸化κB -α(图6 (b))和抑制TNF的表达-α、il - 6和干扰素-γ(数据6 (f)- - - - - -6 (h))。与此同时,OI提升Nrf2的表达和HO-1,从而抑制炎症反应(图6 (e))。
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3.7。OI抑制肿瘤坏死因子-α,和上层清液经处理的RAW264.7细胞诱导肝细胞凋亡
我们分析的影响OI的TNF -α,发现TNF -α显著诱导肝细胞凋亡,而OI减这些变化(数据7(一)和7 (b))。进一步评估巨噬细胞的影响和OI Con A-induced AIH,我们对RAW264.7细胞与欺诈和/或OI 12 h和收集上清液,加入AML12细胞24 h,并收集上层清液检测细胞因子水平。使用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果显示,细胞凋亡是更为明显的反对组比对照组显著减少Con + OI组与欺诈(一组数字7 (c)和7 (d))。同时,我们发现细胞因子(il - 1的水平β和肿瘤坏死因子-α在上层清液,发现OI抑制il - 1的释放β和肿瘤坏死因子-α引起的反对(数字7 (e)和7 (f))。
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4所示。讨论
肝脏是消化系统的一个关键器官。多种有毒物质会导致肝损伤。骗一个是一个从洋刀豆凝集素提取和增强T细胞增殖对有丝分裂原的反应。通过小鼠尾静脉管理一个,Tiegs et al。31日)建立了一个可靠的实验动物模型来研究AIH的病理过程。近年来,研究表明itaconate,三羧酸循环的中间代谢物,发挥保护作用在几个疾病模型通过调节炎症和氧化还原平衡18]。OI, itaconate cell-permeable模仿,被认为是一个合适的模仿itaconate具有强大的抗炎和保护作用在一些疾病的病理32- - - - - -34]。例如,OI减轻肝损伤肝缺血再灌注损伤通过激活Nrf2通路(25]。另外,我们之前发现OI抑制碳tetrachloride-induced肝损伤通过减少炎症和氧化应激24]。然而,OI AIH模型的影响还没有被调查。在目前的研究中,我们发现对Con A-induced OI表现出保护作用在鼠标AIH肝损伤模型。我们的研究结果显示,OI治疗改善Con A-induced肝损伤通过减少炎症反应、氧化应激、细胞凋亡,底层机制与Nrf2信号激活和NF -κB通路抑制。
血清ALT和AST水平通常用来评估肝损伤。这些转氨酶释放到血液中肝细胞损伤。在目前的研究中,反对A-induced成功引起肝脏损伤,由组织病理学检查证明和海拔的ALT和AST水平。OI治疗减少坏死区肝组织和血清ALT和AST水平AIH小鼠模型。ALT、AST比,一个参数广泛应用于临床,可以应用于自身免疫性肝病包括自身免疫性肝炎。然而,我们的研究表明,AST / ALT比率与OI政府未受到影响。也许ALT AST比并不适用于反对A-induced鼠标AIH模型。此外,炎症细胞AIH-associated肝损伤中发挥重要作用。调节性T细胞亚群)是维持免疫耐受的重要因素之一。失去亚群在老鼠身上被报告为一个方法来诱发AIH,导致肝脏损伤(35]。;此外,激活,也称为肝巨噬细胞,参与反对A-induced小鼠肝脏损伤(36]。在我们之前的研究中,我们还发现,反对A-induced肝损伤与巨噬细胞和CD4的积累+T细胞(16]。因此,改变免疫细胞在AIH的发展至关重要。在这里,我们使用F4/80马克巨噬细胞在肝组织和发现OI预处理显著降低巨噬细胞浸润引起的欺诈a .此外,过度的细胞因子参与Con A-induced肝损伤的发病机制。促炎细胞因子如TNF -α和正γ在反对A-induced肝损伤至关重要37]。巨噬细胞产生肿瘤坏死因子-α,这是一个重要的凋亡信号(38]。正,γ,一个关键的中介在AIH的发展39),可以协同TNF -α增加其他炎症介质的生产,从而促进Con A-induced肝损伤。在目前的研究中,OI抑制肿瘤坏死因子的水平α,il - 1β、il - 6和正-γ在反对经处理的老鼠。因此,这些发现表明,OI Con A-induced改善肝损伤通过抑制炎症反应。
除了炎症,氧化应激可引起肝损伤。过多活性氧的主要原因是生产氧化,导致破坏蛋白质、DNA、脂质(40]。活性氧积累在肝脏诱导细胞死亡,最终导致肝损伤。Nrf2等几种抗氧化系统,可以激活抗氧化酵素表达式保持细胞氧化还原平衡,以避免细胞损伤(41]。Keap1 Nrf2是固定在细胞质中,促进Nrf2的泛素化,导致快速水解酶降解。当细胞活性氧的攻击或亲电子分子,Nrf2 Keap1分离并把到细胞核。Nrf2最初形成异质二聚体与小加蛋白质,随后结合激活抗氧化酶的表达受Nrf2 [42]。我们之前确认的一个显著增加肝细胞,促进肝损伤(ROS水平16]。c-PARP验证是可靠的细胞凋亡的标志(43]。在目前的研究中,我们发现OI政府减少的数量正TUNEL和c-PARP-positive细胞在肝脏组织。因此,这一发现表明,OI减毒Con A-induced肝细胞死亡。此外,MDA是脂质过氧化的产物,通过交联聚合会导致细胞毒性的蛋白质,核酸和其他生命大分子(44]。谷胱甘肽是一种重要的抗氧化分子,超越了ROS (45]。增加谷胱甘肽(GSSG比率是重要的维持抗氧化和解毒功能的完整性45]。因此,MDA含量和谷胱甘肽(GSSG比率都是关键指标来评估肝脏的氧化应激。在这项研究中,我们发现,MDA水平明显下降和GSH / GSSG比率增加OI治疗Con经处理的老鼠。因此,OI AIH模型部分的保护作用与其抗氧化性质关联。
据报道,OI在肝脏疾病的保护作用主要与Nrf2激活(24]。激活Nrf2可以促进多个解毒和抗氧化基因对氧化应激和炎症。例如,OI防止耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌血症引起的肺损伤通过激活Nrf2 /通路。这种保护作用是废除ML385管理或Nrf2删除后小鼠(46]。在我们的研究中,我们进一步探讨OI是否被激活Nrf2保护肝细胞免受细胞凋亡。我们使用bcl - 2评估AML12细胞在体外的细胞凋亡。bcl - 2可以形成二聚体proapoptotic蛋白质伯灵顿。如果伯灵顿的相对数量高于bcl - 2、Bax为水平增加,促进细胞死亡(47]。如果bcl - 2的相对数量高于伯灵顿,bcl - 2、Bax异质二聚体的形成将被提升和bcl - 2为的数量将增加到抑制细胞凋亡(47]。首先,我们发现OI c-PARP水平下降和伯灵顿反对经处理AML12细胞,和bcl - 2表达增加了OI。Nrf2撞倒后,OI既不能增加HO-1和bcl - 2体外的表达。这些发现表明OI对肝细胞的保护作用与Nrf2激活有关。此外,我们封锁Nrf2激活体内使用ML385,指定Nrf2抑制剂,这减少了OI的保护作用。我们发现,细胞凋亡指数,包括c-PARP——TUNEL-positive细胞的数量,增加后ML385政府体内。此外,肝酶和氧化应激标志物的水平增加ML385政府行骗后经处理的老鼠。因此,至少在某种程度上,OI减轻激活Nrf2 Con A-induced肝损伤,从而抑制抑制过度的氧化应激和细胞凋亡。
肝巨噬细胞发挥着至关重要的作用的发病机理Con A-induced AIH通过产生过度的炎症介质如TNF -α,这可能会导致肝细胞损伤(37]。NF-B信号是一个重要的转录因子调节炎症反应、细胞凋亡和应激反应(48]。通常,NF-B p65结合κB -α在细胞质中。炎症刺激,如有限合伙人,可以启动我的磷酸化和退化κB -α。随后,NF-B p65电离之后,把核增强促炎细胞因子表达(49]。与此同时,NF-B p65加磷,促进炎症介质的转录。我们之前已经验证,欺诈造成的肝损伤由overactivating NF-B p65诱导过度炎症(16]。在目前的研究中,OI抑制欺诈A-induced核易位和磷酸化的NF-B p65磷酸化和退化的我κB -α。此外,OI可以激活Nrf2 HO-1,抑制炎症反应。此外,我们发现OI抑制促炎细胞因子的表达在反对经处理的巨噬细胞。这些表明OI的保护作用与抑制NF-B通路的激活有关。
5。结论
我们的研究显示,OI发挥保护作用在反对A-induced AIH通过减轻炎症,氧化应激,肝细胞死亡。OI减少氧化应激,抑制肝细胞凋亡的激活Nrf2信号通路来减轻肝损伤。此外,它显著地抑制NF-B激活的巨噬细胞炎症反应减弱,因此最终减轻肝损伤。因此,我们的研究评估了角色的OI Con A-induced AIH并提供证据表明OI AIH可能是一个潜在的治疗药物。当然,可能需要做更多的研究和阐明OI只是部分的影响。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者在合理的请求。
的利益冲突
所有作者宣称他们没有利益冲突。
作者的贡献
文昌杨和王雅馨贡献同样这项工作。
确认
这项研究是由中国国家自然科学基金(号。81701883,82072736,82172171)。