文摘
颞下颌关节骨关节炎的机制(TMJOA),导致最后的软骨和软骨下骨的侵蚀,已被广泛证明,但仍不清楚地阐明。许多研究指出NLRP3-mediated炎症退化性疾病中发挥了至关重要的作用。然而,它与滑膜炎的TMJOA一直缺乏研究。在我们的研究中,我们探索的角色NLRP3 inflammasome在TMJOA滑膜炎和caspase-1和NLRP3抑制剂的治疗潜力。通过建立大鼠TMJOA模型,我们发现NLRP3 TMJOA调节在滑膜组织。它参与细胞程序性死亡的进程称为pyroptosis, caspase-1依赖,最终引发炎症介质白介素il - 1β释放。治疗Ac-YVAD-cmk MCC950,抑制剂针对caspase-1 NLRP3,分别显著抑制pyroptosis TMJOA滑膜组织。然后,巨噬细胞,呈synoviocyte (FLS) cocultured模型进一步验证了上述结果。巨噬细胞在某种程度上促进了FLS的pyroptosis在这项研究中。我们的研究结果表明,NLRP3 inflammasome-mediated pyroptosis参与TMJOA滑膜炎症。干扰的进展可能是一个潜在的选择控制TMJOA发展。
1。介绍
颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)是一种退化性疾病的伴随症状慢性疼痛和关节功能障碍。TMJOA是一种最严重类型的颞下颌紊乱(TMD)影响所有年龄组,尤其是女性患者中普遍存在。进步的滑膜炎,软骨变性,软骨下骨重塑是主要病理变化在大多数TMJOA情况下(1]。虽然机制TMJOA尚不清楚的发展,大量证据表明颞下颌关节滑膜炎症可能是一个重要的变化开始OA进展和相关的疼痛,关节功能障碍,和快速软骨侵蚀(2- - - - - -4]。
颞下颌的synoviocytes包括呈synoviocyte (FLS)和macrophage-like synoviocyte (MLS)是主要的蜂窝组件构成的滑膜衬里2,4]。在OA进展,synoviocytes可以分泌多种促炎细胞因子和趋化因子进入滑液(2,5]。这些细胞因子,如肿瘤坏死因子-α(TNF) (TNF -α)和interleukin-1beta (il - 1β),导致本地滑膜炎症和关节矩阵退化,进而扩大炎症通过中介更多炎症因子释放(3]。
成熟和il - 1的分泌β需要乳沟pro-IL-1β还存在,这是由炎症。活跃分子平台称为inflammasomes内还存在形式。Inflammasomes扮演重要的角色在许多疾病,如心血管疾病、神经系统疾病,口腔疾病,炎症和自身免疫性疾病(6- - - - - -11]。的NLRP3 inflammasome是最广泛的研究规范inflammasomes之一。它由一个inflammasome传感器蛋白质,中央适配器ASC(凋亡speck-like蛋白质含有半胱天冬酶招聘领域(卡),和pro-caspase-1。NLRP3形式认可后两种模式pamp或抑制。NLRP3齐聚反应的受体和细胞溶质ASC激活招聘过程。与会NLRP3 inflammasome然后结构变化pro-caspase-1 caspase-1并最终促进活跃gasdermin D (GSDMD)。劈理的GSDMD会导致pyroptosis,程序性细胞死亡的一种形式。Pyroptosis可能加剧炎症反应形成跨膜孔和等离子体膜破裂,导致释放il - 1β、地震和级联细胞因子(12- - - - - -14]。
的功能NLRP3 inflammasome据报道许多关节炎疾病的发病机制,如痛风、膝骨关节炎,风湿性关节炎(15- - - - - -17]。由于独特的颞下颌关节解剖,是否NLRP3 inflammasome质数颞下颌的synoviocytes和介导pyroptosis和后来的炎症TMJOA仍不清楚。
在这项研究中,我们使用老鼠TMJOA模型来探索是否NLRP3 inflammasome-mediated pyroptosis参与TMJOA的过程,尤其是最初的滑膜炎症。通过使用MCC950 Ac-YVAD-cmk,两种高度选择性抑制剂针对NLRP3 caspase-1,分别,我们的目标是演示的治疗效果,减轻pyroptosis颞下颌关节滑膜炎症反应。这些结果可以帮助我们有一个更好的理解机制TMJOA发生和关于TMJOA预防和治疗提供更多的视角。
2。材料和方法
2.1。动物
Sprague-Dawley老鼠加权300 - 350 g从昆明医科大学实验动物中心购买。60岁男性成年老鼠保持温度控制在12 h光/暗周期在特定的无菌室。老鼠有免费的水和食物。动物实验研究的动物保健和使用委员会批准的昆明医科大学(批准号KMMU2020028)。实验协议被处决后,美国国立卫生研究院的指导的护理和使用实验动物。
2.2。CFA管理和诱导颞下颌关节炎症
不同的实验目的,集团作业被随机。老鼠与戊巴比妥钠腹腔麻醉(50毫克/公斤体重)。作为一个新颖的方法,颞下颌关节intracapsular双边注入引起的炎症是50μl完全弗氏佐剂(CFA) (Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)(油/生理盐水的比例1:1)(18- - - - - -20.]。50μl用生理盐水对照组。体格检查和组织学分析被用于评价颞下颌关节炎症。
2.3。抑制剂的应用
caspase-1抑制剂Ac-YVAD-cmk (Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)在DMSO溶液溶解,稀释到100 ng /μl与生理盐水。在美国青年代表大会组大鼠关节内注射50μl caspase-1抑制剂颞下颌关节的双方。相同体积的生理盐水和DMSO OA组。NLRP3抑制剂MCC950 (MedChemExpress蒙茅斯,新泽西,美国)稀释2毫克/毫升无菌生理盐水和腹腔内注射10毫克/公斤。OA组接受相同剂量的消毒盐水。药物注射最初2天前CFA注入和重复每2天一个星期(图1(一))。
(一)
(b)
2.4。细胞培养
大鼠颞下颌关节的滑膜组织碎到1 ~ 2毫米2块,保存在0.25%胰蛋白酶。切碎的滑膜组织被转移到T-25与DMEM培养瓶补充10%胎牛血清(Gibco;美国马热费希尔科学、沃尔瑟姆),2毫米谷氨酰胺,抗生素青霉素(100 U /毫升和100年μg / ml链霉素)(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA) 1周。当从组织成纤维细胞生长,细胞形态和免疫荧光法进行评估。实验使用3 - 6实现培养滑膜细胞的通道。
rpmi - 1640年THP-1细胞保持介质(美国犹他州Hyclone、南洛根)。每2 - 3天细胞通道保持适当的细胞密度 细胞/毫升。十四烷酸50 ng / ml佛波醇酯(PMA)(σ,圣路易斯,密苏里州,美国)被用来区分细胞M0巨噬细胞在48 h。
2.5。Coculture巨噬细胞和FLS的细胞
Transwell 6-well板(3452;美国纽约康宁)是用于coculture细胞。FLS的细胞密度 细胞/毫升培养下井。THP-1细胞分化与PMA第一和分离Accutase (A6964;Sigma-Aldrich,默克公司,德国)。然后,巨噬细胞在无血清DMEM resuspended并添加到上井的浓度 细胞/毫升。这些细胞被cocultured在湿润的气氛中5%的有限公司2在37°C至少24小时。
2.6。有限合伙人+ ATP感应
刺激之前,饿死细胞无血清DMEM 24 h。然后,1μg / ml脂多糖(LPS)刺激炎症反应用于12 h。20μM Ac-YVAD-cmk或10μM MCC950同时添加到细胞抑制的目的。过去2 h, 3毫米的细胞被挑战三磷酸腺苷(ATP)。盐水是作为控制。上层清液和细胞溶解产物被收集了下面的实验。
2.7。组织学分析
颞下颌关节组织中收获,在4%多聚甲醛固定24小时,用EDTA脱钙(pH值7.4)2周,脱水和嵌入在石蜡。切成4μ米厚,颞下颌关节石蜡部分准备苏木精和伊红染色())。
免疫组织化学分析,部分deparaffinized和脱水降低乙醇浓度。抗原修复使用0.01柠檬酸缓冲在95°C和冷却到室温。片被封锁H为3%2O25分钟在一夜之间使内源性过氧化物酶活性和孵化与初级抗体包括NLRP3 (Huabio et1610 1: 100年- 93年),ASC (DF6304 1: 100年,亲和力),GSDMD(1: 100年,AF4012) caspase-1 (Huabio et1608 1: 100年- 69年),亲和力)和il - 1β(1:100年,AF5103亲和力)在4°C。然后,部分是用PBS和孵化HRP-conjugated二级抗体为15分钟,轻拍5分钟。免疫反应是由蔡司显微镜观察(卡尔蔡司缩微成像)和量化利用ImageJ软件(NIH)。
2.8。末端转移酶的dUTP尼克结束标记(TUNEL)免疫荧光测定
deparaffinizing组织部分后,TUNEL免疫荧光检测设备(瑞士罗氏公司巴塞尔)是利用标记DNA链断裂根据手册。然后部分被洗在PBS和双重与DAPI染色。颞下颌关节片荧光显微镜下拍摄的图像(尼康,东京,日本)。
2.9。免疫荧光
这些细胞被固定在4%多聚甲醛和permeabilised 0.5% Triton x - 100年15分钟,在室温下分别。培养细胞与稀释主要抗体鼠波形蛋白(1:200年,Ab92547 Abcam)一夜之间在4°C。稀释荧光二次抗体(1:200年,SA012 Auragene)应用和孵化37°C 1小时在黑暗中。在黑暗中核与DAPI染色为5分钟。在PBS 4次洗涤后,荧光显微镜下的图像可视化(尼康,东京,日本)。
2.10。TEM
透射电子显微镜法实施验证FLS的细胞的细胞死亡形式。与PBS洗涤3次,收集培养细胞与胰蛋白酶和离心机在1000 rpm 5分钟。细胞颗粒收集和准备2.5%戊二醛。透射电镜下观察细胞的形态变化。
2.11。赫斯特和PI染色
细胞pyroptosis被赫斯特和π染色法测量。短暂,细胞培养在6-well板24 h和挑战与有限合伙人+ ATP或盐水。染色与赫斯特33342和π在制造商的指令(Solarbio,中国),细胞与多孔膜(π透水)蔡司显微镜和ImageJ程序进行了分析。
2.12。LDH释放试验
根据制造商的协议,乳酸脱氢酶测定工具包(Abcam,剑桥,英国)是用来测量后上层清液刺激细胞LDH的释放。
2.13。ELISA
il - 1的水平β和地震后上层清液的培养细胞刺激检测使用酶联免疫试剂盒(中国生物技术,4)根据制造商的指示。吸光度测量450海里。
2.14。流式细胞术
膜联蛋白V-kFluor488 /π检测设备(凯基生物生物技术)是用于双染色细胞根据指令。量化由流式细胞术。
2.15。免疫印迹
提取的蛋白质组织或细胞培养使用缓冲区里帕(Solarbio R0010,中国)。在4°C溶解产物是通过离心12000 rpm,持续15分钟。蛋白质水平用BCA量化分析工具(Beyotime生物技术,中国)。然后,总蛋白质是通过sds - page分离和转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(美国很多# K5NA8025F,微孔)。块膜5%脱脂牛奶TBS-T 1.5 h。培养他们一夜之间在4°C主要抗体NLRP3 (Huabio et1610 1: 1000年- 93年),ASC (DF6304 1: 1000年,亲和力),caspase-1 (Huabio et1608 1: 1000年- 69年),il - 1β(1:1000年,AF5103亲和力),GSDMD (AF4012 1: 1000年,亲和力),和GAPDH(1: 1000年,181602年,Abcam)。TBS-T的膜被洗,其次是孵化与二次抗体室温为1.5 h。与TBS-T洗3次后,污点信号被化学发光可视化工具包(美国微孔)。
2.16。实时聚合酶链反应
根据制造商的协议,总RNA分离培养细胞或滑膜组织使用试剂盒(表达载体)。通过合成第一链cDNA逆转录合成装备(Servicebio)。qPCR执行使用2 xsybr绿色qPCR大师混合(Servicebio)和运营于7500年ABI棱镜系统(应用生物系统公司,生活技术)。引物的序列表中列出1。目标基因的表达水平是由一个2计算- - - - - -ΔΔCt方法在规范化GAPDH表达式。
2.17。统计分析
给出的数据 。为统计分析、独立样本 - - - - - -测试和单向方差分析后跟Bonferroni事后测试使用SPSS和GraphPad棱镜7。
3所示。结果
3.1。关节内注射CFA导致颞下颌关节滑膜炎
下)染色,滑膜组织显示几个特征的变化OA组相比,虚假的组(图1 (b)),包括滑膜衬里层显著增厚。扩散滑膜衬里呈现典型的绒毛状增生到腔。密集的单核细胞浸润,扩张血管,扩散和分散的脂质滴也常见。有明显的炎症和髁突软骨退行性变化。胶原纤维表面的髁突软骨水肿和放松。甚至在一些样品,结晶形成的纤维或软骨层。增生性带层、成熟层和肥厚性层变薄的OA组。然而,软骨下骨侵蚀并没有观察到。以上特性证明CFA能成功诱导TMJOA关节内注射、特别是滑膜炎症。虚假的组中没有观察到这些变化,这和其他发表的研究是一致的18]。
3.2。增加表达NLRP3 Inflammasome TMJOA滑膜的老鼠
组装NLRP3和caspase-1 ASC激活inflammasome被认为是关键的过程。虚假的组相比,蛋白质和mRNA的表达NLRP3高架在TMJOA滑膜组织(数字2(一个)- - - - - -2 (c))。蛋白质水平的裂解capase-1显著调节(数字2(一个)和2 (b))。不一致,caspase-1的变化没有明显的mRNA水平(图2 (c))。自动催化作用的差异可能导致pro-caspase-1形成活跃caspase-1分开。炎性细胞因子il - 1β和pyroptosis-specific蛋白质GSDMD OA老鼠也显著增加,这是几乎体现在虚假的集团(数据2(一个)- - - - - -2 (c))。
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(e)
越来越多的pyroptotic细胞表达GSDMD观察OA组通过免疫组织化学染色,尤其是在滑膜和血管(数字2 (d)和2 (e))。il - 1的生产βNLRP3 caspase-1也调节(数字2 (d)和2 (e))。结果表明,NLRP3 inflammasome-mediated pyroptosis呈正相关,TMJOA滑膜炎体内。
3.3。应用抑制剂Ac-YVAD-cmk TMJOA MCC950 Pyroptosis改善和滑膜炎症
为了进一步确认pyroptosis的执行人,抑制剂Ac-YVAD-cmk(美国青年代表大会)针对caspase-1关节内的注入。我们发现,il - 1的蛋白质水平β、GSDMD caspase-1, ASC下调美国青年代表大会后治疗。然而,NLRP3没有观察到的变化(数据3(一个)和3 (b))。结果证明,通过干扰caspase-1的乳沟,下游il - 1的成熟β和GSDMD克制。
(一)
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(e)
此外,我们使用一个高度选择性抑制剂MCC950针对NLRP3每2天。结果显示显著抑制NLRP3, caspase-1, il - 1β颞下颌关节滑膜,GSDMD表达式(数字3(一个)和3 (c))。Ac-YVAD-cmk和MCC950治疗都可以减弱滑膜炎症和pyroptosis TMJOA老鼠。
为了进一步验证的功能抑制剂,颞下颌关节组织切片和TUNEL分析做好准备。TUNEL检测显示阳性细胞显著增加在TMJOA地区。一致,更少的阳性细胞中观察到OA +美国青年代表大会和OA + MCC950组与OA组(数据相比3 (d)和3 (e))。上述结果表明,Ac-YVAD-cmk和MCC950可能通过干扰在颞下颌关节滑膜炎症治疗效果的激活过程NLRP3 inflammasome和抑制synoviocyte pyroptosis。
3.4。有限合伙人+ ATP-Induced Pyroptosis THP-1细胞
进一步探讨颞下颌关节synoviocytes之间可能的相互作用,然后我们评估的影响有限合伙人+ ATP THP-1培养细胞和鼠FLS的细胞在体外。
THP-1细胞悬浮细胞。紧随其后的是刺激和PMA 48 h,激活巨噬细胞附着和形态学多边形和长伪足(图4(一))。免疫印迹和存在分析显示,NLRP3 ASC, caspase-1 GSDMD, il - 1β是调节巨噬细胞细胞溶解产物被有限合伙人+ ATP控制巨噬细胞(相比数据吗4 (b)- - - - - -4 (d))。
(一)
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抑制性的影响Ac-YVAD-cmk和MCC950监管NLRP3 inflammasome THP-1巨噬细胞激活也探索。之前用Ac-YVAD-cmk预处理和MCC950 ATP, inflammasome明显抑制作用和GSDMD观察(图在上面的测试4 (b)- - - - - -4 (d))。这与其他报道的研究结果是一致的(8,21- - - - - -23]。
3.5。的激活NLRP3 Inflammasome Coculture系统
呈滑膜细胞的主要种synoviocytes颞下颌关节滑膜组织。我们提取并培养初级TMJ-FLS SD大鼠的细胞,第三代是用于我们的研究。的经典组合LPS诱导pyroptosis执行+ ATP。然而,FLS的没有我们预期的反应。没有明显的激活inflammasome被观察到。仅略有增加GSDMD水平在世界银行(数字5(一个)和5 (b))。有趣的是,NLRP3 mRNA水平和caspase-1增加,冲突与蛋白质变化(图5 (c))。
(一)
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(c)
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(e)
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(g)
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然而,当与THP-1 cocultured FLS的细胞,分泌的il - 1β(图5 (d))和地震(图5 (e)上清液),以及在细胞溶解产物(数字inflammasome-related组件5 (f)和5 (g)),被检测到显著增加。中存在的结果也与蛋白质(图的趋势一致5 (h))。蛋白质和RNA的表达水平也可以抑制后的应用MCC950和Ac-YVAD-cmk培养基抑制活性的inflammasomes FLS的细胞(数字5 (f)- - - - - -5 (h))。
3.6。Pyroptosis Cocultured FLS的细胞系统的变化
Pyroptotic FLS的细胞被propidium双染色碘(π)/赫斯特33342年深造。PI-positive细胞调节与对照组(数字6(一)和6 (b))。在细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性研究。后的LDH释放量显著增加有限合伙人(图+ ATP的干预6 (c)),这表明在pyroptosis膜完整性的丧失。流仪分析double-labeled膜联蛋白V-kFluor488和π发现越来越多的PI-positive FLS的细胞(数字6 (d)和6 (e))和一些apoptotic-like (annexin-V + /π−)细胞。鉴于pyroptosis inflammasome-mediated caspase-1-dependent细胞死亡,我们添加抑制剂MCC950 Ac-YVAD-cmk。PI-positive细胞的百分比显著降低(数字6 (d)和6 (e))。此外,超微结构的透射电子显微镜(TEM)分析还显示FLS的形态学的变化包括染色质缩合,线粒体肿胀,分散trans-Golgi网络(dTGN),泡沫,孔隙的形成等离子体膜后刺激(图6 (f))。
(一)
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结果表明,THP-1-differentiated巨噬细胞可能激活呈synoviocytes在炎症过程和放大炎症反应。溶性因素似乎巨噬细胞释放的,至少部分负责纤维母细胞激活。
4所示。讨论
我们的研究表明,NLRP3 inflammasome-mediated pyroptosis参与了大鼠TMJOA滑膜炎。此外,我们发现激活NLRP3 inflammasome顺向GSDMD孔隙的形成和增强FLS的细胞和巨噬细胞体外cocultured系统。抑制NLRP3和caspase-1 MCC950 Ac-YVAD-cmk会抑制pyroptosis和后续TMJOA老鼠和培养synoviocytes炎症反应。我们的研究探索的可能作用NLRP3 inflammasome-mediated pyroptosis TMJOA发展的。
TMJOA是世界上最常见的颞下颌关节紊乱。越来越多的证据指出TMJOA的滑膜炎发生在初始阶段,在整个过程中,起着至关重要的作用,建议针对治疗OA滑膜炎症可能是一个有前途的战略。在这项研究中,我们使用一个常用的CFA关节内注射的方法来建立一个可再生的TMJOA鼠模型(18- - - - - -20.,24]。滑膜炎是复制与扩散的典型病变滑膜衬里和炎症细胞渗透。
TMJOA是一种炎症性疾病以滑膜增生,免疫细胞渗透,和大量的促炎细胞因子释放,包括il - 1β、il - 6、地震- TNF -αcyclooxygenase-2 (cox - 2)、基质金属蛋白酶和前列腺素E2 (PGE2) [25- - - - - -27]。人们普遍认为il - 1β是一个至关重要的炎性介质对应于骨关节炎严重性。il - 1β不仅可以启动滑膜炎在TMJOA也促进破骨细胞的分化,因此诱导软骨退化(28]。然而,il - 1的起源β以及它如何快速升级的炎症反应TMJOA尚未彻底了。
pyroptosis最近,程序性细胞死亡的形态,在多种疾病。规范pyroptosis依赖于裂解caspase-1,导致基质gasdermin D乳沟,细胞溶解,释放il - 1β(23,25,29日),炎症可能导致一连串的炎症反应通过进一步激活居民细胞和招募更多的炎性细胞浸润12]。NLRP3 inflammasome-mediated synoviocyte pyroptosis被报道参与膝骨关节炎的进展(16,30.- - - - - -32]。我们的初步实验证明NLR家族包括NLRP3复杂的mRNA测序检测鼠颞下颌关节滑膜组织。
我们建议NLRP3-mediated pyroptosis参与TMJOA滑膜炎,可能加剧随后的炎症。一致,我们的研究表明,NLRP3作为促炎介质被发现在老鼠TMJOA滑膜组织,随着caspase-1活性升高,il - 1β,GSDMD [25]。同时,越来越多的pyroptotic细胞被认为在大鼠滑膜炎组织。此外,瞄准NLRP3和caspase-1抑制剂抑制il - 1β和GSDMD表达式,以及pyroptotic细胞的存在。因此,我们证明了NLRP3 inflammasome-mediated pyroptosis参与的过程TMJOA滑膜炎。
体外,有限合伙人的组合+ ATP是一个被广泛接受的方法诱导细胞pyroptosis。滑膜成纤维细胞和巨噬细胞的主要细胞群synoviocytes [33]。对巨噬细胞的影响是复制在我们的研究中,与其他研究报告(这是重合的8,10,23]。然而,刺激FLS的细胞很少报道。我们的研究显示,FLS的单独施加inflammasome激活。它只能调解cocultured时明显的炎症巨噬细胞。活化的巨噬细胞可能提供重要的可溶性因子加速组装的NLRP3 inflammasome FLS的细胞。激活成纤维细胞可能导致滑膜增殖,放大炎症,破骨细胞分化、巨噬细胞和软骨退化cocultured时(34]。据报道,cocultured颞下颌关节纤维母细胞和巨噬细胞没有信息接触增强单核细胞chemoattractive蛋白1 (MCP-1)生产和扩大炎症4]。渗透了包括巨噬细胞的免疫细胞激活炎症在成纤维细胞通过核因子-κB (NF -κB)。成纤维细胞招募更多的免疫细胞通过产生炎症因子,传播NF -κB信号,导致了一个积极的反馈循环(35]。底层FLS的之间的相互作用和MLS仍在调查之中。
炎症刺激引发NLRP3 inflammasome大会,把pro-caspase-1变成caspase-1裂解,并最终诱导pyroptosis发生。在这项研究中,应用NLRP3抑制剂MCC950阻塞NLRP3 inflammasome激活体内和体外。裂解的水平caspase-1, il - 1β,GSDMD滑膜组织减少。TMJOA滑膜炎提高与改善滑膜增生,减少炎症细胞浸润。Ac-YVAD-cmk caspase-1的选择性抑制剂的应用,还可以抑制炎症反应,抑制il - 1的成熟β和细胞pyroptosis。然而,滑膜组织中NLRP3含量几乎不变。它起诉NLRP3可能刺激后立即激活,但caspase-1 pyroptosis仍然需要裂的发生。总的来说,Ac-YVAD-cmk和MCC950施加保护作用在颞下颌关节滑膜炎。相比之下,交付MCC950透露更有序的安排滑膜衬里和减少细胞渗透。
广泛的细胞pyroptosis孔隙的形成是在我们的研究中发现。氨基端GSDMD碎片被质膜上的钻井能力(14,25,36]。相比其他形式的程序性细胞死亡,pyroptosis更多的是一种细胞凋亡和坏死(13]。形态学,pyroptosis包括质膜孔隙的形成。当细胞内压力淹没先天membrane-repair机制,因而细胞破裂并形成囊泡周围。细胞核浓缩但保持完整性。Pyroptosis促进等离子体膜的破裂,导致促炎介质和炎性细胞因子的释放23,37]。最近的一项研究发现,分散trans-Golgi网络(dTGN)存在等离子体囊泡,NLRP3聚合作为支架,对ASC交互至关重要和下游信号级联(38]。
在我们的研究有一定的局限性。首先,尽管THP-1细胞inflammasome研究中被广泛使用,它不能完全模仿我们coculture MLS系统的影响。Rat-derived巨噬细胞可能是一个更好的方法。同时,更好地洞察TMJOA的发病机理,成纤维细胞和巨噬细胞之间的交互需要进一步探讨。
总之,我们的研究结果提供的证据表明,装配NLRP3 inflammasome参与TMJOA的发展,尤其是在滑膜炎症,导致synoviocyte pyroptosis和传播炎症反应。MLS可能与读者互动有助于炎症级联触发后续破坏。干预NLRP3 inflammasome组装使用MCC950 Ac-YVAD-cmk会抑制pyroptosis和炎症,这可能会进一步导致组织损伤的预防。
5。结论
研究指出,NLRP3-mediated pyroptosis密切相关TMJOA滑膜炎。MCC950和Ac-YVAD-cmk目标NLRP3 inflammasome组装可以改善在颞下颌关节炎症。发病机制的进一步调查这一新机制TMJOA可能是一个有前途的方向。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
作者的贡献
Yinzi鑫和魏王同样这项工作。
确认
这项研究得到了国家自然科学基金(82060206和82060206号),云南科技项目,中国(202001号ay070001 - 164, 202001 ay070001 - 083, 202001 ay070001 - 084,和2019年fe001 - 008),和云南科技创新团队项目(排名202105 ae160004)。