文摘
背景。肝母细胞癌(HB)是儿科最常见的肝脏恶性肿瘤,但治疗这种疾病是最小的。本研究旨在探索FoxO1和SREBP-1c HB的影响及其机制。方法。FoxO1、SREBP-1c FASN ac, ACC, MAGL表达式RT-qPCR组织样本进行检测和白平衡。包含IHC是用来衡量FASN内容。超表达和击倒FoxO1 sSREBP-1c进行Huh-6细胞。细胞增殖、迁移和入侵被CCK8检查,划痕,transwell化验。ELISA测试执行ATP,粮农组织、NEFA和乙酰辅酶a的内容。芯片是用于检测SREBP-1c蛋白质和FoxO1基因之间的相互作用。体内肿瘤发生是在老鼠身上进行的。肿瘤组织的形态部分被他染色观察。结果。FoxO1表达式在HB组织中表达下调,而SREBP-1c的表情,FASN, ac, ACC, MAGL调节。Huh-6细胞和小鼠肿瘤组织,FoxO1击倒导致增加细胞增殖,迁移和入侵,脂肪酸代谢活跃。相反,SREBP-1c击倒后,细胞增殖,迁移,入侵被削弱,脂肪酸代谢明显减少。SREBP-1c与FoxO1基因的启动子。FoxO1撞倒时,肿瘤组织更密集。击倒后SREBP-1c基因,肿瘤细胞的结构变形。结论。HB FoxO1和SREBP-1c相互抑制,导致细胞内脂肪酸代谢的增加,并最终促进乙肝的发展。
1。介绍
肝母细胞癌(HB)是一个儿科肿瘤引起的肝祖细胞或hepatoblasts。它是儿科最常见的肝脏恶性肿瘤。年度发病率是1.5每百万病例,占大约1%的儿童癌症(1]。主要治疗乙肝是手术切除,但大约60%的肿瘤是不可切除的发作,疗效是最小的(2]。因此,迫切需要探索乙肝的发病机制和开发新的治疗靶点改善乙肝患者的临床结果。癌细胞的特点之一是改变脂肪酸代谢(3]。脂质代谢的变化,如增加脂肪酸摄入,脂肪从头合成,与癌细胞的生成密切相关(4]。参与脂类代谢酶的表达和活性显著增加在许多癌症细胞,如脂肪酸合成酶(FASN)和Acetyl-coenzyme羧化酶(ACC) (5]。FASN在脂质代谢中起着至关重要的作用,已成为一个有吸引力的目标在临床癌症治疗(6]。然而,HB的脂质代谢的机制仍不清楚。
的forkhead box-O1 (FoxO1)是一个中央监管机构的后生动物生理学和在细胞周期过程中发挥作用,增殖,凋亡、自噬、压力阻力、DNA修复、肿瘤抑制,新陈代谢,和其他细胞活动(7]。FoxO1是严格监管通过修改其mRNA和蛋白,和它的表达式是由营养信号环境中(8]。FoxO1通路的障碍会导致各种代谢疾病,包括糖尿病、肥胖、非酒精性脂肪肝疾病和动脉粥样硬化(8]。FoxO1也被认为抑制骨肉瘤的发展,但其抑制作用的机制是不精确的9]。FoxO1也在脂肪代谢中起着至关重要的作用。据报道,FoxO1可以减缓脂质在肝脏沉积引起的应激反应(10]。
固醇调节元件结合蛋白是一类转录因子调节脂质稳态通过控制合成胆固醇、脂肪酸、甘油三酯、磷脂(11]。其中,固醇调节元件结合protein-1c (SREBP-1c)来源于SREBP-1c 17号染色体上的基因,主要调节脂肪酸和甘油三酸酯的合成12]。它是一个重要的致癌信号和肿瘤代谢之间的联系(13]。激活FASN upregulation SREBP-1c原因,提高脂肪酸代谢,并在理论上促进癌症发展(14]。耿等人认为SREBP-1c-driven脂质代谢可以针对治疗胶质母细胞瘤(15]。FoxO1的监管途径和在子宫内膜癌SREBP-1c成立(16]。FoxO1抑制insulin-induced SREBP-1c子活动山羊乳腺上皮细胞的转录SREBP-1c由肝X受体响应元件,如响应元素SREBP-1c启动子(17]。然而,它仍然是难以捉摸的FoxO1和SREBP-1c是否发挥了作用在HB调节脂肪酸代谢。
来自上面的背景中,我们想要探索的影响FoxO1和SREBP-1c HB细胞HB研究脂肪酸代谢的机制。因此,我们收集临床样本HB和paracancerous组织,购买各种HB细胞系,并进行体外和体内实验。本研究有助于我们进一步理解病理生理学的HB,预计将提供一个乙肝患者的临床治疗的新方法。
2。材料和方法
2.1。组织和细胞
临床HB和paracancerous组织样本收集从湘雅医院分为HB和对照组,每组5个样品。人类研究长沙市湘雅医院的伦理委员会批准了这项研究。AF / SQ202104798)。HB细胞包括HepG2 (bio - 105877), HB611 (bio - 73286), Huh-6 (bio - 73060),和人类正常肝细胞WRL68 (bio - 53604)在DMEM培养基培养是从Biobw买来的,(D5796σ)含10%胎牛血清(# 10099141,Gibco) 37°C和5%的公司2。为了研究FoxO1的影响,Huh-6细胞随机分为5组(控制、oe-NC oe-FoxO1, si-NC,和si-FoxO1组)。在第二大部分的研究中,Huh-6细胞被分成5组(控制、si-NC si-FoxO1 si-SREBP-1c, si-FoxO1 + si-SREBP-1c组)研究SREBP-1c的效果。
2.2。向量重组和细胞转染
si-FoxO1和si-SREBP-1c向量集成shRNA序列获得的针对人类FoxO1或SREBP-1c psi-LVRU6MP慢病毒载体(GeneCopoeia)。人类FoxO1 cDNA序列插入到pCDH-CMV-MCS-EF1a向量(时代生命科学公司)得到oe-FoxO1向量。空psi-LVRU6MP慢病毒载体作为si-FoxO1向量。空pCDH-CMV-MCS-EF1a向量是oe-FoxO1向量。然后,构造向量是转染293 T细胞(HEK293T Procell)生产慢病毒解决方案。这些慢病毒解决方案被转染进Huh-6细胞的协助下8μ克/毫升的聚凝胺(# H9268, Sigma-Aldrich) [18]。转染后48小时(19),这些细胞被进一步检查。
2.3。实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)
试剂盒的方法被用于从细胞和组织中提取总RNA。互补脱氧核糖核酸是通过使用一个信使rna逆转录逆转录工具包(# CW2569, Cowin生物)。FoxO1的引物序列,SREBP-1c、FASN ATP-citric酸裂解酶(ac)、ACC, monoacylglycerol脂肪酶(MAGL)β肌动蛋白设计(表1)。上海Sangon生物技术合成引物。荧光染料添加了PCR反应体系做准备。DNA扩增是由荧光定量PCR仪(PIKOREAL96热)。每个基因的扩增和融合曲线获得的荧光信号的实时监控。β肌动蛋白作为内部参考。基因的相对表达计算使用2- - - - - -ΔΔCT方法。
2.4。免疫印迹(WB)
总蛋白的提取细胞和组织里帕溶解产物(# P0013B, Beyotime)。混合沐浴在水5分钟后上层清液的蛋白质完全混合加载缓冲区。然后,蛋白质样品被孤立在凝胶电泳的恒压75 V 130分钟。电泳后,目标蛋白质转移到硝酸纤维素。膜密封,然后用初级抗体FASN孵化(1:2000年,10624 - 1 - ap, Proteintech), ac (1: 10000、67166 - 1 - ig Proteintech)、ACC(1: 4000年,21923 - 1 - ap, Proteintech), MAGL(1: 5000年,ab124796 Abcam)β肌动蛋白(1:5000、60008 - 1 - ig Proteintech)为90分钟。孵化后,膜与PBST洗。膜和二次抗体合山羊anti-mouse免疫球蛋白(SA00001-1, 1: 5000年,Proteintech)或合山羊anti-rabbit免疫球蛋白(SA00001-2 1: 6000年,Proteintech)培养90分钟。最后,在膜条可视化使用SuperECL +高度敏感发光的解决方案(k - 12045 d50 Advansta)。形形色色的灰度值是2019年由Photoshop。β肌动蛋白是用作内部参数。表达的蛋白质的表达目标蛋白质的灰度值的比值的参考蛋白质。
2.5。免疫组织化学(包含IHC)
包含IHC检测FASN在组织的表达。石蜡的HB和paracancerous组织。部分是deparaffinized和水化后,他们在微波炉中加热抗原修复。通过添加1%高碘酸盐酸内酶的灭活的部分。然后,部分和anti-FASN抗体(10624 - 1 - ap, 1: 100年,Proteintech)孵化一夜之间在4°C,然后第二抗体孵育第二天30分钟。部分与PBS溶液冲洗和孵化民建联的解决方案(ZSGB-BIO)在室温下5分钟。部分是re-stained苏木精为5分钟。部分是治疗酒精和二甲苯和中性树脂密封。显微镜(BA410T MOTIC)被用来捕捉图像,Image-Pro-Plus和图像分析软件。IOD比率计算的平均累积光密度的积极表达网站样本区域的观点。
2.6。细胞计数Kit-8 (CCK8)测定
细胞与胰蛋白酶消化和resuspended DMEM培养基。细胞在一个被播种 细胞/密度在100年的96孔板μL /。盘子被放置在37°C和5%孵化器有限公司2preculture。10μL CCK8解决方案(NU679 Dojindo)添加到每个。细胞进一步的孵化器孵化4 h。Bio-Tek酶标分析仪(mb - 530,希尔)是用来测量吸光度在450海里。
2.7。划痕试验
胰蛋白酶消化使用对数生长期的细胞消化成单细胞悬液。细胞被播种到6-well培养板的密度 细胞每口井。细胞培养在37°C公司5%2孵化器大约24小时,直到满six-well盘子。擦伤是用吸管尖端沿横向线six-well背后的盘子。PBS的盘子洗了三次删除挠细胞。然后,无血清DMEM培养基添加。在培养0 h, 24小时,48 h,倒置的生物显微镜下细胞拍摄(DSZ2000X Cnmicro)。
2.8。Transwell化验
康宁Transwell室(# 3428)与一个矩阵凝胶(# 354262,BD)被用来执行Transwell化验。细胞被消化成单细胞悬液与胰蛋白酶和resuspended无血清培养基 细胞/毫升。100年μL细胞悬液接种于up-compartment, 500μL 10% DMEM / F12培养基(D8437σ)low-compartment添加。在孵化器孵化在37°C 48 h。细胞在up-compartment与PBS溶液冲洗。20分钟与多聚甲醛固定细胞,细胞膜被移除。膜沾0.1%结晶紫为5分钟。细胞的外表面上室一个倒置生物显微镜下观察。脱色后醋酸浸,细胞在550 nm的吸光度测定,酶标分析仪(20.]。
2.9。脂肪酸代谢检测
南京建成生物工程研究所产生的ATP测定装备(# A095-1-1), Nonesterified游离脂肪酸分析工具包(# A042-2-1)和甘油三酯(TG)分析工具包(# A110-1-1)。人类脂肪酸氧化酶(FAO)酶联免疫试剂盒(# JL48747)和人类Acetyl-Coenzyme(乙酰辅酶A)酶联免疫试剂盒(# JL32777)买来Jianglaibio(上海,中国)。这些工具被用来测试三磷酸腺苷(ATP),粮农组织、TG, nonesterified脂肪酸(NEFA)和乙酰辅酶a细胞。每一步都严格遵循的指导手册。最后,在特定波长的光信号检测与酶标分析仪(21]。
2.10。染色质免疫沉淀反应(芯片)
芯片工具包(ab500 Abcam)是用于检测SREBP-1c和FoxO1之间的直接交互。细胞与胰蛋白酶消化后,细胞悬液与甲醛和孵化甘氨酸蛋白质交联目标和相应的基因组DNA。缓冲D和蛋白酶抑制剂被添加到细胞悬液。混合物超声粉碎了60年代,离心机。进行琼脂糖凝胶电泳分析DNA片段的大小。然后,使用琼脂糖珠根据指令执行免疫沉淀反应。最后,与DNA琼脂糖珠被暂停净化泥浆解锁DNA交联和净化。6对引物设计根据FoxO1基因的启动子(表2)。RT-qPCR放大DNA,并使用2倍浓缩计算- - - - - -ΔΔCT方法。
2.11。体内肿瘤发生
八周大女性裸体小鼠(BALB / c,ν/ν)从中南大学动物中心购买。小鼠随机分为5组( ):控制,si-NC、si-FoxO1 si-SREBP-1c, si-FoxO1 + si-SREBP-1c组。然后,他们被关在笼的病原体和给食物和水。HepG2细胞与胰蛋白酶消化,resuspended无菌盐溶液。同等数量的HepG2细胞( )的下腹部皮下注射到裸鼠[21]。肿瘤体积测量每周直到最大的体积是1000毫米3。所有老鼠都牺牲了与人工颈椎脱位的方法。肿瘤组织中,测量,称重,并进一步检查。
2.12。苏木精和伊红染色(他)
老鼠的肿瘤组织制成石蜡切片。的部分在微波炉烤60°C 2 h。部分被deparaffinized二甲苯和放置在100%,100%,95%,85%,75%乙醇在每个阶段为5分钟。部分被浸泡在蒸馏水和苏木精染色为3分钟5分钟和曙红的解决方案。然后,部分在梯度酒精脱水和浸泡在二甲苯两次,每次10分钟。最后,他们与中性密封胶(σ),和一个普通的光学显微镜照片(BA210T Motic)。
2.13。免疫荧光(如果)
微波炉是用来烤老鼠肿瘤组织的石蜡切片60°C 2 h。部分是由二甲苯deparaffinized和水化和多个乙醇浓度的解决方案。片都沉浸在pH值6.0柠檬酸缓冲(Wellbio)。柠檬酸缓冲被微波炉加热24分钟。缓冲液体冷却后,部分在硼氢化钠溶液浸泡30分钟和苏丹黑人的解决方案5分钟。部分密封与10%正常血清60分钟。一夜之间,部分被孵化主要抗体FASN (1: 50, 10624 - 1 - ap, Proteintech)在4°C。第二天,部分二次抗体孵育在37°C的90分钟。最后,部分与DAPI孵化解决方案(Wellbio)在37°C 10分钟,用PBS缓冲液冲洗。部分是密封缓冲甘油和荧光显微镜下观察。
2.14。统计分析
使用SPSS 20.0统计分析(SPSS . n:行情)、美国)。数据的形式 ( )。所有实验至少重复三次。学生 - - - - - -测试是用来分析两组之间的差异。比较在多个组由单向方差分析,其次是图基的事后考验。 被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。FoxO1表达下调而SREBP-1c HB和脂肪酸代谢基因调节
为了探索在HB脂肪酸代谢的变化,RT-qPCR和世行发现FoxO1的表情,SREBP-1c, FASN, ac, ACC, MAGL临床样本。从图所示1(一),与对照组相比,HB的FoxO1表达式组减少,SREBP-1c表达显著增加。在RNA和蛋白质、脂肪酸代谢相关指标的表达水平(FASN、ac、ACC和MAGL)乙肝组高于对照组(数字1(一)和1 (b))。包含IHC结果表明FASN表达调节乙肝组与对照组相比(图1 (c))。如图1 (d)中,三种HB、之间的基因表达差异Huh-6细胞和正常肝细胞(WRL68)是最重要的,所以Huh-6细胞被选为后续实验。
(一)
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(d)
3.2。FoxO1不足导致Upregulation SREBP-1c表达和增强扩散,迁移,入侵HB
为了确定FoxO1 SREBP-1表达和细胞功能的影响在HB, Huh-6细胞FoxO1过度或击倒了。RT-qPCR FoxO1表达水平的检测,SREBP-1c FASN,结果表明,FoxO1过度或可拆卸的细胞(图完成2(一个))。与oe-NC组相比,SREBP-1c的表达和FASN oe-FoxO1组降低。的表达水平与si-NC组相比,SREBP-1c和FASN si-FoxO1组增加(图2(一个))。如数据所示2 (b)- - - - - -2 (d)、细胞增殖、迁移和入侵能力oe-FoxO1组比oe-NC组较弱。与si-NC组相比,细胞增殖,迁移和入侵si-FoxO1集团的能力增强。换句话说,FoxO1可以抑制SREBP-1c的表达和FASN和减少扩散,迁移和入侵Huh-6细胞的能力。
(一)
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3.3。在HB FoxO1缺乏增强脂肪酸代谢
细胞内脂肪酸代谢过度和删除FoxO1检查澄清了HB FoxO1对脂肪代谢的影响。如数据所示3(一个)- - - - - -3 (e)与oe-NC组相比,ATP,粮农组织、TG、NEFA和乙酰辅酶a内容oe-FoxO1组降低。同时,与si-NC组相比,ATP的内容,粮农组织、TG, NEFA和乙酰辅酶a si-FoxO1组增加(数据3(一个)- - - - - -3 (e))。这些结果表明,FoxO1可以抑制ATP的吸收和生产,TG, NEFA和乙酰辅酶a。它也抑制了联合国粮农组织。换句话说,FoxO1抑制脂肪酸的新陈代谢在Huh-6细胞(包括合成代谢和分解代谢)。
(一)
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3.4。FoxO1和SREBP-1c相互抑制,调节Huh-6细胞功能
之前它已经被证实,FoxO1监管影响SREBP-1c和HB。进一步探索如何FoxO1 SREBP-1c一起工作,Huh-6细胞FoxO1和SREBP-1c击倒同时或单独SREBP-1c击倒了。图4(一)表明SREBP-1c可以抑制FoxO1表达式( ),和FoxO1也抑制SREBP-1c表达式( )。我们可以看到SREBP-1c有更实质性的抑制作用比FoxO1 FoxO1 SREBP-1c ( )。然后,芯片进行研究是否存在直接SREBP-1c和FoxO1基因之间的相互作用。如图4 (b)引物3倍浓缩的4和5是大于1,表明抗体的非特异性吸附的浓缩能力不到抗体的具体行动。它表明,SREBP-1c直接与网站互动3,4,5 FoxO1基因的启动子。细胞功能结果展示,与si-NC组相比,细胞的增殖、迁移和入侵能力si-SREBP-1c组降低。相比之下,那些si-FoxO1组增强(数字4 (c)- - - - - -4 (e))。同时当FoxO1和SREBP-1c撞倒,细胞的增殖、迁移和入侵能力降低。这些结果表明,FoxO1抑制细胞增殖,迁移和入侵,而SREBP-1c了相反的效果。同时,FoxO1和SREBP-1c相互抑制,Huh-6细胞和他们的净效应是促进细胞增殖,迁移和入侵。
(一)
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(e)
3.5。协调监管FoxO1 Huh-6 SREBP-1c调节脂肪酸的新陈代谢
我们已经表明,FoxO1监管影响SREBP-1c和脂肪酸代谢细胞HB。研究FoxO1和SREBP-1c起到一定的作用在调节脂肪酸代谢,我们构造Huh-6细胞撞倒FoxO1和SREBP-1c或撞倒SREBP-1c脂肪酸代谢相关指标的检测。如数据所示5(一个)- - - - - -5 (e)与si-NC组相比,ATP的内容,粮农组织、TG, NEFA,和乙酰辅酶a减少si-FoxO1 + si-SREBP-1c组和si-SREBP-1c组,而增加si-FoxO1组。这些结果表明,净效应FoxO1和SREBP-1c HB促进脂肪酸的新陈代谢。
(一)
(b)
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3.6。协调监管FoxO1和SREBP-1c促进乙肝的发展通过调节脂肪酸代谢体内
之前的实验都是在体外进行的。裸体小鼠的皮下tumor-forming模型构造,肿瘤组织收集验证的结果是否在体内与体外实验是一致的。图6(一)显示裸体小鼠的皮下肿瘤发生模型已成功构建。从图所示6 (b)与si-NC组相比,肿瘤的体积和重量si-FoxO1组显著增加,而那些si-SREBP-1c集团的减少。RT-qPCR结果表明击倒FoxO1和SREBP-1c基因已成功实现了在肿瘤组织(图6 (c))。如图6 (d)与si-NC组相比,肿瘤组织结构和形态是常规和si-FoxO1组紧密排列。si-SREBP-1c和si-FoxO1 + si-SREBP-1c组织,肿瘤组织的结构被破坏。与si-NC组相比,FASN的表达水平,交流,ACC, MAGL si-FoxO1组增加si-SREBP-1c和si-FoxO1 + si-SREBP-1c组减少(数字7(一)- - - - - -7 (c))。肿瘤组织检测结果表明,FoxO1和SREBP-1c相互抑制,FoxO1的净效应和SREBP-1c促进乙肝的发展通过调节脂肪酸代谢体内。
(一)
(b)
(c)
(d)
(一)
(b)
(c)
4所示。讨论
癌细胞代谢重编程已被认为是癌症的基本特性之一(22]。在胃癌、SREBP-1c被激活和脂肪酸合成显著增加(23]。Neoadipogenesis和脂肪酸β在肝细胞癌(氧化非常活跃24]。我们对临床样本的分析表明,FoxO1 HB组织中表达下调,的表达和基因的表达SREBP-1c和脂肪酸代谢的关键酶显著调节。自然,SREBP-1c和脂肪酸代谢的激活是初步认为是HB的重要特征。FoxO1退化在结肠癌(促进细胞增殖的25]。有趣的是,FoxO1食道癌促进肿瘤发展的过度增加巨噬细胞浸润(26]。宫颈癌后,扩散、迁移和入侵能力明显增强(27]。总之,FoxO1各种功能和调节的发展多种类型的癌症通过许多途径。在这项研究中,我们发现的击倒FoxO1促进乙肝的发展。SREBP-1c脂肪酸代谢的关键蛋白(28]。它激活转录FASN,主要fat-generating基因,促进膀胱癌的增长(29日]。在我们的研究中,SREBP-1c撞倒时,扩散,迁移,入侵和HB细胞的分裂能力降低,脂肪酸代谢水平也显著降低。
在糖尿病心肌病的研究,应等人发现FoxO1监管对脂肪酸代谢的影响(30.]。癌细胞的ATP水平远远高于正常分化的细胞来满足能源需求的增长和扩散31日]。通常,分化细胞主要依靠线粒体氧化磷酸化产生ATP,使用三个主要生物燃料的过程:葡萄糖、谷氨酸盐,和脂肪酸,而癌细胞的扩散取决于联合国粮农组织(32]。粮农组织是人类胶质母细胞瘤显著增强,抑制粮农组织导致减少细胞内ATP水平和生存能力33]。我们在乙肝检测ATP和粮农组织。结果表明,FoxO1的降价可能会显著增加粮农组织在HB和ATP保持在高水平。换句话说,在HB FoxO1缺乏促进脂肪酸的分解代谢。乙酰辅酶a是脂肪酸和胆固醇合成的前体(34]。ACLY-dependent乙酰辅酶a的生产起着至关重要的作用在胰腺肿瘤的早期阶段(35]。NEFAs与变量的线性链长度的有机化合物6-32碳,亲水的头部含有羧酸,促进结肠、肺、皮肤和乳腺癌36]。脂类存储在肺中性粒细胞通过micropinocytosis-lysosome运送到转移性肿瘤细胞通路,提高生存和增殖的肿瘤细胞(37]。我们的研究结果表明,FoxO1击倒显著增加乙酰辅酶a, NEFA, HB TG水平。换句话说,FoxO1缺陷可以在HB促进脂肪酸的合成代谢。儿茶素没食子酸盐抑制肝脏胆固醇合成通过针对SREBP-2 SIRT1 / FoxO1信号通路(38]。在我们的研究中,FoxO1击倒HB加速细胞的能源生产,增强脂肪酸代谢,并最终促进了HB细胞的发展。这个结果与之前的研究一致。
许多研究表明FoxO1可能影响脂肪酸代谢通过调节SREBP-1c的表达。例如,击倒FoxO1显著增加SREBP-1c和FASN在丙型肝炎病毒感染细胞39]。邓等人发现FoxO1可以扰乱SREBP-1c启动子转录的关键组件的组装复杂和抑制SREBP-1c启动子的活性,从而抑制SREBP-1c[的表达40]。然而,在HB FoxO1起到作用的机制仍不清楚。通过降价和FoxO1的过度表达,我们的研究证明FoxO1也可以抑制SREBP-1c的表达和抑制脂肪酸代谢HB。有趣的是,我们发现SREBP-1c FoxO1也有抑制作用(图4(一))。几乎没有报道FoxO1 SREBP-1c的抑制效果,所以我们进行了芯片实验证明SREBP-1c和FoxO1之间的直接交互。一些研究也支持SREBP-1c可以抑制FoxO1通过间接的表达作用。例如,Sajan等人发现,典型的蛋白激酶C的激活SREBP-1c灭活FoxO1通过WD40 /教授(脚手架蛋白)相关Akt在糖尿病41]。因此,这是必要的,以确定其对HB的净效应的增长。同时我们撞倒FoxO1和SREBP-1c Huh-6细胞,发现Huh-6细胞的脂肪酸代谢抑制,细胞功能和tumor-forming能力被削弱。换句话说,协调监管FoxO1 SREBP-1c可以促进乙肝的发展通过调节脂肪酸的新陈代谢。
在这项研究中,我们发现相互抑制FoxO1 SREBP-1c HB。此外,SREBP-1c可以绑定到FoxO1调节其转录的启动子。然而,FoxO1抑制SREBP-1c如何表达的机制仍不清楚。如前所述,SPREP-1c还能抑制FoxO1表达式通过间接监管。在HB,目前还不清楚是否直接或间接监管起着主导作用。我们无法进行详细研究这部分因为实验资金不足。在未来,我们将进行一系列的分子生物学实验来完善我们的研究。
5。结论
FoxO1可以减缓HB的进步通过抑制脂肪酸代谢而SREBP-1c促进它。FoxO1和SREBP-1c有抑制作用。协调监管FoxO1和SREBP-1c促进乙肝的发展通过调节脂肪酸代谢体内和体外。这些发现提供了一个理论依据更好的理解在HB脂肪酸代谢的机制。他们帮助开发新的目标乙肝的临床治疗。
缩写
| HB: | 肝母细胞癌 |
| FASN: | 脂肪酸合酶 |
| ACC: | Acetyl-coenzyme一羧化酶 |
| FoxO1: | Forkhead box-O1 |
| SREBP-1c: | 固醇调节元件结合protein-1c |
| 交流: | ATP-citric酸裂解酶 |
| MAGL: | Monoacylglycerol脂肪酶 |
| TG: | 甘油三酸酯 |
| 粮农组织: | 脂肪酸氧化酶 |
| 乙酰辅酶a: | Acetyl-coenzyme一 |
| NEFA: | Nonesterified脂肪酸。 |
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突,关于这篇文章的出版。
作者的贡献
秦朱、胡余和红岩哉概念化的研究设计。于胡、红岩哉,魏江Zhenglin Ou, Yuanbing姚明收集标本和实验数据。红岩哉和魏姜浩统计分析数据。Zhenglin Ou Yuanbing姚明写了初稿的手稿。
确认
这项工作是由湘雅医院。