文摘
客观的。慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种常见的慢性疾病,全球快速发展成一个严重的公共卫生问题。然而,究竟什么原因慢性阻塞性肺病的发生仍然很大程度上不清楚。在这里,我们试图探索高p16的表达是否由p300 / Sp1可引起慢性阻塞性肺疾病通过促进内皮祖细胞(epc)的衰老。方法。外周血内皮祖细胞是不吸烟的non-COPD隔绝,non-COPD吸烟,吸烟慢性阻塞性肺病患者。p16的表达、p300和伴随老化基因通过rt - pcr和免疫印迹检测到。然后,我们拆除或过表达Sp1和p300芯片试验用于检测组蛋白H4 p16的启动子区域,乙酰化水平CCK8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,β牛乳糖染色计数衰老细胞的比例。结果。的高表达p16在慢性阻塞性肺病患者的外周血内皮祖细胞被发现;香烟烟雾提取物(CSE)导致p16的增加。内皮祖细胞的高p16的表达促进了细胞周期阻滞和细胞凋亡。CSE-mediated高p16的表达促进了细胞的衰老。p300的表达在慢性阻塞性肺病患者的外周血内皮祖细胞增加。此外,p300 / Sp1提高了组蛋白H4乙酰化水平p16的启动子区域,从而调节内皮祖细胞的衰老。和可拆卸的p300 / Sp1可以挽救CSE-mediated细胞衰老。结论。p300 / Sp1提高了组蛋白H4乙酰化水平p16启动子区域调节内皮祖细胞的衰老。
1。介绍
慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种常见的慢性疾病,其患病率、伤残率、死亡率,和社会造成负担逐年增加,发展成为一个严重的公共卫生问题。目前,人们普遍认为,吸烟是诱发慢性阻塞性肺病的主要原因,而其发病机制尚未完全阐明。慢性阻塞性肺病是一种疾病早产儿肺衰竭(1- - - - - -4]。内皮祖细胞是内皮细胞的前体细胞,由中胚层分化发病机制和参与人类胚胎血管生成(5,6]。由于其分化成内皮细胞及其分泌的血管活性的物质等生物学特性,扩散,自导,和迁移,内皮祖细胞(epc)在产后血管生成起着非常重要的作用,reendothelialization,组织再生和修复(7- - - - - -9]。
p16基因属于INK4基因家族,由四个成员:p16INK4A,p15INK4B,p18INK4C,p19INK4D,都有肿瘤细胞生长抑制的生物学特性和抑制(10]。p16也是后第二个最常见的肿瘤抑制基因p53。它被广泛的认为是家族性黑素瘤基因,免疫组织化学的一个明确定义的角色在某些病理条件下(11]。与此同时,p16也被发现在细胞衰老起到至关重要的作用。细胞衰老是一个不可逆的细胞生长。生化和形态学变化发生在细胞衰老,包括独特的细胞形态的形成,如平细胞质(12]。细胞衰老是一个不可逆逮捕细胞增长伴随着生化和形态学变化,包括独特的细胞形态的形成,如平细胞质(13]。p16-mediated衰老导致染色质重组,与抑制相关基因受转录因子E2F1 [13,14]。染色质重组在oncogene-induced过早衰老的特征是SAHF (senescence-associated异染色质病变),表现为致密核DNA和集中H3K9 trimethylation [15,16]。
有研究报道,内皮祖细胞的数量减少和功能衰退在慢性阻塞性肺病患者的外周血与疾病的严重程度高度相关(17]。肺气肿动物模型中,增殖,分泌,和粘附的骨髓内皮祖细胞减少,与衰老标记p16的表达(INK4a)骨髓内皮祖细胞和肺组织增加,而干细胞抗原1(本来)和c - kit表达减少18];同时,香烟烟雾提取物(CSE)可以直接诱导体外培养的内皮祖细胞的功能障碍和上述基因的表达水平的变化表明,EPC衰老和EPC逐渐枯竭存在于与吸烟有关的慢性阻塞性肺病(18- - - - - -20.]。慢性阻塞性肺病鼠标模型进一步通过气管与同种异体移植正常内皮祖细胞,EPC移植后的结果显示,不仅COPD的肺功能和肺气肿病变小鼠显著改善,基质金属蛋白酶的水平和活动在支气管肺泡灌洗液和肺泡隔细胞的凋亡减少,和总抗氧化能力提高(20.- - - - - -24]。内皮祖细胞是一个非常有前途的血管健康生物标志物具有广阔的应用前景,可用于治疗一系列的临床疾病25]。先前的研究显示,慢性阻塞性肺病患者的内皮祖细胞的数量和功能可能会减少,并增加p16表达起着重要的作用在维护细胞周期阻滞特征(26- - - - - -28]。在这项研究中,我们发现高p16的表达在慢性阻塞性肺病患者的外周血内皮祖细胞,这将导致p16的转录活动的增加。
组蛋白翻译后修饰是主要的表观遗传机制调节生活的过程,和组蛋白乙酰化作用是由组蛋白乙酰转移酶(催化的29日]。组蛋白乙酰转移酶(HAT)和p300 / CBP一样,是一个关键的转录辅激活参与调节多种基因。激活的帽子使p300 / CBP的能力通过核小体组蛋白修饰影响染色质的活动。当前可用的数据表明Sp1和p300执行合作工作在几个基因的转录调控30.,31日]。Sp1,作为一个关键的转录因子在哺乳动物中,与Sp1的形成密切相关/帽子复杂[32,33]。在真核生物基因启动子,Sp1能够招募组蛋白乙酰基转移酶(帽子)和脱乙酰酶(HDAC)调节组蛋白乙酰化作用并存动态和快速的方式,从而激活或抑制基因表达式(34- - - - - -36]。以前的文献报道,p300击倒可以减少的表达β牛乳糖(β加)内皮细胞并缓解senescence-like内皮细胞的变化。然而,非常有限的研究都是在p300 / Sp1-mediated高p16的表达内皮祖细胞衰老和慢性阻塞性肺疾病的发展37- - - - - -39]。因此,在这项研究中,我们进行了更深入的研究专注于这种监管机制。
2。材料和方法
2.1。临床样本
本研究通过第三中南大学湘雅医院(2018 - 056)。我们招募了三组受试者组成18个不吸烟的non-COPD, 20 20 non-COPD吸烟,吸烟慢性阻塞性肺病患者。慢性阻塞性肺病患者按照标准定义慢性阻塞性肺疾病的全球倡议标准( )。慢性阻塞性肺病患者临床状态稳定,没有呼吸道感染或急性恶化的证据至少4周。患者并发症如哮喘、肺间质疾病、心脏衰竭和/或神经肌肉疾病被排除在本研究之外(患者信息,请检查补充表1)。对象的吸烟史是决定意味着许多久的香烟消费。静脉血液样本(10毫升)从受试者单独收集。
2.2。EPC隔离和标识
58人类志愿者的血样成功地收集在这个研究。如有3组,每组大约20个病人收集的血液样本。4 - 5批次的血液样本收集每一组,4到5病人每一批。对于每一批收集血液样本,我们混合的血液和花了20毫升提取内皮祖细胞实验。20毫升血液样本稀释…(Lonzo, cc - 3156) 50毫升无菌离心管(1:1, )。同样体积的稀释剂被加入到离心管上部含淋巴细胞分离介质(Axis-Shield)。试管是离心机在室温下2500 rpm 30分钟,然后,中间单核细胞层收集并放在一个空离心桶使用无菌吸。PBS的细胞被洗两次,单核细胞收集。10%的边后卫或者5% pHPL和10 U /毫升肝素(Trevigen, 3450-048-08)被添加到媒介为了避免血小板凝固;然后,细胞培养在12-well板涂有老鼠tail-derived 1型胶原(Termo A1048301)中。一夜孵化后,non-adherent细胞收集金属堆焊。预热培养基添加稀释细胞,细胞被分离出3井12-well 24-well板板和6井,进行三次。然后,媒介是刷新第一七天,一天一次一次每隔一天在接下来的七天。后来,媒介是每2或3天刷新一次。内皮祖细胞被确定通过流式细胞术使用CD34 (Abcam ab64480), CD133 (Abcam ab19898)和VEGFR2 (Abcam ab39256)抗体。 EPCs were detached, centrifuged, and washed twice with phosphate-buffered saline (PBS) and then resuspended in Stain Buffer and counted. The cell suspension was transferred to new 1.5 mL Eppendorf tubes, with roughly 在每个管细胞。5μL CD34和CD133抗体和同形像控制添加到50μL基于抗体浓度的细胞悬液推荐在流式细胞仪的指示。后混合均匀,包含抗体的细胞悬液培养在一个冰箱在4°C完全黑暗中30分钟,三用预冷洗净污渍缓冲区,和离心5分钟在400 g。的抗体被冲走了。最后,细胞resuspended 500年流管μL缓冲染色和流式细胞仪探测到。流式细胞术结果利用FlowJo 7.6软件进行了分析和处理。
2.3。免疫印迹
预冷PBS的细胞被洗了三次,细胞溶解•瑞帕溶解产物,在12000转离心10分钟;然后,浮在表面的聚集检测蛋白质浓度用BCA检测试剂(北京南方世纪生物技术有限公司,CW0014)。电泳后从60 V到120 V电压改变,蛋白质被转移到PVDF膜使用wet-to-electric转移。后,细胞膜被使用5%脱脂milk-TBST和培养在一夜之间在4°C主要抗体如下:anti-Col1a1 (CST, 84336;1:1000),MMP3 (Abcam ab52915;1:1000),MMP13 (Abcam ab39012;1:1000),Pal1 (Abcam ab7205;1:1000)和GAPDH(热,AM4300;1:5000)。随后,膜与辣根培养peroxidase-labeled山羊anti-rabbit免疫球蛋白(北京CoWin生物科学,中国)。 Afterwards, Tanon™ High-sig ECL Western Blotting Substrate (Shanghai Tanon Co., Ltd., 180-501) was used to develop the film, and the gray value was detected by ImageJ (NIH). Thereafter, the protein level was expressed by the ratio of the gray value of the target bands to that of the internal reference (GAPDH).
2.4。RNA提取和rt - pcr
总RNA提取试剂盒(热费舍尔,15596026)和reverse-transcribed cDNA通过PCR扩增仪(Bio-Rad)。随后,实时定量rt - PCR实验使用ABI 7500定量PCR仪(ABI 7500,热费希尔)与反应条件设置如下:在95°C predenaturation 10分钟,在95°C 40-cycle变性10年代,退火60°C 20年代,在72°C和扩展34 s。然后,样本使用PCR或定量PCR分析。p16的引物对如下:5 - - - - - -TTCCTGGACACGCTGGT-3和反义5 - - - - - -CAATCGGGGATGTCTGAG-3 。引物对p300如下:5 - - - - - -GACCCTCAGCTTTTAGGAATCC-3和反义5 - - - - - -TGCCGTAGCAACACAGTGTCT-3 。的引物对β肌动蛋白是如下:5 - - - - - -TCGTGCGTGACATTAAGGAG-3和反义5 - - - - - -ATGCCAGGGTACATGGTGGT-3 。引物对Col1a1如下:5 - - - - - -GCAGCTGGGTCCTCAGAAT-3和反义5 - - - - - -CAGTTCCCCAGTTCCACTTC-3 。引物对MMP3如下:5 - - - - - -CAGACTTGTCCCGTTTCCAT-3和反义5 - - - - - -GGTGCTGACTGCATCAAAGA-3 。引物对MMP13如下:5 - - - - - -CAGACTTGTCCCGTTTCCAT-3和反义5 - - - - - -GGTGCTGACTGCATCAAAGA-3 。引物对Pal1如下:5 - - - - - -TCTACAACAACGGATTGCCGTCC-3和反义5 - - - - - -CACGGTGTTCTTCACCGCGTGC-3 。数据分析使用方法β肌动蛋白作为内部控制。
2.5。流式细胞仪细胞周期分析
细胞与胰蛋白酶消化,与70%乙醇固定,保存和存储在一夜之间在4°C,然后悬浮在50μL与0.5磷酸盐缓冲剂μL和10μ150克/毫升核糖核酸酶A和μL propidium碘。后,细胞DNA内容量化使用FACSCalibur (BD生物科学,圣何塞、钙、美国)。
2.6。染色质免疫沉淀反应
芯片协议已经前面描述的(40)与antiacetyl H4(微孔,06 - 866)抗体。样品被PCR或RT-QPCR评估。
2.7。细胞转染
转染前细胞,内皮祖细胞被播种到24-well盘子,和0.5毫升含有约 细胞。质粒转染了使用Lipofectamine™2000(热费舍尔,1668030)基于Lipofectamine 2000转染指令。RNAi马克斯(表达载体,13778075)转染了50 nmol / L siRNA无血清和不需抗生素中根据制造商的协议。核序列如下:Sp1 siRNA 1: CCUGGAGUGAUGCCUAAUATT;Sp1 siRNA 2: CCAGCAACAUGGGAAUUAUTT;p300 siRNA 1: GCAGCUCAACCAUCCACUATT;p300 siRNA 2: GCAAACAAUCGAGCGGAAUTT;和p16 siRNA: AGAACCAGAGAGGCTCTGA。
媒介改变了完整的增长条件转染后6小时;然后,转染后的细胞收获72小时。
2.8。免疫荧光
这些细胞被洗两次用PBS(5分钟),和4%多聚甲醛固定15分钟,孵化Triton / PBS 6分钟,0.5%受阻(NaN 10%山羊血清,0.05%3卫,0.2%,在37°C和PBS稀释30分钟),和孵化主要抗体在一夜之间在4°C。之后,这些细胞被孵化与荧光二次抗体(热Fisher)在完全黑暗中1小时,与DAPI染色5分钟和密封。最后,共焦显微镜(徕卡SP5)被用来拍照的细胞,或用荧光显微镜观察细胞。
2.9。β加染色
基于制造商的协议,与SA -细胞被染色β加活动使用细胞衰老检测设备(微孔,KAA002)。然后,阳性染色使用ImageJ量化和图像软件Pro总理。
2.10。细胞计数Kit-8 (CCK8)测定
每个板接种细胞基础上实验组集。对数生长期的细胞制成细胞悬液,接种密度设置为 ,和100年μL细胞悬液是放置在一个96孔板和三个复制井每组接种。100年μL培养基作为空白控制和孵化在37°C在5%的股份有限公司2孵化器。细胞计数Kit-8 (CCK8)和血清DMEM喜忧参半的体积比1:10和添加到测试井100剂量μ信用证,然后孵化37°C 1 h有限公司5%2孵化器。450海里的吸光度测量使用标板的记录值。
2.11。荧光素酶实验
p300和Sp1 cotransfected与向量由p16启动子荧光素酶。p16是放大的505个基点片段PCR p16F 5 - - - - - -CCAAACAC-CCCGATTCAATTTGGCA-3和p16R5 - - - - - -CCGCTGCCTGCTCTACCCCTCTCC-3引物产生的p16启动子荧光素酶报告质粒。PCR片段克隆到PCR 2.1威尼斯平底渔船向量,和序列验证。转染48 h后,荧光素酶的记者分析系统(热)是用于检测,具体步骤是按照相应的设备说明。每个孔的细胞培养基是丢弃,和100年μl 被添加到每个洞。细胞溶解产物是振荡瓶30分钟,和杂质被离心沉淀(1200 rpm, 1分钟)。总共有20μL细胞溶解产物被添加到每个不透明的96孔板,和100年μL(荧光素酶检测试剂二世(守护神II)和100年μL(海肾荧光素酶试剂添加反过来根据指令。Tecan无限F200 / M200荧光素酶活性值( )每个油井被Tecan无限F200 M200 /多功能微型板块读者,和 值被用作相对活动每个对统计分析的价值。
2.12。统计分析
的所有数据了 。的两组比较的数据测试和数据分析了多个组的使用单向方差分析(方差分析)。进行数据分析使用SPSS17.0 (SPSS, Inc .,芝加哥,伊利诺斯州,美国)和GraphPad Prism 8.0 (GraphPad软件,圣地亚哥,加利福尼亚,美国)。统计学意义时假定 虽然显著差异时确认 。
3所示。结果
3.1。高p16的表达发生在慢性阻塞性肺病患者的外周血内皮祖细胞
作为一个基本的细胞因子,p16可以调节细胞衰老过程。为了探讨p16的表达在不吸烟的non-COPD外周血内皮祖细胞,non-COPD吸烟,吸烟和慢性阻塞性肺病患者,我们首先分离外周血内皮祖细胞的患者通过流式细胞术和识别这些孤立的细胞(图1(一))。然后,我们检测p16的表达在不同的团体通过rt - pcr和免疫印迹,其结果表明,p16的信使rna和蛋白质水平显著增加慢性阻塞性肺病患者的外周血内皮祖细胞(数字1 (b)和1 (c))。然后,我们进一步验证CSE是否会导致p16的增加。我们培养的外周血内皮祖细胞不吸烟患者和non-COPD CSE的不同浓度。rt - pcr结果表明,p16的表达与CSE浓度的增加逐渐增加。与此同时,免疫印迹结果表明蛋白质水平的p16与CSE浓度的增加显著增加(数据1 (d)和1 (e))。
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3.2。高p16的表达内皮祖细胞抑制细胞活性,促进了细胞周期阻滞
然后我们发现在不吸烟的non-COPD内皮祖细胞的增殖,non-COPD吸烟,吸烟慢性阻塞性肺病患者。CCK8试验表明,吸烟慢性阻塞性肺病患者的内皮祖细胞的增殖能力下降明显(图2(一个))。进一步,我们可拆卸的p16在吸烟慢性阻塞性肺病患者的内皮祖细胞,发现低p16的表达可以挽救患者内皮祖细胞活动的减少(图2 (b))。CSE的治疗方法是进行时,我们发现在此期间击倒p16的表达在内皮祖细胞可以有效地阻止CSE的抑制作用在细胞增殖(图2 (c))。我们进一步分析了内皮祖细胞的细胞周期,在不吸烟的non-COPD non-COPD吸烟,吸烟和慢性阻塞性肺病患者,结果表明,G1 / S相变逮捕发生在所有的吸烟慢性阻塞性肺病患者的内皮祖细胞(图2 (d))。此外,我们撞倒p16在吸烟慢性阻塞性肺病患者内皮祖细胞,发现低p16的表达可以挽救G1 / S期逮捕内皮祖细胞在患者(图2 (e))。同时,我们可拆卸的p16在CSE-treated non-COPD EPC细胞,我们发现推倒p16可以抑制G1 / S期逮捕由CSE(图2 (f))。
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3.3。CSE-Mediated p16超表达促进了细胞的衰老
调查的影响高p16的表达内皮祖细胞的衰老,我们执行β加染色,发现伴随老化的基因的表达。的β加染色实验显示,CSE可以促进内皮祖细胞的衰老。我们还发现,推倒p16的表达在内皮祖细胞可以抑制细胞衰老引起的CSE(图3(一个))。免疫荧光染色表明,CSE Lamp1的高表达,这表明溶酶体的增加,高细胞自噬,和增加衰老程度的内皮祖细胞,而推倒p16会减少Lamp1的表达在一定程度上(图3 (b))。同时,我们也发现伴随老化的基因的表达。伴随老化Col1a1基因,MMP3, MMP13 Pal1与CSE内皮祖细胞治疗中高度表达,而这些基因的表达与p16撞倒(数据是被抑制的3 (c)和3 (d))。
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3.4。增加p300的表达促进了高p16的表达
以前的研究报道,p300可以调节的转录活动p16,和p300的高表达可能促进细胞周期阻滞(41]。我们还发现,在不吸烟的non-COPD non-COPD吸烟,吸烟和慢性阻塞性肺病患者p300的表达在吸烟慢性阻塞性肺病患者的外周血祖细胞显著高于其他两组(图4(一))。当细胞接受CSE和p300的表达被撞倒,p16的表达也减少了rt - pcr和免疫印迹结果(数据4 (b)和4 (c))。当p300的小分子抑制剂(C646)添加到内皮祖细胞治疗CSE,我们发现p300的减少活动在一定程度上可以抑制p16的表达。所有这些表明,在高p16的表达由CSE, p300很可能是一个潜在的转录监管机构p16的上游。
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3.5。p300 / Sp1监管p16转录活动
先前的研究表明,p300函数作为转录共激活剂调节许多细胞反应,如细胞周期进程和细胞分化,这个过程依赖于转录因子Sp1。同时,Sp1指导始发前复合物的形成,-464年到-452年英国石油公司p16启动子区域(41,42]。为了验证这个信号通路是否也可以调节内皮祖细胞的衰老由CSE,我们首先中不同数量的p300在epc和检测p16的活动启动子荧光素酶检测。我们发现p16子活动增加与p300的增加表达(图5(一个))。超表达Sp1的也可以促进p16启动子的转录活动(图5 (b)),而p300击倒或Sp1会抑制p16启动子的转录活动(图5 (c))。我们在内皮祖细胞过表达或可拆卸的p300 / Sp1和发现,过度的p300 / Sp1促进了高内皮祖细胞p16的表达,而击倒p300 / Sp1抑制p16的表达(数据5 (d)和5 (e))。芯片分析显示,过度的p300 / Sp1促进组蛋白H4乙酰化作用的p16启动子区域,而这两个基因的击倒了相反的效果(数字5 (f)和5 (g))。上述结果表明,p300 / Sp1共同参与高内皮祖细胞由CSE p16的表达。
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3.6。低表达的p300 / Sp1抑制CSE-Mediated细胞衰老
进一步证明p300 / Sp1调节内皮祖细胞介导的高表达p16 CSE,我们撞倒了p300 Sp1或内皮祖细胞治疗中心。这两个β加染色和Lamp1免疫荧光实验表明,推倒p300或者Sp1可以抑制细胞衰老在一定程度上由CSE(数字6(一)和6 (b))。同样,流式细胞术结果还显示,推倒p300或Sp1抑制内皮祖细胞的细胞周期阻滞(图6 (c))。与此同时,我们也发现伴随老化Col1a1基因的表达,MMP3, MMP13, Pal1,发现击倒p300或Sp1也可以抑制CSE-mediated这些衰老基因的高表达在一定程度上(数据6 (d)和6 (e))。进一步,我们还进行了救援的实验。我们撞倒了p300或Sp1 CSE-treated epc和过表达p16。后我们发现overexpressing p16,伴随老化Col1a1基因的mRNA和蛋白水平,MMP3, MMP13,和Pal1显著增加,表明CSE监管p16的表达通过p300或Sp1,造成内皮祖细胞的衰老(数字6 (f)和6 (g))。
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4所示。讨论
慢性阻塞性肺病是最常见的呼吸系统疾病和死亡的第四大原因世界各地。这是进步的气流阻塞、应对有害颗粒或气体,特别是香烟,与气道的慢性炎症过程和肺实质43]。COPD的发病机理尚未完全发现。我们的研究发现,慢性阻塞性肺病患者的内皮祖细胞p16的表达增加,抑制细胞的活动,促进了细胞周期阻滞和增强血管内皮细胞的衰老。血管内皮祖细胞是血管健康的重要生物标志物。先前的研究已经表明,存在一定程度的血管EPC减少慢性阻塞性肺病患者。我们的研究表明,减少内皮祖细胞高度可能是由于吸烟引起的p16的表达增加。此外,我们发现,CSE p300 / sp1的表达增加,从而介导内皮祖细胞p16表达的增加。重要的是,我们的研究表明,CSE真正促进了慢性阻塞性肺病的进展,为解释COPD的发病机制提供理论依据。
组蛋白乙酰转移酶p300是一个转录激活剂,它最初是在腺病毒致癌的搜索发现转录因子E1A结合蛋白,后来,它被证明了组蛋白乙酰转移酶活性(44,45]。小鼠的肺组织暴露于香烟烟雾和人类支气管上皮细胞诱导组蛋白的CSE显示一个upregulation H4K12乙酰化水平。击倒的p300可减少的表达β牛乳糖和减缓senescence-like修改内皮细胞(46]。在这项研究中,我们发现,p300调节p16的表达。COPD组蛋白乙酰转移酶p300的增加可能参与COPD的发病机制移植组蛋白的乙酰化水平H4K12,从而激活伴随老化因素的表达,促进内皮祖细胞的衰老。由于p300是一个转录激活剂,也是值得研究的p300是否会激活其他转录因子除了p16。与此同时,我们不知道为什么存在高表达的p300在外周血内皮祖细胞的慢性阻塞性肺病患者。
组蛋白修饰酶是由ubiquitin-proteasome降解途径。泛素化修饰是蛋白质降解的信号(47]。在细胞,ubiquitin-proteasome通路的主要途径是ATP-dependent protein-selective退化,主要功能在某些调控蛋白半衰期较短和一些结构异常,错误配置,或者受损蛋白质在细胞调节细胞活动(48,49]。罗等。50)发现吸烟暴露可以激活ubiquitin-proteasome通路,导致骨骼肌蛋白质降解和细胞损伤。宋et al。51)报道,在肺癌细胞激活ubiquitin-proteasome通路可能导致组蛋白乙酰转移酶p300的退化。也值得研究是否存在一个吸烟引起deubiquitinase激活体内可以促进内皮祖细胞参与的衰老过程通过稳定的慢性阻塞性肺病p300的表达蛋白质,移植组蛋白的乙酰化水平H4K12,激活转录伴随老化因素。
这项研究的局限性主要躺在有限的患者人群覆盖的分析。慢性阻塞性肺病患者选择在本研究中主要是急性发作,包括不稳定的病人。同时,因为我们研究内皮祖细胞从多个患者的外周血中提取,没有具体比较p300的活动/ p21在年级模拟慢性阻塞性肺病患者的内皮祖细胞,我们的研究并不能完全代表整个COPD患者的临床表现。
据报道,早期慢性阻塞性肺病患者内皮祖细胞数量的增加,和内皮祖细胞导致肺血管的修复和重建,而在晚期慢性阻塞性肺病患者循环内皮祖细胞的数量减少(52- - - - - -54]。在这项研究中,我们没有探索是否在4名患者循环内皮祖细胞的数量和功能改变。后续研究将探讨上述问题更加深入。
一般来说,我们的研究发现增加p16的表达和p300在外周血内皮祖细胞的慢性阻塞性肺病患者,和p16的CSE将导致增加。此外,p300 / Sp1提高了组蛋白H4乙酰化水平p16启动子区域调节内皮祖细胞的衰老。
数据可用性
的数据支持本研究的发现可以从相应的作者在合理的请求。
伦理批准
本研究通过第三中南大学湘雅医院,长沙,湖南、中国。
同意
书面知情同意了所有科目。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突,关于这篇文章的出版。
作者的贡献
彭梁G和H研究构思,进行实验和数据分析,起草了手稿。高米,曾庆红M,张X进行实验和数据收集。他Z构思研究及其设计和修订后的手稿。Zhihui他进行研究设计,数据采集,数据分析,和写作的手稿。Huaihuai彭高和最小样本进行收集和写作手稿。Guibin梁做了研究设计、数据解释和写作的手稿。Menghao曾庆红和雪峰张执行的数据解释和写作手稿。所有作者阅读和批准最终的手稿。
确认
这项研究得到了中国自然科学基金(81870040)。
补充材料
补充表1:详细的人口统计学和临床特点的病人在这个研究。(补充材料)