皮质甾酮抑制LPS-Induced NLRP3 Inflammasome启动在巨噬细胞通过抑制黄嘌呤氧化酶

文摘

创伤性侮辱和相关病原体感染后,激活先天免疫在围手术期期间,尤其是NLRP3 inflammasome巨噬细胞。神经内分泌反应也迅速激活调节过度炎症;然而,分子机制仍不完全清楚。本研究旨在调查的调制NLRP3 inflammasome启动内源性糖皮质激素(肾上腺酮、CORT)及其与黄嘌呤氧化酶(XO)之间的关系。RAW264.7小鼠巨噬细胞与LPS刺激(1μg / ml)。LPS-induced NLRP3表达了通过CORT预处理不同浓度(0 - 900 ng / ml)。然后,更高浓度的CORT的影响(700 ng / ml) LPS-induced NLRP3表达和别嘌呤醇的影响(250μg / ml)被观察到。最后,CORT拮抗剂的影响(RU486) XO表达和活动在巨噬细胞和NLRP3表达进行了进一步的分析。浮在表面的水平il - 1β和地震测量。结果表明,LPS-induced NLRP3表达调节进一步通过预处理CORT (300 ng / ml) ( );然而,更高浓度的CORT(大于700 ng / ml)下调NLRP3表达式( )和XO的表达和活动( 和 ,分别)。别嘌呤醇显著抑制NLRP3表达式。然而,XO表达式和活动,NLRP3表达式,上层清液il - 1β和地震水平显著增加RU486组相比CORT组。总之,我们的结果表明,CORT抑制LPS-induced NLRP3 inflammasome启动在巨噬细胞。底层机制是XO表达式的调制和活动有关,这可能是参与启动和激活NLRP3 inflammasome。

1。介绍

最初的创伤性侮辱扰乱macrobarriers如皮肤、microbarriers如细胞膜,以及构成的开始迅速激活免疫反应。同时,身体的机械屏障被破坏,使病原体入侵并放大组织损伤和破坏的恶性循环免疫过程(1- - - - - -3]。严重伤害可能最终导致感染相关性并发症,早期多器官功能障碍综合征(插件)。炎症是激活先天免疫的特点,试图明确受损组织及入侵的病原体,维持体内平衡的最终目标。至关重要的身体紧密监管过度炎症反应来维持平衡和体内平衡。

通常类似的toll样受体)的先天免疫系统,inflammasomes也编排侵略,先天免疫反应和点头,远程雷达和pyrin domain-containing蛋白3 (NLRP3) inflammasome是研究最多的日期(4]。multiprotein复杂,NLRP3 inflammasome由一个传感器(NLRP3),一个适配器(ASC),和一个效应(pro-caspase-1) [5]。与跨膜通常局部细胞表面或内部核内体(6),NLRP3胞质传感器,主要检测细胞内刺激。除了其关键作用在不同的细胞内病原体的检测和控制7),NLRP3也感觉和反应有关分子模式(抑制),中介无菌炎症外伤性侮辱,甚至一些NLRP3 inflammasome-associated疾病。首先,模式识别或细胞因子receptor-induced启动信号导致的蛋白质合成NLRP3 pro-IL-1β,这通常需要激活NLRP3 inflammasome [8]。然后,第二个信号促进NLRP3 inflammasome assembly-mediated裂解caspase-1和il - 1β分泌。的核心组件NLRP3 inflammasome, NLRP3高度表达的免疫细胞,特别是巨噬细胞,其在静息细胞表达相对较低。NLRP3 inflammasome组装NLRP3齐聚反应的结果,和一个启动步骤必须先发生。因此,NLRP3 inflammasome活动应该有效的控制,主要是通过调节NLRP3表达式。

尽快激活神经内分泌反应创伤和手术后的先天免疫,和它在调节免疫功能方面的作用已被广泛认可,但机制仍不完全清楚。外伤性侮辱或病原体入侵,-肾上腺轴(HPA)被激活,通过直接和间接提供重要的生理调节炎症adrenal-produced糖皮质激素的抗炎作用。作为一种内源性糖皮质激素在啮齿动物,皮质酮(CORT)是主要的最终产品激活HPA轴后压力。糖皮质激素有著名的抗炎作用,广泛用于治疗许多炎性疾病,但确切的机制尚不清楚。身体调节炎症有可能通过调节NLRP3通过CORT inflammasome。

手术损伤不仅会导致组织损伤,还会破坏身体的障碍,从而暴露了先天免疫系统各种抑制和其分子模式(pamp)。事实上,这些诱因NLRP3 inflammasome激活是异构的9]。值得注意的是,活性氧(ROS)生成通常是由多个通路调节inflammasome共享激活(10]。当ROS生产被拾荒者压制,NLRP3-induced il - 1β一代受损(11]。然而,巨噬细胞来源于小鼠的NADPH氧化酶(NOX1 NOX2,或NOX4)组件氮氧化物复杂的淘汰赛没有受损的il - 1β分泌(12]。线粒体ROS可能有另一个细胞内的来源,有数据连接线粒体ROS生产压力(13]。事实上,许多外生和内生因素促进NLRP3表达式,包括toll样受体激动剂、促炎细胞因子和活性氧。此外,最近的一项研究表明,黄嘌呤氧化酶(XO)派生的线粒体活性氧引发NLRP3表达式,最后其inflammasome激活(14]。

给定的关键作用NLRP3 inflammasome的先天免疫反应,调节NLRP3表达式及其inflammasome启动可能参与打击过度的炎症反应。因此,我们假设内源性糖皮质激素CORT、手术后大量释放压力,调节NLRP3 inflammasome活动通过XO的规定。作为一个模型系统,RAW264.7细胞被刺激与LPS诱导NLRP3表达式和' NLRP3 inflammasome。在目前的研究中,我们调查的角色CORT的调制LPS-induced NLRP3 inflammasome启动及其与XO的关系并提供新见解先天免疫调制的手术损伤后内源性糖皮质激素维持体内平衡。

2。方法

2.1。细胞培养

小鼠巨噬细胞的细胞株RAW264.7从写明ATCC获得和维护在DMEM(美国Gibco)补充10%胎牛血清(HyClone), 100 U /毫升青霉素,100μ克/毫升链霉素。细胞培养中5%的股份有限公司₂孵化器在37°C和被用于实验,直到细胞生长密度大约是80%。的ASC-reconstituted RAW264.7细胞系来自细胞应激生物学国家重点实验室(厦门大学)。

2.2。股票的解决方案的准备

有限合伙人(σ,圣路易斯,密苏里州)稀释1毫克/毫升的浓度在PBS原液和储存在-20°C到使用。CORT(σ,圣路易斯,密苏里州)稀释1毫克/毫升的浓度在DMSO作为股票的解决方案,直到使用存储在-80°C。CORT的原液稀释在PBS,然后使用不同的最终浓度。别嘌呤醇(σ)是稀释的浓度为10毫克/毫升,和RU486 (MCE)稀释的浓度为1μ米在DMSO作为股票的解决方案。

2.3。抑制和刺激细胞

细胞的被试1μ为2 h g / ml有限合伙人,除非另有规定。与不同浓度的预处理后CORT (0 - 900 ng / ml) 1 h,细胞与LPS刺激额外的1 h。检查XO的影响,与别嘌呤醇预处理后(250μg / ml) 1 h,细胞与LPS刺激进一步。预处理与RU486 CORT的拮抗剂,是执行。上层清液收集、收获的细胞和蛋白质、RNA和酶活性进行了分析。

2.4。免疫印迹分析

细胞细胞溶解在里帕裂解缓冲。细胞总蛋白提取和量化。墨迹是准备使用聚丙烯酰胺凝胶和硝化纤维膜使用Bio-Rad II系统。使用的抗体是兔子anti-mouse NLRP3 (CST),兔子anti-mouse caspase-1 (ImmunoWay),兔子anti-mouse XO (Abcam),兔子anti-mouse GAPDH (Bioworld),和山羊anti-rabbit共轭,辣根peroxidase-2(中山生物公司,北京)。获得的图像和分析通过使用ECL开发者和凝胶图像分析系统。

2.5。PCR和定量实时PCR

短暂,细胞被置于试剂盒(豆类)和RNA提取和反向转录成cDNA使用工具包(豆类)。RNA转录的相对表达水平测定使用gene-specific底漆,SYBR绿、PCR仪器(Bio-Rad)。

使用的引物序列如下:鼠标NLRP3 5 - - - - - -CCAGACCTCCAAGACCACTACG-3和反义5 - - - - - -GCTTCCGCAGATCACACTCCT-3 ;鼠标XO感觉5 - - - - - -TATGGGGTGGCTTGCTCAGA-3和反义5 - - - - - -CAAGACCCTGGACAAATGCC-3 ;鼠标GAPDH感觉5 - - - - - -GACATCAAGAAGGTGGTGAAGC-3和反义5 - - - - - -GAAGGTGGAAGAGTGGGAGTT-3 。

2.6。XO活性

XO活性测定根据制造商的协议(Solarbio,中国)。细胞被收集和沉淀,反应液补充道。细胞是由超声波细胞溶解(200 W),然后,上层清液被离心分离(4°C, 8000 rpm, 10分钟)。后上层清液(500μl)吸气,工作流体添加并混合在一起。最初的吸光度值(A1)在290 nm, 1分钟后吸光度值(A2)读取和记录使用标仪(美国BioTek)。活动是通过使用公式来计算 。

2.7。ELISA

上层清液从巨噬细胞转移到包含酶联il - 1抗体的板β和地震。显色后,吸光度在450 nm 2000年被无限(TECAN、Grodig、奥地利)。

2.8。图示和统计分析

结果表示为的意思是(他)从至少三个实验获得的数据。比较组间是用单向方差分析(方差分析),是和意义 。生成的数据和统计数据是6和以SPSS11.0 GraphPad棱镜版本。

3所示。结果

3.1。LPS诱导NLRP3表达和NLRP3 Inflammasome启动后巨噬细胞刺激各个不同的时期

足够水平的NLRP3蛋白质是必要的形式和激活NLRP3 inflammasome,及其起动一般是使用微生物体外TLR来实现的。在目前的研究中,RAW264.7老鼠巨噬细胞与LPS刺激。NLRP3蛋白表达在休息巨噬细胞在对照组相对较低,和组装的NLRP3 inflammasome复杂差引起的。NLRP3表达式在蛋白质水平显著增加在LPS刺激后从0.5 h - 1.5 h相比与控制( ),达到最高水平2 h ( )(图1)。NLRP3信使rna控制的价格相比也明显增加(图S1)(支持信息)。这些结果表明,在我们的模型系统中,有限合伙人增强NLRP3表达一致,导致NLRP3 inflammasome启动在巨噬细胞。

3.2。CORT调节NLRP3和裂解Caspase-1浓度的方式表达

CORT是主要的内源性糖皮质激素在啮齿动物。除了影响NLRP3 LPS引起的巨噬细胞表达,不同浓度的CORT可能调节NLRP3表达式后压力。检查是否CORT NLRP3表达影响巨噬细胞浓度增加我们添加了CORT(0到900 ng / ml)的细胞。NLRP3蛋白表达在控制巨噬细胞治疗只有有限合伙人没有CORT (0 ng / ml)。预处理CORT含量较低的(100 ng / ml)略NLRP3蛋白表达增加。300 ng / ml CORT的浓度显著增加NLRP3蛋白表达与控制( )(数据2(一个)和2 (b))。相比之下,NLRP3蛋白表达显著减少后暴露在高浓度CORT (700 ng / ml和900 ng / ml),但不是在500 ng / ml(数字2(一个)和2 (b))。在NLRP3 inflammasome启动,pro-caspase-1裂解,促进NLRP3 inflammasome激活。此外,CORT还调制裂解caspase-1表达式类似于对NLRP3表达式(数据2(一个)和2 (c)),这表明CORT可能调节NLRP3 inflammasome启动及其最终激活。在一起,这些结果表明,CORT调节NLRP3表达和inflammasome启动,这是浓度依赖性。

3.3。更高浓度的CORT下调NLRP3和XO表达和抑制XO活动

在对照组,NLRP3蛋白表达很低没有治疗的有限合伙人和CORT。CORT组NLRP3表达增加与CORT预处理后没有LPS刺激( )(数据3(一个)和3 (b)),这表明CORT直接调节和质数先天免疫。我们选择700 ng / ml后高浓度CORT的压力。除了toll样受体激动剂,XO-derived ROS生产可能参与NLRP3表达式。我们测量XO表达式在LPS刺激的巨噬细胞和高浓度CORT (700 ng / ml)。与上面的结果一致,CORT显著抑制NLRP3刺激细胞蛋白表达有限合伙人为0.5 h 2 h相比与CORT组(即。执行,LPS刺激在0 h CORT (700 ng / ml)预处理后1小时)( 或 )(数据3(一个)和3 (b));CORT也下调NLRP3 mRNA表达( )(图S2)。此外,XO CORT相比,蛋白表达下调逐渐由CORT的小组,并与LPS刺激显著(1μg / ml)为1.5 h 2 h ( )(数据3(一个)和3 (c))。此外,XO mRNA水平也表达下调(图S3)。XO蛋白表达的主要决定因素是XO活性。此外,与XO CORT的活动组相比,CORT也抑制XO活动从1 h 2 h ( 或 )(图3 (d))。总的来说,这些结果表明,更高浓度的CORT下调不仅NLRP3表达式,而且XO表达式及其活动,这表明XO活性之间的紧密联系和NLRP3 inflammasome。

3.4。XO调节NLRP3 mRNA和蛋白表达水平

别嘌呤醇是XO抑制剂。证明XO调节NLRP3表达式,别嘌呤醇(250μ使用g / ml)。与别嘌呤醇预处理后,LPS-induced NLRP3蛋白表达下调与LPS刺激后从0.5 h 2 h ( 或 )(图4);NLRP3信使rna也显著抑制从0.5 h 2 h(无花果。S4)。总的来说,这些结果表明,XO调节LPS-induced NLRP3巨噬细胞中表达。

3.5。通过抑制XO CORT抑制NLRP3表达式

RU486是糖皮质激素受体(GR)拮抗剂。因为XO的作用在调节NLRP3表达式,RU486 CORT抑制被用来调查是否通过抑制XO NLRP3表达式。在不同的药物组合实验,NLRP3 XO和XO活动的蛋白质含量都低于对照组相比与LPS组( )(数据5(一个)- - - - - -5 (d)),这表明NLRP3和XO表达式是由有限合伙人。别嘌呤醇管理时抑制LPS刺激前XO, LPS-induced XO和NLRP3表达式都是减毒( )。CORT组NLRP3和XO表情表达下调( 和 ,分别)。最后,预处理RU486 NLRP3蛋白表达增加( )和增强XO蛋白表达和XO活动相比与CORT集团( )(数据5(一个)- - - - - -5 (d))。总的来说,这些结果表明,CORT抑制LPS-induced NLRP3表达抑制XO的巨噬细胞。

3.6。CORT抑制LPS-Induced NLRP3 Inflammasome XO的启动和激活的巨噬细胞抑制

巨噬细胞RAW264.7细胞系不表达ASC基因,但细胞类似于骨骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)当ASC ectopically介绍(15]。在这项研究中,ASC-reconstituted RAW264.7细胞株用于调查inflammasome激活。浮在表面的水平的il - 1β和地震都低的对照组相比LPS组( )(数据6(一)和6 (b)),表明NLRP3 inflammasome由有限合伙人+ ATP激活。别嘌呤醇降低了上层清液il - 1的水平β( )。CORT集团的上层清液il - 1β水平也下降了( )。最后,预处理RU486 il - 1的含量增加β和地震( )(数据6(一)和6 (b))。总的来说,这些结果证实LPS诱导NLRP3 inflammasome启动通过调节XO和激活NLRP3 inflammasome在巨噬细胞的增加上层清液il - 1β和地震水平,这些影响被CORT抑制。

4所示。讨论

这项研究表明CORT调制NLRP3表达式及其inflammasome启动内源性糖皮质激素在调节巨噬细胞炎症,和更高浓度的CORT抑制LPS-induced NLRP3表达式及其inflammasome活动,这是与XO密切相关。

手术损伤导致内源性分子和可能的病原体入侵,感觉到的常见模式识别受体(PRRs)以及诱导一系列促炎的免疫反应(16,17]。除了严重的大手术或创伤后全身炎症反应,引起死亡的原因往往是由于感染和感染性并发症,围手术期的期间。类似于通常,NLRP3 inflammasome也已被证明能够发挥重要作用在先天免疫反应损伤和感染4]。广泛的内源性抑制和外生pamp可以触发NLRP3 inflammasome激活,使其完美的候选人inflammasome-mediated反应在手术损伤和相关感染(18]。NLRP3 inflammasome激活导致促炎细胞因子的分泌,包括il - 1β的地震,导致了系统性炎症反应(19,20.]。有趣的是,它已经表明,inflammasome激活被动和主动发挥了至关重要的作用的细胞外释放高机动组框1 (HMGB1),一个良好的潮湿(21]。除了炎性介质生产、NLRP3 inflammasome激活导致pyroptotic细胞死亡,导致胞内内容的释放到细胞外空间,有助于提高和传播“无菌”炎症(22]。此外,NLRP3 inflammasome也参与反应的不同的病原体,包括变形虫、原生动物、真菌、细菌和病毒(23]。

尽管研究NLRP3 inflammasome,调节NLRP3 inflammasome活动仍不清楚。NLRP3至关重要的蛋白质水平inflammasome组装和被认为是一种病原元素inflammasome激活(24),证明NLRP3表达的水平决定了其活动(25]。感兴趣的,与小鼠单核细胞相比,有限合伙人启动信号本身就足以引发NLRP3 inflammasome激活人类单核细胞在某些情况下,虽然激活信号可能保持必要的弱启动信号的增强作用[26,27]。这些差异需求可能是由于内源性ATP分泌人类单核细胞在启动。释放ATP可能会作为一个激活信号以自分泌/旁分泌的方式(27]。在目前的研究中,有限合伙人不断增加NLRP3表达RAW264.7老鼠巨噬细胞,在2 h达到最高水平。符合之前的报道(15,28),在我们的模型系统中,LPS诱导NLRP3在巨噬细胞表达和启动。

糖皮质激素是中央效应对HPA轴激素,负责维持体内平衡,以应对压力。越来越多的证据表明,远非抑制内源性糖皮质激素可能会增强免疫功能显示促炎效应和防止进一步的伤害或病原体,特别是在低浓度和生理压力条件下29日]。Dhabhar和Viswanathan30.]表明CORT相当于50 ng / ml的浓度产生生理应激后,对巨噬细胞有刺激免疫效果和帮助老鼠迅速适应急性应激。阐明CORT的作用在调节炎症反应,我们经过不同巨噬细胞与不同浓度的CORT (0 - 900 ng / ml),模拟手术创伤后CORT的体内作用。在这项研究中,低浓度的CORT (≤300 ng / ml)增加NLRP3表达式,表明低浓度的天然糖皮质激素可能对巨噬细胞起到促炎作用。这些结果与以前的观测证明一致糖皮质激素会影响先天免疫增强TLR2的表达(31日]。创伤和手术后,激活下丘脑轴由于应激反应,导致大量的糖皮质激素的释放的肾上腺皮质进入流通,和糖皮质激素后增加10倍以上的压力。然而,更高的CORT含量(≥700 ng / ml)抑制LPS-induced NLRP3表达式,表明CORT可能发挥抗炎效应通过调制NLRP3表达式。此外,CORT还调制裂解caspase-1表达式以类似的方式。因此,可以得出结论:作为一种内源性糖皮质激素,CORT调节NLRP3表达式及其inflammasome启动,先天免疫调节通过NLRP3 inflammasome。

这些发现具有重要意义的理解免疫调节内源性糖皮质激素。他们认为,在早期急性内源性糖皮质激素释放或中度压力增强免疫功能,这可能帮助'先天免疫系统抵御病原体或受伤。与早期的报告一致,在中枢神经系统中,糖皮质激素促炎已经被证明,增加il - 1的水平β和肿瘤坏死因子-α小胶质细胞(32]。此外,地塞米松可以直接提高NLRP3培养和初级巨噬细胞,表达和活动,反过来,导致增强NLRP3 inflammasome激活(33]。外伤或手术后,过度释放糖皮质激素发挥抗炎作用通过下调NLRP3表达,这可能是非常重要的在预防后续病原体入侵或组织损伤的应对系统性炎症反应。除了糖皮质激素的浓度,不同的细胞类型,实验条件,结合内生和合成糖皮质激素GR可能导致不同的研究成果。此外,这些发现有助于解释为什么适量的糖皮质激素仍建议在围手术期期间因为监管对炎症的影响34]。

的确切机制NLRP3 inflammasome激活尚不清楚,和大量的研究表明,各种细胞内触发激活NLRP3 inflammasome也可以产生活性氧。线粒体ROS生产密切相关,细胞内ROS主要来源于线粒体。因此,线粒体和ROS作为常见的信号调解NLRP3 inflammasome激活(13]。然而,Bauernfeind et al。35)表明,活性氧抑制剂剂量依赖性抑制NLRP3的表达,导致阻塞NLRP3 inflammasome激活。启动子区域NLRP3包含AP-1的结合位点,Sp1, Ets, Myb, ROS提高他们的表达,导致转录调控NLRP3 [36]。XO是线粒体酶主要是局部舱和介导的线粒体ROS生成。除了CORT的抗炎效应抑制NLRP3表达式,目前的结果首次证明浓度更高(大于700 ng / ml) CORT也下调XO表达式和活动。此外,别嘌呤醇,XO的抑制剂,减少NLRP3表达式。目前的数据表明,XO调节LPS-induced NLRP3表达式。

GR的主要效应分子的糖皮质激素发挥他们的行动和表达无所不在地许多细胞的细胞质中。目前的结果表明,添加GR拮抗剂RU486 NLRP3和XO表达和XO活动增加。根据目前的数据,可以得出的结论是,更高浓度的CORT抑制LPS-induced NLRP3表达式通过抑制XO活动主要是通过GR。最后,类似于NLRP3表达式的结果,上层清液il - 1β和地震水平测定,证实CORT抑制NLRP3 inflammasome启动并通过抑制XO最终激活。

尽管我们发现XO调节活性氧,参与调节NLRP3表达式,我们没有测量细胞内ROS,特别是线粒体活性氧的生产。ROS能否调节inflammasome大会直接或通过其他的机制与inflammasome激活有关,除了调制NLRP3表达式通过XO,仍然未知。最后,需要体内的研究来证实上述结果。

总之,我们已经表明LPS诱导NLRP3表达式在巨噬细胞在不同时间点,更高浓度的CORT下调NLRP3表达式,和CORT上调NLRP3低浓度的。NLRP3表达确定的活动NLRP3 inflammasome,和NLRP3 inflammasome是至关重要的识别入侵微生物病原体和内源性损伤分子和引发一连串的炎症反应的第一道防线。XO密切相关NLRP3 inflammasome启动。CORT NLRP3表达的调节通过调节炎症反应,抑制NLRP3 inflammasome XO活动的启动和激活通过抑制。因此,先天免疫反应受损,这可能是一个宿主防御机制来避免过度炎症反应和保持平衡,但也可能增加感染的可能性在手术压力。因此,目前的研究提供了新的见解的调制先天免疫和手术后的炎症反应的侮辱。尽管额外的研究必须充分理解NLRP3表达式的调制和NLRP3 inflammasome活动XO和其潜在的分子机制,我们的研究首次描述,更高浓度的内生CORT NLRP3表达式及其差别是参与对这些巨噬细胞体外inflammasome活动和提供了一个潜在的目标,如XO,手术后的炎症损伤的调制和NLRP3-associated疾病,如autoinflammatory疾病、痛风、糖尿病。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现是包含在这篇文章。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

凌吴邦国委员长和Chengfu周同样都贡献给了工作。

确认

这项工作是支持的基础研究和前沿项目重庆渝中区科技委员会(20170121)和普通中国国家自然科学基金项目(81172122)。

补充材料

图S1 NLRP3 mRNA的表达在RAW264.7细胞处理有限合伙人(1μ不同时期的g / ml)。在对照组,细胞与LPS刺激在0 h。值的意思是(他)( )。 , 与控制。图S2: NLRP3 mRNA水平RAW264.7细胞接受CORT和有限合伙人。细胞被使用700 ng / ml CORT 1 h和LPS刺激(1μ不同时期的g / ml)。在对照组,没有治疗。CORT组细胞使用700 ng / ml CORT 1 h和刺激与有限合伙人在0 h。值的意思是(他)( )。 , 与CORT组。图S3: XO mRNA水平RAW264.7细胞接受CORT和有限合伙人。图S4 NLRP3 mRNA水平RAW264.7细胞与别嘌呤醇治疗。细胞被使用250年μ克/毫升的别嘌呤醇与有限合伙人(1 1 h和刺激μ不同时期的g / ml)。在对照组,没有治疗。LPS组与LPS刺激的时间点是没有别嘌呤醇预处理2 h。值的意思是(他)( )。 , 与LPS组。(补充材料)

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