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研究文章|开放获取

体积 2020 |文章的ID 6302391 | https://doi.org/10.1155/2020/6302391

吕佳，刘永胜，贾淑涵，张云娜，田浩阳，李景远，宋慧， ＂一氧化碳释放分子-3抑制肿瘤坏死因子-α- - - Interleukin-1β通过血红素氧合酶-1途径诱导人牙龈成纤维细胞连接分子的表达"，炎症介质， 卷。2020， 文章的ID6302391， 11 页面， 2020． https://doi.org/10.1155/2020/6302391

一氧化碳释放分子-3抑制肿瘤坏死因子-α- - - Interleukin-1β通过血红素氧合酶-1途径诱导人牙龈成纤维细胞连接分子的表达

贾Lv，1，2 永胜刘，1 Shuhan贾，1 张伊藤由奈，1 Haoyang田，1 靖远县李，1 和 回族歌曲1

1山东省济南市文华西路44-1号，山东省口腔组织再生重点实验室，口腔材料与口腔组织再生工程实验室，山东大学口腔医学院附属医院VIP中心，山东济南250012

2山东大学齐鲁医院口腔修复科，山东济南

学术编辑：卡洛杰罗·卡鲁索
已收到 2019年12月25日
修改 2020年2月24日
接受 2020年3月23日
发表 2020年4月28日

摘要

炎症引起的牙龈成纤维细胞屏障功能障碍可导致牙龈炎，并可导致炎症性牙周病。疾病特征包括上皮通透性上调，炎症介质增加，连接复合物分子下调。一氧化碳- (CO-)释放分子-3 (CORM-3)是一种水溶性化合物，已证实具有抗炎作用在体外和在活的有机体内学习。在这项研究中，我们旨在探讨CIMR-3对用肿瘤坏死因子刺激的人牙龈成纤维细胞（HGF）表达紧密和粘附结分子的影响 -α（TNF-αα)和interleukin-1β(il - 1β)．HGFS从正常人牙龈组织的外植体，这是在CORM-3的存在或不存在刺激的培养。上皮屏障功能通过细胞旁渗透性和连接复合体分子的表达的分析评价。粘附连接分子（蛋白质和mRNA表达水平VE-钙粘着蛋白和β-catenin)和紧密连接分子(封闭带-1,ZO-1)采用western blot和逆转录-定量聚合酶链反应(RT-PCR)进行研究。同时分析瞬时转染HO-1小干扰RNA (siRNA)响应TNF-的HGFs中这些细胞因子的mRNA和蛋白表达水平α和IL-1β刺激。CORM-3降低了渗透性，增强了连接复合物分子(ZO-1、VE-cadherin和β连环蛋白）的TNF-αα- - - il - 1β-然而，当HO-1 siRNA瞬时转染HGF时，CORM-3的这些作用减弱。这些发现表明CORM-3对TNF具有抗炎作用-α- - - il - 1β-通过HO-1途径刺激HGF，这表明CORM-3在治疗炎症性牙周病方面具有良好的潜力。

1介绍

牙周病是一种炎症性疾病，其特征是牙龈下斑块中存在致病菌，导致软组织破坏、牙槽骨吸收，最终导致牙齿脱落[1- - - - - -3.]。牙周炎最显著的特征是免疫活性细胞（如单核细胞/巨噬细胞和淋巴细胞）及其细胞因子在血管外牙周结缔组织中的积聚。特别是，已证明促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-αα)和interleukin-1β(il - 1β)在牙周组织破坏中起重要作用[4- - - - - -6］.它也被报道，TNF-α和IL-1β通过上调趋化因子，增加屏障通透性，下调紧密和粘附连接分子表达，增强白细胞粘附[7］.

人牙龈成纤维细胞（HGFs）是牙周结缔组织中最丰富的细胞类型之一。HGFs作为牙周组织的支持细胞发挥作用，并对促炎刺激和病原体产生炎症介质[8]牙周结缔组织在维持牙周组织完整性中的重要作用以及在调节局部炎症反应中的作用已得到充分研究。在细胞连接复合体中，紧密连接主要负责控制细胞旁转运，而粘附连接主要是对细胞间粘附负责[9，10］.

作为血红素降解的限速酶，血红素加氧酶1（HO-1）的诱导表示于促炎细胞应答的重要事件以维持细胞稳态[11，12］.HO-1是已知诱导酶中最敏感的一种，已被证实具有细胞生物传感器的作用。许多刺激物，如血红蛋白、细胞因子和内毒素，可以在几小时内诱导高水平的HO-1。HO-1的药理学或遗传调节可诱导细胞核定位并抑制细胞迁移、增殖和侵袭[13］.HO-1代谢产生胆绿素、铁2＋，及一氧化碳(CO) [14］.CO已被证明在多细胞事件中发挥重要作用;例如，CO可以抑制细胞增殖和凋亡[15，抑制炎症[16]，保护器官免受缺血/再灌注损伤[17，18］.CO的作用是由HO-1诱导、鸟苷酸环化酶激活和p38 MAPK信号通路调控介导的[19］.

广泛的研究已经表明，CO释放分子（球茎），其可以以可控的方式在生理条件下释放CO，可以增加血红素氧合酶-1（HO-1）在各种动物模型和细胞类型中的表达。CO释放的分子（CO-RMS）属于两大类：含钌，锰，钼或金属羰基配合物，其携带CO结合到过渡金属，以及包含金属硼，而不是过渡金属boranocarbonates。间球茎，CORM-1和CORM-2是亲脂性;它们必须被溶解在有机溶剂如二甲亚砜（DMSO）。CORM-3（tricarbonylchloro（glycinato）合钌（II））是完全溶于水并溶解在生理溶液中，其示出比较有前途的临床治疗潜力在未来时可迅速释放CO [20.］.通过提供并以可控的方式携带CO，CORM-3可以施加重要的药理学活性[21］.

我们研究小组先前的一项研究发现，CORM-3抑制TNF刺激的HGF中粘附分子的表达-α和IL-1β［21］.因此，我们本研究的目的是确定在暴露于炎症细胞因子TNF-后，CORM-3对HGF屏障功能的影响α和IL-1β并阐明了CORM-3的作用机制。

2.材料和方法

2．1．试剂

CORM-3，人重组TNF-αα,il - 1β购自Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA);Dulbecco的改进的Eagle’s培养基(DMEM)从HyClone (GE Healthcare Life Sciences, Logan, UT, USA)购买;胎牛血清(FBS)购自以色列生物工业公司(Kibbutz Beit-Haemek, Israel)，青霉素-链霉素溶液100x购自北京Solarbio科技有限公司β-连环蛋白（ab32572，兔抗-β-Catenin单克隆抗体），Ve-Cadherin（AB33168，兔抗Ve-Cadherin多克隆抗体），血红素氧合酶-1（AB68477，兔抗血红素氧酶-1单克隆抗体），ZO-1（AB96587，兔抗ZO-1多克隆抗体），β-肌动蛋白（AB8226，小鼠抗 -β-actin单克隆抗体)来自Abcam (Cambridge, UK)。甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体(10494-AP，兔抗GAPDH多克隆抗体)、辣根过氧化物酶(HRP-)二抗亲和纯山羊抗兔IgG(H+L) (SA00001-2)和酶标亲和纯山羊抗小鼠IgG(H+L) (SA00001-1)购自protetech Group。美国伊利诺斯州芝加哥有限公司。beta-catenin、VE-cadherin、ZO-1引物购自上海BioSune。聚偏氟乙烯(PVDF)膜购自Millipore (Bedford, MA, USA)。二苯二酚酸(BCA)蛋白测定试剂盒23225)购自Millipore (Bedford, MA, USA)， PrimeScript RT试剂盒with gDNA Eraser购自TaKaRa (TaKaRa Bio Inc.， Japan)。

2．2．细胞培养

采用外植体培养技术从正常牙龈组织中分离出HGFs。术前征得患者的知情同意。本研究得到了山东大学口腔医学院伦理委员会的批准。组织用Dulbecco 's modified Eagle 's培养基(DMEM, HyClone, Logan, UT, USA)清洗，其中含有青霉素G (100 U/ml)和链霉素(100 mg/ml)。然后，将它们切成1-3毫米2explants with scissors and cultured in 25 cm2培养瓶(Corning Inc.， Corning, NY, USA)加入100 U/ml青霉素G, 100 mg/ml链霉素和20%热灭活胎牛血清，置于含5% CO的湿空气中2在37°C。细胞播种密度为 ．每2-3天更换一次培养基，形成融合的单层细胞。5-7天后，当细胞融合达到90%时，用0.025%胰酶和0.05% EDTA分离，按1:2的比例传代。3-5代的hgf用于后续实验。hgf分别用100、200和400预处理μmcorm -3孵育6 h后，用10 ng/ml TNF-诱导细胞αIL-1 2 ng/mlβ除另有说明外，另服24小时。

２．３．细胞增殖实验

细胞计数试剂盒-8（CCK-8）测定用于在上HGFS不同浓度来评估CORM-3的毒性。HGFS接种并在96孔板中与对照培养基中培养以5000个细胞/孔的密度。HGFS分为六类：TNF-α(10 ng/ml)和IL-1β(2 ng/ml），随着CORM-3浓度的增加，将CORM-3添加到孔中并培养24小时 在37°C条件下，用未受刺激的细胞作为对照。CORM-3必须在实验前通过溶解在培养基中新鲜制备。然后，10 μl每孔加入CCK-8试剂，37℃孵育2 h。随后，使用SPECTROstar纳米紫外分光光度计(SPECTRO Analytical Instruments GmbH, Germany)在450 nm处测量光密度(OD)吸光度。整个实验重复了三次。

2.4.测量穿过HGF单层的异硫氰酸荧光素-（FITC-）BSA通量

为了测定HGF单分子膜的通透性变化，HGF的种子密度为 在24孔跨孔室顶部，6.5 mM直径的聚酯膜嵌件(0.4μM孔径，COSTAR，美国)和生长到汇合。HGFs在含1%胎牛血清的培养基中培养24小时，直到观察到形成良好的单层细胞。HGFs与TNF-孵育α(10 ng/ml)和IL-1β(2 ng/ml)，随CORM-3浓度增加作用24 h。未受刺激的细胞作为对照。刺激结束时，小心地从每个板孔中取出处理培养基，将FITC-BSA (10 mg/ml, Sigma，美国)和等摩尔量的未标记BSA加入到无酚红DMEM的上、下腔中，在37℃黑暗中浸泡2小时。然后将不同室孔的培养基转移到空白的96孔不透明板上进行荧光测定。荧光强度定量在494 nm激发和520 nm发射(SpectraMax i3X, Molecular Devices, USA)。

2．5．免疫荧光染色

hgf作为单分子层在2%聚l -赖氨酸包被的盖玻片上接种，血清饥饿24小时。细胞经TNF-预处理α(10 ng/ml)和IL-1β(2 纳克/毫升）24小时 h、 随着CORM-3浓度的增加，使用未受刺激的细胞作为对照。用磷酸盐缓冲盐水（PBS）清洗细胞，用4%甲醛固定15分钟 温度为4°C时的最小值，并用1%Triton X-100渗透20分钟 在4°C条件下，HGFs被5%牛血清白蛋白阻断1分钟 h，然后暴露于VE钙粘蛋白的一级抗体（1 : 250），ZO-1（1 : 250）和β-连环蛋白（1 : 250）在4°C下过夜。用PBS清洗盖玻片三次，然后用适当的二级抗体孵育1小时 在37°C条件下，用PBS洗涤后，用4 ，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI，Sigma-Aldrich公司，美国）染色。用共聚焦激光扫描显微镜观察HGFS（LSM-880，卡尔蔡司，Oberkochen的，德国）。

2.6.蛋白质印迹分析

HGFs经TNF-预处理α(10 ng/ml)和IL-1β(2 ng/ml)处理24 h，随着CORM-3浓度的增加。未受刺激的细胞作为对照。HGFs用冰水PBS洗涤3次，用RIPA裂解缓冲液裂解(Beyotime Biotechnology Institute, Jiangsu, China)。冷冻30 min后，以4℃，12000 × g速度离心5 min分离细胞。蛋白样品使用BCA试剂盒(Solarbio，北京，中国)和30μ将每克样品与四分之一体积的5x SDS-PAGE加载缓冲液（Solarbio）混合，并煮沸5分钟 敏化变性。然后，通过10%十二烷基硫酸钠（SDS-）聚丙烯酰胺凝胶电泳（凝胶制备试剂盒，美国加利福尼亚州普莱森顿市博斯特生物技术公司）分离全细胞蛋白质样品，并转移至聚偏氟乙烯膜（0.45 μ由电泳M)。在室温下用5%脱脂奶粉在PBS中封闭膜1小时。然后用以下特异性一抗在4℃下孵育过夜:抗人ZO-1兔单克隆抗体(1:1000稀释)、抗人VE-cadherin兔多克隆抗体(1:1000稀释)、抗人血红素加氧酶-1 (HO-1)兔单克隆抗体(1:10000稀释)、抗人β -catenin兔单克隆抗体(1:5000稀释)、抗人GAPDH兔多克隆抗体(1:50 000稀释)，抗人β-actin兔多克隆抗体(1:50 000稀释)。广泛冲洗三次后，用适当的辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG(1: 5000稀释剂)或辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠IgG(1: 5000稀释剂)在室温下孵育1小时。使用tris缓冲盐水Tween-20 (TBST)进行三次广泛清洗后，根据制造商的说明，使用增强化学发光(Millipore, Bedford, IL, USA)检测免疫反应条带，并使用Imaging J软件(NIH, USA)进行量化。

2.7.RNA分离和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）

HGFs在含有各种刺激物的6孔板(200000细胞/孔)中随着CORM-3浓度的增加培养24小时。未受刺激的细胞作为对照。第一部分实验将HGFs分为六组:对照组、TNF-α(10 ng / ml) + il - 1β(2 ng/ml)组，CORM-3 (100μ+ TNF - M)α(10 ng / ml) + il - 1β(2 ng/ml)组，CORM-3 (200μ+ TNF - M)α(10 ng / ml) + il - 1β(2 ng/ml）组和CORM-3（400）组 μ+ TNF - M)α(10 ng / ml) + il - 1β(2 ng / ml)组。

实验的第二部分，将HGFs分为如下7组:对照组，TNF-α(10 ng / ml) + il - 1β(2 ng/ml)组，CORM-3 (200μ+ TNF - M)α(10 ng / ml) + il - 1β(2 ng/ml)， HO-1 siRNA+CORM-3 (200μ+ TNF - M)α(10 ng / ml) + il - 1β(2 ng/ml)组，HO-1 siRNA+TNF-α(10 ng / ml) + il - 1β(2 ng/ml)组，炒siRNA+CORM-3 (200μ+ TNF - M)α(10 ng / ml) + il - 1β(2 ng/ml)组，并炒siRNA+TNF-α(10 ng / ml) + il - 1β(2 ng / ml)组。各组均孵育24 h。

根据制造商的说明，使用Trizol Reagent (Invitrogen, Carlsbad, USA)从培养的细胞中分离总RNA。根据制造商的协议，使用PrimeScript RT试剂试剂盒与gDNA Eraser (TaKara, Kusatsu, Japan)将一微克总RNA逆转录为互补DNA。使用TB Green Premix Ex Taq II (TaKara, Kusatsu, Japan)在Applied Biosystems StepOnePlus Real-Time PCR系统上进行定量RT-PCR。引物为:ZO-1正向引物、5 -GAAATACCTGACGGTGCTGC-3 和反向，5 -GAGGATGGCGTTACCCACAG-3 ；VE-cadherin的推进，5 -AAGGACACTGGCGAAAACCT-3 和反向，5 -ACGCATTGAACAACCGATGC-3 ；β连环蛋白,5 -GGCTTGGAATGAGACTGCTG-3 和反向，5 -GGTCCATACCCAAGGCATCC-3 ；HO-1向前,5 -AGGCCAGACTGCGTTCCT-3 ，和反向，5 -AACTGTCGCCACCAGAAAGCTGAG-3 ；和GAPDH向前，5 -GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3 和反向，5 -TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3 ．实时定量PCR循环条件为:95℃初始变性30 s, 95℃变性5 s, 60℃退火34 s, 72℃延伸45 s，共40个循环。将目的基因表达的周期阈值归一化为甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的周期阈值，用2-ΔΔCt方法。

2.8。瞬时转染

对于HGFS的HO-1的siRNA靶序列如下：正向，5 -GGGUCCUUACAUUCAGCUUTT-3 ，和反向，5 -AAGCUGAGUGUAAGGACCCTT-3 ．第二部分实验设七组。HGFs在6孔板的对照培养基中播种培养，密度为15万细胞/孔。HGFs转染5μl siRNA和Lipofectamine 2000转染试剂(Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Inc.)，根据制造商的协议6小时。细胞在Opti-MEM还原血清培养基(Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc)中培养，瞬时转染炒后的siRNA或HO-1 siRNA，然后TNF-α(10 ng/ml)和IL-1β（2 ng/ml) treatments in the presence or absence of CORM-3.

2.9。统计分析

这些数据来自至少三个独立的实验，一式三份。使用GraphPad Prism 6软件（美国加利福尼亚州GraphPad）评估不同组的显著性。采用单因素方差分析和Tukey多重比较检验确定统计显著性 小于0.05的值被认为是显著的。

3.结果

３．１．CORM-3对HGF增殖的影响

数字1显示了CORM-3对HGF增殖的影响。HGFs与不同浓度的CORM-3孵育24 h。通过CCK-8检测细胞增殖。同时刺激10 ng/ml TNF-αIL-1 2 ng/mlβ在缺乏CORM-3的情况下，细胞活力显著降低( )．而在浓度为100、200和400的CORM-3存在时μM时，细胞活力与未受刺激的细胞保持相同水平。CORM-3在800μ与正常和非诱导HGF增殖相比，M显著抑制HGF增殖( )．因此，在400时使用CORM-3μM或更小。


图1
CORM-3对人牙龈成纤维细胞(HGFs)活力的影响。用0、100、200、400和800刺激HGFsμmcorm -3和10 ng/ml TNF-α和2 ng/m IL-1β24 h。然后采用细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)检测细胞活力。这些值是从至少三个重复的独立实验中获得的，其中 和 与正常和非诱导HGFs相比^ ^ ^ 通过方差分析和Tukey的多重比较检验对两组进行比较。C：TNF-α- - - il - 1β全身的细胞;N:正常和非诱导hgf。CORM-3:一氧化碳释放分子-3;OD:光密度;肿瘤坏死因子-α：肿瘤坏死因子-α；il - 1β:interleukin-1β．
３．２．肿瘤坏死因子-α- - - il - 1β-CORM-3可阻断诱导的高HGF单层通透性

牙龈水肿是由急性炎症引起的牙周炎的一个特征。除了细胞改变，大多数水肿是由于单层上皮通透性增加导致屏障完整性受损。通过测量加入或不加入TNF-孵育24小时后FITC-BSA的通量来评估HGF单层对CORM-3渗透性的变化α和IL-1β, CORM-3。数字2显示，所述炎症介质TNF-α和IL-1β显著增加了HGF单层的通透性（ )，CORM-3能够通过 （ ）在200μ米, （ ）在100μ米, （ ）在400μ在200观察CORM-3对渗透性M.最大抑制作用 μ米( )．


图2
CINM-3对TNF响应HGF单层渗透率的影响α和IL-1β．用10 ng/ml TNF-刺激HGFsαIL-1 2 ng/mlβ随着CORM-3浓度的增加，持续24 h，然后评估FITC-BSA通量。这些值是从至少三个重复的独立实验中获得的，其中 ， ，和 抗肿瘤坏死因子-α- - - il - 1β诱导细胞和^ ^ ^ 通过方差分析和Tukey的多重比较检验对两组进行比较。C：TNF-α- - - il - 1β-诱导细胞；N：正常和非诱导HGF；CORM-3：一氧化碳释放分子-3；肿瘤坏死因子-α：肿瘤坏死因子-α；il - 1β:interleukin-1βFITC-BSA：异硫氰酸荧光素牛血清白蛋白。
3.3.免疫荧光染色

VE-cadherin和β-连环蛋白是血管内皮细胞中主要的跨膜粘附分子。闭塞带-1（ZO-1）是血管内皮细胞中主要的跨膜紧密连接分子。这些因素代表了细胞屏障完整性的关键决定因素。VE钙粘蛋白、ZO-1和β-catenin在混合HGF细胞单层中，在控制条件下细胞边界呈线性染色模式(图)3.)．孵化与肿瘤坏死因子-α和IL-1βfor 24 h led to intercellular gap formation and pronounced loss of VE-cadherin, ZO-1, andβ-Catenin染色在细胞边界。随着肠3浓度的孵育阻止了Ve-Cadherin，ZO-1和和β-连环蛋白的不同程度。CORM-3对VE-cadherin、ZO-1和β-连环蛋白损失也表现出剂量依赖性。在浓度为200时观察到最明显的保护作用μM表示每个连接分子（图3.)．


图3.
位置和表达的变化β-catenin, VE-cadherin和ZO-1在用CORM-3处理的HGFs中响应TNF-α和IL-1β刺激。用10 ng/ml TNF-刺激HGFsαIL-1 2 ng/mlβ共聚焦免疫荧光检测(原始放大倍数×400)。DAPI(蓝色)核染色。肿瘤坏死因子-α和IL-1β诱导导致在β-Catenin，Ve-Cadherin和HGF中的ZO-1表达。这些图片代表了三个独立实验。 ．C：TNF-α- - - il - 1β全身的细胞;N：正常和非诱导HGFS;ZO-1：透明occludens-1;CORM-3:一氧化碳释放分子-3;肿瘤坏死因子-α：肿瘤坏死因子-α；il - 1β:interleukin-1β；达皮，4岁 ，6-diamidino-2-phenylindole。
3．4．CORM-3防止连接复合物分子破坏

连接复合物分子在细胞膜屏障的完整性方面起着重要作用。连接复合物由紧密连接(调节细胞旁运输)和粘附连接(主要负责细胞间粘附)组成。因为CORM-3能够抑制TNF-α(10 ng/ml）-和IL-1β(2 ng/ml)诱导的高渗透性，这些影响是否与连接复合物分子VE-cadherin、ZO-1和β连环蛋白被阐明。孵化与肿瘤坏死因子-α和IL-1β诱导细胞通透性增加(图2)．后肿瘤坏死因子-α和IL-1β、VE-cadherin、ZO-1、β-catenin在基因和蛋白水平均明显低于正常和非诱导细胞。添加CORM-3后，VE-cadherin、ZO-1和β-连环蛋白水平在200μM(图4)．

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图4.
CORM-3对TNF-后HGFs中连接复合物分子表达的影响α和IL-1β归纳。(a) CORM-3对β-Catenin，Ve-Cadherin和HGF中的ZO-1 mRNA表达。（b）在TNF-后HGF中的结络合物分子的蛋白质表达α和IL-1β归纳。用TNF-刺激HGFsα(10 ng/ml)和IL-1β(2 ng/ml)，增加CORM-3浓度处理24 h。提取总RNA或蛋白，采用RT-qPCR或western blot分析。这些值是从至少三个重复的独立实验中获得的，其中 ， ，和 抗肿瘤坏死因子-α- - - il - 1β诱导细胞和＾ ， ^^ ，和^ ^ ^ 根据ANOVA和Tukey的多重比较检验。C：TNF-α- - - il - 1β全身的细胞;N:正常和非诱导HGF;HGFs:人牙龈成纤维细胞;CORM-3:一氧化碳释放分子-3;肿瘤坏死因子-α：肿瘤坏死因子-α；il - 1β:interleukin-1β．
3．5．在含或不含TNF-的HGFs中，CORM-3促进HO-1的表达α和IL-1β

HGFs与CORM-3 (200μM） 加或不加TNF-α(10 ng/ml)和IL-1β(2 ng/ml)静置24 h。RT-PCR和western blotting检测HO-1 mRNA和蛋白表达水平。与对照组相比，CORM-3诱导HO-1的mRNA和蛋白表达水平显著升高(图)5)．停用的corm-3没有诱导HO-1表达，这表明CINT-3的效果主要导致CO。结果表明TNF-α- - - il - 1β-诱导的HO-1表达水平与对照组相当。与对照组相比，CORM-3显著增加HGF中HO-1的mRNA和蛋白质表达（图5).另一方面，失活的CORM-3对HO-1没有诱导作用。CORM-3可通过释放CO促进HO-1的表达。

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图5.
CORM-3对TNF孵育HGFs中HO-1mrna和蛋白表达的影响-α和IL-1β．（a）中HGFS分成6组：对照;肿瘤坏死因子-α+ il - 1β， HGFs与10 ng/ml TNF-孵育αIL-1 2 ng/mlβ24小时 h、 CORM-3，其中HGFs用200 μM CORM-3处理24 h;CORM-3 +肿瘤坏死因子-α+ il - 1β，其中HGFS用200处理 μmcorm -3和10 ng/ml TNF-αIL-1 2 ng/mlβ24小时;在iCORM-3中，hgf用200μM灭活CORM-3 24小时 h、 和iCORM-3+TNF-α+ il - 1β，其中细胞与200 μM灭活的CORM-3和10 ng/ml TNF-αIL-1 2 ng/mlβ24 h。RT-qPCR检测HO-1 mRNA表达水平。(b) western blotting检测HO-1蛋白表达水平。β-肌动蛋白用于演示等样加载。这些值是从至少三个重复的独立实验中获得的，其中 ， ，和 抗肿瘤坏死因子-α- - - il - 1β诱导细胞和＾ ， ^^ ，和^ ^ ^ 通过方差分析和Tukey的多重比较检验对两组进行比较。HO-1:血红素oxygenase-1;CORM-3:一氧化碳释放分子-3;肿瘤坏死因子-α：肿瘤坏死因子-α；il - 1β:interleukin-1β；HGFs:人牙龈成纤维细胞。
3.6。HO-1沉默对TNF-孵育后连接复合物分子表达的影响α和IL-1β有或没有CORM-3预处理

为了检查COM-3对HGFS的调节效果是否通过HO-1介导，将HO-1 siRNA转染到HGF中。如图所示6（a），HO-1 siRNA转染显着降低了HO-1的mRNA表达，而糖化的siRNA转染对HO-1表达没有影响。在其他实验中，用HO-1小干扰RNA（siRNA）转染HGF 6小时，然后与TNF孵育α和IL-1β加或不加CORM-3处理24小时。HO-1 siRNA转染后，HO-1 mRNA和蛋白表达水平的变化明显被抑制(图)6)．用HO-1 siRNA或炒后siRNA转染细胞，阐明HO-1或炒后siRNA对VE-cadherin、ZO-1和VE-cadherin表达的影响β连环蛋白。结果表明，HO-1 siRNA转染抑制了CORM-3的抗炎作用(图7)、VE-cadherin、ZO-1和β-catenin表达水平未因CORM-3而增加。结果显示在mRNA(图图7（a）)和蛋白质(图图7（b）)的水平。VE-cadherin、ZO-1和β-在HO-1 siRNA+CORM-3+TNF中，连环蛋白较低-α+ il - 1β对照组与对照组比较，差异有显著性( ）但与HO-1 siRNA+TNF组相比无显著差异-α+ il - 1β组。结果表明，CORM-3不再有效诱导连接复合物分子VE-cadherin、ZO-1和β-Catenin基因和蛋白质表达在HO-1 siRNA转染后表明CINT-3的调节作用主要是由HO-1途径介导的。

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图6
在HGFS HO-1表达转染HO-1的siRNA。（a）中HGFS瞬时与HO-1 siRNA转染的。乱序的siRNA用作对照。通过RT-qPCR的检测HO-1的mRNA的表达。（b）中HGFS分为7组：对照，TNF-αα+ il - 1β， HGFs与10 ng/ml TNF-孵育αIL-1 2 ng/mlβ24小时;CORM-3 +肿瘤坏死因子-α+ il - 1β，其中HGFS用200处理 μmcorm -3, 10 ng/ml TNF-αIL-1 2 ng/mlβ24小时;炒siRNA + TNF -α+ il - 1β，in which cells were transiently transfected with scrambled siRNA 6 h prior to incubation with 10 ng/ml TNF-αIL-1 2 ng/mlβ24小时;炒siRNA + TNF -α+ il - 1β+CORM-3，瞬时转染炒过的siRNA 6 h，用10 ng/ml TNF-孵育α，2 ng / ml IL-1β和200 μM CORM-3处理24 h;HO-1的siRNA + TNF-α+ il - 1β，在用10 ng/ml TNF-孵育6小时之前，将HO-1 siRNA瞬时转染细胞αIL-1 2 ng/mlβ24小时;和HO-1 siRNA + TNF -α+ il - 1β+CORM-3，在用10 ng/ml TNF-孵育6小时之前，瞬时转染HO-1 siRNAα，2 ng / ml IL-1β和200 μM CORM-3处理24 h。RT-qPCR检测HO-1 mRNA表达水平。(c) western blotting检测HO-1蛋白表达水平。β-肌动蛋白用于演示等样加载。这些值是从至少三个重复的独立实验中获得的，其中 ， ，和 抗肿瘤坏死因子-α- - - il - 1β诱导细胞和^^ 和^ ^ ^ ，通过方差分析和Tukey的多重比较检验对两组进行比较。HO-1:血红素oxygenase-1;CORM-3:一氧化碳释放分子-3;siRNA:小干扰RNA;肿瘤坏死因子-α：肿瘤坏死因子-α；il - 1β:interleukin-1β；HGFs:人牙龈成纤维细胞。
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图7
表达的变化β-catenin、VE-cadherin和ZO-1在HO-1 siRNA转染HGFs中的表达。(a)瞬时转染HO-1 siRNA或打乱siRNA的HGFs。以未转染的hgf作为对照。RT-qPCR检测紧密连接和贴壁连接的mRNA表达。(b) hgf分为7组:对照组;肿瘤坏死因子-α+ il - 1β， HGFs与10 ng/ml TNF-孵育αIL-1 2 ng/mlβ24小时;CORM-3 +肿瘤坏死因子-α+ il - 1β，其中HGFS用200处理 μmcorm -3, 10 ng/ml TNF-α，IL-1 2 ng/mlβ24小时;炒siRNA + TNF -α+ il - 1β，in which cells were transiently transfected with scrambled siRNA 6 h prior to incubation with 10 ng/ml TNF-αIL-1 2 ng/mlβ24小时;炒siRNA + TNF -α+ il - 1β+CORM-3，瞬时转染炒过siRNA 6 h的细胞用10 ng/ml TNF-孵育α，2 ng / ml IL-1β和200 μM CORM-3处理24 h;HO-1的siRNA + TNF-α+ il - 1β，在用10 ng/ml TNF-孵育6小时之前，将HO-1 siRNA瞬时转染细胞αIL-1 2 ng/mlβ24小时 h；HO-1sirna+TNF-α+ il - 1β+CORM-3，在用10 ng/ml TNF-孵育6小时之前，瞬时转染HO-1 siRNAα，2 ng / ml IL-1β和200 μM CORM-3处理24 h。RT-qPCR检测HO-1 mRNA表达水平。(c) western blotting检测HO-1蛋白表达水平。β-肌动蛋白用于演示等样加载。这些值是从至少三个重复的独立实验中获得的，其中 ， ，和 抗肿瘤坏死因子-α- - - il - 1β诱导细胞和＾ ， ^^ ，和^ ^ ^ 通过方差分析和Tukey的多重比较检验对两组进行比较。HO-1:血红素oxygenase-1;CORM-3:一氧化碳释放分子-3;siRNA:小干扰RNA;肿瘤坏死因子-α：肿瘤坏死因子-α；il - 1β:interleukin-1β；HGFs:人牙龈成纤维细胞。

4讨论

近期研究表明，CORM-3对血管内皮细胞、巨噬细胞、单核细胞等多种细胞具有抗炎作用[22- - - - - -24]然而，CORM-3通过下调紧密连接分子（ZO-1）和粘附连接分子，降低促炎细胞因子刺激的HGF屏障通透性(β-catenin和VE-cadherin)尚未被描述。在本研究中，研究了CORM-3对TNF-的影响α- - - il - 1β-研究了诱导的炎症反应以及HO-1在这一过程中的作用。

HGF被选择用于本研究，因为它们是受TNF影响最严重的细胞组-α和IL-1β在牙周炎。他们在许多过程中也发挥着至关重要的作用，因此由于炎症调解器引起的屏障完整性和功能的变化将导致牙周职能受损[25，26］.众所周知，牙周炎是一个复杂的病理炎症过程，这意味着各种促炎细胞因子的表达或分泌，如趋化因子和粘附分子，可能在局部环境中同时增加。众所周知，TNF-α和IL-1β是参与牙周炎的两种最重要的炎症细胞因子，这两种分子已被证明通过增加屏障的通透性和下调上皮细胞上紧密和粘附连接分子的表达来增强白细胞的粘附[7，27，28］.tnf-的影响α和IL-1βHGF屏障的完整性和功能也得到了支持在体外研究21．在此，我们报道了CORM-3可以抑制TNF-α- - - il - 1β- 诱导HGF渗透性和紧密和粘附结表达的变化。这些研究结果表明，CORM-3响应炎症的HGF阻挡完整性和功能施加有益效果。

研究结果表明，当HGFs暴露于TNF-时α和IL-1β，VE钙粘蛋白，ZO-1和β-连环蛋白产量下降。此外，发现与CORM-3孵育可有效下调TNF-α- - - il - 1β-诱导的VE-cadherin, ZO-1和β-连环蛋白水平。相反，灭活的CORM-3 (iCORM-3)不能释放CO，不能减弱TNF-α- - - il - 1β-HGF中诱导的炎性细胞因子表达。因此，可以假设CORM-3通过共释放发挥抗炎作用。CO是HO催化血红素降解的代谢物，是内源性CO的主要细胞来源[19]，它不包括毒性分子为在调节细胞功能和通信广泛信号分子的作用。作为水溶性CORM，CORM-3是提供CO和调制许多内源性反应[有效载体24，29］.此外，许多动物研究发现球茎对心脏和肺有保护作用[30.，31.]，包括超级急性内毒性休克，肺炎炎症，术后Ileus，气道高反应性和肺动脉高压[32.- - - - - -35.］.

血红素加氧酶(HO)系统是广泛存在于人类和哺乳动物体内的微粒体酶系统。迄今为止，已经报道了三种HO亚型:HO-1、HO-2和HO-3。HO-1据报道是一种诱导酶[36.，37.］.此外，HO-1在调节细胞生长和分化以及控制促炎细胞因子等应激方面发挥着重要作用[38.- - - - - -40］.本研究证实TNF-α和IL-1β在HGFs中诱导HO-1表达，而CORM-3诱导的HO-1表达高于TNF-联合α和IL-1β．本研究中假定HO-1的诱导CORM-3 HGFS可以负责CORM-3的抵抗由TNF-α诱导的炎症的抗炎作用α和IL-1β．本研究清楚地表明，在抗炎过程中，CINM-3显着增加了HO-1表达。然而，COM-3在将HO-1 siRNA转染到HGF中后失去了抗炎作用，这表明CINT-3依赖于HO-1的效果[41.］.

牙周病是全球主要的口腔健康问题，但目前没有可用来限制它的发展[没有治疗42.- - - - - -44.]本研究的结果首次表明，CORM-3的抗炎作用在牙周病模型中通过HO-1依赖性途径发生，这些途径通过VE钙粘蛋白、ZO-1和HO-1介导β-连环蛋白表达。总的来说，结果表明CORM-3在治疗炎症性牙周病方面可能具有潜在的治疗价值。CORM-3保护作用的确切机制仍有待确定。此外，CORM-3的有益作用在活的有机体内设置需要在将来进一步调查。

化学CO供体化合物corm作为CO气体管理的一种替代方法，已被证明具有许多有益的效果，甚至在灵长类动物模型中[45.］.特别地，肝脏的应用可能更有效地绕过脱氧杂环蛋白代表的生物捕集器，这导致了典型的吸入有限公司典型的COHB累积。最近，通过将肠道缀合出与各种核因子红外红外2-的杂交分子称为Hycos。相关系数2（NRF2）激活器已设计[46.］.这些发现表明CORMs在临床应用中具有更广阔的前景。

数据可用性

用于支持本研究结果的所有数据都包含在文章中。

利益冲突

本文的发表不存在利益冲突。

致谢

山东省科技发展计划项目(no . 2010GSF10270);济南市临床医学科技创新计划项目(no . 201805045);山东省教育奖励专项资金(no .路才矫治(2014)94)。关键词:生物力学，生物力学，生物力学，数值模拟

工具书类

  1. “吸烟对慢性牙周炎患者牙龈微循环影响的初步研究”，花溪口强一学杂志，卷。37，没有。5，第485-489，2019。查看在：出版商网站|谷歌学者
  2. D. T. Graves和D. Cochran，《白细胞介素-1和肿瘤坏死因子对牙周组织破坏的贡献》，牙周病学杂志》第74卷第1期3，页391-401,2003。查看在：出版商网站|谷歌学者
  3. J. L. zink, A. C. Tanner, A. D. Haffajee, S. S. Socransky，“革兰氏阴性菌与活动性破坏性牙周病变相关”，临床牙周医学杂志，卷。12，没有。8，第648-659，1985。查看在：出版商网站|谷歌学者
  4. R. Clark, S. Zwicker, D. Bureik, G. Johannsen, E. A. Boström，“牙周炎患者和对照组牙龈组织和牙龈成纤维细胞中的菌群刺激因子1和白细胞介素-34的表达，”牙周病学杂志》, 2020年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  5. R.赫格德和K. H.阿万“对全身健康牙周疾病的影响，”Disease-a-Month，卷。65，没有。6，第185-192，2019。查看在：出版商网站|谷歌学者
  6. Kang，Y.D.Park，S.I.Kang等人，“抵抗素在体外尼古丁加脂多糖诱导的人牙周膜细胞炎症反应中的作用，”牙周研究杂志，第50卷，第5期，第602-613页，2015年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  7. T. Sim, H. Harith, C. Tham等人，“合成香叶酰苯酮在TNF-细胞模型中的保护作用α-肺上皮屏障功能障碍分子，第23卷，第2期。6, p. 1355, 2018。查看在：出版商网站|谷歌学者
  8. E.A.Boström，E. inceStedt，R.Sulniute等，“在牙周炎和人牙龈细胞内暴露于促炎细胞因子的人牙龈细胞内的血清中，”肠道素和MCP-1水平增加，“《公共科学图书馆•综合》，第10卷，第5期。8, article e0134608, 2015。查看在：出版商网站|谷歌学者
  9. K. Brune, J. Frank, A. Schwingshackl, J. Finigan, V. K. Sidhaye，“肺上皮屏障功能:一些新的角色和机制，”美国生理学杂志肺细胞和分子生理学，第308卷，第2期8, pp. L731-L745, 2015。查看在：出版商网站|谷歌学者
  10. R. Vogelmann，M. R.阿米耶瓦，S.伐尔柯和W. J.纳尔逊，“破入上皮心尖连接复合体 - 从病原体黑客消息，”《细胞生物学最新观点》，第16卷，第5期。1，页86-93,2004。查看在：出版商网站|谷歌学者
  11. G. Gueron, J. Giudice, P. Valacco等，“血红素加氧酶-1在细胞形态和前列腺癌细胞粘附行为中的意义”，Oncotarget，第5卷，第12期，第4087-4102页，2014年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  12. B. Bussolati, A. Ahmed, H. Pemberton等，“vegf诱导的血红素加氧酶-1在体内的双功能作用:诱导血管生成和抑制白细胞浸润，”血，卷。103，没有。3，第761-766,2004。查看在：出版商网站|谷歌学者
  13. G. Gueron，A. de Siervi，M. Ferrando等，“内源性血红素氧酶1作为前列腺癌细胞侵入潜力的调谐器”的“关键作用”分子癌症研究，卷。7，不。11，pp。1745-1755,2009。查看在：出版商网站|谷歌学者
  14. “血红素加氧酶-1介导尼古丁和脂多糖诱导的人牙周韧带细胞中环氧合酶-2和诱导型一氧化氮合酶的表达，”牙周研究杂志第45卷第5期2，页177-183,2010。查看在：出版商网站|谷歌学者
  15. “一氧化碳对缺血-再灌注肺损伤中细胞凋亡的抑制依赖于p38丝裂原激活蛋白激酶途径并涉及到caspase 3”，张新民，单平，L. E. Otterbein等。生物化学杂志第278期2，页1248-1258,2003。查看在：出版商网站|谷歌学者
  16. L. E. Otterbein, F. H. Bach, J. Alam等，“一氧化碳具有抗炎作用，涉及丝裂原激活蛋白激酶途径，”自然医学，第6卷，第4期，第422-428页，2000年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  17. M. Matsumoto, Y. Makino, T. Tanaka等，“钴诱导肾保护基因表达可改善大鼠肾脏的缺血性损伤，”美国肾脏学会杂志第14卷第2期7，页1825-1832,2003。查看在：出版商网站|谷歌学者
  18. E. M.西科尔斯基T.福，N.希尔Kapturczak和A.阿加瓦尔，“迄今为止的故事：在肾损伤的血红素加氧酶-1基因的分子调控”美国生理学杂志。肾的生理，卷。286，没有。3，第F425-F441，2004年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  19. ‘一氧化碳释放分子-3诱导血红素加氧酶-1抑制白细胞介素-1的研究’，林春春、杨春春、萧立德、陈胜义、杨春明β介导的神经炎症。”分子神经科学前沿， 2017年第10卷，第387页。查看在：出版商网站|谷歌学者
  20. E. Masini, A. Vannacci, P. Failli等，“一种一氧化碳释放分子(CORM-3)消除多形核粒细胞诱导的内皮细胞和肥大细胞的激活”，FASEB Journal.第22卷第2期9，页3380-3388,2008。查看在：出版商网站|谷歌学者
  21. “一氧化碳释放分子-3抑制并发肿瘤坏死因子-α- - - interleukin-1β-诱导人牙龈成纤维细胞粘附分子的表达牙周研究杂志，卷。46，没有。1，第48-57，2011。查看在：出版商网站|谷歌学者
  22. Zhang L. M. Zhang, D. X. Zhang, L. Fu, et al.， " Carbon -一氧化碳释放分子-3通过线粒体调控对失血性休克和复苏诱导的皮质焦亡的保护作用，"自由基生物学与医学，第141卷，第299-3092019页。查看在：出版商网站|谷歌学者
  23. L. Portal, D. Morin, R. Motterlini, B. Ghaleh, and S. Pons，“co释放分子CORM-3通过调节pH值恢复保护成年心肌细胞对抗缺氧-再氧”欧洲药理学杂志，第862卷，p。172636, 2019.查看在：出版商网站|谷歌学者
  24. A.比哈里，K.（A.）。涌，G. Cepinskas，D.桑德斯，E. Schemitsch和A.-。R. Lawendy“在室综合症的体外模型一氧化碳释放分子-3（CORM-3）提供保护，”微循环第26卷第2期第7条e12577, 2019。查看在：出版商网站|谷歌学者
  25. S. Urnowey, T. Ansai, V. Bitko, K. Nakayama, T. Takehara, and S. Barik，“提示:牙龈卟菌单胞菌感染人牙龈成纤维细胞中抗和促凋亡因子的暂时激活:细菌蛋白酶在宿主信号转导中的潜在作用”BMC微生物学，第19卷，第1期，第227页，2019年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  26. 李敏，任斌，刘玉玲，“含il -1ra的葡聚糖/PLGA微球的制备及其对牙周炎症的抑制作用，”炎症，卷。43，不。1，pp。168-178,2019。查看在：出版商网站|谷歌学者
  27. P.L.Brazee，P.N.Soni，E.Tokhtaeva等人，“FXYD5是肺损伤期间炎症反应的重要介质，”免疫学前沿， 2017年第8卷，第623页。查看在：出版商网站|谷歌学者
  28. Wang w, W. J. Guan, R. Q. Huang等，“Carbocisteine减弱TNF-α-通过抑制NF-诱导体外人肺泡上皮细胞炎症κB和ERK1/2 MAPK信号通路Pharmacologica学报，第37卷，第5期，第629-636页，2016年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  29. S. M. Carvalho, J. Marques, C. C. Romão，和L. M. Saraiva，“大肠杆菌与抗微生物一氧化碳释放分子CORM-3的代谢组学揭示了以三羧酸循环为主要目标，”Antimicrob代理Chemother，第63卷，第2期10，第63页，2019年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  30. O. Pak, A. G. Bakr, M. Gierhardt等，“一氧化碳释放分子对离体灌注肺血管反应活性的影响”应用生理学杂志号，第120卷。2, pp. 271-281, 2016。查看在：出版商网站|谷歌学者
  31. S.Zhuk、O.Smith、V.Thondapu、K.Halupka和S.Moore，“在有创冠状动脉造影期间使用对比运动生成患者特定的血流模拟，”生物力学工程学报，第142卷，第2期。2、2020。查看在：出版商网站|谷歌学者
  32. J. Li，L.歌，M. Hou，P. Wang，L. Wei和H.歌曲，一氧化碳释放分子-3通过释放一氧化碳促进大鼠骨髓间充质干细胞的骨质发生分化，“国际分子医学杂志，第41卷，第4期，第2297-23052018页。查看在：出版商网站|谷歌学者
  33. Y.Kumada，T.Takahashi，H.Shimizu等，“一氧化碳释放分子-3对失血性休克和复苏后急性肺损伤的治疗作用，”实验与治疗医学，第17卷，第5期，第3429-34402019页。查看在：出版商网站|谷歌学者
  34. J. P. de Rivero Vaccari，“一氧化碳释放分子-3抑制炎症小体激活:一种潜在的脊髓损伤治疗方法”艾比美辛，第40卷，第17-18页，2019年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  35. G. Zheng，Y. Zhan，H. Wang等人，“一氧化碳释放分子-3通过炎症调节缓解脊髓损伤后神经元死亡”艾比美辛，第40卷，第643-654页，2019。查看在：出版商网站|谷歌学者
  36. “一氧化碳释放分子3通过血红素氧合酶-1抑制RAW264.7细胞的破骨分化，”细胞生理学和生物化学，第50卷，第5期。5、pp. 1988-2003, 2018。查看在：出版商网站|谷歌学者
  37. 温文，林颖，蒂志，“桂皮醇提物对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠的抗糖尿病、抗高脂血症、抗氧化、抗炎活性”，前内分泌素(一九九九年)《中华人民共和国刑法》第十卷第716页。查看在：出版商网站|谷歌学者
  38. S. K. Lee，D. Y. Y. Park，H. J.Lee等，“一氧化氮诱导的铁稳态和血红素氧基酶-1中的功能相互作用，永生化和恶性口服角蛋白细胞，”癌症的信，第249卷，第2期，第283-293页，2007年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  39. “血红素加氧酶-1可降低低剂量脱氧雪华醇诱导的肝脏炎症，可能与微生物群有关，”毒理学及应用药理学，第374卷，第20-31页，2019年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  40. “血红素氧合酶-1在风湿性疾病治疗中的应用”，生命科学，第218卷，第205-212页，2019年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  41. L.宋，J.Li，X. Yuan等，“一氧化碳释放分子通过血红素氧合酶-1途径抑制尼古丁 - 和脂多糖刺激的人牙周韧带细胞中的炎性和骨质细胞源细胞因子”国际分子医学杂志，第40卷，第5期。5, pp. 1591-1601, 2017。查看在：出版商网站|谷歌学者
  42. E. Y. Choi, S. H. Choe, J. Y. Hyeon, J. I. Choi, I. S. Choi, S. J. Kim，“一氧化碳释放分子-3抑制普雷沃氏菌中脂多糖诱导的一氧化氮和白细胞介素-1的产生β在鼠巨噬细胞，”欧洲药理学杂志，第764卷，第22-29页，2015年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  43. N. El Sayed, R. Cosgarea, S. Rahim, N. Giess, J. Krisam, T.-S。“在学术背景下，患者、牙齿和牙医相关因素影响切除治疗后的长期牙齿保留——回顾性研究”，Kim，“患者、牙齿和牙医相关因素影响学术背景下切除治疗后长期牙齿保留的回顾性研究”，临床口腔调查, 2019.查看在：出版商网站|谷歌学者
  44. 赵丹，a . T. Khawaja, L. Jin等，“牙周炎慢性肾脏病患者的非外科牙周治疗对肾功能的影响:一项系统综述和介入研究的meta分析，”临床口腔调查，第24卷，第2期4, pp. 1607-1618, 2020。查看在：出版商网站|谷歌学者
  45. M. Vadori, M. Seveso, F. Besenzon等人，“一氧化碳释放分子CORM-3在异种猪到灵长类动物环境中的体外和体内效应，”异种器官移植，第16卷，第5期。2期，第99-114，2009年。查看在：出版商网站|谷歌学者
  46. A. Ollivier，R.Foresti，Z.El Ali等，“基于锰和钌的混合CO-RMS（HYCOS）的设计和生物学评估，”化学药品第14卷第2期18, pp. 1684-1691, 2019。查看在：出版商网站|谷歌学者

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