文摘

本研究的目的是评估的影响肽来源于synbiotics改善炎症性肠病(IBD)。有没有雄性C57BL / 6小鼠管理通过饮用水与葡聚糖硫酸酯钠(DSS)七天诱导炎症性肠病(IBD)组。炎症性肠病组的小鼠口服接种与PBS (IBD-PBS-positive控制),加氏乳杆菌505 (IBD-Pro)、发酵粉的CT提取l . gasseri505 (IBD-Syn),β酪蛋白:LSQSKVLPVPQKAVPYPQRDMP (IBD-Pep 1),或α_s2酪蛋白:VYQHQKAMKPWIQPKTKVIPYVRYL (IBD-Pep 2)(肽存在于synbiotics)四天,诱导炎症性肠病。确认IBD感应,动物的体重和疾病活动指数(DAI)分数每两天进行一次。益生菌的治疗后,synbiotics或肽11天,老鼠被牺牲掉了。小肠和大肠的长度测量。促炎细胞因子il - 1的表达β、il - 6、TNF -α是测定,cox - 2在大肠。大肠组织于10%福尔马林固定,苏木精和伊红染色进行组织病理学分析。身体的重量减少,戴在炎症性肠病组分数增加,但戴IBD-Pep 2组的分数低于那些在炎症性肠病组处理PBS, Pro, Syn、Pep 1。小肠和大肠的长度短的炎症性肠病组比组没有炎症性肠病,和促炎细胞因子的表达水平较低( )IBD-Pep 2组比对照组IBD-PBS-positive。此外,组织病理学分析表明,IBD Pep 2-treated组的改善。这些结果表明,Pep 2来自α_s2酪蛋白是有效减轻IBD-associated炎症。因此,我们表明,这些肽可以减轻炎症性肠病的炎症。

1。介绍

炎症性肠病(IBD)是一种肠道慢性炎症,和IBD患者的数量增加了12到14.5倍,尤其是对儿科患者(1,2]。炎症性肠病是由于不正常的免疫反应和肠道细菌的生态失调3,4]。因此,有必要研究如何提高免疫反应和失调。

益生菌是有利于生物的健康宿主摄取在温和的数量(5,6]。乳酸菌是代表各种等功能益生菌,如标准化肠道菌群,增强免疫力,抗氧化和抗炎活动(7,8]。其他的研究(9,10]表明,难消化的食品可以帮助肠道中有益微生物的生长,尤其是益生菌菌株,并改善人类健康。因此,益生菌和益生元的组合的影响,称为synbiotics,被调查的基础上,假设synbiotics有更好的单独功能的好处比益生菌和益生元(11,12]。

加氏乳杆菌是一种兼性厌氧细菌,丰富人类和动物胃肠道(13,14]。它们用于不同的发酵乳制品和益生菌,因为他们有免疫调节、抗菌、抗高血压活动(15,16]。Cudrania tricuspidata(CT)一直在亚洲使用作为抗菌药物和抗癌疗法(17,18),被发现有生命起源以前的影响通过促进肠道内的有益细菌的生长通过其noncarbohydrate组件组成的多酚(19]。

因此,本研究的目的是检查益生菌的影响(l . gasseri),synbiotics (l . gasseri+ CT提取),肽分离的synbiotics IBD的改进。

2。材料和方法

2.1。动物

有没有雄性C57BL / 6小鼠从东方生物有限公司购买(凭借、京畿道、韩国)和适应在20 - 30°C,湿度40 - 60%一周。老鼠被分为六个实验小组,如表所示1。动物实验(smwu - iacuc - 1709 - 020)是通过研究所的动物保健和使用委员会Sookmyung女子大学。

2.2。诱导炎症性肠病和治疗

老鼠接受1 - 2%葡聚糖硫酸酯钠(DSS;韩国首尔的议员生物医学韩国,Songpa-gu)通过7天的饮用水诱导炎症性肠病;这些小鼠炎症性肠病组组成。负对照组收到正常的饮用水。从第0天、消极控制小鼠口服接种与磷酸盐(PBS: pH值7.4;0.2 g KH₂阿宝₄,1.5 g Na₂HPO₄h·7₂啊,8.0克氯化钠,氯化钾和0.2克、1 L蒸馏水)使用7天,一天喂一次针。炎症性肠病组进一步分为以下子组:的IBD-PBS group-orally与PBS管理;的IBD-Pro group-administered益生菌(l . gasseri505;哦,et al ., 2016);的IBD-Syn group-administered synbiotics(发酵粉的CT提取l . gasseri505);IBD-Pep 1和Pep group-administered 1;和IBD-Pep 2 group-administered Pep 2。政府使用7天喂养一天发生一次针,如表所示1。口服持续了4天没有饮用水中的DSS(表1)。两个肽Pep 1和Pep 2,分开的synbiotics如表所示2(19),是由首尔牛奶中央研究所(Ansan-si、京畿道、韩国)。小鼠禁食18 h和异氟烷麻醉(Hana制药有限公司,韩国华城,京畿道,韩国)的牺牲。肠道被迅速删除,小肠和大肠的长度测量。然后他们被储存在-70°C。部分大肠组织固定在10%福尔马林溶液(HISKO、Gunpo-si、韩国)进行组织病理学分析。

2.3。测量体重和粪便的观察条件

小鼠的体重测量每2天。疾病活动指数(DAI)分数的粘度分级通过观察粪便和血液的存在与否对11天的粪便水行政DSS的第一天。值的计算根据哈默尔et al。20.]。

2.4。测量血清中一氧化氮和炎性细胞因子的浓度

血液样本离心机,享年94岁×g10分钟分离血清。血清(80μl)和同样体积的格里斯试剂(WI Promega,麦迪逊,美国)被添加到96孔板,然后在室温下孵化了10分钟。Take3体系的吸光度测量时代™微型板块分光光度计(BioTek仪器有限公司、Winooski VT,美国)在540 nm,和浓度的计算基于纳米的定量曲线₂标准的解决方案。此外,血清中炎性细胞因子产品浓度测量使用ProcartaPlex™鼠标Th1 / Th2细胞因子面板(11丛)(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国)。

2.5。促炎细胞因子mRNA水平测量大肠组织

总信使rna提取大肠组织使用RNeasy迷你包(试剂盒、希尔登,德国)根据制造商的指示。大肠组织的mRNA在时代量化使用Take3系统™微型板块分光光度计(BioTek仪器)。为定量实时逆转录聚合酶链反应(存在)分析、互补脱氧核糖核酸合成使用QuantiTect逆转录工具包(试剂盒)根据制造商的指示。中使用的引物中存在il - 1β、il - 6和cox - 2表中列出3和引物TNF -α购自试剂盒(Mm_Tnf_1_SG QuantiTect底漆化验,猫。不。QT00104006)。执行中存在一个Rotor-Gene问仪器(试剂盒),使用Rotor-Gene SYBR®绿色PCR试剂盒(试剂盒)根据制造商的指示。相对褶皱的变化使用−2基因表达水平进行了分析^ΔΔCt方法(24]。

2.6。组织病理学分析大肠组织

固定大肠组织样本用蒸馏水洗净,并使用酒精脱水。他们与石蜡固定,这些样本被放置在幻灯片和苏木精和伊红染色())。组织病理学分析200放大。结果是由指命名和诊断标准的国际协调(INHAND)标准,和标本病变比较。

2.7。统计分析

实验数据分析了使用SAS的一般线性过程®version 9.4 (SAS研究所有限公司、卡里、数控、美国)。最小二乘均值比较治疗组间两两进行 - - - - - -测试在 。

3所示。结果

3.1。多肽对小鼠体重的影响和戴

经过4天的口服1% DSS,粪便状态没有明显的变化,如血液的存在和腹泻,被观察到。因此,DSS的浓度增加到2% 3天,观察和血腥的凳子和腹泻。体重的2% DSS(炎症性肠病组)治疗组减少,而负对照组稳步增长(表4)。傣族分数计算使用粪便(表条件5)。因此,傣族分数负控制和炎症性肠病组0和2,分别(表6)。IBD-Pro身体重量,IBD-Syn IBD-Pep 1,或者IBD-Pep 2组没有明显不同于IBD-PBS-positive对照组。傣族的得分(0.5 - -1.5)的IBD-Pro IBD-Pep 1, IBD-Pep两组一般都低于IBD-PBS-positive对照组( ),特别是对于IBD-Pep 2组( )(表6)。傣族IBD-Pep 2组的分数非常接近-控制(表6)。因此,Pep 2 (α_s2酪蛋白)分开synbiotics可以改善肠道炎症。

3.2。比较小的和大小肠的长度

Yoon et al。25)表明,小肠和大肠的长度往往是短的炎症性肠病的老鼠。同样地,我们发现小肠和大肠的长度短了IBD-PBS-positive控制,IBD-Pro, IBD-Syn, IBD-Pep 1和IBD-Pep比阴性对照组,2组和大小肠的长度IBD-PBS-positive对照组是最短的(表7)。

3.3。一氧化氮和血清中炎性细胞因子水平

没有水平最高的阳性对照组,但无治疗组的水平与IBD-Pro IBD-Syn和IBD-Pep 1显著降低( )比积极的控制(图1)。它表明炎症的水平提高,当益生菌,synbiotics, Pep1治疗的小鼠肠道炎症。血清中炎性细胞因子(IFN -γ、il - 6和TNF -α少),这些细胞因子分泌在所有治疗组,比较积极的控制(图2)。特别是,干扰素-γ较低( )IBD-Pep 2组,il - 6低( )IBD-Pro IBD-Pep 1组比积极的群体。肿瘤坏死因子-α显著降低( )在IBD-Pro IBD-Syn, IBD-Pep两组比积极的组织(图2)。

3.4。信使rna在大肠组织中炎性细胞因子的水平

许多研究报道,il - 1的表达水平β和肿瘤坏死因子-α增加在IBD患者26]。我们评估的mRNA水平等促炎细胞因子il - 1β、il - 6、TNF -α,cox - 2在DSS-treated老鼠的小肠(炎症性肠病组)和大肠的水平增加( ),表明DSS治疗明显诱导炎症性肠病(图3)。这些炎症标记物在大肠的mRNA水平组织明显减少( )IBD-Pep 2组相比IBD-PBS-positive对照组。此外,mRNA水平的il - 6、TNF -α,cox - 2,但不是il - 1β,降低IBD-Pro IBD-Pep 1组( )(图3)。因此,益生菌,Pep 1, Pep 2是有效抑制促炎细胞因子的表达。

3.5。大肠组织的组织病理学特征

炎症性肠病主要是观察到大肠,因此,空肠组织检查的组织病理学特征。空肠IBD-PBS-positive控制炎症被发现,IBD-Pro, IBD-Syn, IBD-Pep 1组、阴性对照组相比(图4)。病变的程度显然是低IBD-Pep 2治疗组比对照组IBD-PBS-positive和其他治疗组(图4)。因此,α_s2酪蛋白(Pep 2)治疗导致的减少结直肠病变小鼠炎症性肠病。

4所示。讨论

鲍尔et al。27]表明,DSS-induced小鼠炎症性肠病的特点是减肥,和Okayasu et al。28]表明,减肥和血腥的凳子是炎症性肠病的特点。根据这些研究,我们的研究结果表明,炎症性肠病由2% DSS诱导的小鼠治疗(表4),小肠和大肠的长度变短了2% DSS治疗,这是发现在IBD患者29日戴的分数也低IBD-Pep 1和IBD-Pep 2治疗组,表明炎症改善了Pep 1和Pep 2(表6)。

没有水平血清作为一种重要的生物标志物用于活跃IBD患者(30.]。当发生结肠癌的炎症反应时,肿瘤坏死因子等细胞因子-的作品α和干扰素-γ诱导第三同种型诱导(间接宾语)来增加生产。肿瘤坏死因子-α和血清中il - 6与肠道疾病有关,和所有调节在IBD患者31日]。增加肿瘤坏死因子-α由于肠道疾病刺激干扰素的分泌γ在炎症性肠病病人32]。在我们的研究中,炎症反应是缓解益生菌,synbiotics, Pep 1是老鼠的IBD口头管理。肿瘤坏死因子-α干扰素-γ,il - 6分泌通常是降低(图21)益生菌,Pep, Pep 2治疗。这一结果表明,益生菌的治疗,synbiotics, Pep 1, Pep 2可以减少没有和血清炎性细胞因子。

结肠病变发生在IBD患者和炎症细胞浸润病变区域产生促炎细胞因子(33]。然而,使用益生菌会使促炎细胞因子的表达,限制如免疫细胞浸润黏膜炎症反应(34]。因此,mRNA水平的促炎细胞因子il - 1等β、il - 6、TNF -α,cox - 2在大肠组织也以我们的研究。结果,促炎细胞因子在IBD-Pro IBD-Pep 1和2 IBD-Pep显著降低,而积极的控制。在组织病理学结果,空肠损伤的程度明显降低,特别是在IBD-Pep 2组。这一结果表明,益生菌,Pep 1, Pep 2减少炎性细胞因子水平和Pep 2减少损伤的程度。

5。结论

总之,Pep 2,它包含了α_s2酪蛋白VYQHQKAMKPWIQPKTKVIPYVRYL序列分开synbiotics(发酵CT提取与l . gasseri505),通常涉及改善肠道炎症因素,如傣族得分,炎性细胞因子水平与组织病理学结果。因此,Pep 2可以作为一个补充改善IBD患者的炎症。然而,人类应用研究应该进行确认这种效果。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

本研究支持的“自然Synbiotic食品的开发和生产改善小儿炎症性肠病和肠道微生物群”(项目编号117069),韩国研究所的计划和评估技术在食品、农业、林业和渔业。