文摘

toll样受体(通常)在初始先天免疫反应的关键。TLR2在承认lipopeptides至关重要的革兰氏阳性细菌和纠缠不清的慢性炎症。唐氏综合症儿童(DS)很容易从这些病原体感染和自身免疫的风险增加。Sparstolonin B (SsnB)是一个变弱的TLR拮抗剂细胞因子的生产在脓毒症和改善结果。我们提出,TLR信号可能与DS儿童异常,为临床表型。我们评估TLR通路在3个方面:确定表面的表达TLR2中性粒细胞和单核细胞,流式细胞术,检查关键调控蛋白的基因表达参与TLR信号传播,MyD88, IRAK4, TRIF,定量PCR,最后决定由ELISA与促炎症刺激后免疫调节细胞因子的生产(脂多糖(LPS), Pam3Csk4)和抗炎剂SsnB。我们报告TLR2表达显著增加在中性粒细胞,单核细胞总数,中间值和模在DS儿童单核细胞( , 年,女 )相对于控件( , 年,女 )。在基线,MyD88的表达显著降低,TRIF明显在DS的孩子长大。TLR拮抗剂SsnB是有效地减少TLR2和CD11b细胞因子表达和废除生产两个组别。我们得出结论,TLR信号和TLR2通路在DS特异表达,而这不同的先天免疫可能导致慢性炎症在DS。SsnB变弱促炎介质和可能的治疗效益。

1。介绍

唐氏综合症(DS)是由额外的21号染色体的遗传物质,是最常见的染色体异常影响1 700年出生在美国1]。它与无数的健康并发症包括发育迟缓、先天性心脏病、胃肠闭锁,急性白血病,和阻塞性睡眠呼吸暂停(2]。免疫失调DS的另一个重要特性,如减少T和B淋巴细胞计数(3,4),改变血清细胞因子(5,6),次优抗体免疫反应(7- - - - - -9]。然而,有免疫系统的关键方面,据我们所知,在这个队列之前没有检查。

通常toll样受体及其在启动激活是至关重要的先天免疫反应,同时也将感染的适应性反应10]。激活这些通常启动下游信号通路和招聘的星座适配器蛋白质:骨髓分化主要响应基因88 (MyD88) MyD88 adaptor-like蛋白质(MAL) IL-1R-associated激酶(伊拉克的)家庭和TIR-domain-containing适配器protein-inducing干扰素-β(TRIF),进而刺激下游激酶(ERK物,MAPKs),导致核易位的转录因子的增加,包括核转录因子(NF -κBκB)和干扰素监管因素3 (IRF-3),最终导致生产的促炎细胞因子(11]。严格监管的TLR防止感染的途径是至关重要的实现也避免破坏细胞因子的生产过剩会导致更糟糕的结果,严重脓毒症或慢性炎症导致自身免疫,这些后遗症更频繁地发生在DS (12,13]。

TLR2参与检测细菌感染和慢性炎症和位于细胞膜,它承认和信号分子结合。这些分子来源于微生物,如细菌、病毒或真菌表现出其分子模式(pamp,例如,肽聚糖,脂蛋白,lipoarabinomannan, lipoteichoic酸,酵母聚糖,和糖脂)或从垂死的内源性细胞轴承有关分子模式(例如,抑制内源性抑制,热休克蛋白70 (HSP70) Snapin,和透明质酸)(14,15]。虽然从革兰氏阳性细菌和商业lipopeptides TLR2受体激动剂如Pam3Cys-Ser——(赖氨酸)4-3HCL (Pam3Csk4 16)是经典与激活受体,有证据表明,脂多糖(LPS)内毒素也可以产生强劲增加TLR2表达式(16,17]。这两个在活的有机体内和在体外实验证明显著增加单核细胞TLR2有限合伙人治疗后(16]。

TLR2的意义及其对选民的亲和力的革兰氏阳性细菌是特殊的意义与DS DS作为个体更倾向于从这群病原体感染。DS儿童感染和有更大的风险增加进入医院呼吸道感染的风险(rti),他们更可能有一个长期保持,需要重症监护的支持(18]。革兰氏阳性细菌,如链球菌引起的肺炎和金黄色葡萄球菌致病微生物在很多情况下,前者也是一个重要的贡献者和积液复发性中耳炎(渗出性中耳炎),在这些孩子经常导致传导性听力损失(4]。积极的长期牙周炎造成持续感染和慢性炎症是经常在这个人口19]。高架TLR2表达在慢性牙周炎患者的口腔黏膜与控制(20.,21]。

特异表达TLR2 autoinflammation由于信号原因不促炎细胞因子释放。这可能导致一些自身免疫和炎症性疾病如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、动脉粥样硬化,和脓毒症(22]。DS儿童更容易受到类似条件关节病和甲状腺和腹腔疾病23和脓毒症的死亡率增加13]。CD11b是一个显示激活的细胞表面受体,介导中性粒细胞和单核血球渗出和附着力24]。异常嗜中性粒细胞迁移和依从性与感染在新生儿和成人的风险增加25]。因此,开发和利用TLR拮抗剂或这些通路的抑制剂可能的临床受益。Sparstolonin B (SsnB)是一种天然异香豆素化合物来源于植物的根等Sparganium三棱和芦苇yagara和已经被证明可以减少炎症26]。这种化合物作为选择性TLR2和TLR4拮抗剂通过优先限制协会MyD88 TLR2和TLR4和减少一般NF -κB活动(27]。SsnB有可能废除促炎细胞因子释放,和巨噬细胞治疗与有限合伙人或Pam3Csk4减少促炎细胞因子的表达,如白介素1β(il - 1β)、白介素6 (il - 6)、肿瘤坏死因子-α(TNF -α)[28]。

我们提出,TLR信号可能与DS儿童异常,改变TLR2有助于临床表型革兰氏阳性感染的风险增加,慢性炎症和自身免疫。我们旨在评估TLR在三方面途径:通过确定表面的表达TLR2中性粒细胞,单核细胞,和他们的子集,通过检查关键调控蛋白的基因表达参与TLR信号传播,MyD88, IRAK4, TRIF,最后通过确定与促炎细胞因子的生产在基线和免疫调节后刺激(有限合伙人,Pam3Csk4)和抗炎剂SsnB。

2。材料和方法

2.1。研究人群

本研究经伦理委员会批准在全国儿童医院,Tallaght,和夫人的儿童医院,Crumlin (OLCHC),都柏林,爱尔兰。所有家庭和参与者收到口头和记录信息的研究,并获得书面同意之前招聘。有两组病人登记:(a)的孩子 岁参加专门的唐氏综合症的诊所,或OLCHC,和(b)年龄患者(控制)参加放血或天程序;在这种情况下,血液抽样发生在全身麻醉的诱导。两组没有最近的证据的感染或发热。

2.2。病人的特点

有20个孩子患有唐氏综合症(DS) 的时代 11年(y)是女性和15控制的平均年龄 ,其中5个是女性。在DS人群中,儿童的历史重大需要手术在婴儿期先天性心脏病( )都没有进一步的心脏病临床表现稳定的干预。两组人无热的血液抽样的时候没有感染的近代史。

2.3。实验设计

我们利用相同的实验方法(如下面所列),按照我们之前的文献[29日),评价在中性粒细胞和单核细胞TLR4和CD11b表达DS在基线和应对有限合伙人。血液样本(1 - 3毫升)在体外实验收集在柠檬酸钠实际上血管和分析在两小时的放血。全血在37°C 1小时孵化与促炎兴奋剂脂多糖(LPS;大肠杆菌0111:B4,σ生命科学,威克洛郡,爱尔兰)10 ng / mL, Pam3Csk4 (Tocris Bio-Techne,阿宾顿,英国)5 ng / mL,和TLR拮抗剂sparstolonin B (SsnB;σ生命科学,威克洛郡,爱尔兰)10μM和结合。

2.4。抗体和流式细胞术

血样孵化的死细胞染色(表达载体可确定的可行性染料eFluor 506年,加利福尼亚,美国),稀释浓度在磷酸盐(PBS)。以下fluorochrome-labelled单克隆抗体(mAb)被添加到每个样本:CD14-PerCP, CD15-PECy7, CD16-FITC, CD66b-Pacific蓝色,TLR2-APC (BioLegend®,加利福尼亚,美国)和PE-labelled CD11b (BD生物科学,牛津大学,英国)。PBA缓冲区(PBS包含1%的牛血清白蛋白和0.02%的叠氮化钠)被用于制造抗体的鸡尾酒。在黑暗中样本孵化15分钟。接下来,1毫升的流式细胞仪赖氨酸溶液(BD生物科学,牛津大学,英国)添加到每个管,然后样本在黑暗中孵化15分钟。离心细胞颗粒状的在室温下7分钟450克,洗两次PBA缓冲区,和固定的300年μL 1%的多聚甲醛。最终细胞颗粒resuspended于100年μL PBA缓冲区和BD FACSCanto II流式细胞分析仪分析。

TLR2和CD11b抗原的表达中性粒细胞和单核细胞表面被流式细胞术进行评估。中性粒细胞是基于SSC-A划定和CD66b +积极性如前所述30.)和单核细胞被定义基于SSC-A CD66b消极和基于子集CD14和CD16表达:古典(CD14 + / CD16 -)、中级(CD14 + / CD16 +),模(CD14dim / CD16 +)。至少10000事件被整理,和相对表达TLR2和CD11b表示为平均荧光强度(MFI)。流式细胞仪数据分析使用FlowJo软件(俄勒冈州,美国)。每个样本处理和分析相同的研究员(DH)从而减少变化的结果。

2.5。互补脱氧核糖核酸合成RNA提取,rt - pcr

孵化后的样品与促炎的兴奋剂,1毫升的试剂盒(热费希尔)的解决方案是添加到0.3毫升。样本在室温下培养5分钟紧随其后的氯仿。溶解后,采用水相分离RNA,按照制造商的指示(美国表达载体)。RNA纯度和浓度测定用NanoDrop nd - 100分光光度计和分析使用nd - 1000 ver.3.1.2软件。总RNA, 1μg,是反向转录单链cDNA使用高容量cDNA存档工具包(应用生物系统公司)后,制造商的协议和存储在-80°C到使用。设置放大10分钟在25°C和120分钟37°C,在85°C和5秒然后保持在4°C。基因表达的评估是由TaqMan®rt - pcr。商用TaqMan®引物和探针组合被用来检测以下基因的表达,MyD88 (001172567.1 NM), TRIF (NM_182919.3), IRAK4 (NM_001114182.2)。GAPDH内生控制选择。所有样本化验一式三份。热循环条件如下:2分钟50°C,在95°C, 10分钟,40周期,在95°C和1分钟24秒60°C,使用7900 ht快速实时PCR系统。②相对量化值计算使用2^-ΔΔCt方法。

2.6。多路复用ELISA

下面的细胞因子,肿瘤坏死因子-α(TNF -α)、白介素1β(il - 1β)、白介素6 (il - 6)、白细胞介素8(引发)、γ干扰素(IFN -γ)、白介素18(地震)、血管内皮生长因子(VEGF)、红细胞生成素(Epo)、白介素1受体拮抗剂(IL-1ra)和白介素10 (il - 10),分析了使用一个定制的MSD®多点试验板从中尺度(美国默沙东公司诊断)。提取外周血血清,如上所述,被转移到96 - MSD板,这些细胞因子评估按照制造商的指示。部门成像仪上的板就可以分析和验证(位于马里兰州Rockville发现,内消旋规模,美国;http://www.meso-scale.com/)。为个人化验检测的局限性在预期范围之内。

2.7。统计数据

统计分析是使用配对和未配对 - - - - - -测试比较意味着结果之间的两个独立的群体。双向方差分析与Bonferroni也进行多重比较测试比较感兴趣的两个群体不同治疗方式的疗效。

3所示。结果

3.1。单核细胞子集分析

关于枚举单核细胞的子集,尽管DS儿童有更高比例的中间(DS和控制:5.2%比4.3%; )和模(DS与控制:18.3%比11.5%; )亚种群比控制,它们之间没有显著差异。经典的单核细胞的百分比与DS儿童低相对于控件(DS和控制:76.4%比84.2%; )。

3.2。TLR2表达式

中性粒细胞TLR2高表达在DS儿童而控制基线( )。有限合伙人孵化后,没有变化在队列(DS (TLR2表达式 )与控制( );图1(一))。总单核细胞TLR2表情也提出在DS儿童基线与控制( )。TLR2表达式post-LPS治疗增加DS群体而不是控件(DS, ;控制, ;图2 (b))。

单核细胞TLR2的子集分析显示更大的表情中间( )和模单核细胞( )在DS儿童相比,在基线控制。古典单核细胞TLR2在DS儿童更高但并没有完全达到意义( )(数据1 (c)- - - - - -1 (e))。没有上涨TLR2表达式在队列post-LPS治疗。中间单核细胞的最大意味着TLR2 MFI基线的单核细胞亚群与DS和对照组儿童(DS和DS;控制与控制;中间与古典( ; )。模单核细胞显示最低的意思是三个单核细胞TLR2在基线子集是低于中间单核细胞TLR2在两个组别(图1)。

3.3。Pam3Csk4效果和有限合伙人TLR2表达式

孵化后Pam3Csk4 Pam3Csk4和LPS结合,没有上涨TLR2表达式在队列(DS(中性粒细胞 )与控制( );图2(一个))。TLR2表情总单核细胞是治疗后两组有限合伙人和有限合伙人+ Pam3Csk4 (DS:有限合伙人( )和有限合伙人+ Pam3Csk4 ( );控制:有限合伙人( )和有限合伙人+ Pam3Csk4 ( );图2 (b))。单独治疗Pam3Csk4 TLR2增加没有导致任何队列。孵化Pam3Csk4和有限合伙人的影响导致更高的比Pam3Csk4 TLR2表达式或有限合伙人仅对总单核细胞在控制而不是DS组(vs Pam3Csk4: DS ( )和控制( );与有限合伙人:DS ( )和控制( );图2 (b))。

Pam3Csk4和有限合伙人的单核细胞TLR2表情子集,请补充图。1。

3.4。CD11b Pam3Csk4和有限合伙人

有上涨CD11b Pam3Csk4后,有限合伙人,有限合伙人+ Pam3Csk4孵化两个组别的中性粒细胞(Pam3Csk4 (DS, ;控制, ),有限合伙人(DS, ;控制, ),和有限合伙人+ Pam3Csk4 (DS, ;控制, );图2 (c))。治疗与兴奋剂导致更高的比用Pam3Csk4 CD11b独自在两组(DS, ;控制, )。

总单核细胞CD11b毕竟治疗增加两个组别(Pam3Csk4 (DS, ;控制, ),有限合伙人(DS, ;控制, ,和有限合伙人+ Pam3Csk4 (DS, ;控制, );图2 (d)),以及治疗与有限合伙人和Pam3Csk4导致较高的CD11b表达式比Pam3Csk4 (DS, ;控制, )或仅有限合伙人(DS, ;控制, )还在两组。

单核细胞分析显示,中间单核CD11b子集对刺激有限合伙人和Pam3Csk4军团(补充图。2)。Pam3Csk4的影响和有限合伙人CD11b表情单核细胞子集,请补充图。2。

3.5。SsnB对TLR2表达的影响

TLR拮抗剂SsnB被用来评估其潜在作为免疫调制剂与LPS刺激后,Pam3Csk4, toll样受体激动剂在一起。关于中性粒细胞TLR2表情,没有减少TLR2在样品处理SsnB + Pam3Csk4和SsnB + LPS在DS儿童和控制(Pam3Csk4: DS ( )和控制( ),有限合伙人:DS ( )和控制( );图3(一个))。总单核细胞,SsnB减少TLR2和有限合伙人+ Pam3Csk4孵化后控制而不是儿童DS (DS, ;控制, ;图3 (b))。还有对总单核细胞TLR2上升以应对有限合伙人+ Pam3Csk4控制。没有减少TLR2表达式后SsnB + LPS和SsnB + Pam3Csk4两组(有限合伙人+ SsnB: DS ( )和控制( ),Pam3Csk4 + SsnB: DS ( )和控制( );图3 (b))。

单核细胞子集分析显示,SsnB减少TLR2在古典和模有限合伙人和有限合伙人+ Pam3Csk4治疗后单核细胞(经典:有限合伙人( )和有限合伙人+ Pam3Csk4 ( );模:有限合伙人( ))。请补充图。3SsnB的效果在单核细胞TLR2子集。

3.6。SsnB对CD11b表达的影响

CD11b表达式在治疗后中性粒细胞减少SsnB +有限合伙人( )孵化后的有限合伙人与Pam3Csk4 ( )在对照组;也有上涨CD11b与有限合伙人(治疗后 )和有限合伙人和Pam3Csk4 ( )在这一组。与DS儿童,没有变化在CD11b SsnB治疗后中性粒细胞(有限合伙人+ SsnB, ;有限合伙人+ Pam3Csk4, ;图3 (c))。对总单核细胞,减少CD11b在控件(有限合伙人和SsnB治疗后 );也有上升CD11b post-LPS孵化( )。在DS儿童,有下降CD11b SsnB和Pam3Csk4治疗后( );在这两个军团,没有减少治疗后SsnB和促炎兴奋剂(图3 (d))。

单核细胞子集分析显示模单核细胞CD11b减少与LPS处理后,两个组别Pam3Csk4, SsnB (DS, ;控制, ;补充图。4)。请补充图。4效应的SsnB CD11b单核细胞上的子集。

3.7。toll样受体信号通路基因表达

儿童外周血细胞的表达MyD88低与DS ( );有限合伙人的治疗后,控件(有MyD88上升 ),但这是与DS(图未见的孩子4(一))。在基线,TRIF表达式在DS儿童长大与控制( ),也没有增加表达有限合伙人治疗后两组(图4 (c))。没有差异的表达IRAK4在两组之间,有一个缺乏有限合伙人反应在两个组别(图4 (c))。

3.8。免疫调节和细胞因子:SsnB-IL-1的影响β肿瘤坏死因子-α、il - 6、地震- VEGF, Epo(促红细胞生成素)引发,干扰素-γ、il - 10和IL-1ra

与LPS刺激后全血,有增加il - 1的两个组别β肿瘤坏死因子-α、il - 6、地震引发,VEGF。重要的有限合伙人响应只是控制样本促红细胞生成素和干扰素-γ(值< 0.05)(数据4- - - - - -7)。有限合伙人和Pam3Csk4一起也导致增加il - 1β肿瘤坏死因子-α,il - 6、引发和VEGF在两组而不是地震或促红细胞生成素(值< 0.05)显著,只有干扰素- DS队列γ(数据5- - - - - -7)。有两个组别的增加引发、控制肿瘤坏死因子-α只,VEGF Pam3Csk4单独刺激(值< 0.05),表明这种免疫调制剂生成一个劣质的细胞因子反应而有限合伙人。

TLR2拮抗剂SsnB时添加到有限合伙人,TNF -细胞因子的生产α两个组别,地震,促红细胞生成素减少(值< 0.05)(数据5和6)。il - 1β和il - 6水平下降在DS SsnB治疗后组,而对照组只有VEGF水平相对较低。有限合伙人的影响和Pam3Csk4 SsnB废除了il - 1β、il - 6和VEGF在对照组(值< 0.05)。对肿瘤坏死因子- SsnB最显著的影响α后生产,导致减少有限合伙人,Pam3Csk,有限合伙人+ Pam3Csk4两组(值< 0.05)。对引发和干扰素- SsnB没有影响γ生产(数据5- - - - - -7)。

il - 10版本增加以下有限合伙人和降低了SsnB控制。促炎兴奋剂有限合伙人和Pam3Csk4导致上涨IL-1ra在这两个军团,这是减少后的SsnB有限合伙人和有限合伙人+ Pam3Csk4两组(值< 0.05)(图6)。

4所示。讨论

我们演示了增加TLR2表情中性粒细胞,单核细胞,单核细胞亚群与DS儿童相比,控制。这可能是临床上重要的过剩TLR2表达式与更常见的在DS发病率有关,如革兰氏阳性感染(31日),自身免疫(32),和贫穷的结果在脓毒症(13]。这是第一次我们的知识,TLR2的失调及其通路被描述在DS。

我们以前描述的增加在模单核细胞TLR4表达基线和高反应性嗜中性粒细胞CD11b LPS刺激后在DS儿童29日]。在其他疾病TLR2和TLR4表达改变。与迟发性的术语新生儿败血症,TLR4表达增加与阳性血培养婴儿和TLR2表达在那些临床脓毒症(长大33]。成人患者的肺炎,唐et al。34]报道TLR2和TLR4表达的增加,以及提高了il - 1、il - 6和TNF -α。未来的研究需要确定我们的发现的重要性增加的TLR2在DS表达式。DS儿童rti的风险增加,进入医院与本课程(18,35]。革兰氏阳性细菌,如肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌致病微生物在很多情况下,和TLR2在这些病原体防御中起着举足轻重的作用。研究的影响金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌感染小鼠缺乏TLR2显示减少促炎细胞因子和增加死亡率(36,37),强调TLR2的重要性在这个临床上下文。

DS的孩子也容易发展与积液复发性中耳炎(当地)经常导致传导性听力损失(38]。肺炎链球菌这个条件是一个重要的因素,可以刺激持续慢性炎症通过TLR2 [39,40]。慢性炎症造成持续感染被许多革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌也看到患病率增加患者的口腔DS (41]。有研究证明增加TLR2表达在慢性牙周炎患者口腔粘膜组织与控制(20.,21]。这种慢性炎症和感染继发于牙周炎可能导致促炎局部模单核细胞增多和在末梢循环39];此外,Bloemers等人的研究表明增加数量的循环中单核细胞亚型DS与控制(40]。我们没有发现显著差异在单核细胞之间的细胞数量的亚种,但古典单核细胞显著减少的百分比在DS儿童控制相比,被描述的Bloemers et al。40]。两个组别之间的差异在TLR2表达式也可以因此受到单核细胞亚群的变化更频繁的细菌感染后DS。此外,很难说是否过剩引起的革兰氏阳性感染大TLR2表达式或如果这个受体是内在的调节或从小就有缺陷,导致在DS传染病负担增加。总的来说,持续的炎症在DS可能部分由于TLR2的失调。

在DS,关节病等自身免疫也描述(42,43),流行在青少年特发性关节炎的6倍。增加单核细胞TLR2表情活跃类风湿性关节炎患者的子集(44),十二指肠粘膜的腹腔疾病患者的样本(CD) [45,46],PBMCs的自身免疫性甲状腺疾病也被报道(47]。我们发现TLR2和TLR4表达和诱导改变在DS儿童建议为这些病原体可能作用受体在自身免疫性疾病的发展。

综上所述,证据指向TLR2的负担是一个可能的中介在多个临床的病理条件下更频繁地在DS。我们已经证明了TLR2和TLR4拮抗剂sparstolonin B是有效地减少TLR2和CD11b表达儿童的中性粒细胞和单核细胞。之前它已经表明SsnB介导其抗炎特性通过减少NF -κB生产和衰减等促炎细胞因子il - 1β、il - 6和TNF -α(26]。看来SsnB也可以废除抗炎细胞因子释放,因为它减少了il - 10和IL-1ra水平在这些孩子。CD11b是一个关键的表面标记调节在先天免疫细胞的活化和迁移(48),它也可以通过MyD88-dependent和MyD88-independent调节TLR信号通路(49]。我们展示了一些与SsnB CD11b表达显著降低,这对我们的知识是第一个实验概述CD11b SsnB的影响。

toll样受体信号主要通过两种途径传播依赖于利用(MyD88依赖)(MyD88 MyD88独立)。前者是受雇于所有通常TLR3除外。在NF - MyD88-dependent通路的结果κB和TNF生产。通过TRIF MyD8-independent通路信号诱导IRF3最后导致干扰素-β产生(50]。MyD88不足已被证明有各种各样的临床后果:il - 1和地震反应减少,传染性病原体的易感性增加,抗LPS内毒素(10,51,52]。MyD88已被证明是安装一个适当的免疫反应的关键细菌性肺炎链球菌(53]。MyD88不足的DS描述在我们的实验中可以代表一个可能的原因感染发病率的增加和贫穷的临床结果。

虽然在DS儿童MyD88表达减少,我们发现TRIF表达增加。通过TRIF-dependent信号通路导致一些重要的感染的免疫反应,提高1型干扰素的生产和调节细胞凋亡,细胞凋亡蛋白酶激活,necroptosis,最终导致降低病毒复制和细菌清除率增加(54]。DS儿童更容易受到rti,大多数的病毒病原学,一篇论文评价病毒儿童脓毒症的报道增加了表达TRIF在那些受此影响临床条件(55]。的确,TRIF增加生产重要的抗病毒介质如IRF3和1型干扰素(56]。然而,病毒性呼吸道感染的小鼠模型研究发现,过量TRIF信号有有害影响主机由于过度的炎症,中性粒细胞招募,肺部炎症和肺水肿54]。

在我们的实验中,我们观察到,对于一些细胞群,积极的刺激没有两个组别的工作,例如,模单核细胞TLR2和中间单核细胞CD11b。我们以前报道类似hyporesponsiveness有限合伙人在模和中间单核细胞TLR4表达和CD11b模单核细胞在DS儿童和控制29日]。原因尚不清楚,其他人群显著反应,这可能是这些子集天生hyporesponsive受体或可能存在一定程度的内毒素耐受;抗LPS刺激引起细胞促炎反应[的削弱57]。有证据表明,有限合伙人可能采取行动减少对单核细胞TLR4表达子集2 h代替移植这种受体。然而,可能有一个时间组件,因为这项研究指出TLR2表达式在20 h古典单核细胞增加了20倍,而这并没有发生CD16 +亚种群(58]。

5。结论

总之,我们描述TLR通路的失调DS。有更大的表面表达TLR2的中性粒细胞和单核细胞。下游信号改变和减少MyD88 TRIF的表达增加,可能代表补偿upregulation MyD88-independent通路。这改变了先天免疫可能导致增加的负担在DS感染和慢性炎症。SsnB变弱促炎介质和可能潜在的治疗临床受益。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

信息披露

早期版本的手稿是作为一个抽象的表现在儿童疾病档案,2019。

的利益冲突

作者没有利益冲突声明。

确认

这项研究是由国家儿童研究中心(NCRC) (14187), Crumlin,都柏林12日和国家儿童医院基金(206965),Tallaght,都柏林,爱尔兰。

补充材料

中性粒细胞和单核细胞的补充图1:toll样受体(TLR2)表达有限合伙人和唐氏综合症儿童Pam3Csk4 (DS, )和控制( )。值表示为意味着通道荧光(MFI)。(一)中性粒细胞TLR2, (b)总单核细胞TLR2 ( 与车辆控制, 与车辆在各自的群, 与车辆和Pam3Csk4在各自的群),(c)古典单核细胞TLR2 ( 与车辆控制, 与车辆在各自的群, 与车辆和Pam3Csk4在各自的群, 与车辆、有限合伙人和Pam3Csk4在各自的群),(d)中间单核细胞TLR2 ( 与车辆控制, 与车辆在各自的群, 与车辆和Pam3Csk4在各自的群),和(e)模单核细胞TLR2 ( 与车辆控制, 与车辆和有限合伙人在各自的群)。中性粒细胞和单核细胞的补充图2:CD11b表达有限合伙人和唐氏综合症儿童Pam3Csk4 (DS, )和控制( )。值表示为意味着通道荧光(MFI)。(一)中性粒细胞CD11b ( 与车辆控制, 与车辆在各自的群, 与车辆和Pam3Csk4在各自的群),(b)总单核CD11b ( 与车辆控制, 与车辆在各自的群, 与车辆和Pam3Csk4在各自的群, 与车辆、有限合伙人和Pam3Csk4在各自的群),(c)古典单核细胞CD11b ( 与车辆控制, 与车辆在各自的群, 与车辆和Pam3Csk4在各自的群),(d)中间单核CD11b, (e)模单核细胞CD11b ( 与车辆控制, 与车辆在各自的群, 与车辆和有限合伙人在各自的群。中性粒细胞和单核细胞的补充图3:toll样受体(TLR2)表达有限合伙人,Pam3Csk4和唐氏综合症儿童SsnB (DS, )和控制( )。值表示为意味着通道荧光(MFI)。(一)中性粒细胞TLR2, (b)总单核细胞TLR2 ( 与车辆在各自的群, 在各自的组群与有限合伙人+ Pam3Csk4), (c)古典单核细胞TLR2 ( 与车辆在各自的群, 在各自的组群与有限合伙人和有限合伙人+ Pam3Csk4), (d)中间单核细胞TLR2和非经典数理单核细胞TLR2 (e) ( 对有限合伙人在各自队列)。中性粒细胞和单核细胞的补充图4:CD11b表达有限合伙人,Pam3Csk4和唐氏综合症儿童SsnB (DS, )和控制( )。值表示为意味着通道荧光(MFI)。(一)中性粒细胞CD11b ( 与车辆在各自的群, 与有限合伙人和有限合伙人+ Pam3Csk4在各自群组),(b)总单核CD11b ( 与车辆在各自的群, 与有限合伙人和Pam3Csk4各自群组),(c)古典单核细胞CD11b ( 与车辆在各自的群),(d)中间单核细胞TLR2和非经典数理单核细胞TLR2 (e) ( 与车辆在各自的群, 在各自的组群与有限合伙人+ Pam3Csk4)。(补充材料)