回收的粉末残留使用益生菌及其对腹泻的治疗效果gydF4y2Ba

文摘gydF4y2Ba

残留物从草药处理制药工厂创建大量的浪费(草残留),主要由环境污染和药用的浪费。为了解决这个问题,益生菌gydF4y2Ba芽孢杆菌(b)细小gydF4y2Ba,gydF4y2Ba曲霉属真菌oryzae (a)gydF4y2Ba,gydF4y2Ba乳杆菌(l)gydF4y2BaM3选择重用草渣Jianweixiaoshi平板电脑(JT),和一个antibiotic-associated腹泻(AAD)小鼠模型建立了评价草渣发酵上清液的治疗效果。我们的研究结果表明,发酵上清液回收77.8%的2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 78%的OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba},36.7%的gydF4y2Ba^•gydF4y2Ba哦,39%的铁gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}螯合,716 mg / L还原能力。的抑制区gydF4y2Ba鼠伤寒沙门氏菌(s)gydF4y2Ba,gydF4y2Ba美国肠炎gydF4y2Ba,gydF4y2Ba志贺氏杆菌(Sh) flexnerigydF4y2Ba,gydF4y2Ba大肠杆菌(大肠)gydF4y2Ba,gydF4y2Ba李斯特菌(l) monocytogenesgydF4y2Ba,gydF4y2BaSh.痢疾杆菌gydF4y2Ba301年,gydF4y2Ba金黄色葡萄球菌(s)gydF4y2Ba18是17日,14日,19日,20日19日和20毫米。体内的结果表明,发酵上清液导致腹泻抑制率高(56%),gydF4y2Ba ),极大地增强了细菌多样性的破坏由抗生素引起的,和恢复的主导地位gydF4y2Bal . johnsoniigydF4y2Ba治疗和恢复阶段。因此,草渣和益生菌的组合表明潜在的这些材料探索转换治疗AAD的可能发展。gydF4y2Ba

1。介绍gydF4y2Ba

传统中药(TCHM)是在中国医疗体系的重要组成部分,香港,和其他几个亚洲国家,而这被认为是补充或替代医疗系统在大多数西方国家gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。目前,每年产生大约12000000吨草残留1500中国医药企业在中国gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

TCHM的活性成分是植物的次生代谢产物,和汤效率低大约30% -50%的药用活性物质的粉末残留(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。此外,草残留物主要是通过叠加处理,卫生掩埋,或燃烧,导致严重的环境污染,尤其是在中国影响水质(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]。因此,大量的粉末残留产生的中草药行业的不断发展已成为一个严重的问题对于大型制药公司。gydF4y2Ba

微生物发酵理论表明,消化酶(例如,纤维素酶、蛋白酶、果胶酶和木质素酶和脂肪酶)由微生物产生的能有效地降解植物细胞壁,细胞间地区扩大,提高有效成分的提取率gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。此外,益生菌(微生物)现在被认为是有用的预防和/或治疗某些病理条件下,尤其是腹泻,服用适量(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba芽孢杆菌(b) subtiligydF4y2Bas是一个细菌分泌酶生产的冠军作为免疫刺激性剂帮助治疗胃肠道疾病(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba];gydF4y2Ba曲霉属真菌oryzae (a)gydF4y2Ba已广泛应用于各种传统的发酵食品,赋予他们一个伟大的味道和香味的gydF4y2Ba11gydF4y2Ba];gydF4y2Ba乳杆菌(l)gydF4y2Ba通常被发现在许多发酵食品,它可以帮助抑制天然气生产菌在肠道的生长,可能对有些病人患有肠道疾病(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。因此,益生菌的组合gydF4y2Ba枯草芽孢杆菌gydF4y2Ba,gydF4y2Ba答:oryzaegydF4y2Ba,gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2BaM3不仅参与消化、吸收和代谢的蛋白质,碳水化合物,和脂肪通过合成维生素和叶酸的营养素,但也赋予他们进入发酵益生菌特征(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

Antibiotic-associated腹泻(AAD)显然是一个最常见的副作用遭遇抗菌治疗,这是引起的肠道菌群的变化和潜在的致病微生物的生长gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。Jianweixiaoshi TCHM构成的gydF4y2BaPseudostellaria heterophyllagydF4y2Ba沈根块茎(太子),gydF4y2Ba薯蓣属oppositagydF4y2Ba粉末(山么),gydF4y2Ba大麦芽gydF4y2Ba水果(Mai丫),gydF4y2Ba山楂gydF4y2Ba水果(山查),gydF4y2Ba试gydF4y2Ba陈果皮(π)和Jianweixiaoshi平板电脑(JT)(商标®Z20013220)卫生部批准为治疗肠道疾病。在目前的研究中,使用益生菌发酵的草药残留JT作为体内治疗潜在的对油气地质模型。gydF4y2Ba

2。材料和方法gydF4y2Ba

2.1。发酵上清液的抗氧化和抗菌活性gydF4y2Ba

草渣得到JT的河制药有限公司和捣碎的使用碎浆机内2 h。细菌gydF4y2Ba枯草芽孢杆菌gydF4y2Ba,gydF4y2Ba答:oryzaegydF4y2Ba,gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2BaM3 (10gydF4y2Ba^8gydF4y2Bacfu /毫升)被用作准备草渣发酵上清液的培养液。简而言之,gydF4y2Ba枯草芽孢杆菌gydF4y2Ba和gydF4y2Ba答:oryzaegydF4y2Ba被添加到发酵基质24 h,然后呢gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2BaM3添加另一个24小时。2的间隙,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba},·哦;菲gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}螯合;和氧化还原活性的发酵上清液测定文献[中描述的一样gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

抗菌活性,一夜之间(12小时)文化的病原微生物包括gydF4y2Ba鼠伤寒沙门氏菌(s)gydF4y2Ba写明ATCC 13311,gydF4y2Ba美国肠炎gydF4y2BaATCC13076,gydF4y2Ba志贺氏杆菌(Sh) flexnerigydF4y2Ba写明ATCC 12022,gydF4y2Ba大肠杆菌(大肠)gydF4y2Ba44102年,gydF4y2Ba李斯特菌(l) monocytogenesgydF4y2Ba写明ATCC 19111,gydF4y2BaSh.痢疾杆菌gydF4y2Ba301年,gydF4y2Ba金黄色葡萄球菌(s)gydF4y2Ba考恩1磅琼脂板表面传播,和文化上层清液(200gydF4y2BaμgydF4y2BaL)加载到一个牛津杯(外径7.8±0.1毫米,内径6.0±0.1毫米,和身高10.0±0.1毫米),放置在琼脂表面。抑菌圈的大小测量,直到形成一个清晰的区域在牛津杯。实验进行了一式两份(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

2.2。腹泻模型和治疗gydF4y2Ba

伦理委员会批准的这项研究是南昌大学第二附属医院,和所有方法进行依法批准的指导方针。gydF4y2Ba

特定的无菌6 - 8-week-old雄性C57BL / 6小鼠被安置和美联储商业饮食,与水随意。建立腹泻模型,盐酸林可霉素0.15毫升/天(40毫克/毫升)对通过orogastric老鼠注射接种了5天。所有未感染控制动物注射同样体积的磷酸缓冲盐(PBS)。然后,老鼠被分为三组:模型组(gydF4y2Ba ),建模老鼠只给予PBS;益生菌+药物残留组(gydF4y2Ba ),模型小鼠给予草渣发酵上清液;和JT集团(gydF4y2Ba ),建模老鼠JT。gydF4y2Ba

老鼠的粪便收集控制阶段(第0天、没有治疗),建模阶段(第五天,接种盐酸林可霉素),治疗阶段(第十天,药物治疗),和恢复阶段(17天,没有管理)。然后,三个建模组的小鼠的粪便,益生菌+药物残留组,JT组随机选择进行分析通过变性梯度凝胶电泳(DGGE)。gydF4y2Ba

2.3。决心腹泻的索引gydF4y2Ba

第二天的治疗(7天),老鼠在笼子里,笼子的底部再用一滤纸观察腹泻的发生。老鼠粪便被分为五种类型:1、正常的粪便;2,与平淡正常的形状;3、软粪便与正常形状;4、水样粪便;5,粘液大便。正常粪便和normal-shaped粪便稀薄被认为正常的粪便,normal-shaped软粪便,水样大便,大便粘液被认为是腹泻。过滤文件是改变了一旦发生腹泻,腹泻便溏率和抑制率是计算在6 h。便溏率(%)=(每个鼠标/总数量的稀便粪便数量的每个鼠标)×100;腹泻抑制率(%)=((数字与腹泻−对照组与治疗组腹泻)/数量与对照组腹泻)H×100。gydF4y2Ba

2.4。DGGE分析gydF4y2Ba

DNA被bead-beating隔离方法,和细菌gydF4y2Ba乳酸菌gydF4y2Ba引物被用于DGGE分析(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。DGGE凝胶的乐队感兴趣的是切除使用无菌叶片和孵化一夜之间在4°C TE缓冲(pH值8.0)允许DNA扩散进一步放大。使用QIAquick PCR产物测序的纯化PCR净化装备和subcloned使用pMD18-T向量系统我(豆类)根据制造商的指示,由表达载体转化株被随机选择和排序(中国上海)gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

2.5。数据分析gydF4y2Ba

数据报告为±SD,和结果进行了分析使用SPSS 13.0软件(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)通过一个独立的单向方差分析测试在每个采样点。三组之间的差异进行评估通过最少的显著差异(LSD)多重比较检验(gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba

3所示。结果gydF4y2Ba

3.1。草渣发酵上清液的抗氧化和抗菌活性gydF4y2Ba

与草残留(对照组)相比,发酵上清液(益生菌+药物残留集团)有显著增强的DPPH清除率,哦,间隙,OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}间隙,菲gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}螯合(图和减少活动gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba )。有趣的是,没有观察到使用草残留抗菌效应,而添加益生菌授予100%抑制活动对所有病原体检测发酵上清液,例如,gydF4y2Ba美国沙门氏菌感染gydF4y2Ba写明ATCC 13311(抑菌圈直径:17毫米),gydF4y2Ba美国肠炎gydF4y2BaATCC13076 (IZD: 14毫米),gydF4y2BaSh. flexnerigydF4y2Ba写明ATCC 12022 (IZD: 19毫米),gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba44102 (IZD: 18毫米),gydF4y2Bal . monocytogenesgydF4y2Ba写明ATCC 19111 (IZD: 20 mm),gydF4y2BaSh.痢疾杆菌gydF4y2Ba301 (IZD: 19毫米)gydF4y2Ba金黄色葡萄球菌gydF4y2Ba考恩1 (IZD: 20 mm)(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

3.2。腹泻模型和治疗gydF4y2Ba

与模型组相比,两种发酵上清液组和JT组显示显著抑制痢疾腹泻频率和平均比率(gydF4y2Ba ),其中发酵上清液拥有最高的腹泻抑制率(56%)(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

3.3。草渣发酵上清液对细菌多样性的影响在小肠gydF4y2Ba

DGGE结果表明,乐队b(无教养的细菌)和g(无教养的gydF4y2Ba拟杆菌门gydF4y2Ba细菌)占据了主导位置建模组和出现在所有阶段。带一个(gydF4y2Ba肠球菌gydF4y2Basp),占主导地位的细菌在控制阶段,抗生素治疗(图后消失或减弱gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba)。发酵上清液和JT团体,乐队m(无教养的细菌)和g(无教养的gydF4y2Ba拟杆菌门gydF4y2Ba)是占主导地位的细菌和存在于所有阶段,和政府的上层清液发酵有选择地增强乐队e (gydF4y2Bal . johnsoniigydF4y2Ba),j(无教养的细菌)、k (gydF4y2Ba肠球菌gydF4y2Basp),和m(无教养的细菌),成为占主导地位的细菌治疗和恢复阶段(图gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba和表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

此外,DGGE剖面表明,抗生素管理严重降低细菌多样性(带数字),而发酵上清液和JT的政府阻止了下降趋势和增强在小鼠肠道细菌丰富(图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。未加权的pair-group与算术方法意味着(UPGMA)结果表明,口服抗生素管理严重改变了细菌组成、减少细菌多样性,和不能细菌多样性恢复到原来的水平,甚至在经济复苏阶段。益生菌+药物残留和JT组、发酵上清液和JT极大地促进了细菌的多样性减少由抗生素引起的,通道2的更大的相似性和10(70%),通道1和9(68%),和车道3和12(70%)表示,益生菌和草残留的结合是最有效的恢复破坏肠道细菌(图原来的水平gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

3.4。草渣发酵上清液对肠杆菌多样性gydF4y2Ba

杆菌DGGE概要,抗生素消除带b (gydF4y2Bal . johnsoniigydF4y2Ba)治疗和恢复阶段建模组,和相同的应变恢复地位占主导地位的细菌发酵上清液和JT组(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。此外,发酵上清液的加入使乐队e (gydF4y2Ba梭状芽胞杆菌gydF4y2Basp)占主导地位的细菌治疗和恢复阶段(图gydF4y2Ba3 (b)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

4所示。讨论gydF4y2Ba

广告是一种腹泻发生期间或抗生素管理后不久,出现率在1% - -44%的范围根据人口和类型的抗生素(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba,gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。潜在的致病微生物过度生长,碳水化合物代谢的变化与降低短链脂肪酸的吸收导致腹泻(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba),可以接受中医和益生菌(gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

在中国,JT生成企业每年超过12亿元人民币的收入,但他们也生产大约100000吨草渣。gydF4y2BaPseudostellaria heterophyllagydF4y2Ba沈根块茎(太子),gydF4y2Ba薯蓣属oppositagydF4y2Ba粉末(山么),gydF4y2Ba大麦芽gydF4y2Ba水果(Mai丫),gydF4y2Ba山楂gydF4y2Ba水果(山查),gydF4y2Ba试gydF4y2Ba果皮(陈π)包含在JT有助于消化、厌食、腹胀、补肾益胃、脾脏和恢复的语气。声称JT促进胃肠蠕动,胃消化液的分泌,增强胃蛋白酶活性,体格,和免疫功能,没有腹泻的副作用报道。此外,益生菌现在接受有用的预防和/或治疗某些病理条件(gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。目前,研究最多的益生菌乳酸细菌制造酸性物质,特别是gydF4y2Ba乳酸菌gydF4y2Ba物种(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba),被证明是有用的治疗一些胃肠道疾病,如急性感染性腹泻或pouchitis, metastudy AAD预防表明益生菌可能是有益的(gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。因此,脾胃虚弱的组合强化效应(草残留)和腹泻的预防效应(益生菌)腹泻治疗可能是一个完美的选择。在我们之前的研究中,我们发现草残留物发酵gydF4y2Bal .杆菌gydF4y2Ba(HM218749)显著抑制脲酶活性,延缓了细胞的渗透和炎性因子在小鼠模型的血液gydF4y2Ba幽门螺杆菌gydF4y2Ba感染(gydF4y2Ba17gydF4y2Ba),我们进一步讨论了antidiarrhea草渣发酵上清液的效果。gydF4y2Ba

正如我们所知,腹泻的特点是机会致病菌的生长,益生菌的大幅减少(例如,gydF4y2Ba乳酸杆菌gydF4y2Ba,gydF4y2Ba拟杆菌gydF4y2Ba,gydF4y2Ba双歧杆菌gydF4y2Ba),微生物不平衡会相反的低营养吸收和免疫能力和减少抵抗病原体的入侵,这进一步加剧了疾病(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。因此,良好的清除DPPH(77.8%),哦(36.7%),和OgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba^{•−gydF4y2Ba}(78%)和铁gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}螯合(39%)和减少活动(716 mg / L),连同所有测试的100%抑制病原菌表现出上层清液发酵,表示一个有前途的止泻的作用。此外,抗生素严重降低了小鼠的精神和显著增加的总频率腹泻(72),平均腹泻频率(7.2),和腹泻率(78),甚至建模后2天,发酵上清液显著抑制腹泻率(56%,gydF4y2Ba )(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

作为肠道微生物中起着重要作用生产维生素、酶、和其他化合物消化和代谢的食物和调节宿主免疫系统,它可以被看作是一个额外的器官的动态和对宿主生理产生重大影响gydF4y2Ba27gydF4y2Ba],益生菌比病原体一直被视为一个重要的标准来评估人体健康在中国医院。因此,DGGE被用来监测体内微生物多样性。如图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba和表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba、细菌DGGE资料表明,抗生素的使用严重降低了微生物多样性,减少建模组的乐队表示少选择宿主抵抗外部入侵。此外,增强多样性的发酵上清液和JT团体表示他们的强劲复苏能力保护宿主肠道健康。此外,UPGMA指数的高相似性之间的控制和恢复阶段益生菌+药物残留组表明,发酵上清液拥有强大的能力来恢复肠道平衡其正式的水平(图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

此外,芽孢杆菌DGGE资料也证实抗生素消除带b (gydF4y2Bal . johnsoniigydF4y2Ba),而发酵上清液和JT恢复治疗的主导地位这种细菌治疗和恢复阶段。gydF4y2Bal . johnsoniigydF4y2Ba属于类的乳酸菌(实验室),由他们的证明通常被认为是安全的(GRAS)状态,由于他们无处不在出现在健康食品和他们的贡献人类粘膜表面的微生物群落。因此,主要的复苏gydF4y2Bal . johnsoniigydF4y2Ba在老鼠体内显示良好的健康状况。gydF4y2Ba

在目前的研究中,我们报告的转换草残留JT的益生菌止泻的发酵上清液。这种成分被证明是有效的对小鼠腹泻和保持肠道健康。因此,草残留和益生菌可能会提供一个新颖的方法来解决环境污染问题和重用草药的废物原料。gydF4y2Ba

的利益冲突gydF4y2Ba

作者声明没有竞争的经济利益。gydF4y2Ba

作者的贡献gydF4y2Ba

Fanjing孟和陈Tingtao同样这项研究。gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

本研究支持由中国国家自然科学基金(批准号。81503364,91639106,91639106,91339113),中国国家基础研究项目(批准号从江西省2013 cb531103),资助(批准号。20171 bcb23028, 20175526)。gydF4y2Ba

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