文摘

的新化学物质来源于FTY720子囊菌Isaria sinclairii,用于治疗多发性硬化症、肾癌和哮喘。鞘氨醇1-phosphate (S1P)是一种具有生物活性的鞘脂类代谢产物,存在于红细胞。FTY720合成S1P模拟,可以阻止S1P唤起生理效应。最近研究表明,S1P参与激活炎症细胞诱导肾损伤。本研究的目的是评估FTY720对肾损伤的保护作用的潜在机制和FTY720在慢性肾病缓解足细胞损伤。在这项研究中,我们选择40 IgA肾病患者,检查他们的临床特点。Ang张力素灌注大鼠肾损伤模型阻力指标病变也许可以评估肾小球和成立。结果表明,血清和尿液中S1P的浓度呈正相关,IgA肾病患者肾损伤。FTY720可降低肾组织学病变和张力素灌注诱导的大鼠。此外,FTY720 S1P合成减少Ang张力素灌注大鼠的差别,通过对这些炎性细胞因子包括TNF -α和il - 6。此外,FTY720外生S1P-induced足细胞损伤减轻。总之,FTY720足突细胞损伤能够减弱S1P-induced通过减少炎性细胞因子。

1。介绍

慢性肾脏疾病(CKD)包括一个广泛的各种各样的疾病,尤其是慢性损伤的肾排泄功能主要是因伤肾的结构。大多数形式的CKD无法挽回和进步。肾损害包括肾元损失、纤维化和肾血管变化(1]。CKD的结果不同的原因包括炎症性和渗透性的疾病,肾炎,糖尿病,高血压,肾和系统性感染。肾脏炎症,出现炎症细胞的浸润,肾实质,是各种慢性肾病的主要病理过程(2- - - - - -4]。炎性浸润导致CKD的起始与发展。在间质炎性细胞浸润和持续的纤维发生涉及到几个途径,例如,刺激的管状趋化因子表达,炎性细胞因子,各种生长因子和单核细胞趋化蛋白(5]。蛋白尿是一个健壮的慢性肾病进展的标志(5]。肾小球滤过屏障的完整性依赖于它的三层结构,如内皮细胞、肾小球基底膜(GBM),和足细胞。增强intraglomerular液压或肾小球滤过屏障损伤可能导致肾小球/过载蛋白尿(5]。血尿和蛋白尿是慢性肾病的主要早期临床特征,可以引发促炎和/或profibrotic效果,直接阻力指标损伤。也许可以诱发慢性

鞘氨醇1-phosphate (S1P)是一种具有生物活性的鞘脂类代谢产物,可以作为细胞外介质和细胞内第二信使。S1P信号介导多种疾病的发病机制,如炎性疾病、骨质疏松症和关节炎(6- - - - - -8]。大量的细胞类型,如红细胞(RBC),血小板,内皮细胞和中性粒细胞分泌S1P。红细胞在等离子体(S1P的主要来源9,10]。鞘氨醇激酶(SPHK)包括两个亚型,SPHK1和SPHK211),S1P的监管机构是至关重要的。SPHK1主要是局部细胞溶质和把真核细胞的质膜上激活。SPHK2发现主要在细胞核11]。S1P,通过提高其细胞内的内容通过鞘脂类代谢及其受体结合,控制大量的生理/病理过程,例如,细胞增殖,自噬,迁移和血管生成。这些过程与肿瘤的生长、转移和入侵。S1P可能与一个家庭G protein-coupled受体(S1PRs),也称为内皮分化基因(EDG)受体(12),从而影响细胞对S1P的反应。S1PRs,包括S1P受体1到5 (S1PR1-S1PR5),在不同的组织细胞表达具体(13,14]。S1PR1广泛表达于大脑、心脏、肺、肝脏和脾脏,在较小程度上,在胸腺、肾脏,肾髓质,肾小球和肌肉15- - - - - -20.]。特别是S1PR1起着至关重要的作用在血管病变的发展,动脉粥样硬化的发展,癌症、自身免疫性疾病,或多发性硬化(21- - - - - -23]。此外,删除S1PR1加剧肾脏损害和炎症(24)和S1PRs激活肾脏和骨骼骨髓来源的细胞减少炎症(25,26]。总的来说,人们普遍猜测S1PR1参与调节血管张力和病理条件下参与肾损害。然而,人们很少知道发展的S1PR1肾损害的作用。

合成S1P模拟,FTY720磷酸化SPHK1和SPHK2到它的生物活性形式,FTY720-phosphate [27- - - - - -29日]。各种S1PRs FTY720-phosphate函数作为一种非竞争性抑制剂(30.,31日),如S1PR1 S1PR3、S1PR4 S1PR5,但不是S1PR2受体(27,32,33]。FTY720-phosphate阻碍S1P信号通过促使S1PRs的内化和随后的退化30.]。特别是,FTY720已显示出非凡的保护作用对自身免疫性心肌炎(34),多发性硬化(27,35],uveoretinitis [36),和动脉粥样硬化37]。临床试验来测试其预防效果进行肾移植的排斥反应(38,39]。此外,FTY720政府缓解ovariectomy-induced骨质疏松症(40和减轻lipopolysaccharide-induced关节炎小鼠41]。在这项研究中,我们使用FTY720阻止S1P-elicited生理效应。尽管先前的研究表明,FTY720压抑免疫反应(38,40的机制(s)], FTY720调节炎性疾病知之甚少。在这项研究中,我们调查了FTY720背后的机制抑制炎症反应,减轻慢性肾脏疾病的足细胞损伤。

2。材料和方法

2.1。人类研究

外周血收集来自IgA肾病患者和健康者。所有患者进行肾活检组织学诊断的IgA肾病在武汉大学人民医院2014 ~ 2015年。IgA肾病患者的组织学分级分类,李是我~第四的成绩。系统性红斑狼疮患者系统性疾病,Henoch-Schonlein紫癜性肾炎、糖尿病和慢性肝脏疾病在临床上被排除在外。接受类固醇治疗和免疫抑制剂治疗的患者被排除在外。我们收集病人的临床资料,包括年龄、性别、有无高血压(血压> 140/95 mmHg或要求抗高血压治疗),血清肌酐、血尿素氮、高密度脂蛋白、甘油三酯、补充(C3和C4),血清白蛋白、血清总蛋白、24 h尿蛋白。24小时尿蛋白排泄由磺基水杨酸法检测。从IgA肾病患者肾活检组织存储立即在−80°C为进一步组织冰冻病理分析的部分。癌旁肾组织收集作为一个正常的控制。这些研究被批准的医院的机构伦理委员会(武汉大学人民医院,中国),和书面知情同意是获得所有的病人。

2.2。ELISA

血浆和尿液中S1P浓度IgA肾病病人,健康的人,老鼠被S1P评估ELISA(雁行生物科学、盐湖城、UT)。允许血液凝块,然后离心,整除的血清储存在−S1P分析前70°C。24小时尿液收集S1P水平分析。血浆和尿液的ELISA板30μg蛋白/。ELISA进行根据制造商的指示。结果经比较S1P浓度由标仪(美国VT BioTek) OD 450海里。S1P浓度计算的样本通过对比OD样品标准曲线。

2.3。动物

动物实验进行根据指南的护理和使用实验动物的武汉大学。三十六岁男性SPF Wistar鼠称重g从SJA购买实验动物公司(湖南、中国),并保持在一个温度控制(°C)和湿度(%)光/暗周期的12/12 h和随意用啮齿动物食物和水。老鼠嵌入渗透mini-pump (Alzet模型2002年或2004年,CA) mini-pump皮下植入方法中描述我们的先前的研究42,43]。老鼠被随机接受正常的盐水,或皮下连续Ang张力素灌注400 ng /公斤·最小浓度,或Angⅱ400 ng /公斤·分钟+ FTY720 0.5克/公斤·d通过胃内的管理14或28天。24小时尿液代谢笼收集和尿白蛋白排泄率以14天、28天的评分。在14 - 28天或治疗,老鼠被牺牲掉了。血液样本在EDTA-containing立即收集管和serum-separating管分离血浆和血清。血清Angⅱ的浓度、S1P浓度、肾功能血尿素氮(BUN)、肌酐和血清白蛋白水平测定。24小时尿蛋白排泄由磺基水杨酸法检测。肾脏解剖和冲洗冷等渗盐水和体重。右肾组织中和固定在10%福尔马林进行组织学分析。

2.4。血管紧张素ⅱ等

敏大鼠血浆和肾血管紧张素ⅱ等进行12×75毫米聚丙烯文化管按照Amersham RIA程序(Amersham公司,阿灵顿高地,IL)。放射性决心在4810 T Tri-Carb tr液体闪烁分析仪(美国波士顿PerkinElmer)。

2.5。Hematoxylin-Eosin染色

部分大鼠肾脏与苏木精染色10分钟。随后,他们根据自来水运行5分钟,洗干热板,伊红染色和0.5% 96%乙醇5分钟。部分是在95%的乙醇迅速冲洗和脱水2的变化绝对乙醇每5分钟。幻灯片是脱水,二甲苯清理,安装在树脂中。

2.6。免疫组织化学染色

部分是用PBS (pH值7.5)和孵化的蛋白质堵塞的解决方案(PBS正常山羊血清0.5%,v / v)为30分钟。的部分与抗体对大鼠肿瘤坏死因子,然后孵化α(1:100年,GTX110520罗福斯、圣查尔斯,MI,美国)和大鼠il - 6(1: 100年,罗福斯,圣查尔斯,MI,美国)一夜之间在调湿室4°C (44与PBS),冲洗3次,和孵化peroxidase-conjugated二级抗体(1:100年,DAKO斯特鲁普,丹麦)在室温下1 h。检测阳性反应,幻灯片与稳定3,孵化39-diaminobenzidine (DAB) 5 - 10分钟(中山金桥生物技术,北京)。部分是用蒸馏水冲洗,与吉尔的苏木精复染色1分钟(σ,圣路易斯,密苏里州)和BX53奥林巴斯显微镜下观察。

阻力指标损伤,也许可以量化肾小球和immunoperoxidase肾脏部分检查不到20×放大,使用一个奥林巴斯BX40显微镜(奥林巴斯光学、伦敦、英国)安装一个光子科学颜色Coolview数码相机(英国东苏塞克斯光子科学)。数字图像捕获和分析使用Image-Pro +软件(美国马里兰州银泉的媒体控制论),和颜色分割进行单独为每个幻灯片,定义像素包含适当的颜色。对于每个幻灯片,连续20个肾小球或皮质区域被定义为一个感兴趣的领域,和每一个横截面积的百分比计算沾定义的颜色。每个幻灯片的最终值是平均百分比区域彩色来自20个地区。

2.7。细胞培养和治疗

一个有条件的不灭的小鼠足细胞被彼得博士请提供Mundel(纽约西奈山医学院)。足细胞是维持1640年RPMI介质(美国HyClone)含10% heat-inactivated胎牛血清(美国Gibco), 100 U /毫升青霉素G, 100μg / mL链霉素在孵化器有限公司为5%₂。在足细胞增殖过程中,介质混合10 U /毫升鼠标重组干扰素-γ美国(σ),细胞维持在33°C。然后足细胞培养在37°C诱导分化没有干扰素-γ10 - 14天。15 - 25通道底部突起被用于以下实验。

采用无血清细胞培养RPMI 1640至少8 h和使用5μmol / L FTY720(开曼的化学物质,安阿伯市,美国)30分钟治疗2紧随其后μmol / L S1P(西格玛化工有限公司)为24小时。

2.8。免疫印迹

免疫印迹被处决(如前所述)(45]。简单地说,30μg蛋白溶菌产物在减少resuspended样品缓冲和电泳三羟甲基氨基甲烷凝胶液,涂抹NC膜,随后探讨了主要抗体包括FAK (1: 500;Abcam、剑桥、马、美国),兔多克隆SPHK1 (1: 500;Abcam、剑桥、马、美国),Alexa萤石680(表达载体),IRDye 800 (LI-COR生物科学)。辣根peroxidase-conjugated山羊anti-rabbit抗体随后补充道。使用增强化学发光信号检测通过放射自显影法(ECL +、通用电气医疗、密尔沃基、WI)与《奥德赛》红外成像系统(LI-COR生物科学)和量化使用奥德赛执行软件。免疫印迹数据评估如下:免疫印迹条带的灰度值进行检测Image-Pro +(媒体控制论,Inc .)实验组和对照组;每组的兴趣蛋白的灰度值除以内部参考蛋白质本身的灰度值。

2.9。实时聚合酶链反应

总RNA提取试剂盒(表达载体)。总RNA(2毫克)是用于合成第一链cDNA RevertAid™合成第一链cDNA工具包(Fermentas维尔纽斯,LTU)。PCR进行的SYBR绿色实时PCR系统使用7500快。所有PCR反应运行至少一式三份,重复三次。根据相对差异计算使用量化方法β肌动蛋白基因校准。鼠il - 6前锋的引物:5′-TGATGGATGCTTCCAAACTG-3′,相反:5′-GAGCATTGGAAGTTGGGGTA-3′;大鼠肿瘤坏死因子-α转发:5′-ACTGAACTTCGGGGTGATTG-3′,相反:5′- GCTTGGTGGTTTGCTACGAC-3′。

2.10。免疫荧光

有条件地永生的小鼠足细胞培养在盖玻片24-well板。细胞被固定为4%多聚甲醛在室温下30分钟,洗净,permeabilized 0.5% Triton x - 100为5分钟。细胞与phalloidin-Alexa孵化488(1:40,表达载体,卡尔斯巴德,CA) 4°C 20分钟。延长黄金不变色试剂与DAPI(英杰公司)是用来挂载盖玻片幻灯片。这些细胞被可视化使用共焦荧光检测肌动蛋白细胞骨架的亚细胞分布。绿色荧光代表f -肌动蛋白;和蓝色荧光代表了细胞核。

2.11。电子显微镜

肾皮质(1毫米³从每个老鼠都切成小块和固定在2.5%戊二醛在0.1 mol / L磷酸盐缓冲剂(pH值7.4)在4°C好几天了。洗后在磷酸盐缓冲剂和后缀OsO在1%₄2 h,固定材料脱水和嵌入在环氧树脂812 (Okenshoji、东京、日本)。超薄部分准备和染色与醋酸双氧铀及柠檬酸铅和检查日立H7100电子显微镜(日立、日本横滨)。

2.12。愈合试验

愈合试验如前所述[被处决46]。细胞被镀的密度1×10⁶细胞/毫升6-well板,融合增长到100%。这些细胞被血清饥饿12 h。伤口是挠内底部的每个使用p - 200吸管小费。细胞与磷酸盐缓冲盐水洗两次(PBS)消除细胞碎片;然后无血清RPMI 1640中包含10μg / mL丝裂霉素C和刺激物是添加到每个。细胞在同一场拍摄在0和24小时后细胞被挠。伤口缝合的百分比是使用下面的公式来计算的,在这年代是伤口的表面积。

2.13。细胞粘附试验

如前所述(细胞粘附实验被执行死刑46]。96 - 50孔板被涂上一层μL纤连蛋白(Fn) (20μ克/毫升)或人工基底膜(200μg / mL)(德国海德堡,正欲)37°C 2 h,然后用PBS洗两次,封锁与血清DMEM + 2% BSA的30分钟37°C。24小时细胞受到刺激的37°C湿润孵化器补充5%的二氧化碳。治疗足细胞与0.25% trypsin-EDTA和resuspended收获1×10的密度⁵采用无血清细胞/毫升RPMI 1640培养基,然后播种密度为100μL / 96 -孔板在前面涂。然后,细胞被允许连接到盘子1.5 h在37°C。

细胞与PBS轻轻洗两次后,20μ5-dimethyl-2-thiazolyl L (3 - (4) 2, 5-diphenyltetrazolium溴化(MTT)被添加到每个4 h。然后,MTT摘除,200μL(二甲亚砜(DMSO)被添加到每个。光密度(OD)在570 nm的每个测量标15分钟后。实验进行了三次。控制细胞没有苦参碱处理。细胞粘附率是使用以下公式计算:

2.14。统计分析

数据报告为平均值±标准错误。数据分析使用学生的双尾未配对或配对(美联储/禁食实验)测试。统计分析的数据有相同的方差是由单向或双向方差分析(方差分析)其次是图基的事后测试在适当的时候。变量之间的关联进行了使用SPSS 13.0软件的斯皮尔曼相关系数。的差异被认为是具有统计学意义。数据使用SPSS 13.0进行分析。

3所示。结果

3.1。S1P在血清和尿液的浓度呈正相关,慢性肾脏疾病肾损伤

轻度和中度临床IgA肾病的特点是血尿和蛋白尿。因此,我们选择了IgA肾病慢性肾脏疾病的代表性疾病。李的组织学分类(成绩我~ IV)受雇。总40例,平均年龄年(范围内19 - 67),有不同程度的血尿和蛋白尿,有或没有肾脏功能障碍。我们随机选择10个健康志愿者和收集他们的血清和尿液。所有参与者都在表的临床特点1。在这项研究中,40 IgA肾病患者18个是男性。有一个轻微的女性的优势。24小时尿蛋白排泄是0.56 - -4.3 g / 24小时。病人的性别、年龄、血清尿素氮、血清肌酐、高密度脂蛋白,补体C3,收缩压和舒张压并没有显示显著差异()。然而,血清总蛋白、白蛋白、24 h尿蛋白排泄,补体C4,血清IgA,胆固醇和甘油三酸酯表现出显著差异()。IgA肾病组,血清总蛋白和白蛋白含量低于对照组,但24 h尿蛋白,补充C4,血清IgA,胆固醇和甘油三酯在IgA肾病组显著增加与对照组(数据未显示)。

浓度的血浆和尿液中S1P用ELISA测定。如数据所示1(一)和1 (b),有一个重要的区别在等离子体控制和IgA肾病组(与μmol / L,S1P)和尿液浓度(与μmol / L,)。在血浆和尿液的浓度S1P IgA肾病患者明显高于健康志愿者。

基于24 h尿蛋白排泄的总量,IgA肾病患者分为三组:低级蛋白尿(0.15 ~ 1克/ 24小时,13例),中度蛋白尿(1 ~ 3.5克/ 24小时,16例),和大量的蛋白尿(≥3.5克/ 24小时,11例)。等离子S1P水平蛋白尿,中度蛋白尿,低层次的蛋白尿,,μ分别mol / L。血浆S1P水平显示统计学意义差异这三个组()(图1 (c))。此外,大量蛋白尿,尿S1P水平中度蛋白尿,低层次的蛋白尿,,μmol / L,分别显示显著差异()(图1 (d))。斯皮尔曼相关分析表明,血浆和尿液S1P水平和24小时尿蛋白排泄呈正相关()。

足细胞是肾小球滤过屏障的重要组成部分。足细胞足突抹杀足突细胞损伤的特征标志,伴有蛋白尿的发病47]。电子显微镜是用来分析足细胞的超微结构的改变和张力素灌注和FTY720干预大鼠。部分足突的足细胞和张力素灌注大鼠的收回和缩小,导致位移和破坏的专业跨脚之间的过滤缝的缝横隔膜的过程。如图2 (h),扩散过程融合在足细胞和基底膜和扩散不均匀厚度和张力素灌注大鼠电子显微镜下观察。脚融合过程往往是超然于底层肾小球基底膜。地下室严重剥蚀肾小球足细胞脱离地区导致肾小球滤过屏障的缺陷,导致严重的蛋白尿发展(48]。FTY720干预改善这些变化。

3.2。FTY720在盎张力素灌注大鼠肾损伤减轻

我们先前的研究发现,系统注入Ang张力素灌注正常大鼠肾脏病理变化引起包括肾小球系膜细胞增殖,细胞外基质沉积,肾小管萎缩,扩张,尿的形成,炎症细胞和炎症因子渗透阻力指标损伤,也许可以在和间质纤维化49,50]。众所周知,Angⅱ导致的肾小球损伤进展通过其血流动力学或nonhemodynamic效应(51]。这里,盎张力素灌注的大鼠模型建立了评估的作用和二世在肾小球,阻力指标病变。也许可以足细胞,

如图2血液、血清肌酐、尿素氮、24小时尿蛋白排泄和II-infused 14天、28天的老鼠比正常saline-infused控制老鼠和他们被FTY720明显采用了预处理()(数据2(一个)和2 (b))。然而,盎张力素灌注后14天,大鼠血清白蛋白浓度显示无显著差异比正常盐水对照组()。然而,盎张力素灌注后28天,血清白蛋白浓度明显低于对照组()(图2 (c))。Angⅱ的浓度在血浆和肾组织中检测到RIA Ang II-infused老鼠显著增加与对照组()(数据2 (d)和2 (e)),从而指示成功的Ang张力素灌注大鼠模型。24小时尿蛋白排泄Ang II-infused老鼠后14天、28天高于生理盐水输液控制老鼠和FTY720明显被预处理,S1PR受体激动剂()(图2 (f))。这些结果表明,FTY720阻塞S1P-evoked生理效应。28天盎张力素灌注后,大鼠肾组织病理学变化被他染色观察。与生理盐水灌注大鼠相比,光学显微镜显示重要的系膜和间隙扩张,近端小管上皮细胞肿胀、炎症细胞浸润阻力指标损伤大鼠接受也许可以在28天的Ang张力素灌注(图2 (g))。Ang张力素灌注大鼠14天没有造成明显的肾组织学病变。光学显微镜阻力指标积累也许可以只显示轻度系膜和矩阵(图2 (g))。因此,我们表明,28天的Ang张力素灌注诱导更明显在大鼠肾脏损害。FTY720口服28天阻力指标矩阵,积累也许可以大大减少间质和近端小管上皮细胞肿胀、阻力指标病变也许可以和炎性细胞浸润在光学显微镜下Ang张力素灌注大鼠(图2 (g))。因此,我们得出这样的结论:FTY720可降低肾组织学病变引起的Ang张力素灌注大鼠。

3.3。FTY720减少S1P合成Ang张力素灌注大鼠的差别,通过对这些炎性细胞因子

盎张力素灌注后28天,动物被牺牲了。S1P浓度在血浆和尿液使用ELISA测定,但S1P浓度尿液中没有检测到。在盎张力素灌注大鼠血浆S1P水平远高于对照组。然而,FTY720干预显著降低血浆S1P的浓度和张力素灌注大鼠()(图3(一个))。接下来,肿瘤坏死因子-α在大鼠肾组织和il - 6表达使用一种免疫组织化学技术检测出来。我们表明,TNF -α和il - 6主要表达在肾小管和张力素灌注后,和一个非常低的水平的il - 6和TNF -α在肾小球表达。比正常盐水的老鼠,TNF -α和il - 6表达在盎张力素灌注大鼠升高。然而,FTY720政府抑制TNF -α和il - 6表达在肾组织和张力素灌注大鼠(图3 (b)),这表明FTY720干预可以减轻Ang II-infusion-induced鼠肾组织炎症。il - 6和TNF -αmRNA水平在肾组织和大鼠血浆也检测到实时PCR。Ang张力素灌注il - 6和TNF水平升高αmRNA的表达,抑制FTY720干预(数字3 (c)和3 (d))。

接下来,我们调查了机制FTY720-induced S1P浓度下降。鞘氨醇激酶(SPHK),包括SPHK1和SPHK2是守恒的脂质激酶家族催化S1P的形成。SPHK1存在于真核细胞的胞质和质膜在活化迁移,而SPHK2局部细胞核。这里,SPHK1蛋白表达被西方分析测量。如图3 (e),FTY720干预显著抑制Ang II-induced增加大鼠血浆SPHK1蛋白表达。

3.4。足突细胞损伤FTY720可以减轻外生S1P-Induced

进一步证实FTY720对S1P-induced损伤的保护作用,我们培养的永生化预处理小鼠足细胞与5μM FTY720对30分钟,其次是S1P治疗(2μ米)24 h。足突细胞迁移使用愈合试验测定。如图4(一)S1P加速足突细胞迁移,而FTY720可抑制S1P-induced足突细胞迁移。此外,FTY720明显阻塞S1P-induced足突细胞粘附的抑制()(图4 (b))。粘着斑激酶(FAK)是一个nonreceptor酪氨酸激酶在细胞运动中发挥了至关重要的作用[52]。肾小球损伤导致足细胞的激活FAK [53];因此FAK可以用作足细胞损伤标记。在这里,我们表明,S1P FAK蛋白浓度的方式表达增加。然而,预处理和5μM FTY720可以抑制S1P-induced FAK蛋白表达()(图4 (c))。

接下来,我们观察到在足细胞构成的。细胞质中的f -肌动蛋白的表达在S1P-treated组低于对照组。此外,在正常的足突细胞f -肌动蛋白纤维聚集的压力主要是安排在一个方向。S1P治疗后,一些不规则的肌动蛋白丝观察无应力纤维细胞边缘。重要的是,FTY720获救S1P-induced细胞骨架破坏(图4 (d))。

4所示。讨论

目前的研究表明小说发现FTY720对慢性肾脏疾病肾损害的保护作用,Ang张力素灌注大鼠模型。S1P在血清和尿液的浓度呈正相关,慢性肾脏疾病肾损伤。此外,FTY720 S1P合成减少Ang张力素灌注大鼠的差别,通过对这些炎性细胞因子,包括TNF -α和il - 6,肾小球足细胞的渗透和控制功能。FTY720在盎张力素灌注大鼠肾损伤减轻。此外,我们发现FTY720可以减轻外生S1P-induced足细胞损伤。血管紧张素ⅱ(Angⅱ)的主要效应肽肾素-血管紧张素系统(RAS),在肾脏疾病的病理生理学中起着核心作用。除了贡献的肾小球损伤进展通过其血流动力学和/或nonhemodynamic效果,和二世被认为是在肾脏病理与一个活跃的细胞因子的作用。因为进步肾病Angⅱ起源于畸变引起的肾小球和tubulointerstitium S1PR受体激动剂的广泛影响可能比目前的治疗更有效。

多个系统赋予S1P受体多向性的行动和调节许多必要的细胞功能(54,55]。S1P的生理功能已被广泛的研究在不同的组织。尽管如此,肾脏S1P的特定的病理生理学作用还不清楚。肾脏表达S1PRs [25,56],它扮演了一个重要的角色在维持内皮细胞完整性(57,58)和淋巴细胞转移(59]。S1P和SPHK1与TNF -的行为相关联α细胞因子,炎症和自身免疫性疾病的关键,例如,炎症性肠病、类风湿性关节炎、哮喘。肿瘤坏死因子-α刺激ERK1/2-mediated磷酸化和易位SPHK1质膜、催化S1P的形成(60]。TRAF2,中间TNF -一个重要的信号α直接途径,激活NF-kB绑定SPHK1 [61年]。

具体来说,S1P调节炎症条件下血管屏障完整性和S1P1从根本上保护血管S1P2/3与对抗泄漏的影响。此外,S1P信号控制走私的几种类型的免疫细胞,如淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞和中性粒细胞(62年),影响这些细胞的功能,例如,炎症介质的形成。因此,治疗目标S1P通路有有利的效果。这将是重要的发展组织——/受体subtype-specific干预S1P信号。

肿瘤坏死因子-α是由巨噬细胞分泌和功能作为一个至关重要的炎性介质调节炎症反应和免疫细胞活性(63年]。肿瘤坏死因子-α通过激活NF-kB调节细胞生长,促炎的转录因子(64年- - - - - -66年]。肿瘤坏死因子-α/ NF-kB承诺开发新颖的慢性肾脏疾病药物的目标。是有趣的推测,一些药物对肿瘤坏死因子-抑制的影响α激活显示肾脏损害命令式的好处。在目前的研究中,我们表明TNF -α、il - 6表达和S1P水平升高和张力素灌注大鼠。然而,FTY720政府抑制TNF -α、il - 6表达和S1P内容从盎张力素灌注大鼠肾组织,这表明FTY720干预可以减轻Ang II-infusion-induced鼠肾组织炎症。我们的结果说明,TNF -α/ S1P cascade-mediated肾脏引起的炎症反应和II可以通过FTY720压抑。FTY720 kidney-protective的影响可能是相关的,至少部分,其抑制肿瘤坏死因子-的能力α和S1P活动。

总之,这项研究加深了我们对角色的理解和II-induced S1P的肾脏损害和显示管理S1P1R受体激动剂减少肾脏功能障碍。S1P1R受体激动剂对肾脏组织的保护作用是由一种直接对kidney-derived细胞有益的影响,也就是说,足细胞。我们得出这样的结论:S1P1R激活可能代表小说早期慢性肾病治疗方法。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版这篇文章。

作者的贡献

克苏和萍曾造成了同样的工作。

确认

作者感谢国华叮建议和刺激讨论;柯吴的批判阅读手稿;红霞杨和亨周优秀免疫组织化学技术援助。这项工作是由中国肾脏病学会临床研究和专项资金的中国医学协会(14050470584),国家自然科学基金(没有。大学生创新实验项目81470912),武汉大学医学院(MS2015046)。