文摘

结构变化和气流阻塞在哮喘气道高反应。新兴证据指向c - kit的参与⁺细胞在肺内稳态,尽管他们在哮喘是未知的潜在作用。我们的目的是隔离c - kit⁺细胞从正常小鼠肺部和测试这些细胞是否会干扰哮喘动物模型的特点。成年小鼠GFP-tagged c - kit⁺ovalbumin-induced气道高反应性细胞,气管内的传递,积极影响气道重塑和改善气道功能。在支气管肺泡灌洗液cell-treated动物,减少炎症细胞的数量和il - 4, IL-5, IL-13释放,增加il - 10,被观察到。MSC-treated小鼠的巨噬细胞极化M2-like子集可以解释,至少部分,增加抗炎细胞因子il - 10的水平。在体外刺激c - kit⁺细胞与炎性因子、吲哚胺2,3-dioxygenase TGFβ被调节。这些数据,再加上体内炎症细胞凋亡的增加,表明c - kit⁺细胞表达下调免疫反应在哮喘影响当地环境,可能通过细胞间接触结合旁分泌作用。总之,气管内的管理c - kit⁺细胞减少炎症,积极调节气道重塑,改善功能。这些数据文档是之前未c - kit的属性⁺细胞,能够阻碍病理生理特性实验气道高反应性。

1。介绍

哮喘是一种气道的慢性炎症性疾病,其特征是变量(AHR)和阻塞气道高反应。据估计,全球大约有3亿人患有哮喘,哮喘占全球每250人死亡(1- - - - - -3]。建立慢性炎症的基础是粘液生产过剩和气道重塑,导致支气管多动症和变量的气流阻塞程度(4- - - - - -6]。在这方面,一些生长因子的释放和激活当地的祖细胞是重要的方面来控制炎症和气道重塑从而防止哮喘恶化[7,8]。

地区不同的居民与干细胞/祖细胞特征包括基底细胞,他们一边人口(9,10),克拉拉细胞及其变体(11),支气管肺泡干细胞(12),肺泡上皮II型祖细胞(13,14),lung-derived间充质干细胞(msc) [15],c - kit⁺干细胞(16- - - - - -19]。

c - kit的重要性⁺强调了肺细胞内稳态的观察c - kit突变小鼠显示不正常的肺结构和上皮细胞祖细胞的扩张依赖于c - kit激活(20.]。c - kit受体的贡献(也称为CD117或干细胞因子受体)在新生儿肺发展已经证明转基因小鼠的肺显示c - kit的巨大贡献⁺细胞(21]。此外,c - kit受体发现CD133⁺上皮细胞祖细胞(22)和肺泡毛细血管内皮细胞(23]。最近的一篇论文已经测试了血统c - kit的潜力⁺细胞,证明他们直接对血管内皮细胞命运的贡献17),而另一个研究人类胎儿和出生后肺声称,c - kit表达标志着祖人口限制内皮血统,表明c - kit信号参与肺血管发展潜力(18]。最后,在一个实验模型的肺肺气肿,c-kit-expressing细胞减轻疾病的进展在被肝细胞生长因子激活(24]。

尽管c - kit的存在⁺细胞肺一再称,这表明这种受体(及其内源性配体)可能有临床意义,c-kit-bearing细胞的性质尚未完全阐明。因此,本研究的目的是测试哪个角色c - kit⁺细胞,正常老鼠的肺隔绝,在炎症过程的气道高反应性和气道重塑,从根本上提高病理生理学的动物模型。

2。方法

2.1。细胞隔离和文化

6 / 8肺部都是从2-3-month-old BALB / c雄性老鼠(哈伦实验室、圣皮特al Natisone意大利)为每个隔离小鼠肺c - kit⁺细胞和成纤维细胞。样本中收集100毫米直径文化菜肴和很快就洗DPBS w / o Ca^{2 +}和毫克^{2 +}(Euroclone、米兰、意大利)洗掉血。大血管和支气管组件被移除。为了获得一个细胞悬液,肺小碎和保持酶的分离与prewarmed胶原酶溶液(280 U /毫升II型胶原酶(美国新泽西州沃辛顿,莱克伍德);100 U /毫升青霉素和链霉素100毫克/毫升(笔/喉炎,Euroclone)]。45分钟消化后37°C下风潮,胶原酶灭活了添加一个双卷的预冷淬火缓冲区(0.5%牛血清白蛋白(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国);笔/喉炎]。细胞悬液进一步纯化由几个段落通过细胞过滤器[70和40μ毛孔(BD生物科学,富兰克林湖,新泽西,美国)]和离心机在1200转10分钟去除碎片。细胞颗粒收集然后用DPBS洗净。后离心10分钟(1200 rpm),细胞颗粒镀在60毫米直径文化菜肴。火腿的F12培养基培养细胞(Euroclone),补充10% (v / v)胎牛血清(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国),5% (v / v)马血清(美国新泽西Peprotech,落基山),100毫米谷胱甘肽(Sigma-Aldrich), 10 U /毫升红细胞生成素(Sigma-Aldrich), 100年μg / mL bFGF (Peprotech)和笔/喉炎的症状。24小时后,漂浮细胞被移除和贴壁细胞,主要由成纤维细胞,在相同条件下培养。上层清液保存,离心10分钟(1200 rpm),并分别镀。浮在表面的细胞培养扩大直到P2接受immunomagnetic细胞排序以获得c - kit⁺细胞。具体地说,老鼠CD117微被按照制造商的指示(Miltenyi研究,格拉德巴赫,德国)。在P2-P3,细胞的流式细胞仪和immunolabeling评估细胞表型。

2.2。流式细胞仪分析

孤立的细胞从肺组织中提取总分析流式细胞仪(FACScalibur BD生物科学)的检测c - kit⁺分组人口(BD生物科学、意大利)。磁排序后,c-kit-enriched细胞分析造血系采用CD45标记抗体(BD生物科学)。Isotype-matched负控制被用来定义每个特定信号的阈值,建立适当的控制。数据分析软件工具。

2.3。体外刺激c - kit⁺细胞

1.5×10⁵c - kit⁺同时细胞被刺激10 ng / mL TNFα和10 ng / mL干扰素γ(默克密理博,达姆施塔特,德国)模拟炎症环境(25]。总RNA提取后3、6、12、24小时。干扰素γ和肿瘤坏死因子α常用的体外细胞启动细胞因子,诱导分泌的分子参与组织内稳态的规定,包括吲哚胺2,3-dioxygenase (IDO)和前列腺素E2 (26]。

2.4。定量rt - pcr

总RNA提取试剂盒的休息和c - kit⁺细胞的检测、转化生长因子β(TGFβ)和il - 10成绩单(KiCqStart SYBR绿色引物;Sigma-Aldrich)。产生HPRT被用来看家基因。iScript一步法rt - pcr试剂盒SYBR绿色(Bio-Rad实验室、意大利米兰)是用来执行定量rt - pcr和3 ng的信使rna从任何样本作为模板。循环条件下进行根据制造商的指示:互补脱氧核糖核酸合成(10分钟50°C);逆转录酶失活在95°C(5分钟);PCR循环和检测(42周期;在95°C 10秒;30秒58°C);融化曲线分析(在95°C 1分钟,1分钟55°C, 5秒在55 - 95°C,增加了0.5°C每个周期)。 A CFX96 Real-Time PCR Detection System was employed (Bio-Rad Laboratories).

2.5。免疫细胞化学

immunolabeling, c - kit⁺细胞被固定在4%多聚甲醛和孵化anti-CD117(美国圣克鲁斯生物技术、达拉斯、TX)。遗漏的主要抗体作为消极的控制。

2.6。GFP慢病毒感染

体外扩张后,c - kit⁺细胞被感染Cignal慢病毒携带绿色荧光蛋白和嘌呤霉素抗性基因的莫伊50(试剂盒、米兰、意大利)。24小时后,细胞被洗和感染中被新鲜培养基所取代。这时,Cignal记者构造被整合到基因组DNA。记者选择细胞稳定表达GFP基因,嘌呤霉素(5μg / mL)进行选择。绿色荧光蛋白⁺c - kit⁺离心收集的细胞的密度和稀释5×10⁴细胞/ 50μL在适当的介质和用于体内过程。

2.7。试验协议

诱发哮喘、BALB / c小鼠(哈伦实验室)在6周的年龄被南卡罗来纳州注射致敏0.4毫升10μg卵子,吸收到3.3毫克的氢氧化铝凝胶在无菌生理盐水和7天0。从21天,老鼠被质疑喷雾卵子在PBS(1%) 7分钟,每周3天3周的超声波雾化器(De Vilbiss卫生保健,蒂普敦,英国)。卵子来自鸡蛋是一种常用的过敏原,诱发过敏性肺部炎症在实验室啮齿动物(27,28]。小鼠随机分为三组:实验(1)对照组(),不接受任何敏感和治疗;(2)卵巢组()、敏化和挑战与卵子注入介质;(3)卵巢+ c - kit⁺细胞(卵+ cCs)组()、敏化和挑战与卵子和c - kit对待⁺细胞(5×10⁴细胞/ 50μL介质)。中等或c - kit⁺细胞被气管内的管理31天,24小时后的第二个星期卵子的挑战。所有的老鼠都牺牲了10天后和肺反应测试或支气管肺泡灌洗(BAL)。不同的动物被用于肺反应试验或BAL收集,避免落下帷幕的可能性过程可能影响肺反应性测量。评估肺反应后,肺灌注和组织学与磷酸盐10%福尔马林固定。实验的示意图表示协议是显示在图2(一个)。其他动物()有肺成纤维细胞(5×10⁴细胞/ 50μL介质)的肺功能进行比较分析。

2.8。气管内的电池管理

电池管理之前,老鼠与盐酸氯胺酮麻醉(40毫克/公斤,i.p。)和盐酸medetomidine(0.15毫克/公斤,i.p)。一个20量度定制的导管插入气管通过口腔和连接到一个鼠标通风机(美国哈佛装置,Holliston, MA)。确认后的正确位置导管在气管和切断通风机,c - kit⁺细胞或肺成纤维细胞是通过导管使用细针注射器。之后,老鼠机械通风3分钟,然后放置在温暖的房间,直到他们恢复意识,通常在5到15分钟。老鼠的卵巢组接受相同体积的介质。

2.9。肺反应性分析

灌注肺反应性评估在孤立和小鼠肺癌模型。如前所述,水套有机玻璃室(水温、37°C)被用来适应手术,灌注,和通风29日]。在麻醉老鼠,气管被曝光和插管。腹部被打开,隔膜被切断,50μL的肝素注入心脏。鼠标是抽血后的切口肾静脉,胸被打开了,两个胸半固定有两个套管在软木塞板两侧。随后,肺动脉插管通过结扎和固定。增加乙酰胆碱的浓度(ACh)管理通过动脉插管进入肺动脉。肺灌注在nonrecirculating时尚通过肺动脉1毫升/分钟的恒流导致肺动脉压力的H 2 - 3厘米₂o .灌注介质,RPMI 1640缺乏酚红(37°C)含有内毒素年级使用白蛋白低4%。肺被负压通风(−−3 H 9厘米₂O) 90次/分钟和潮汐卷约200μl .每5分钟一个恶性通货膨胀(−20厘米H₂O)。人工胸燃烧室压力测量的差压传感器(Validyne DP 45-24, Validyne工程,北岭,CA,美国),和气流速度pneumotachograph管连接到压差传感器。肺部气息奄奄的湿润空气。动脉压力持续监控压力传感器(Isotec;美国Healthdyne心血管,科斯塔梅萨,CA)是与肺动脉插管的结局。所有数据被传输到电脑和分析Pulmodyn软件(哈佛装置)。对于肺力学,数据分析采用以下公式:,在那里室的压力,肺的依从性,潮汐体积,气道阻力。60分钟后,意味着潮汐卷,意味着气道阻力,而平均肺动脉压力稳定在基线。测量气道阻力修正了气流速度计的电阻和0.6厘米的气管插管H₂O s /毫升。先后,重复剂量反应曲线ACh (10⁻⁸到10⁻³米)在所有实验小组。

2.10。支气管肺泡灌洗

BAL收集如下:0.5毫升的生理盐水是灌输和退出肺部通过气管内的套管。洗胃重复了三次,不同的样本收集。BAL离心机在1000年10分钟在4°C。上层清液转移到管子,储存在细胞因子分析−70°C。细胞颗粒在磷酸盐resuspended最后一卷和微分细胞总数的0.5毫升。

2.11。道达尔和微分细胞计数

细胞总数与伯爵夫人进行自动细胞计数(热费希尔科学),评估细胞计数和可行性用台盼蓝染色根据制造商的指示。微分计算是由Reastain Diff-Quik工具包(热费希尔科学)和至少300个细胞被指望每个cytospin根据标准光学显微镜下形态标准。

2.12。细胞因子测定

测量细胞因子的平衡进行利用的方法,Luminex®xMAP技术,使得测量的体积小样本(100多个分析物μ同时(左)30.]。分析,定量检测il - 4, IL-5, il - 10,和IL-13执行使用Milliplex细胞因子面板框(默克密理博)根据制造商的说明自动化免疫测定分析仪(Luminex 200™系统,热费希尔科学)如前所述[31日]。所有的样品都在重复运行。运行后,数据分析采用Xponent软件(1.9版本,Luminex 200系统;热费希尔科学)和每个细胞因子表达的最终浓度pg / mL。

2.13。组织化学和免疫荧光

组织部分,5μ米厚度,用于组织学。通过免疫荧光,注入细胞检测到GFP抗体(Abcam,剑桥,英国)32]。自行车上皮和平滑肌细胞(smc)是由Ki67标签标识(美国向量实验室,伯林盖姆,CA)。评估了粘液细胞化生immunolabeling anti-mucin 5 ac抗体(Abcam)。Mucin-positive细胞在支气管上皮细胞层的量化计算标记细胞每在气道上皮细胞的总数。炎症细胞被CD45表达式(罗福斯生物制剂,利特尔顿有限公司,美国)。巨噬细胞被pan-macrophage识别标记F4/80(罗福斯生物制品)和M1 / M2子集通过诱导一氧化氮合酶(进气阀打开,热费希尔科学)和arginase-1表达式(Abcam),分别。终端deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP尼克结束标记(TUNEL)分析被用于肺组织细胞凋亡的检测,根据制造商的指示(Clontech实验室、山景、钙、美国)。凋亡指数表示为TUNEL的数量⁺细胞的细胞在炎性浸润。核与DAPI染色(Sigma-Aldrich)。异硫氰酸荧光素(FITC)和tetramethylrhodamine-5 -(6)异硫氰酸酯(TRITC)共轭二次抗体被用于(杰克逊ImmunoResearch,纽马克特,英国)。炎症的评估,组织部分沾)(Sigma-Aldrich)。肥大细胞的数量每毫米²肺组织的测量与甲苯胺蓝染色后(Sigma-Aldrich) [33]。样地测量与图像专业+软件(媒体控制论,罗克维尔市,医学博士,美国)。样品进行了分析与徕卡显微镜DM 5000 b(徕卡微系统公司,位于德国)和蔡司LSM 700共焦显微镜(蔡司、从、德国)。

2.14。GFP基因的PCR检测

GFP的PCR检测石蜡切片获得GFP小鼠的肺⁺以前通过免疫组织化学方法检测细胞。组织deparaffinized 100 ng基因组DNA片段,与QIAamp提取DNA工具包(试剂盒),与GFP引物混合。循环条件如下:30秒94°C,紧随其后的是30周期放大(30秒94°C, 62°C为30秒,30秒和72°C),最后一个孵化在72°C 3分钟。PCR检测的产品运行到琼脂糖凝胶GFP乐队(扩增子大小:315个基点)。DNA提取GFP小鼠作为积极的控制而组织部分medium-injected老鼠作为负控制(34]。

2.15。统计分析

结果报告为平均数±标准差。数据分析使用GraphPad棱镜(GraphPad软件、圣地亚哥、钙、美国)。两个比较由学生的决定意义t以及由单向方差分析和多重比较,Bonferroni期末测验。肺反应曲线比较使用双向方差分析Bonferroni紧随其后的期末测验。的值被认为是重要的。

2.16。动物研究批准

实验动物保健和使用委员会批准的协议是那不勒斯第二大学(1966/7.17.2012)。动物保健遵守意大利法规保护动物用于实验和其他科学(116/1992)以及与欧盟指南的使用实验动物(2010/63 /欧盟)。老鼠住在那不勒斯第二大学的动物设施。食物和水是随意提供。室温保持在22°C-24°C和相对湿度在40% - -50%。日夜周期是12 h / 12 h。小鼠适应任何程序开始前一周,在此期间,他们每天提交处理,让他们用来操纵,从而减少实验变化由于压力由于程序。所有治疗都由经验丰富的运营商和无菌。在挑战(气溶胶),自由移动的老鼠放在一个合适的最小压力室。没有动物在体内成为重症或死亡过程。 Mice subjected to lung reactivity were exsanguinated after incision of the renal vein, while the remaining animals were sacrificed by cervical dislocation.

3所示。结果

3.1。识别和隔离c - kit⁺细胞

c - kit⁺在成年小鼠肺组织细胞被发现(图1(一))。他们没有表达CD45,不包括造血血统(图1 (b)),为阴性特征上皮标记,如pan-cytokeratin、甲状腺转录因子1,囊性纤维化跨膜电导调节以及肥大细胞类胰蛋白酶(没有显示)。流式细胞仪分析显示c - kit的一小部分⁺物理分离获得的小肺细胞组织细胞酶消化(图1 (c))。后来,immunosorting产生c-kit-enriched负CD45(数据的细胞群1 (d)和1 (e))。

3.2。气道高反应性和c - kit的移植⁺细胞

c - kit⁺细胞被气管内的灌输给实验动物中诱导的气道高反应敏感,挑战与卵巢(图2(一个))。政府之前,与GFP细胞转导跟踪在收件人组织(图2 (b))。在卵巢的老鼠,ACh-induced支气管收缩增加对控制,同时显著减少支气管代动物中可观察到收到c - kit⁺细胞。肺成纤维细胞没有产生有益的影响(图2 (c))。这个使用额外的细胞类型(即进行比较分析。,lung fibroblasts) was done to elucidate whether the modulation of lung function was dependent on the cell class. The presence of GFP⁺细胞受体组织证明了GFP基因PCR和免疫组织化学显示GFP-tagged细胞在支气管上皮细胞和肺实质(数据2 (d)- - - - - -2 (f))。

3.3。气道重塑

增生上皮和smc检测在航空公司记录的贡献增生气道重塑。在卵巢的老鼠,Ki67的分数⁺上皮和smc将近6倍和5倍高于控制。然而,在上皮细胞增殖指数降低71%,54%平滑肌层后c - kit⁺细胞管理局(数据3(一个)- - - - - -3 (f))。激烈的粘液上皮化生中观察到小鼠卵子被c - kit显著降低⁺细胞(数据3 (g)- - - - - -3(我))。这些结果文档,c - kit⁺细胞能够减弱支气管上皮和平滑肌的增生的阶段质量,从而减少气道重塑。

3.4。炎症和免疫调节

增加支气管旁浸润的炎症细胞在卵巢组明显。然而,c - kit⁺确定细胞显著减少炎性浸润的程度(数字4(一)- - - - - -4 (c))。此外,肥大细胞数量的增加在卵子动物细胞管理局(数据之后变得明显降低4 (d)- - - - - -4 (f))。分析拜尔表示一个正在进行的炎症在卵巢的老鼠,总细胞数的增加,淋巴细胞的比例,polymorphonucleated细胞和嗜酸性粒细胞。相反,道达尔和微分的炎症细胞计数证明不太突出年级cell-treated动物(图4 (g))。有趣的是,巨噬细胞的扩增分数,报道也与msc (35),表明巨噬细胞激活抗炎反应的参与。此外,BAL的卵子老鼠Th2促炎细胞因子浓度升高(即。il - 4, IL-5, IL-13),而il - 10的水平持平。c - kit⁺政府决定减少细胞水平的Th2促炎细胞因子和增加il - 10(图4 (h))。由于巨噬细胞在炎症调制发挥至关重要的作用,他们的招聘和极化已经确定。c - kit的滴注法⁺细胞并不影响组织巨噬细胞的总数(以pan-marker F4 / F80) OVA-treated肺(没有显示)。然而,在cell-treated动物,arginase-1的感应⁺M2-like巨噬细胞激活标记更加突出,而间接宾语⁺M1表型不代表(数字4(我)- - - - - -4(左))建议优先极化IL-10-producing M2-like细胞。

这些数据表明,c - kit气管内的管理⁺细胞可以负责控制当地的炎症过程。

在寻找潜在的机制负责c - kit的积极作用⁺细胞炎症、孤立的c - kit⁺细胞在体外刺激干扰素γ和肿瘤坏死因子α。实时PCR显示il - 10的成绩单在c - kit⁺细胞,但未显示差异后炎性刺激(图5(一个))。有趣的是,当刺激时,c - kit⁺细胞表现出的被罩和TGF mRNA水平增加β(数据5 (b)和5 (c))。TGFβ端依赖途径是必不可少的被罩监管反应(36],IDO-producing细胞可以促进淋巴细胞的死亡通过修改局部微环境(37]。在炎性浸润在这方面,凋亡率测量,成为超过2倍cell-treated动物(数字5 (d)- - - - - -5 (f))。绿色荧光蛋白的存在⁺邻近细胞的凋亡炎症细胞表明c - kit⁺细胞可能下调,以旁分泌的方式,炎性浸润的程度。

4所示。讨论

哮喘是一种常见的慢性疾病主要为特征的气道嗜酸性炎症与整个频谱哮喘严重程度的相关模式,从轻度到中度到严重的不受控制的疾病38,39]。支气管代答,其病理生理学包括间歇性气道阻塞气道嗜酸性慢性炎症反应,杯状细胞增生,气道结构改变以应对慢性Th2免疫反应(40]。过敏原和一些疾病与哮喘动物模型和人类的恶化(41- - - - - -43]。

越来越多的报道表明,在几个肺居民干细胞类型,c - kit⁺肺细胞是重要的体内平衡和修复(16- - - - - -19,23,44),但到目前为止,他们的能力来调节炎症从未被研究过。在目前的工作,鼠标c - kit⁺细胞被发现在正常小鼠肺癌和大部分位于整个肺实质和偶尔的上皮细胞层。为了观察他们的行为在一个肺部疾病的实验模型,我们执行一个外源细胞交付。考虑到少量存在于一只老鼠肺部,细胞接种后气管内的隔离和体外扩张。气管内的路线细胞交付我们的研究中使用的一种方法有几个优点。这种类型的地方政府,很少开展,提供了好处,不能扩展到系统注入,如细胞数量的减少注入和低风险嫁接其他器官。

在我们的模型中,上皮细胞的增殖率,自行车smc的分数,和激活的杯状细胞明显高于卵巢组织。这是一致认为支气管上皮增生,平滑肌层增厚,和食用细胞数量的增加都是关键的组件在过敏性哮喘气道重塑的发生(2,45]。有趣的是,老鼠接受c - kit⁺细胞表现出降低支气管上皮细胞的增殖指数和气道smc的杯状细胞数量的减少。重要的是,积极对重构的影响加上改进的航空公司的功能性质,表现为减少代课时。这些发现表明,c - kit⁺细胞,在这个特定的病理炎症条件下,可能会干扰细胞方面的气道重塑,有助于疾病的演变。在我们的实验环境中,气道高反应性肺成纤维细胞没有改善。这表明肺功能的调制不能仅仅归因于“生物质”进入组织的滴剂,但代表一个特定细胞类型的现象。我们的数据不排除这种可能性,其他肺干细胞/祖细胞可能参与反应的损伤。了解潜在的功能性病变的肺中不同的细胞群之间的关系仍然是一个开放的和具有挑战性的问题。

衰减的免疫和炎症过程可以显著影响支气管功能和体内平衡。事实上,msc已经被证明是有效的消炎作用,主要是因为他们分化为上皮细胞的能力仍有待澄清(20.,46,47]。同样,在我们的研究中炎症过程,典型的OVA-induced气道高反应性的实验模型,显著影响体内管理c - kit⁺细胞。观察到的数量的减少炎症细胞在球和肺组织的渗透建议可能的免疫调节特性的细胞类型进行测试。相关的有利影响是显著减少促炎细胞因子il - 4, IL-5, IL-13落下帷幕。相比之下,il - 10,多种促炎细胞因子的有效抑制剂(48- - - - - -50),显著增加。c - kit⁺体外细胞能够产生il - 10但没有差别在接触规范炎性刺激后il - 10成绩单。这表明il - 10的提高BAL cell-injected动物可能是由于c - kit的能力⁺细胞刺激其他细胞分泌多效性的免疫抑制细胞因子(51,52]。在这方面,巨噬细胞的参与,是一个强有力的il - 10的来源被认为是。激活巨噬细胞调节支气管炎症和哮喘的气道高反应性。而经典激活巨噬细胞(M1亚型)对炎症刺激反应生产高水平的促炎细胞因子、M2-like巨噬细胞分泌的抗炎因子,如il - 10 (53- - - - - -55]。我们的数据表明,c - kit⁺细胞决定极化对M2-like亚型,这表明监管巨噬细胞,在其它类的细胞能够产生和释放il - 10,可能是部分负责抑制炎症,因此调解c - kit的积极作用⁺气道高反应性细胞和嗜酸性粒细胞的积累。

此外,被罩和TGFβmrna在刺激细胞明显增加。我调节免疫反应的诱导的氨基酸色氨酸和快速损耗的形成proapoptotic代谢物(37),而TGFβ能够表达下调的过敏反应(56]。此外,被罩,TGFβ,由脂肪细胞分泌的前列腺素E2 msc改善气道炎症和改善肺功能57]。GFP-labeled c - kit的观察⁺细胞在炎症浸润和炎症细胞的凋亡是高cell-treated动物支持当地免疫调节的假设作为一个可能的调节机制。

几个因素提出调解免疫抑制效应,包括语言、TGFβ、前列腺素E2、肝细胞生长因子一氧化氮和il - 10。涉及到一些特定的免疫细胞的数量和他们的招聘和分泌生物因素直接或间接的能力可以解释旁分泌免疫抑制活性观察与干细胞或营养分子实验研究。Myeloid-derived抑制细胞(MDSCs)是先天免疫细胞的特点是其潜在控制T细胞反应和抑制炎症。据报道,MDSC积累积极与il - 10的增加直接生产和MDSCs和巨噬细胞之间的相互作用58,59]。也有证据表明不同的传统角色和血浆树突细胞在调节T细胞介导获得性免疫在肺60]。传统树突状细胞促进Th2敏化(61年),而血浆树突细胞发挥抗炎作用的能力释放被罩从而抑制T细胞反应(62年,63年]。到目前为止,没有研究解决了体内c - kit的影响⁺细胞免疫系统,唯一相关的信息可以从旁分泌外推msc的影响。通过TGF msc调节,β和/或被罩,CD4细胞的功能⁺CD25⁺FoxP3⁺调节性T细胞和NK细胞,通过前列腺素E2,成熟/激活树突状细胞(64年,65年]。然而,在搜索的msc调解免疫调节机制,细胞间接触应该考虑,因为证明了msc在体外研究表明直接参与免疫细胞行为的监管66年,67年]。我们没有检查c - kit的效果⁺淋巴细胞的细胞在不同的人群;巨噬细胞极化数据表明,c - kit⁺细胞可以促进细胞释放细胞因子免疫抑制/激活积累。我们的数据对于改善气道功能和广泛的c - kit的行动⁺细胞与msc使可能的交互分享各种免疫细胞超过合理。还需要进一步的调查和特别的实验来阐明抗炎的机制参与调制响应由c - kit⁺细胞。

5。结论

在目前的研究中我们报告,c - kit⁺从成人的肺细胞,分离,改善肺功能通过炎症过程的限制。多个可溶性介质的分泌,关掉促炎的状态,有利于抗炎条件,可以解释c - kit的免疫抑制效果⁺细胞体内,类似于已知的行为归因于msc。炎性环境的修改能力,可能以旁分泌和细胞间接触的方式,可以被视为一个新的c - kit的特性⁺细胞,除了他们的参与组织内稳态16- - - - - -18]。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

朱塞佩Spaziano, Donato Cappetta,康拉德他贡献了同样的工作。安东内拉·德·拉斯泰利旧金山布鲁诺贡献达同样这个工作和cosenior作者。