文摘

背景和目的。中性粒细胞胞外陷阱(网)在急性心肌梗死已确定。我们评估了时间配置文件和与梗塞大小网标记st段抬高心肌梗死肝素)和稳定心绞痛(AP)。方法。与美联社20 STEMI患者和10接受经皮冠状动脉介入(PCI),收集血液样本在PCI(只有AP组)和3和12小时后,天1,3,5,7,14网测量的标记。结果。双链脱氧核糖核酸(dsDNA)和核小体在STEMI水平高于美联社,直到第三天,12个小时( ,所有)。在两组DsDNA拒绝后第五天( ),而核小体减少,直到第三天只在AP组 ,所有)。DsDNA峰值与肌钙蛋白T和肌酸激酶MB (CKMB)在第五天( , )和MRI-measured梗塞大小在5至7天 , 和 , 职责),核小体与梗塞大小在第五天( , )。结论。高水平的网标记被观察到在STEMI与梗塞相关血管形成后不久,部分尺寸。下降之后两组表明网在急性和慢性壁血栓的作用。

1。介绍

中性粒细胞激活细胞在急性心肌梗死(MI)最近引起了人们的关注。定量大量的中性粒细胞和嗜中性粒细胞颗粒蛋白预测梗死大小的建议,左心室射血分数(LVEF)、急性心肌梗死后新的心血管事件和死亡(1- - - - - -6]。十年前,很明显,中性粒细胞激活后可以释放部分核内容驻留中性粒细胞颗粒蛋白进入细胞外空间形成spindle-like网络称为中性粒细胞胞外陷阱(网)7]。虽然网最初被认为在传染病主要作用,确保微生物截留在高浓度的抗菌蛋白(7),网最近被确定在冠状动脉疾病(CAD) (8- - - - - -10]。

在急性心肌梗死,高水平的循环脱细胞脱氧核糖核酸(DNA),代孕网的标志,已报告11- - - - - -15)也与梗塞面积(8,13,15]。网也建议在冠状动脉血栓(8,9),在壁画动脉粥样硬化斑块16,17),在稳定心绞痛(AP),他们似乎进一步作为预测冠状动脉严重程度和新的冠状动脉事件的风险(10]。通过看似广泛凝血属性如血小板截留和激活(18),凝血系统的激活(19,20.,抑制纤维蛋白溶解(21),网壁血栓的可能发病机制的重要球员。

循环的动态资料网在st段抬高心肌梗死的急性和亚急性阶段肝素)之前没有详细报道。在这项研究中,我们旨在探索循环的时间剖面代孕网的标记双链脱氧核糖核酸(dsDNA)和核小体(DNA-histone复合物)STEMI患者或稳定美联社接受冠状动脉造影和经皮冠状动脉介入(PCI)。时间的髓过氧化酶(MPO)和pentraxin 3 (PTX3),著名的中性粒细胞颗粒细胞蛋白质,也为了研究调查是否这些蛋白质可能反映在网的测量标记。我们进一步评估是否dsDNA,核小体,MPO的心肌损伤的相关指标和左心室功能。

2。材料和方法

2.1。研究设计

与STEMI三十CAD患者,20,美联社10与稳定,承认奥斯陆大学医院(诸多)Ulleval,挪威,经历成功与PCI血管形成,都包括在内。研究设计的细节已报告之前(22]。总之,入选标准STEMI组临床症状特点,心电图描记的st段抬高,和血管造影检查冠状动脉闭塞,而血管改变的临床症状特点和CAD适合PCI在AP组入选标准。排除标准在之前的透壁的两组梗死,心原性休克和严重的并发症。所有患者根据当前医学上治疗指南和给书面知情同意参与研究。研究协议批准的区域委员会医学研究伦理和符合伦理指南1975年赫尔辛基宣言。

2.2。血液采样

收集血液样本标准静脉穿刺前PCI AP组和3和12小时后,天1,3,5,7,和14两组。从第一天,进一步获得血液样本在空腹状态下早上之前摄入的药物。常规分析了用传统方法。血清是由离心1小时内,享年2500岁 g 10分钟和EDTA等离子体是由离心1小时内,享年2500岁 g 20分钟在4°C,都储存在−80°C到分析。

2.3。实验室分析

dsDNA和核小体被使用血清中量化Quant-iT Picogreen dsDNA化验# P11496(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)和ELISA检测细胞死亡工具包# 11774425001(美国印第安纳波利斯罗氏诊断),分别。光密度值在核小体试验规范化的内部积极控制和表达为任意单位的核小体每毫升(ν/毫升)。所有相关的一个病人的样本和两组样本进行分析在同一板以减少interassay可变性的重要性。MPO水平被ELISA以EDTA等离子体(Mercodia AB,乌普萨拉,瑞典)。Interassay变异系数(CV)的测量dsDNA,核小体,和MPO分别为2.5%,28.7%,和6.3%,分别。

心肌损伤是评估血清肌钙蛋白T水平峰值(参考价值< 0.03μg / L)和肌酸激酶MB (CKMB)(参考价值< 5μg / L)和后期钆对比增强技术基于梗塞大小(%)衡量磁共振成像(MRI)在6周之后。左心室功能评估左心室射血分数(LVEF)核磁共振后6周。在16个病人MRI措施可用。

2.4。统计分析

大多数的变量斜分布,用非参数统计。组差异被Mann-Whitney评估 测试或确切概率法,而整体改变在一组和两个时间点之间在一组被弗里德曼测试和评估魏克森讯号等级测试,分别。相关性分析是由斯皮尔曼ρ。由于假设生成的性质研究,Bonferroni调整为多个比较没有执行。将水平的意义 。所有统计分析都由SPSS软件包,23.0版。

3所示。结果

患者在基线特征如表所示1。以外的更成熟的CAD稳定AP组,从而更频繁的使用二级预防心血管药物,组可比。

表1
研究人口的临床特点。
3.1。网的时间剖面循环标志
3.1.1。双链脱氧核糖核酸(dsDNA)

水平的dsDNA STEMI组明显高于AP组各时间点,直到第三天( )(图1(一))。

(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
(c)
(d)
(d)
图1
网的时间配置文件标记、髓过氧物酶和白细胞计数。(a)双链脱氧核糖核酸(dsDNA), (b)核小体(DNA-histone复合物),(c)髓过氧化物酶(MPO)和(d)白细胞总数。不同的时间点( 设在)和水平( 设在)st段抬高心肌梗死肝素)和稳定心绞痛(AP)组,以及和类内之间的比较。值作为中位数(25 - 75百分位数)。伯恩·隆伯格:基线。 群体间的差异在不同的时间点。 会差从3小时STEMI组。 会从基线稳定AP组的差异。

在两组中,一个重要的观察整体改变dsDNA水平( ),值下降3小时STEMI组和基线稳定AP组,分别,第五天,以后所有的时间点( )(图1(一))。

3.1.2。核小体(DNA-Histone复合物)

核小体的水平明显高于在STEMI组相比,稳定AP组3和12小时( )(图1 (b))。

没有明显的总体变化或改变从3小时后观察时间点在STEMI组。稳定的AP组,从基线水平下降,直到第三天( 对于所有),尽管没有明显的总体变化是观察(图1 (b))。

3.2。MPO的时间剖面

观察两组之间没有差别的MPO水平在任何时间点(图1 (c))。

在两组中,一个重要的总体变化( )水平下降3小时之后所有的时间点( 对于所有)。在稳定的AP组,显著增加从基线到观察3小时,持续的高天1,3,5,7 ( )(图1 (c))。

3.3。网的标志和嗜中性粒细胞蛋白之间的相互关系

在总群,dsDNA和核小体水平intercorrelated明显多数的时间点(表2)。MPO水平并没有与dsDNA或核小体水平除了负相关核小体在3个小时( , )。以前,我们一直在调查pentraxin 3的时间剖面(PTX3),另一种中性粒细胞颗粒蛋白,因此潜在的网络组件在同一队列和PCI后不久就发现PTX3水平升高(23]。PTX3水平没有显著关联dsDNA或核小体在任何时间点(数据没有显示)。

表2
dsDNA水平和核小体之间的相关性研究总人口在相应的时间点 。
3.4。与白细胞总数的相关性

在总群,dsDNA水平相关的积极与白细胞总数大部分的时间点,而核小体相关程度较轻。MPO水平与白细胞总数只有14天(表3)。相关性不明显的在分析组分别(数据未显示),尽管两组白细胞总数的时间剖面适度模仿dsDNA的模式(图1 (d))。

表3
网的标志之间的相关性、MPO和白细胞总数在相应的时间点总研究人群( )。
3.5。与心肌损伤的关系

水平的积极dsDNA相关峰值的肌钙蛋白T水平和CKMB第五天( , 两个),而5和7天的水平与梗塞大小评估磁共振成像( , 和 , 职责。)(数据2(一个)- - - - - -2 (d))。此外,核小体水平第五天与梗塞面积由核磁共振( , )(图2 (e)),而MPO水平并没有与任何心肌损伤的指标。要么dsDNA、核小体或MPO水平与LVEF在任何时间点(数据没有显示)。

(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
(c)
(d)
(d)
(e)
(e)
图2
梗塞大小的网标记和指标之间的相关性。dsDNA:双链脱氧核糖核酸。CKMB:肌酸激酶MB。MRI:磁共振成像。

4所示。讨论

探究的主要发现,假设生成研究如下:(1)网的两个循环替代标记,dsDNA和核小体,高STEMI患者相比,稳定的AP患者PCI后不久,和水平在一定程度上与心肌损伤指标;( )dsDNA患者PCI后和核小体水平降低也稳定的美联社,表明瞬态相关冠状动脉缺血可能是生产这些蚊帐标记;( )循环水平MPO水平不能反映dsDNA或核小体和STEMI没有影响,但显然由PCI过程本身。

尽管循环DNA被报道在AMI高于稳定美联社和健康对照组(11- - - - - -15),没有研究,据我们所知网代理的详细时间剖面上标记在STEMI和稳定的美联社。观察到高浓度的dsDNA和核小体后不久在STEMI患者PCI是明显的,可能反映了增强中性粒细胞激活细胞,心肌细胞坏死核内容的后续版本,或多个事件的组合。dsDNA之间的相关性和核小体水平获得亚急性阶段后PCI和梗塞大小衡量MRI观察6周后,这些潜在的标记网可以直接反映心肌细胞坏死。他们也代表中性白细胞细胞激活的可能性仍然存在,循环白细胞总数之间的相关性dsDNA和核小体水平最多观察时间点,因为白细胞总数的时间剖面模仿dsDNA的时间剖面。中性粒细胞进一步此前提出的循环水平的主要来源dsDNA和核小体(10,24]。如网可能持有像血小板激活凝血属性18第十二),凝血激活的因素和组织因素,组织因子途径抑制剂(TFPI)抑制[19,20.和抑制纤维蛋白溶解21),在冠状动脉血栓形成是合理的。目前的样本大小是有限和梗塞相对较小,可能评估指标之间的联系网和冠状动脉血栓形成需要进一步探索。

高浓度的dsDNA和核小体后不久PCI并不限于STEMI组,减少水平的标记也观察到稳定的AP组在整个研究期间。符合我们的观察,水平dsDNA和核小体曾被报道与冠状动脉粥样硬化的严重程度(10,12),表明AP之间的联系与冠状动脉缺血和刺激生产网(所谓的NETosis)。网在动脉粥样硬化的病理生理特性,因此可能也在美联社没有详细探讨,但在小鼠模型已经提出,包括刺激和各种先天和适应性免疫细胞迁移到动脉粥样硬化斑块,部分是通过macrophage-mediated释放细胞因子(16,25通过金属蛋白酶()和内皮功能障碍介导26]。由于凝血网的特性,这也将是有趣的推测是否网参与microthrombosis intraplaque出血后,动脉粥样硬化斑块进展的一个行之有效的原因(27]。

MPO水平,一个著名的嗜中性粒细胞颗粒网(蛋白质和提议的组成部分7,28),并没有反映在dsDNA和核小体的水平。如果dsDNA和核小体实际上是网的一部分,这项观察表明循环MPO主要不是NETs-derived。缺乏MPO和dsDNA /核小体之间的联系是一致的与另一个中性粒细胞颗粒蛋白,PTX3 [23),这表明尽管从中性粒细胞颗粒在中性粒细胞释放细胞的激活,这两个蛋白质与dsDNA同时没有进入血液循环和核小体,并因此可能不能反映NETosis队列。进一步,STEMI MPO水平没有影响,增加水平稳定AP组的PCI后不久可能暗示的直接影响PCI过程本身。机械的解释明显PCI-effect尚不清楚。最后,MPO并不与任何指标的心肌损伤或左心室功能与之前报道的不良性质MPO AMI后左室重构(29日,30.]。再次,有限的样本大小和小梗塞大小可能影响这些结果。

标记的发现的网壁血栓是特别感兴趣的网可以受到治疗操作,也就是说,通过政府的酶能溶解净结构像脱氧核糖核酸酶(dna)或通过抑制peptidylarginine deiminase 4 (PAD4)在NETosis必不可少的酶。虽然在人类体内实验没有进行到目前为止,添加DNAse标准溶栓(t-PA)已被证明加速人类体外血栓溶解血栓(8)和减少心肌流体区域,梗塞大小和ischemia-reperfusion-induced在大鼠左心室重构(31日]。同样,PAD4抑制药被证明能减少NETosis在小鼠和人类中性粒细胞和进一步直接影响动脉粥样硬化小鼠的负担(17,32,33]。

5。限制

超越有限的样本大小和小梗死如前所述,本研究的假设产生自然有方法的局限性,为核小体高简历分析。在多大程度上循环水平dsDNA和核小体是特定网进一步不清楚。此外,阿司匹林、肝素和他汀类药物都被抑制或破坏网报道在小鼠和人类模型(18,34- - - - - -37),这就可以解释dsDNA水平下降和核小体在两组,以及低水平通常在AP组。最后,作为中性粒细胞的微分项,dsDNA[的主要来源24),没有可用的,我们的分析是基于总白细胞计数。这些虽然高度代表循环中性粒细胞。

6。结论

高水平的网队标记dsDNA和核小体观察STEMI患者血管形成后不久,也部分反映了梗塞大小。下降随着时间的推移,也观察到在AP患者,也可能表明瞬态冠状动脉缺血刺激释放网标记。在一起,这些观察结果可能意味着角色壁血栓的网。

信息披露

研究身份证号码(区域医学研究伦理委员会)是126 - 03032。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

Ragnhild Helseth Svein Solheim,哈拉尔德阿内森,Ingebjørg Seljeflot,鲍尔和三分相Opstad都极大地推动了概念化,方法论,可视化,和写作。三位一体鲍尔Opstad也在实验室进行分析,而Ragnhild Helseth执行正式的分析。

确认

作者感谢帕维尔•霍夫曼,Torstein Jensen和哈k . Grøgaard参与的病人。