文摘
肿瘤坏死因子-α(TNF -多态性α)基因成为胃疾病的关键决定因素。肿瘤坏死因子-α−308(G / A)和肿瘤坏死因子-α−238(G / A)单核苷酸多态性snp是最广泛的研究。然而,所有这些研究都是在白种人和亚洲人。因此,第一次在非洲,我们试图探讨多态性是否在TNF -α基因与胃癌病理学的发展有关摩洛哥。两个单核苷酸多态性位于启动子区域(308和238−−位置)在TNF -α基因的基因在244人(170名患者和74名健康对照组)。优势比(ORs)和95%可信区间(CI)估计使用逻辑回归分析。肿瘤坏死因子-α−238(G / A)基因型是具有高的风险显著相关胃炎、胃癌(GC) (和、职责)。此外,一个新的多态性位于启动子区域位置193−TNF -α基因被发现。这个SNP的分布明显不同的病人患有溃疡。肿瘤坏死因子之间的关系α−193(G / A)基因型和高风险的溃疡是重要的()。这些结果表明TNF -α−193(G / A)等位基因对胃癌有保护作用,发展溃疡。
1。介绍
胃癌(GC)是第四个全世界最常见的恶性肿瘤(1),频率变化很大在不同的地理位置(2]。患者感染幽门螺杆菌(幽门螺旋杆菌GC()的风险增加,开发3]。现在知道幽门螺旋杆菌在胃致癌作用中起着重要作用[4通过生理和组织学变化,以至于在胃粘膜5,6]。然而,感染者的数量之间存在显著的区别,数量继续开发GC [6]。因此对胃癌进展很可能取决于一个多因子的病因,结合细菌致病性的影响,主机敏感性和环境因素(3,6,7]。
宿主遗传因素正在成为许多癌症疾病的关键因素8]。促炎和抗炎细胞因子基因遗传变异影响个人对致癌风险。促炎细胞因子基因多态性,特别是肿瘤坏死因子(TNF -α)及其受体与GC的风险增加(9]。事实上,单核苷酸多态性在TNF -监管区域α扮演重要角色在基因转录水平10]。肿瘤坏死因子- snp几件物品已经被确认α基因,主要在5′启动子区域(11]。两个单核苷酸多态性在308年和238−−位置与胃癌最常见评估协会。肿瘤坏死因子-α−308(G / A)与TNF -生产的增加有关α(3中央中介),这是一个许多生物属性与il - 1免疫反应和股票。肿瘤坏死因子的功能和意义α−238(G / A)不太清楚,但是,因为一个假定的阻遏站点位于238−25-base延伸,包括位置,这种多态性可能功能(12,13]。肿瘤坏死因子-α−308(G / A)和肿瘤坏死因子-α−238(G / A)单核苷酸多态性snp是最广泛的研究。然而,所有这些研究都是在白种人和亚洲人。在非洲,到今天,没有特别研究感兴趣的多态性在肿瘤坏死因子启动子之间的关系α基因和GC的风险很高。因此,本工作的目的是研究snp在TNF -的频率α基因在摩洛哥患有胃炎、溃疡和胃癌。
2。患者和方法
2.1。病人和控制
在这种情况下控制研究中,共有244 GC患者登记(93例GC, 56慢性胃炎患者和21患有溃疡和控制集团由74名健康志愿者,没有任何胃疾病)。一组全面的社会人口、临床和实验室数据已经收集了。写所有受试者知情同意了。
2.2。基因分型方法
允许同时测定的基因型TNF -α−308(G / A)和肿瘤坏死因子-α−238(G / A)单核苷酸多态性,266 - bp片段的肿瘤坏死因子α基因的5′侧翼区域放大从基因组DNA提取血液样本,通过聚合酶链反应(PCR)。总共0.2μ克的基因组DNA,连同200μMgCl M的核苷酸,1.5 M2,0.5μ的引物(表1),1单位Taq标准PCR缓冲20的最后一卷μl . PCR条件如下:最初的变性94°C 10分钟,其次是35周期为30秒94°C, 57°C 30秒,30秒72°C,然后最后一个扩展7分钟在72°C。反应体积和条件TNF - PCR在本质上是相同的α−238(G / A) PCR,除了退火温度,这是55°C。
PCR产品被在2%琼脂糖凝胶电泳分析和纯化使用0.5μ核酸外切酶的L, 1μ0.5 L碱性磷酸酶μL 7的缓冲区的最后一卷μL, 10 - 50 ng PCR产物和孵化37°C 30分钟和15分钟的80°C。DNA 20周期进行了测序μL反应使用5μL纯化PCR产品,1μL (3.2 pmol底漆,1μL和ABI棱镜BigDye 3.1。正向和反向测序引物是各自的PCR扩增中使用的相同,在不同的测序反应。PCR产品的排序条件是25周期在96°C与10秒,5秒50°C, 4分钟60°C。残余双脱氧法结束符被乙醇沉淀和序列分析在应用生物系统公司377 DNA测序仪。
2.3。统计分析
证据偏离哈迪温伯格平衡各个位点的等位基因被精确的测试评估。不同比例的TNF -α−308(G / A)和肿瘤坏死因子-α−238(G / A)基因型频率之间的情况下和控制被测试川崎评估2统计数据。原油优势比(ORs),调整口服补液盐,同时影响的基因多态性与95%的置信区间(CIs)估计,通过逻辑回归分析。口服补液盐和无条件的逻辑回归模型计算使用项目Epi Info 2002(可用:ftp://ftp.cdc.gov/pub/Software/epi_info/)。差异被认为是重要的一个值< 0.05。统计测试都是双向的。
3所示。结果
我们的研究是基于人口与244名参与者群体。健康对照组为比较突变的频率之间的病人组和普通人群。在我们的研究中,我们用TNF -最初的兴趣α多态性在308和238−−位置。尽管差距−世界上308个snp,这不在我们的人口。然而,肿瘤坏死因子的分析α子从372年106−−位置位置显示一个新的突变的存在位置−193。这是一个过渡鸟嘌呤和腺嘌呤G / a。发生的频率TNF -α−193等位基因在我们的人口是17.35%的病人患有胃疾病和控制为13.51%。三种基因型的分布GG, GA, AA是不规则的控制和患者之间。肿瘤坏死因子-的频率α−193等位基因和GA + AA基因型在患有溃疡略高。此外,溃疡存在明显更频繁的航空母舰等位基因群TNF -α−193(G / A)(表2)。
此外,我们证明了一个惊人的SNP−238在TNF -之间的联系α基因与胃炎和腺癌。总的来说,这些结果强烈支持我们的假设表明TNF -α−238(G / A)多态性可能参与胃炎易感性,在腺癌(表的进展3)。
4所示。讨论
肿瘤坏死因子-α是一个重要的免疫介质在炎症反应和肿瘤被认为是内生的,发起人在人类致癌作用[14,15]。一些特定的多态性可能会妨碍转录的TNF -α基因影响TNF -的循环水平α从而增加对胃的病理结果幽门螺旋杆菌感染(3,16,17]。我们的研究的目的是将TNF -α多态性高胃疾病的风险。
目前,一些分子流行病学研究已经进行了探讨TNF的SNPs——之间的联系α与胃癌风险(18]。一些常见snp在TNF -确定α基因,特别是TNF -α−308(G / A)和肿瘤坏死因子-α−238G / A,广泛研究[19,20.]。然而,所有这些研究进行白人或亚洲人群。据我们所知,没有研究都集中在肿瘤坏死因子——之间的关系α胃癌在非洲人群的多态性。在我们的研究中,我们发现了一个新的SNP位于193−从未显示位置,使用排序。这是一个过渡鸟嘌呤和腺嘌呤(G / a)。肿瘤坏死因子-α−193(G / A)溃疡风险高的显著相关。这个结果表明TNF -α−193(G / A)等位基因对胃癌有保护作用,发展溃疡。事实上,科雷亚已经建立了一个级联事件导致GC 20多年前。慢性炎症诱导通过惠普可能进一步进展的癌变前的阶段胃萎缩,肠上皮化生,发育不良,最后腺癌(21]。消化性溃疡和胃癌的关系一直是一个争议的问题。相比之下,十二指肠溃疡疾病常被反向与胃癌有关。进行了一些研究调查在胃腺癌发展溃疡的作用。他们得出结论,对GC胃溃疡是一个保护因素。除此之外,大多数的多态性研究肿瘤坏死因子-α基于已知的单核苷酸多态性的研究使用PCR-RFLP或有时聚合工艺。因此,我们有限的寻找新的单核苷酸多态性可能是特定于特定的人群。证明了这项研究的原创性小说SNP TNF -α−193利用测序技术(G / A)。
到目前为止,肿瘤坏死因子之间的关系α−308(G / A)、肿瘤坏死因子-α−238(G / A)多态性,胃癌是一个悖论12]。有大量的研究集中在肿瘤坏死因子——之间的联系α−308G / A多态性与胃癌。这些研究的结果仍然是不确定的或不一致。的例子,肿瘤坏死因子-α−308(G / A),而我们的研究没有发现这个SNP和胃之间的联系病理像日本22),中国(23)和韩国(24),其他研究证实这种关系25,26]。此外,一些分析总结这些研究结果,确定了TNF -α多态性作为胃癌的危险因素在高加索人群,但不是在亚洲人口(9,27,28]。最近的荟萃分析在2014年出版的阐明了这个问题(12]。他们表明TNF -α−308(G / A)多态性与胃癌风险在白种人中,但不是在东亚和其他民族。同样,Gorouhi等人表明TNF -之间的显著关联α−308(G / A)和胃癌仅限于西方人口(9]。这个协会显示小异质性和保持持续强劲的分析仅限于解剖和胃癌的组织学亚型,或局限于研究基因型频率在哈迪温伯格平衡或局限于更大规模的研究。
然而,肿瘤坏死因子-α−238(G / A)是第二常见SNP的研究网站308年−在所有多态性位于启动子区域的TNF -α基因(19,29日]。它的功能和意义仍不太清楚,但是,因为一个假定的阻遏站点位于238−25-base延伸,包括位置,这种多态性可能功能(9]。在我们的研究中,TNF -α−238明显与胃炎和GC的高风险有关。这些结果与发现被别人30.,31日]。玉等人在2013年发表了一篇荟萃分析(19]。,研究表明TNF -一个重要的关联α−238和高GC的风险。相反,另一个荟萃分析显示有关TNF -无显著关联α−238频率基因型G / G / A和G / (6,15,20.]。但是,没有综合分析了TNF -是否得到明确的结论α−238(G / A)与GC [19]。据我们所知,在所有出版物,研究调查了TNF -之间的联系α−238多态性和胃疾病的风险产生了矛盾的结果。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
确认
作者要感谢a·易卜拉欣博士从医疗和医药学校,穆罕默德Vth大学他的贡献。从摩洛哥的巴斯德研究所博士作者感谢m . Timinouni l . Wakrim博士和h . Benomar。作者感谢m . Sebbar博士。