文摘

Paricalcitol,选择性维生素D受体(VDR)激活剂用于治疗继发性甲状旁腺功能亢进的慢性肾脏疾病(CKD),已与生存相关优势,表明这种药物,除了其抑制甲状旁腺激素的能力,可能会有额外的有益的行动。在这个前瞻性nonrandomised、非盲、概念验证研究中,我们评估的假设选择性维生素D受体激活与paricalcitol CKD患者是一种有效的目标调节炎症。八估计患者肾小球滤过率15至44 mL / min / 1.73米²和一个完整的甲状旁腺素水平高于110 pg / mL收到口头paricalcitol (1μg / 48小时)作为治疗继发性甲状旁腺功能亢进。九个病人,年龄、性别、和慢性肾病阶段,但甲状旁腺素水平< 110 pg / mL,为对照组。我们的结果表明,五个月的paricalcitol管理与降低血清浓度有关hs-CRP (13.9%,)、肿瘤坏死因子-α(11.9%,)和il - 6 (7%,),il - 10的无意义的增加了16%。此外,TNF的信使rna表达水平α和il - 6基因外周血单核细胞显著降低30.8% ()和35.4% (),分别。总之,选择性VDR激活是一种有效的目标在CKD调节炎症。

1。介绍

心血管(CV)疾病(CVD)是一个非常共同特征的病人患有慢性肾脏疾病(CKD),尤其是在那些终末期肾病(ESRD)。这个人群的心血管发病率和死亡率升高并不完全解释经典的CV风险因素(1]。非传统CV风险因素是必不可少的元素的光谱在肾患者心血管疾病,与一个伟大的相关性炎症的作用,矿物质代谢的紊乱,已经明显在慢性肾病的早期阶段(2,3]。同时改变导致了增加心血管危险因素在CKD患者继发性甲状旁腺功能亢进,一个常见的并发症带来的能力的丧失肾脏调节phosphatemia和合成骨化三醇,维生素D的活性形式(4- - - - - -6]。

在过去的十年中,一个最相关治疗领域的创新CKD已经引入paricalcitol (19-nor-1 25-dihydroxyvitamin D₂),维生素D受体的选择性激活的预防和治疗继发性甲状旁腺功能亢进(7,8]。Paricalcitol一直与长期血液透析患者的生存优势(9,10]。这种化合物的行为更有选择性地抑制甲状旁腺激素(素合成和分泌,减少hypercalcemic和hyperphosphatemic效应(11,12]。

另一方面,尽管实验在体外和在活的有机体内研究表明,paricalcitol可能有抗炎作用,临床数据是有限的(13- - - - - -15),没有进行分析研究选择性维生素D受体激活的影响作为调节炎症的目标在CKD患者透析治疗的起始。因此,本试验研究的目的是评估的影响政府口服paricalcitol CKD患者血清炎性细胞因子的基因表达谱。

2。对象和方法

2.1。主题和研究设计

nonrandomised,这是一个潜在的非盲、概念验证研究的CKD患者从一个中心。《京都议定书》是人类研究伦理委员会批准的机构,并为所有患者知情同意了。

患者年龄超过18年CKD 3 b和4阶段(估计肾小球滤过率(eGFR) 30 - 44岁和15 - 29 mL / min / 1.73米²、职责)被认为是合格的,如果他们遇到以下入选标准:临床状况稳定,没有糖尿病,以前没有类似物或磷酸盐粘结剂,维生素D治疗血清25 (OH)维生素D水平高于20 ng / mL,血清钙和磷含量不高于10 mg / dL和4.5 mg / dL,分别和钙磷乘积低于45毫克²/ dL²。排除标准包括严重的胃肠疾病,目前的吸烟习惯,酒精依赖或滥用药物,已知的活性免疫或tumoral疾病,急性炎症或感染事件在前3个月,乙型肝炎、C或HIV积极性,先前的移植,积极治疗与免疫治疗或免疫抑制药物。

初步评估后,八继发性甲状旁腺功能亢进患者血清完整甲状旁腺素(iPTH)浓度高于110 pg / mL服用口服paricalcitol,这是管理软胶囊(1μg)一天一次,每隔一天三次一个星期。九个病人,年龄、性别、和慢性肾病阶段,iPTH < 110毫克/毫升为出于比较目的作为对照组。血液样本被吸引在基线和随访5个月后测量研究的变量。没有患者失访,因此,所有受试者完成了这项研究。

2.2。一般和特定的生化参数

血清样本获得8 - 10 h通宵禁食后,立即和冷冻−80°C。常规生化参数测量使用标准的方法。血清c反应蛋白高敏感(hs-CRP)是衡量一个immunoturbidimetric全自动试验(罗氏诊断GmbH,曼海姆,德国)功能灵敏度为0.3 mg / L(内部inter-assay精度,1.6和8.4,分别地)。血清肿瘤坏死因子水平α(肿瘤坏死因子-α)、白介素6 (IL)和IL - 10高灵敏度ELISA方法测定(Quantikine人力、研发系统,明尼阿波利斯,美国)在DSXTM 4板ELISA处理器(体外SA、西班牙)。最低检测浓度0.10 pg / mL, 0.70 pg / mL,分别和0.50 pg / mL。内部,inter-assay变异系数(CV) < 10.8%在所有情况下。

2.3。基因表达

基因表达分析的RNA,是提取外周血单核细胞(PBMC)。全血样品(2.5毫升)的患者纳入研究收集PAXgene血液中RNA管(BD,富兰克林湖,新泽西)同时,血清样本。总使用PAXgene血液分离出RNA RNA工具包(试剂盒,瓦伦西亚,CA)和存储在−80°C。提取RNA质量测试使用一个Experion自动电泳系统(Bio-Rad实验室、大力神、钙、美国),以确保28 s和18 s rRNA乐队显然是明显的。RNA是使用热科学量化NanoDrop 2000分光光度计(美国热科学NanoDrop)。获得的互补脱氧核糖核酸是使用高容量RNA-to-cDNA工具包(应用Byosistems,福斯特城、钙、美国)在定量rt - pcr和rt - pcr。

记录编码TNF -α,il - 6、il - 10和3 -磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)组成型基因是衡量TaqMan实时定量PCR(存在)TaqMan快速普遍PCR反应混合液(应用Byosistems)。为每个记录(Hs00174128_ml [TaqMan基因表达分析肿瘤坏死因子α],Hs00985639_mL [il - 6],Hs0961622_m1 [il - 10],Hs99999905_m1 [GAPDH])分析了在7500年快速实时PCR系统(应用Byosistems)。目标mRNA水平估计相对量化使用比较方法()通过正火GAPDH表达式。量化的cDNA测试样本一式三份,和相应nonreverse转录酶反应是包括作为DNA污染的控制。

2.4。统计分析

数据提出了意味着±标准差(SD),除了炎症参数,提出了中值和范围。的Shapiro-Wilk测试是用于测试正常。由于非正态分布,血清浓度炎症参数和基因表达率的对数转换为分析然后back-transformed自然单位表示。比较基础和最终值是由Wilcoxon配对测试。被认为是具有统计学意义。目标基因的表达的褶皱变化计算与数据协助v3.0软件(应用生物系统公司)。执行计算剩余使用GraphPad棱镜5软件(GraphPad软件,圣地亚哥,CA)。

3所示。结果

3.1。人口特征和矿物质代谢参数

这项研究是在8男性病人进行paricalcitol(平均年龄,年;表皮生长因子受体,mL / min / 1.73米²)和9岁男性病人年,的意思是表皮生长因子受体mL / min / 1.73米²被包含在一个对照组。在两组基线生化数据的参与者,包括矿物质代谢参数和炎症性变量,描述在表1。组织没有任何重要的区别除了iPTH水平,显著降低在主题包括在对照组,和出于这个原因,患者对照组没有收到paricalcitol。

经过5个月的随访中,血清钙、磷、钙磷乘积(CaxP)在任何组差异不显著。然而,血清iPTH浓度经历了一个从201年(166 - 228)显著减少pg / mL 100 (71 - 121) pg / mL ()患者接受paricalcitol代表平均减少50.4%。相反,这个参数会增加趋势在对照组,平均增量的3.7% ()。

3.2。血清浓度的炎症性变量

关于炎症剖面的对比,hs-CRP的血清浓度,TNF -α,il - 6 paricalcitol患者明显下降(表2)。这些参数的平均百分比下降从基线到研究结束的是13.9%(95%可信区间(CI), 24.4−−4.7) (),11.9% (95% CI,−−0.5 21日)()和7.0%(95%可信区间,13.9−2.5)(),分别。血清il - 10水平增长了16%,但是差异没有达到统计学意义。pro和抗炎细胞因子之间的平衡是进化计算的TNF -的比率α抗炎细胞因子il - 10、il - 6。这些比率显示出减少的趋势,其中百分之一减少18.5% (95% CI, 43.3−6.3) ()和14%(95%可信区间,14.2−42)(),分别。相反,血清炎症参数和细胞因子的浓度比例的患者纳入对照组与基线相比没有任何明显的修改。

3.3。炎性细胞因子的基因表达

关于炎性细胞因子基因表达在外周血单核细胞(PBMCs) mRNA的TNF水平α和il - 6显著降低后从基线paricalcitol政府30.8% (95% CI, 49.1−−12.6) ()和35.4%(95%可信区间,46.7−−24.1)(),分别,而il - 10的表达并没有改变(图1)。肿瘤坏死因子的基因表达率α/ il - 10并没有改变。然而,il - 6 / il - 10比值下降了35% (95% CI, 46.7−−24.1) ()。关于对照组,这些参数对基线的变化百分比低于5%,无显著差异。

4所示。讨论

这项前瞻性研究的结果在常规临床实践表明,选择性维生素D受体激活paricalcitol是一种有效的目标来调节炎症的慢性肾病患者。具体来说,paricalcitol政府相关显著减少hs-CRP的血清浓度,TNFα和il - 6、TNF的信使rna表达水平明显下降α并在PBMCs il - 6。

在CKD减少维生素D受体的激活,导致增加甲状旁腺素的表达和增长的甲状旁腺,继发性甲状旁腺功能亢进的发病机制中起着至关重要的作用。通常的治疗这种疾病包括活性维生素D类似物的管理,尽管他们的重大缺点增加钙和磷的水平。Paricalcitol (19-nor-1 25-hydroxi-vitamin D₂)、选择性、新一代维生素D受体激活剂,已被证明是有益的控制继发性甲状旁腺功能亢进患者血液透析和predialysis少calcemic和phosphatemic效应(16,17]。paricalcitol管理在我们的研究中,5个月后,中位数iPTH浓度显著降低50.4%,类似于最近的研究发现口服paricalcitol在常规临床实践(17,18]。

无处不在的维生素D受体分布在人体组织负责的多效性的影响维生素D受体激活超出其古典的影响(19),包括重大行动氧化应激、免疫调节、炎症(20.,21]。实验研究表明,paricalcitol能够调节炎症(22- - - - - -24]。然而,数据的潜在抗炎行动paricalcitol临床级别的稀缺,以及研究在血透患者中进行静脉paricalcitol或(13- - - - - -15]。

目前的工作是第一次学习专门设计来分析选择性VDR活化的影响作为目标来调节炎症的慢性肾病患者不接受透析。我们发现paricalcitol管理局与hs-CRP显著降低血清浓度和促炎细胞因子TNF -α、il - 6和TNF -减少的趋势α/ il - 10、il - 6 / il - 10比值。我们所知,只有一个先前的研究观察潜在的抗炎作用paricalcitol CKD患者,尽管只有血清hsCRP被评估为炎症标记(血清和炎性细胞因子的基因表达水平进行评估)。在一个月随机,对照试验设计,以确定使用paricalcitol铅标记相关的慢性肾病的进展,改善Alborzi et al。25]发现hsCRP增加了50%在安慰剂组而减少病人收到paricalcitol(减少20% paricalcitol 1μ与paricalcitol 2克/天,减少30%μ克/天;团体之间)。减少hsCRP在我们的研究中为13.9%,这也可能被解释成低剂量(1μg / 48 h)。类似于我们的研究中,这项工作Alborzi等人包括8个科目学习小组和他们中的大多数是男性,尽管很大一部分患者糖尿病患者肾功能是更好的(意思是表皮生长因子受体47 mL / min和33毫升/分钟)。

最后,除了影响血清炎症,paricalcitol政府相关显著减少PBMCs的促炎细胞因子基因表达。在最近的一次在体外研究中,Eleftheriadis et al。26)表明,paricalcitol能够减少基底和lipopolysaccharide-induced TNF -α而引发生产PBMCs健康受试者。我们的研究是在协议与之前的发现,显示了一个信使rna表达水平的降低TNF -α和il - 6 30.8%和35.4%,分别。

尽管小说呈现的信息,我们的研究有一些局限性。首先,低的患者数量可能缺乏统计差异的影响。其次,这项工作计划作为一个概念验证研究,因此研究并不是基于随机设计执行。然而,包容的基础上一个对照组和同质性的治疗和随访的一个中心,没有变化的一般护理和治疗方法的病人在研究过程中,我们认为结果可以认为是由于paricalcitol管理。最后,我们的决定是基于单一测量炎症标记物的某些变化。

5。结论

在CKD,炎症,炎性细胞因子是一种常见的条件是关键分子参与心血管损伤、血管钙化和动脉粥样硬化27,28]。已经证明,血清CRP和il - 6是强大和独立的预测因子的全因死亡率和CV人口(27- - - - - -29日]。此外,ESRD患者单核细胞显示增加促炎细胞因子的表达和证据的特点影射prestimulated促炎细胞(30.),一个条件相关的心血管事件(31日,32]。我们的研究结果表明,选择性维生素D受体激活是一种有效的目标调节炎症慢性肾病患者。因此,paricalcitol的免疫调节和抗炎作用可能导致病人的生存利益,住院治疗,死亡率在透析病人9,10,33],它不仅仅被认为是相关的传统影响维生素D受体激活骨和矿物质体内平衡。进一步长期前瞻性试验是必要的,以评估paricalcitol对CKD患者临床结果的影响。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者研究的支持由西班牙肾脏病学会及ACINEF。支持研究活动j . f . Navarro-Gonzalez项目Intensificacion de la对于Investigadora (ISCIII / Comunidad根据加)。