文摘
乙胺嗪(DEC)块白三烯生产,废除了challenge-induced eosinopoiesis增加骨髓卵白蛋白-(卵子)致敏小鼠,这表明5-lipoxygenase (5-LO)产品有助于血液反应实验哮喘模型。我们探索5-LO之间的关系,中央和嗜酸性粒细胞外围和12月的有效性,使用PAS或BALB / c小鼠和5-LO-deficient突变体。我们量化嗜酸性粒细胞数量在刚收获或培养的骨髓,腹腔灌洗液,脾脏,有或没有管理代白三烯抑制剂(DEC和MK886)和cisteinyl-leukotriene I型受体拮抗剂(montelukast)。在骨髓嗜酸性粒细胞数目的增加,在敏化/挑战野生型老鼠,被废除MK886和12月预处理。ALOX突变体,相比之下,没有增加骨髓嗜酸性粒细胞计数,或嗜酸性粒细胞生产文化,以响应敏感/挑战。在敏化/挑战ALOX老鼠,challenge-induced迁移腹膜腔的嗜酸性粒细胞明显减少相对于野生型不控制。12月在ALOX老鼠无效,如预期的作用机制依赖5-LO。在BALB / c小鼠,挑战明显增加脾嗜酸性粒细胞数量和增加12月治疗预防。总的来说,5-LO表现为全身血液对过敏原反应不可或缺的挑战,以及12月的有效性。
1。介绍
,有相当多的证据表明,嗜酸性粒细胞炎性浸润特点的突出特征直接过敏反应,和相关的慢性病,包括过敏性哮喘(1- - - - - -3),发挥致病的作用通过释放颗粒细胞毒性蛋白,细胞因子和脂质介质(4- - - - - -6]。急性嗜酸性炎症,浸润嗜酸性粒细胞最终死亡通过细胞凋亡和由常驻巨噬细胞清除,导致决议(7]。相比之下,持续增加骨髓嗜酸性粒细胞生产(eosinopoiesis),以及长期生存的周围炎症,慢性过敏性炎症被认为是促进人类和老鼠8- - - - - -10]。此外,有证据表明,嗜酸性粒细胞祖细胞积聚在致敏小鼠的肺挑战,表明骨髓eosinopoiesis也会导致血液反应对过敏原(11,12]。
有兴趣描述机制,确保eosinopoiesis选择性增加,内部和外部的骨髓,暴露于过敏原致敏科目的挑战。这些机制最初显示系统,因为骨髓不直接暴露于过敏原但响应因素生成的肺部,这是明显的在等离子体传输协议(9]。最近,TNF -α和应激激素肾上腺酮释放的肾上腺,被证明是需要增加eosinopoiesis针对过敏原致敏小鼠的挑战[10]。然而,无论是TNF -α和皮质甾酮eosinophil-selective的效果,他们的生产并不局限于敏化/挑战的动物。这凸显了需要识别额外的耦合元素可以占eosinophil-selective骨髓造血作用的响应在骨髓或网站。这里我们有检查是否5-lipoxygenase (5-LO)通路发挥作用的血液对过敏原的挑战,可能由许多建议观察,临床和实验。
5-LO生成各种介质,通过专门的终端酶的作用不同的表达在不同的细胞类型,它作用于初始5-LO产品及其衍生品,像白三烯(LT) A4,产生白三烯B4, cysteinyl-leukotrienes (CysLT) LTC4, LTD4, LTE4 [13- - - - - -15]。有证据的一个重要的角色CysLT在哮喘等过敏性疾病的病理生理学与临床一致阻止他们合成的好处或他们的行为13- - - - - -15]。细胞表达5-LO存在于骨髓,骨髓造血细胞和其他网站应对5-LO产品,特别是CysLT [16- - - - - -18]。嗜酸性粒细胞产生和应对CysLT [4]。刺激骨髓文化白介素(IL) 5,主要eosinopoiesis-promoting细胞因子和lineage-specific生存因子(1- - - - - -3,7,17),体内添加CysLT,显著提高eosinopoiesis [19,20.]。此外,1型CysLT受体(CysLT1R)调解增强行为的非甾体类抗炎药、消炎痛、阿司匹林(19],proallergic细胞因子,eotaxin / CCL11和白介素(IL) -13 (20.eosinopoiesis]。最后,CysLT保护发展中嗜酸性粒细胞proapoptotic各种炎症介质的影响,包括前列腺素(PG) E2 (16)和干扰素(IFN)γ(Gaspar-Elsas Queto et al .,提交)。
尽管IL-5信号通过一个常见β链(βc),这也是使用gm - csf和IL-3信号通过自己的受体,IL-5,与其他细胞因子在这个小组,是嗜酸性粒细胞血统和优先表达对于生理eosinopoiesis[是必要的21]。因此,IL-5和5-LO产品之间的交互在活的有机体内可以促进lineage-specific血液对过敏原的挑战。在骨髓文化虽然观察表明这种可能性,从天真的老鼠,他们是由骨髓后添加外源性代理(CysLT;非甾体抗炎药;细胞因子)。另一方面,启发性的证据得到小鼠哮喘模型,通过有益的示范乙胺嗪(12月),一种antifilarial药物(22]。12月,抑制白三烯的合成(23),废除了eosinopoietic过敏原致敏小鼠的挑战,以及在挑战肺嗜酸性粒细胞浸润[24,25]。这个观察指出,白细胞三烯的可能性,在活的有机体内这些挑战后,导致血液反应条件和抑制白三烯的合成由12月构成其有效性。如果是这样的话,类似的效果应该是可论证的5-LO动物提交封锁或失活的通路,独立于12月。
这一假设,在致敏试验和挑战野生型老鼠不同的菌株,以及在缺乏5-LO突变体,通过评估不同药物的有效性能够干扰白三烯的合成,或与CysLT1R信号,防止骨髓对过敏原反应。此外,我们检查了敏化的影响和挑战在脾脏嗜酸性粒细胞的积累,以及12月在预防的有效性这个组件的血液学的应对挑战。
2。方法
2.1。试剂
FCS是Hyclone(洛根,UT);文化媒体从RHyClone RPMI 1640、Thermoscientific(沃尔瑟姆,MA);重组小鼠interleukin-5 (IL-5)从研发系统(明尼阿波利斯,美国);II级卵清蛋白(猫。A5253)、甲基纤维素(猫。M0387)σ(圣路易斯,密苏里州,美国);硫酸铝铵(AlNH4(所以4)2h·122O,明矾](猫。01 s1048.01.af)(制造商、合成器、巴西),V级卵清蛋白(猫。950 512),从ICN生物医学(美国);和MK886(猫。10133),montelukast(猫。10008318),从开曼群岛化学(美国)。
2.2。动物供应商和伦理方面
野生型老鼠的BALB / c和129 s2 / SvPas (PAS)菌株和129 s2 / SvPas-Alox (ALOX)突变体缺乏功能性5-lipoxygenase基因(26CECAL-FIOCRUZ),饲养,里约热内卢,巴西,在6 - 8周的使用年龄敏感,挑战,和药物治疗实验在活的有机体内和骨髓细胞的来源体外分析、制度批准后(CEUA-FIOCRUZ # L-010/04 CEUA-FIOCRUZ # L-002/09, CEUA-CCS-UFRJ 181)协议。
2.3。动物的过程
老鼠和两皮下注射卵白蛋白致敏(100μg卵白蛋白混合1.6毫克明矾总量的0.4毫升生理盐水),7、14天分开(24]。接收到的动物之一鼻内挑战(10μg级V卵子/ 25μL(生理盐水)14天或三个鼻内挑战(25μg级V卵子/ 25μL(生理盐水)天19日,20日和21日。选择挑战协议被用于选定的实验:气溶胶在第14天挑战,一次,1 h, PBS二级卵白蛋白为2.5%,腹腔内挑战,有一次,在第14天,10μg级V卵巢/ 400μ生理盐水的L。在选定的实验中,小鼠接受MK886口服,1毫克/公斤,0.1%甲基纤维素/去离子水,在天13日和14日,后者剂量被管理前1 h的挑战。控制了甲基纤维素。在选定的实验中,小鼠接受口头,12月12毫克/公斤,在去离子水中,12天开始在第14天或天19日,20日和12月21日,治疗前2 h每日的挑战。控制收到同样体积的汽车(24]。在选定的实验中,小鼠montelukast口头,10毫克/公斤,2% DMSO / PBS 1 x,管理1 h之前的挑战。控制了2% DMSO / PBS 1 x车辆。
2.4。样品收集
动物被提交给安乐死在有限公司2室。腹腔灌洗液收集洗后3 x 10毫升的腹膜腔冷却RPMI1640介质(血清)使用22 g针(26]。复苏通常8 - 9毫升注射体积。样品是离心机和细胞颗粒resuspended 2毫升1% FCS相同的介质,对总(在土耳其稀释后的染色)和微分(嗜伊红染色后过氧化物酶;(27,28分别])指望血球计和cytocentrifuge幻灯片。脾细胞准备从个人脾脏单个细胞悬浊液表示,剁脾用剪刀和针头和反复传递细胞悬液通过一个注射器针头。总有核细胞和嗜酸性粒细胞的数量是由血细胞计数器和cytocentrifugate计数,如上所述。
2.5。骨髓的研究
从股骨骨髓细胞收集个人天真的老鼠,水洗,在血球计算,播种在1061毫升的RPMI 1640中,10% FCS, rmIL-5 (1 ng / mL;最佳浓度,正如前面定义的(29日在48-well集群),孵化在37°C, 5%的公司2空气/ 95%,7天。Eosinopoiesis在液体培养严格依赖IL-5,和文化条件适合展示增强和抑制效应(9,29日,30.]。细胞存在于7天文化resuspended,收集、统计,cytocentrifuged,嗜酸性粒细胞过氧化物酶染色(促红细胞生成素;cyanide-resistant过氧化物酶),小鼠嗜酸性粒细胞lineage-specific标记,目前从最早的前身终末分化嗜酸性粒细胞(27,28),和详细分9]。
2.6。统计分析
数据(均值±SEM)分析析因方差分析与图基HSD校正组同等大小,使用Systat的Windows版本4软件Systat Inc .(埃文斯顿IL) [10]。大小不等的团体,Bonferroni调整使用(9]。被认为是显著的。
3所示。结果
3.1。5-LO不足也取消了造血应对过敏原致敏小鼠的挑战
我们最初5-LO通路的完整性是否检查过敏原挑战所需的诱导骨髓嗜酸性粒细胞增加生产。图1显示了敏化的结果和鼻内((a) (b))或腹腔内((c) - (f))的挑战与卵子5-LO-deficient ALOX小鼠和野生型控制(PAS)相同的遗传背景。不是老鼠,促红细胞生成素的数量+刚收获的股骨骨髓细胞从卵子/卵子显著增加(图1(一)),相对于卵子/ SAL控制,正如以前报道的其他近交品系小鼠(BALB / c和C57BL / 6)。相比之下,与卵子ALOX突变体敏化和挑战,没有天0 EPO +细胞数量显著增加,相对于各自的卵子/ SAL控制(图1(一))。不是老鼠的反应是eosinophil-lineage选择性,因为我们没有观察到显著差异总数量的骨髓有核细胞(所有血统认为)在这些条件(图1 (b))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
我们下一个检查是否要求5-LO也是显而易见的挑战是通过腹腔内路线时,没有参与的航空公司。不是老鼠,以应对i.p。卵子挑战,显著增加促红细胞生成素+骨髓细胞的数量,与卵子相比/ SAL控制(图1 (c))。另外,ip挑战诱导,正如所料,嗜酸性粒细胞积累腹膜腔的挑战不是老鼠,这是重要的(),相对于卵子/ SAL控制(图1 (d))。相比之下,OVA-challenged ALOX小鼠没有表现出显著增加在刚收获的骨髓嗜酸性粒细胞的数量,相对于各自的卵子/ SAL控制(图1 (c))。然而,ALOX小鼠呈现显著的嗜酸性粒细胞的积累挑战网站(腹腔)相比,相同的控制(图1 (d))。尽管响应的统计显著性,其大小相当于不超过三分之一的野生型控制。重要的是,该协议允许我们区分挑战影响骨髓和站点周边的挑战,后者是减少,但不废除,5-LO不足,前者形成鲜明对比。
因为还包括中性粒细胞浸润人口和已知应对5-LO-derived化学引诱物,如LTB4 [26),我们还研究了小鼠的腹腔灌洗液中性粒细胞数量在这些实验小组。有显著增加,中性粒细胞计数相对于挑战控制ip挑战不是控制,但不是在ALOX老鼠(图1 (e))。这表明5-LO-deficiency,正如所料,影响中性粒细胞迁移,除了迁移的嗜酸性粒细胞(26]。总细胞数,其中包括单核吞噬细胞(单核细胞/巨噬细胞的重要组成部分[26]),用很少的淋巴细胞,显著增加了过敏原的挑战不是和ALOX老鼠(图1 (f)),显示,嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞迁移的减少并不是因为白细胞招聘的一般故障。
排除这些观察的可能性在某种程度上依赖于微观读出系统,其中包括人类观察者,我们执行额外的控制使用一个自动检测嗜伊红的过氧化物酶(9]。之前报道,促红细胞生成素测量活动是在良好的协议与促红细胞生成素的微观得分+细胞(没有显示)。
启动在活的有机体内增加体外应对eosinophil-selective生长分化因子、白介素(IL) 5,是血液的重要组成部分对过敏原的挑战[9),相似之处在活的有机体内嗜酸性粒细胞但独立监管(29日]。我们检查是否启动也依赖5-LO的功能完整性。如图2与卵子不是小鼠致敏和挑战,在骨髓嗜酸性粒细胞生产文化建立与IL-5显著增加,相对于各自的卵子/ SAL控制。相比之下,在ALOX老鼠,类似的增加没有被观察到。嗜酸性粒细胞的差异两株小鼠卵子/卵子之间生产是非常重要的。
3.2。药理5-LO通路的封锁阻止骨髓应对挑战
我们已经检查了5-LO血液反应的过敏原的关系通过一个独立的挑战,药理方法,通过使用5-lipoxygenase激活蛋白的抑制剂抑制剂,MK886,阻止5-LO通路在挑战(图3)。BALB / c小鼠致敏与卵子和挑战通过气溶胶(图3(一个))或ip注入(图3 (b))。致敏小鼠、处理车辆之前挑战与卵子(卵子/ VEIC卵子),提出了一个显著增加促红细胞生成素+细胞数量刚刚捕捞上来的骨髓,相对于saline-challenged控制(卵子/ VEIC / SAL)。治疗前MK886卵子挑战(卵子/可卵子)阻止骨髓嗜酸性粒细胞对过敏原的增加的挑战,通过气溶胶(图3(一个)(图)和ip的路线3 (b)),如图所示的显著差异相对于各自的卵子/ VEIC卵子控制。
(一)
(b)
3.3。12月的有效性在敏化/挑战小鼠的骨髓抑制Eosinopoiesis取决于5-LO
如果12月在过敏性肺部炎症的影响是由抑制白三烯的合成,12月应该有效的小鼠可以产生白细胞三烯而不是5-LO缺乏动物,这表明其有效性不涉及二次药理机制与5-LO无关。我们最初测试这个假设使用重复挑战在为期3天的时期,在12月12天的课程结束,因为这些是12月活动最初的条件证明(20.]。
图4显示12月治疗的效果在骨髓对过敏原的挑战,在野生型不是控制和突变ALOX老鼠。不是老鼠提交重复i.n.挑战(图4(一)),有一个数量的显著增加促红细胞生成素+刚收获的骨髓细胞从卵子/ VEIC卵子捐助者(积极的),相对于卵子/ VEIC SAL挑战(负面)控制。重要的是,这种增长是被预处理(12月卵子的区别/ 12月/卵子,卵子/ VEIC /卵子)。相比之下,ALOX老鼠没有显示增加骨髓嗜酸性粒细胞即使重复挑战,也不是一个重大变化的基线时使用12月这表明不是老鼠像其他菌株(BALB / c、C57BL / 6)为了应对这些实验条件(12月20.],ALOX老鼠,它们来自同一个背景但没有功能5-LO显示完全没有可检测血液应对挑战和12月。
(一)
(b)
这些观察结果扩展到气溶胶的挑战(图模型4 (b)),本质上相同的结果。不是控制显示重要的应对挑战(为积极的和消极的控制和之间的区别12月的区别治疗和积极的控制)。12月治疗saline-challenged控件本身没有影响,如图所示(前20.]。再次ALOX老鼠的嗜酸性粒细胞数量没有增加挑战后,也不是一个重要的应对12月在任何方向。
在一起,这些观察12月建立,在这些实验条件,有效5-LO和没有5-LO没有可检测的影响,这是符合这一假说的机制包括抑制白三烯的合成,而不是二次(即的假说。5-LO-independent)药理的目标。
我们进一步检查12月是否会影响嗜酸性粒细胞数量在脾脏,含有大量白细胞,,在特定情况下,能够支持骨髓造血作用。我们使用应变(BALB / c)和协议(i.n.挑战在三天时间内)最初用于演示的效果在12月allergen-stimulated骨髓嗜酸性粒细胞(24),可以肯定的是,12月是有效的在实验条件用于骨髓检查脾脏。意外,促红细胞生成素+细胞的数量在这些动物的脾脏明显受到过敏原的挑战和12月,尽管在相反的方面。
鼻内挑战诱导大量增加的嗜酸性粒细胞计数从敏化BALB / c小鼠的脾脏(图5)。这些代表超过5倍的股骨骨髓嗜酸性粒细胞计数相同的动物。这表明,在敏化和挑战老鼠的应变,脾脏积累,在三天时间内嗜酸性粒细胞的庞大的人口,我们的知识没有先前描述。最有趣的,这种扩张的脾嗜伊红池作为过敏原暴露的函数在航空公司由12月预处理可预防的,作为主要造血网站之前报道,骨髓(23]。此外,12月对脾脏的影响嗜酸性粒细胞计数显示相同的模式(图12月在骨髓嗜酸细胞增多症的影响5 (b)),因为(a)较短的12月,由于只有在挑战时期,和前面的每一个挑战,是传统的有效12天的课程;12月(b)的有效性将丢失,如果一个没有12月预处理挑战发生了接触。
(一)
(b)
3.4。影响CysLT I型受体拮抗剂,Montelukast,骨髓应对挑战
针对的有效性5-LO失活/封锁,一方面,12月,另一方面,在预防嗜酸性粒细胞在这个模型中,内部和外部的骨髓,重要的是要确定目标CysLT效果与CysLT I型受体拮抗剂一样有效。这样做是在ALOX不是老鼠和突变体(图6)。Montelukast废除了增加骨髓嗜酸性粒细胞计数由过敏原引起的挑战不是老鼠。相比之下,它没有影响嗜酸性粒细胞计数在敏化和挑战ALOX突变体。这表明montelukast一样有效删除5-LO在预防血液对过敏原的挑战和其有效性,正如所料,取决于CysLT的存在,不能在ALOX老鼠。
4所示。讨论
在这项研究中,我们进行了复查5-LO函数之间的关系,血液反应敏感和挑战过敏模型,和12月的有效性在这些条件下,通过一系列互补的方法。我们测试的假设,如果12月是通过抑制白三烯的合成作用,它的影响(20.)将复制小鼠骨髓的失活白三烯生物合成途径,以及其他药物作用于相同的目标。总的来说,有一个很好的协议通过这些不同的方法,观察和5-LO通路的一个重要的角色在小鼠血液对过敏原的挑战。
相同的实验表明,这是一个普遍现象,不仅限于气道挑战和过敏性肺部炎症,并进一步提供证据表明,嗜酸性粒细胞的骨髓(中央)和腹腔(外围)可以分离在特定的实验条件。
4.1。协议和互补基因失活和药理封锁的方法
ALOX突变体和PAS老鼠相同的背景提供了一个优秀的组合评估的影响5-LO失活(26在确认),非常有用的药物效果的关系存在功能性5-LO。
5-LO通路的抑制,我们选择MK886是因为它被认为是特定的14,15),不影响骨髓本身(19,20.]。重要的是,无论是MK886治疗还是5-LO失活显著改变基线EPO +细胞在骨髓,显示,既不影响稳态条件嗜酸性粒细胞生产。这符合先前发表的研究从ALOX小鼠嗜酸性粒细胞在活的有机体内(26),以及在体外(19,20.]。的影响因此,5-LO失活/封锁重要只是选择性增加eosinopoiesis从敏化引起的小鼠骨髓内在活的有机体内过敏原暴露,12月在小鼠过敏的主要影响24]。
相比之下,IL-5是必要的稳态(基线)生产和增加生产引发免疫反应,记录的古典Nishinakamura及其同事的研究(21]。因此,5-LO和IL-5互补和不同的角色,与IL-5 lineage-selective生长因子是必不可少的,虽然5-LO是必要的修改IL-5效应,最终导致嗜酸性粒细胞增加生产。
结合遗传和药理方法的有效性证明在本研究中我们5-LO之间建立联系的能力,12月的有效性和montelukast阻断血液应对挑战。这是通过显示这两种药物在野生型小鼠的影响,这对过敏原的挑战,在一起在突变体缺乏5-LO没有任何效果,不应对挑战。结论是基于积极的结果(封锁在野生型小鼠对过敏原的挑战),连同负控制结果(没有影响的药物在小鼠缺乏公认的药理目标,即5-LO通路)。
负控制分支的包容这些实验似乎不必要的甚至是夸张的,因为我们使用的药物可能被合理认为没有影响在动物缺乏挑战的生理反应,他们将阻止。然而,谨慎推荐当药物或药物面板中,评估,因为许多药物已被证明在过去的意想不到的行为,由于影响以前但一个个药理指标,不同于那些由调查人员承担相关。我们的研究结果是令人鼓舞的。乙胺嗪和montelukast有任何对小鼠缺乏5-LO嗜酸性粒细胞生产产生重大影响。montelukast,结果支持假设它是CysLT1受体的选择性。乙胺嗪,有生化效果除了抑制白三烯的生产(31日对其依赖),我们更有信心在ALOX骨髓5-LO因为它没有效果。
4.2。参与CysLT在活的有机体内
此外,我们有检查montelukast是否会重复的影响MK886和5-LO失活,如预期如果CysLT有关5-LO产品缺乏5-LO MK886的存在或无所作为。结果表明,montelukast MK886一样有效的野生型小鼠,像12月,在ALOX突变体不工作。这与过敏原的影响是一致的挑战在老鼠身上被CysLT占,之前所提出的人类研究,并认为对一个重要的角色LTB4或lipoxins不抵消CysLT受体封锁,在这个反应。进一步预测,老鼠缺乏CysLT I型受体应该像老鼠用montelukast预处理和没有eosinopoietic对过敏原的挑战,在以后的研究中应解决的问题。
4.3。启动在活的有机体内
启动的骨髓在活的有机体内增加体外应对IL-5在骨髓的文化是一个非常可再生的过敏原的影响[挑战9,10]。过敏原致敏动物的挑战不同的模型已被证明导致IL-5 [9,10,12)和CysLT生产(13,15]。Montelukast,块CysLT eosinopoiesis行动在体外(19,20.),是在活的有机体内阻止过敏原的主要影响骨髓的挑战,这是一个嗜酸性粒细胞计数增加,通常伴随着启动应对IL-5增加文化(9,10]。因此,它是合理的假设启动涉及CysLT的作用可以被montelukast因此由CysLT1R。
启动我们的实验发生后的48小时内的挑战,在此期间骨髓可能受到IL-5和CysLT。所以,CysLT不'嗜酸性粒细胞缺乏IL-5增加响应后续IL-5敞口。相反,骨髓的接触在活的有机体内IL-5和CysLT准备增加接触IL-5孤单。重要的是,这两个IL-5 [9)和5-LO / CysLT(如下所示)所需的血液对过敏原的挑战。这意味着可以占选择性增加eosinopoiesis IL-5和CysLT协同组合,其中IL-5 eosinophil-selective,而CysLT作用于细胞刺激IL-5加强IL-5效果。因为CysLT的目标取决于IL-5刺激,CysLT协同组合和IL-5一定是lineage-selective刺激。
在比较上述情况时应该谨慎的从天真(nonsensitized)小鼠骨髓的文化建立19,20.]。它已经表明,CysLT,当补充道在体外加上IL-5,显著提高嗜酸性粒细胞在骨髓的文化的生产(19,20.]。在这些条件下,缺乏IL-5 CysLT是无效的,因为他们不支持在骨髓嗜酸性粒细胞生产文化本身(未发表的观察)。虽然可以将启动研究在体外,由不同的文化启动代理(CysLT)和生长因子(IL-5),这可能是丰富的在体外情况下,可以控制曝光时间(外生)白三烯和IL-5。这个实验设计不能外推到事件的分析在活的有机体内,这样的操作不能没有改变整个研究的基本条件。
4.4。类似的效果
最后,一个意想不到的发现研究的12月5-LO是其有效性的关系对脾脏的嗜酸性粒细胞的大规模积累敏化/挑战BALB / c小鼠,诱导的挑战,因此建立在3天(重复挑战时期)。几行嗜酸性粒细胞的积累的证据表明,在这两个网站(脾和骨髓)是一个集成的一部分血液响应敏感和挑战。嗜酸性粒细胞在这两个网站是(a)引起的挑战在BALB / c小鼠相同的三天;(b)预防具有相同效果的长期(12天)和短期(三天)12月的课程;和(c)对治疗12月后一个不受保护的挑战[20.]。
嗜酸性粒细胞反应脾脏的大小本身就是令人惊讶,因为它很大程度上超过计数在股骨骨髓,表明后的挑战脾脏可能很快成为嗜酸性粒细胞体内最大的水库显然,通过leukotriene-dependent机制值得进一步检查,通过它的大小以及12月治疗的快速响应能力。
这一现象,据我们所知,没有过敏疾病的小鼠模型中描述。然而,有报道称脾嗜伊红血球过多的人类,与致命的过敏反应,由大量平行在脾组织中肥大细胞脱颗粒,这一发现表明,脾脏是一个重大的系统性过敏休克器官(32]。如果是这样,在小鼠模型的研究结果表明,大量积累的嗜酸性粒细胞脾也发生在非致命的过敏反应,并依赖于5-LO和12月治疗的反应。这将导致未来12月的考试可能的好处治疗系统性过敏反应的模型。
4.5。伊诺的关系
这些研究结果的一个重要含义是12月行动的机制在血液对过敏原的挑战必须重新评估,考虑到它需要5-LO。先前的研究[24,25]显示12月效果依赖于诱导没有合酶,这是一个重要的组成部分,proapoptotic通路激活各种可溶性配体(30.]。目前的研究表明12月是不可能直接诱发或激活伊诺,观察12月的没有影响5-LO-deficient老鼠。然而,可能有间接关系的12月进气阀打开,进气阀打开激活或表达在敏化/挑战小鼠的骨髓需要5-LO的封锁。这应该是将来检查,通过直接监测伊诺和5-LO骨髓暴露于相同的面板在这项研究中使用的药物。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
确认
本文从CNPq奖学金支持Daniela Masid-de-Brito(博士生奖学金)和佩德罗Xavier-Elsas和玛丽亚Ignez五车二Gaspar-Elsas(研究生产力奖学金)研究经费从CNPq (470377/2011-9 Edital通用)和FAPERJ (E26/103.138/2011 Cientista Nosso Estado)和e - 26 - 112.694 - 2012(协作网络免疫调制剂),佩德罗Xavier-Elsas。