文摘
过度的能源管理导致低级,慢性炎症,这是一个重要因素预测非传染性疾病。反过来,炎症、氧化和新陈代谢的过程与这些疾病;线粒体功能障碍似乎是在十字路口的相互关系。在炎症免疫细胞的迁移是由趋化因子和趋化因子受体之间的相互作用。趋化因子,特别是C-C-chemokine配体2 (CCL2),各种附加功能,参与维护正常的新陈代谢。我们假设一个无处不在的和连续的分泌CCL2可能代表的轻度慢性炎症动物模型,在能量盈余,可以帮助确定上述关系和/或搜索特定的治疗方法。这里,我们现在初步数据创建一个小鼠模型通过使用目标基因敲入技术集成CCl2基因的额外拷贝Gt (ROSA) 26 sor轨迹的小鼠胚胎干细胞的基因通过同源重组。短期饮食操作进行评估和调查结果包括代谢障碍、过早死亡,巨噬细胞可塑性和自噬的操纵。这些结果为未来的研究提出一些机械问题。
1。介绍
能量摄入过多是当前人类生活方式的一部分,导致慢性炎症的慢性系统性风险,被认为扮演一个角色在动脉粥样硬化的发展,癌症和其他的非传染性疾病。同时,也似是而非的长期后果长期炎症加剧连续的有害影响养分盈余(1- - - - - -3]。
免疫系统和新陈代谢之间有密切联系4,5]。在炎症过程中,全身代谢压力下,和精力过剩的管理可以妥协代谢之间的关系,氧化和炎症。我们认为,寻找一个适当的动物模型(6)可能会让我们更好地了解疾病的发病机理。
趋化因子是有前途的候选人为这样一个模型的设计。有些趋化因子的功能与免疫细胞的迁移和趋化因子对正确的新陈代谢功能很重要。在人类中,碳碳趋化因子配体2 (CCL2;以前称为MCP-1或单核细胞化学引诱物蛋白1)可能是炎症的标记;它是在非传染性疾病和参与各种代谢功能(7]。实际上,CCL2修改脂质和葡萄糖代谢,导致胰岛素抵抗和肝脂肪变性8- - - - - -11]。值得注意的是,循环趋化因子引起和维持代谢紊乱可能逆转的消炎药,和趋化因子的作用可能是因果和诱发因素12,13]。而不是本地超表达(14- - - - - -17),现在承认CCL2蛋白质和mRNA表达在绝大多数的组织,建议系统生产和反应能力原位炎症刺激(18,19]。
因此,我们提出具有挑战性的动物模型,系统过度表现CCL2与富含脂肪和胆固醇的饮食可以帮助评估慢性炎症的作用,以应对过度的能量摄入。然后我们开始整合的一个副本Ccl2Gt (ROSA) 26 sor基因(通常称为ROSA26)轨迹的小鼠基因组通过同源重组胚胎干细胞(ES)生成靶向转基因小鼠20.- - - - - -22)过表达CCL2在所有组织。初步的数据是有前途和对未来研究建议一些机械问题。
2。材料和方法
2.1。动物的处理
所有程序和实验协议被核准的动物实验伦理审查委员会大学·罗维拉我Virgili。基本协议组织收集、饮食、分配隐藏和代谢评估老鼠已经详细描述(6,18,23]。菌株backcrossed > 10代C57BL / 6 j小鼠和纯合子地维护。同窝出生没有突变被用作控制(WT)。我们还提供数据从淘汰赛(KO) CCL2(方便backcrossed),购买的杰克逊实验室(萨克拉门托,CA)。饮食实验始于10周的年龄,当所有菌株显示相似的表型。避免不成熟的脂肪细胞模型的影响,大多数结果在6到14周的治疗后不同群体(16 - 24尸体resp)。探讨饮食的影响,从每组小鼠喂养食物(Teklad啮齿动物的饮食;哈伦,西班牙巴塞罗那)或高脂肪饮食(FuttermittelfurMause;SSniff spezial diaten,所以,德国)和监督下笼无限期。所有实验种群的繁殖进行了在我们的设施,和子代保持密切监视之下。 The animals were not kept under germ-free conditions.
2.2。有针对性的转基因小鼠(TG)
通过基因靶向诱导转基因模型生成敲入(KI),也就是说,复制基因,方法使用标准方法和专利技术从Ozgene(宾利、佤族、澳大利亚)。信使rna序列对应鼠标Ccl2(NM_011333和ENSMUSG00000035385)基因位于染色体11。有3个外显子的基因分布在大约3 Kb。基因片段是来自C57BL / 6基因组DNA (PCR引物AGCAAGATGATCCCAATGAGTAGGC和GAGGTGGTTGTGGAAAAGGTAGTGG)插入的基因打靶ROSA26轨迹。上游调控元件的转录调节很重要Ccl2基因。人类泛素启动子(Ubic)被选为转基因产生高层次的表达。loxP-flanked停止盒式UbiC后阻止转录的基因启动子(见图1网上S1和S2和补充材料http://dx.doi.org/10.1155/2013/953841)。停止使用cre盒可以删除。选择磁带,PGK-Neo-SD-IS插入的下游Ccl2基因进行同源重组事件。老鼠和人类之间的ROSA26轨迹是守恒的。位置是常染色体(6号染色体)和积极转录在大多数组织(图1)。此外,表观遗传失活是不可能的(21,24- - - - - -26]。
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基因打靶和ES细胞技术利用同源重组提供了优于其他技术(27- - - - - -31日S3)](补充材料。小鼠可按照客户要求定制。
2.3。免疫病理研究和评估肝脏脂肪变性
部分的器官和组织都是冻结在氮或在磷酸盐4%福尔马林固定24小时在室温下,用水洗了两次,在4°C存储在70%的乙醇,嵌入在石蜡进行组织学分析。初级和二级抗体得到从圣克鲁斯生物技术(德国海德堡)和Serotec(英国牛津大学)18,32]。与美国广播公司(ABC)过氧化物酶系统进行检测(向量,伯林盖姆,CA)使用轻拍(Dako、斯特鲁普、丹麦)作为衬底。评估特异性,主要控制抗体被省略了。肝脂肪变性是评估如前所述6]。
2.4。实验室测量
我们测量小鼠CCL2在血浆、血清和组织通过ELISA (Peprotech、伦敦、英国),根据制造商的指示。重组体人CCL2抗原被用作分析标准化的校准器,我们发现弱与其它趋化因子大,尤其是CCL7。intraassay系数的变异< 3.2%,变异的interassay < 9.1%。其他生化测量进行自动分析器使用商用试剂作为描述(6,33]。选择组织被单一化使用Precellys 24系统(Izasa,巴塞罗那,西班牙)肾上腺素珠管缓冲的选择。分数的单一化肝脏免疫印迹(描述34),利用抗体和试剂从圣克鲁斯生物技术(德国海德堡)。
2.5。透射电子显微镜法
小块的肝脏就固定在0.1甲次砷酸盐缓冲,2%的戊二醛溶液pH值7.4。样本然后在1%四氧化锇(OsO后缀4)顺序步骤2 h和脱水的丙酮树脂的浸渍前增加浓度丙酮在24小时内。Semithin部分沾1%甲苯胺蓝(500海里)。超薄部分(70海里)使用钻石刀,随后被削减double-stained与醋酸双氧铀及柠檬酸铅,并分析了用透射电子显微镜(日立,东京,日本)。
2.6。描述鼠标骨骨髓来源的巨噬细胞
如前所述(执行的方法35]。骨髓细胞被去除孤立的腿骨WT和TG老鼠(年龄在10周),培养24小时。漂浮细胞被删除,剩下的细胞进行分析。细胞在DMEM进一步培养补充10%灭活胎牛血清,50μM beta-mercaptoethanol, 1000 U /毫升小鼠集落刺激因子(gm - csf)或25 ng / mL人类巨噬细胞集落刺激因子(csf) (ImmunoTools Friesoythe,德国)提供分化激活细胞M1和M2作为功能可塑性的一个简化的描述符。巨噬细胞活化的影响,评估服用100 ng / mL大肠杆菌055:B5脂多糖(LPS) 24小时,相比之下,各自的未经处理的控制。这种治疗后,上层清液从M1 (gm - csf)和M2 (csf)巨噬细胞检测CCL2,肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子α)、白介素10 (il - 10)使用ELISA (BioLegend, Inc .,马德里,西班牙)。总RNA提取使用RNeasy工具包(试剂盒,巴塞罗那,西班牙),retrotranscribed使用逆转录系统工具包(应用生物系统公司;表达载体,西班牙巴塞罗那)。寡核苷酸为选定的基因设计根据罗氏软件定量实时PCR(通用探针罗氏库),使用LightCycler执行480年(罗氏诊断,巴塞罗那,西班牙)。的分析进行了一式三份,结果正常化根据tata结合蛋白mRNA的表达水平。碳碳趋化因子受体2型(CCR2或CD192)、肿瘤坏死因子α抑制素β(INHBA),诱导一氧化氮合酶(间接宾语),7 (CCR7)碳碳趋化因子受体类型,Egl九同族体3 (EGLN3)被选为M1标记。精氨酸酶(ARG) EMR1 / F4/80胰岛素生长因子- 1 (IGF1), il - 10,甘露糖受体CD206,增长arrest-specific 6 (GAS6)被选为M2标记。
2.7。统计分析
使用Kolmogorov-Smirnov的常态分布的评估方法。变量使用Mann-Whitney测试或克鲁斯卡尔-沃利斯相比单向分析调整为多个测试。除非另有指示,数字代表中的值均值和SEM 8组小鼠获得的。的χ2测试是用于比较分类变量。对于所有的测试中,我们使用SPSS (SPSS Inc .,芝加哥,IL)或GraphPad棱镜软件(http://www.graphpad.com/scientific-software/prism/)。
3所示。结果
3.1。针对转基因老鼠不显示身体异常
有针对性的突变的小鼠是可行的,肥沃的,正常的尺寸和重量。动物不会显示明显的行为或生殖缺陷。的转基因插入一个副本出现在定义站点,它允许简单的基因型(图2)和消除可能的不稳定,独立隔离在繁殖期间,染色体和不可预知的职位。
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这一战略的另一个优点是Cre /液态氧复合系统,促进了组织过度。Ubic受制于一个Lox-Stop-Lox (LSL)元素激活Cre-mediated使用适当的切除,组织Cre压力。
3.2。转基因小鼠CCL2过表达在选定的组织,和循环蛋白增加对控制
,转基因小鼠表现出更多CCL2蛋白在所有组织检查对WT动物。的差异随着年龄的增加,还有小相对差异组织(图3)。我们确认CCL2免疫所有选定的组织中发现的转基因小鼠。CCL2 mRNA表达的转基因老鼠也在不同类型的细胞对WT老鼠。CCL2表达量较高的设计时期接触后脂肪含量高的饮食。值得注意的是,血清和血浆CCL2也在转基因小鼠高于WT老鼠,这是最有可能造成CCL2分泌由多个组织。按照以前的观测,血浆浓度与血清浓度不同。差异可能引起的凝血和处理,但转基因小鼠的差异没有统计学意义。值得注意的是,CCL2 KO小鼠中发现,但强度有所减弱。这很可能是因为定量较小的交叉反应,所述的方法。
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3.3。饮食因素影响体重和脂肪细胞的大小
当老鼠常规食物的饮食,我们没有观察到显著差异在组间体重增加。三个菌株的累计食物摄入量是相同的。相反,当喂食高脂肪的饮食,转基因动物和WT动物肥胖发展。值得注意的是,男性C57BL / 6 j小鼠模型是一种常用的食源性肥胖的36]。后立即CCL2超表达的影响是明显的高热量饮食的摄入,和比WT老鼠体重增加更快。没有CCL2,然而,从过度保护KO小鼠体重增加。缺乏显著差异CCL2的食物摄入量排除任何影响食欲(图4)。
超表达CCL2也增加了脂肪细胞的大小。数据提出了附睾脂肪组织(图5),但是效果是类似的其他脂肪组织。CCL2转基因动物的脂肪细胞大小明显高于与WT和KO动物相比美联储与饮食,但不同的是高当老鼠的饮食高热量的内容。不同类型的脂肪组织的重量时,我们发现一个食物饮食的老鼠显示菌株之间没有显著差异,可能除了腹股沟的组织。相反,增加脂肪的饮食导致显著增加小鼠的体重从其他仓库的白色脂肪组织CCL2超表达。值得注意的是,没有影响褐色脂肪组织(图的重量6和补充材料S4)。然而,这些差异在脂肪组织中组织重量与高脂肪饮食当老鼠消失了14周。这些结果可能表明一个已经报道的影响脂肪组织改造在高脂肪饮食摄入量的后果37)(S5补充材料)。
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3.4。食源性干扰葡萄糖和脂质代谢
葡萄糖耐量测试(胰岛素抵抗)的代理人未受影响菌株喂食物的饮食在6周的实验时间。WT的同胞,KO,转基因老鼠喂食高脂肪食物时显示异常值,证实了饮食的影响在胰岛素抵抗的发病机制和暗示这个短期干预不是足够的调查可能的角色,如果有的话)的CCL2代葡萄糖和脂质紊乱。此外,没有差异的菌株禁食6小时后血浆葡萄糖水平,和禁食状态,3小时后我们发现基线血糖浓度明显高于在CCL2 overexpressing老鼠对CCL2缺乏动物。这种效应更明显在转基因小鼠血浆葡萄糖(补充材料S6),但差异消失了14周的饮食治疗后提出不成熟脂肪组织改造(38]。
当这些测试被执行在动物喂食高脂肪饮食较长的实验段14周脂肪组织已经模仿,缺乏胰岛素耐受性的差异是维护,可能表明CCL2超表达的影响在胰岛素抵抗的发病机制是微不足道的。
然而,结果没有CCL2表明该趋化因子可能修改葡萄糖代谢,因此我们不能抛弃的影响下更加激烈代谢压力(9]。血浆胆固醇和甘油三酯浓度的变化是最小的菌株在16周。高脂肪饮食的数量显著增加循环胆固醇,在CCL2 overexpressing高老鼠产生影响。相反,有意想不到的,最有可能不代表,这些小鼠的血浆甘油三酯浓度的变化由于饮食操作(数据没有显示)。
3.5。CCL2和饮食操作在肝脏的影响
美联储chow饮食时,老鼠没有显示显著差异菌株中他们的肝脏组织的出现。脂肪变性的分数没有检测菌株之间的显著差异,虽然发现了一些微小的变化(图7),不与肝脏脂质含量(数据没有显示)。老鼠被喂以高脂肪食物的时候,我们发现一定数量的脂质积累在WT老鼠,但这在转基因小鼠脂质积累明显更明显。相反,没有脂质积累KO小鼠(图7)。因此,CCL2在这些条件下的影响直接相关的组织CCL2处理;没有CCL2防止肝脂肪变性,和超表达CCL2容易使肝脏脂肪变性。我们还发现在肝脏脂肪酸合成酶的表达显著增加在所有菌株喂高脂肪的食物,但没有明显差异比较转基因和KO小鼠。我们也探讨了激活的磷酸化活化蛋白激酶(AMPK),和价值观并没有改变由于高脂肪饮食在转基因小鼠和显著高于在KO小鼠相比,转基因小鼠(辅料S7)。
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当肝脏检查F4/80抗原的存在,一个被广泛接受的巨噬细胞的标记,我们发现膳食脂肪和超表达CCL2修改尺寸,数量和形态的肝巨噬细胞(图8和补充材料S8)。值得注意的是,F4/80染色细胞在KO小鼠更频繁,发现值得进一步研究,因为这些结果可能代表函数的变化,可能是负责CCL2微分作用的肝脏脂肪变性。然后,我们探索CCL2和饮食的影响线粒体生物起源。基于矩阵的外观,线粒体是健康食物的饮食比“饮食”的白鼠喂食高脂肪的饮食。矩阵也始终少电子致密的转基因小鼠。我们还发现融合动力学改变。在转基因小鼠食物饮食的情况下,向线粒体融合过程是不平衡的,但饮食操纵极大地引起了转向裂变。WT老鼠的变化类似,但饮食定量的影响明显小于在转基因小鼠。然而在KO小鼠,每单元有更多的线粒体,聚变和裂变是正确的平衡,显然不是改变饮食的差异。这些研究结果强烈支持进一步的机械的研究,这可能联系的表达与线粒体生物起源CCL2,炎症,和能源管理。 According to our results, these putative mechanisms are related to the autophagic response, which was clearly enhanced in transgenic mice. Conversely, most liver cells in WT and KO displayed no evidence of autophagy (Figure9)。
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3.6。转基因小鼠过多表达CCL2过早死亡当喂食高脂肪的饮食
转基因老鼠用高脂肪饮食喂养过早去世10至14个月。老鼠逐步减少活动,减少食物摄入量和脆弱的外表变得明显。也有伤亡的转基因食物饮食的老鼠,但突然,意想不到的,没有之前的体重下降或活动。的伤亡,也观察到在WT组喂高脂肪的食物(辅料S9)。执行一个完整的解剖,死因是不确定的。有癌症和动脉硬化这些动物,但也有一些皮肤的,肤浅的,局部的皮肤病变伴有局部脱发。也没有脓毒症的证据。唯一显著结果仅限于脾脏和肝脏。脾的大小和重量是一致的转基因老鼠喂食高脂肪的饮食。在这些转基因小鼠脾肿大的存在符合巨细胞的存在被认定为巨核细胞(VIII因子阳性染色)和其他增生性的迹象。 The weight of the liver was also higher in the transgenic mice, which is most likely due to the higher presence of steatosis. In the liver, there were signs of regenerative cells and increased apoptosis. Ongoing studies with higher sample sizes and the inclusion of females have been designed to further ascertain this point.
3.7。转基因小鼠的骨髓巨噬细胞:选择细胞因子和mRNA的表达
CCL2 mRNA表达在骨髓巨噬细胞在转基因高于WT老鼠,不管刺激与gm - csf (M1,促炎)或- csf (M2,吞噬)。选中的M2标记的mRNA表达相似,与低或检测不到表达gm - csf中巨噬细胞没有转基因和WT老鼠之间的差异。选中的M1标记的表达实际上是相同的gm - csf巨噬细胞从TG和WT老鼠,CCR7的例外。令人惊讶的是,这个趋化因子受体的表达在TG显著降低小鼠,表明低促炎症活动。M1标记的表达- csf巨噬细胞表现出独特而显著减少CCR2 mRNA表达;然而,一些M2标记,包括CD 206, GAS6,也和IGF1 underexpressed。il - 10表达也下降,但差异未达到统计上的显著水平。结果表明,CCL2过度可能改变巨噬细胞分化。因此,选择细胞因子的分泌是检查相比,接受有限合伙人和巨噬细胞都与相关的控制。CCL2分泌高TG与治疗相比WT老鼠和老鼠高出2 - 4倍- csf巨噬细胞(2-4-fold变化)。 The IL-10 secretion was clearly detectable only in LPS-treated animals. The concentration in the supernatant was higher in TG than in WT mice, and the differences were statistically significant in GM-CSF macrophages. Finally, TNFα分泌表面上是高LPS-treated动物和TG显著提高小鼠对相关控制(数字10和11)。
4所示。讨论
在这项研究中开发的转基因小鼠系统性CCL2过表达。这些动物被创造来评估招聘的综合效应的循环单核细胞组织和响应刺激的高膳食脂肪和能量摄入。趋化因子的假说是,连续超表达可能促进或常见的病理条件恶化,以及动物模型可以用于评估的致病机制和治疗方法39]。
生育能力、增长和外观都相同的控制。CCL2超表达并没有导致小鼠异常被喂以普通食物的饮食。然而,在饮食中加入脂肪在短时间内体重的差异引起的,脂肪细胞大小、葡萄糖和脂质代谢紊乱,过早死亡,和肝脏病变,包括更高的倾向脂肪肝和线粒体生物起源和自噬将发生重大变革。此外,我们探讨骨髓巨噬细胞在不同在体外条件,我们发现CCL2过度影响功能的可塑性。
在先前的研究中,CCL2一直被认为是由脂肪组织分泌的趋化因子(adipokine),但系统性CCL2过度调节白色脂肪组织(窟)质量和大小没有明显影响褐色脂肪组织(蝙蝠)。窟是主要是脂质存储和蝙蝠用于热的一代。这两种脂肪组织之间的平衡会影响全身的能量体内平衡,和肥胖的发展和严重性40]。更高的生产CCL2不仅是肥胖的结果但很可能加剧食源性改变的因素。CCL2角色的肥胖和糖尿病的病因学,监管机制和治疗的效果,抑制CCL2生产最近审查(4,41]。我们还发现脂肪组织脂肪细胞在不同仓库之间的差异和脂肪细胞的异质性在同一个仓库。进一步检查的这个问题是必要的,因为不同的基因表达模式可以解释的微分发展各种类型的脂肪组织(42,43]。此外,这是与脂肪分布的模式密切相关,肥胖的程度,因此不同的脂肪仓库的影响代谢并发症的严重程度(44,45]。
肝巨噬细胞的大小和数量显著不同转基因和KO小鼠之间针对F4/80当检测到抗体。奇怪的是,这是一种细胞外抗原的未知函数,它属于一个小组G-protein-coupled受体(46]。巨噬细胞形态学的变化可能是伴随变化函数和巨噬细胞是否居民招募了。这是进一步证实,这些转基因小鼠容易患脂肪肝疾病和KO小鼠的保护。CCL2增加的作用还不清楚,但招募巨噬细胞似乎是重要的在不同的动物模型。在KO小鼠有过氧物酶体的表达增加proliferator-activated受体伴随着脂肪酸代谢相关基因的诱导和抑制促炎细胞因子的生产47- - - - - -49]。我们确认的影响脂肪在脂肪肝的发病机制49,50)数量的影响可用CCL2,趋化因子之间的联系和肝脏脂质代谢是可信的。
转基因小鼠骨骨髓来源细胞的描述表明,CCL2过度影响巨噬细胞的分泌功能的过渡(或M1-M2范式作为功能可塑性的简化描述符)。这是说明了gm - csf和csf的差异,这是区分巨噬细胞的细胞因子在体外不同的形态和炎症功能(51,52]。巨噬细胞表型和功能差异的调制CCL2过度分化的代表一个转向低促炎症活动(53]。CCL2 CCR7在M1和减少的表达减少的表达CCR2, IGF1, CD206, il - 10, GAS6平方米。然而,有限合伙人在细胞治疗CCL2超表达il - 10和肿瘤坏死因子的分泌增加α关于WT控制。这些变化将是定量发展的决定因素macrophage-induced代谢改变。应该强调,高百分比的全身常驻巨噬细胞存在于肝脏和脂肪组织是一个积累的主要网站招募巨噬细胞(54,55]。
值得注意的是,CCL2,直接通过诱导和/或代谢改变,线粒体生物起源和自噬。我们把CCL2添加到越来越多的不必要的监管机构机制,线粒体分裂和融合(56]。复兴之间的平衡和消除受损的线粒体自噬影响CCL2过度的存在和增加可用性的能量。聚变和裂变的敌对和平衡活动机械不断提供对炎症的反应紧密调节体内平衡的生物57,58]。这是预期因为线粒体疾病与代谢改变有关。显然,有一个转向融合CCL2超表达最大化ATP合成。相反,形态发现CCL2缺乏的老鼠,这是独立的高脂肪饮食,建议一个完美的平衡59,60]。一定不平衡预计将在炎症条件和其他能量依赖性干扰通过线粒体功能障碍(61年,62年]。这很重要,因为线粒体和获取能量(卡路里限制或增加膳食脂肪)发挥关键作用的机械的雷帕霉素靶(MTOR)在决定是否肝细胞是死是活63年]。
在转基因小鼠中,自噬增加对WT KO小鼠,这尤为重要,因为自噬影响免疫反应的降解,生物起源的,分泌活动,应对各种输入通过MTOR [64年,65年]。自噬可能控制某些病原体的感染,还可以防止过度炎症反应在主机66年]。如autophagy-deficient巨噬细胞所示,自噬清除大量的促炎的刺激(67年- - - - - -69年]。因此,增加肝脏在CCL2过度自噬可以被解释为一个努力从主机避免持续炎症的有害作用。
自噬与炎症之间的联系也被发现在免疫功能影响几种疾病,打开一个新维度的理解多因子的非传染性疾病的基础。例如,增加巨噬细胞自噬保护晚期动脉粥样硬化患者(70年]。它也被报道,CCL2控制的程度自噬在人类前列腺癌(71年),自噬是至关重要的生存和分化的单核细胞(72年]。
最后,CCL2过度导致过早死亡当加上一个高能量的摄入。这些研究结果需要更广泛的检查,和死亡的原因仍然是模糊的。环境中的老鼠逐渐失去了兴趣,减少活动,和食物的摄入量减少。没有明显的慢性疾病,没有脓毒症或主要感染的迹象。人们很容易认为过早老化的可能性,和未来的调查将包括senescence-associated分泌表型的描述,特别是促炎细胞因子浓缩(73年)和炎性表型伴随老化(74年,75年]。
5。结论、观点和局限性
这种动物模型提出了一些有关流行疾病的问题限制了现代生活的质量负责。此外,这个模型提供了一个炎症和代谢之间的联系,提出目标管理的疾病有明确CCL2超表达。具体地说,该模型有助于揭示CCL2在线粒体功能障碍的作用,自噬,巨噬细胞的功能和老化结合过度的能量摄入。从中获得的信息可以用于设计新的系统,治疗策略。
没有描述影响正常饮食的情况下,出现在老鼠,这一事实强调了卡路里限制对健康的重要性。因此,nutrient-sensing MTOR途径似乎非传染性疾病管理的关键。因此,药物调节MTOR是显而易见的候选评估。例如,实验对癌症、衰老和病毒感染二甲双胍(强烈建议这是理由76年- - - - - -78年]。这抗糖尿病药激活AMPK和强有力的抗炎抑制MTOR的行动。MTOR抑制剂雷帕霉素的有用性,和类似的药物在癌症预防化验(79年]。阿司匹林可以减少炎症,抑制MTOR通路,降低癌症发病率,并可能减少动脉粥样硬化的负担(13,80年]。最后,尽管研究稀缺,angiotensin-II-blockers和β受体阻断剂,广泛应用于高血压患者,也可以防止MTOR通路的激活和慢性疾病的发病率81年]。
的潜在迹象表明这些药物大多是慢性疾病相关的炎症中起着至关重要的作用。这个动物模型可以用来进一步选择候选人,并为未来的研究表明许多机械问题。特别是,我们认为该模型是一个宝贵的贡献我们的进化的理解自噬和炎症之间的间期。然而,我们承认,必须注意在分析的结果研究动物模型,进一步的研究工作进行全面描述我们的观察是必要的。等等,可能影响性研究和代谢的改变应该确认使用代谢笼和更具体的方法来检测显著差异。特别是CCL2可能有更高的影响如果有相对贡献从不同类型的细胞,尤其是来自免疫细胞(72年]。
确认
Unitat de Recerca基于校园的一部分国际卓越加泰罗尼亚南部和目前支持的计划从大学合并组·罗维拉我Virgili和资助的洋底de Investigacion疗养地(FIS PI08/1032、PI08/1381 PI11/2187 PI11/00130)。以斯帖Rodriguez-Gallego接收者的奖学金从Generalitat de加泰罗尼亚(2012 fi_b 00389),玛尔塔Riera-Borrull是大学的奖学金的接受者·罗维拉我Virgili (2010 pfr-urv-b2-58),和安娜贝尔Garcia-Heredia接收者的奖学金Insituto de Salud卡洛斯三世(FI12/00133)。
补充材料
辅料S1:比较人类和小鼠CCL2区域,对应手稿。
辅料S2:序列中使用的其他主要元素的细节建设的向量,对应手稿。
辅料S3:详细的构造设计,对应手稿。
辅料S4:重量选择的组织和器官,对应手稿。
辅料S5:重量的脂肪组织的三个菌株经过14周的食物饮食或高脂肪的饮食治疗。
辅料S6:在葡萄糖代谢紊乱,对应手稿。
辅料S7:脂肪酸合酶的表达和肝脏中AMPK,对应手稿。
辅料S8:膳食脂肪和CCL2修改尺寸的过度表达,肝巨噬细胞的数量和形态也经过14周的饮食治疗相应的手稿。
辅料S9:转基因老鼠过多表达CCL2过早死亡喂养高脂肪饮食时,对应的手稿。