文摘

行动的多个机制flavocoxid有关花生四烯酸(AA)形成和代谢进行了研究在体外。Flavocoxid滴定到鼠腹膜巨噬细胞文化抑制细胞磷脂酶A2 (PLA₂)(集成电路₅₀= 60μg / mL)。在在体外酶化验,flavocoxid显示小anti-cyclooxygenase (CO)活动COX-1 / 2酶,但抑制COX-1 (IC₅₀= 12.3)和cox - 2 (IC₅₀= 11.3μg / mL)过氧化物酶(PO)以及半个5-lipoxygenase (5-LOX (IC)₅₀= 110μg / mL)。没有发现可检测5-LOX抑制多个传统和cox - 2选择性非甾体抗炎药。Flavocoxid也表现出了强烈的和不同的抗氧化能力在体外(IC和减少亚硝酸盐水平₅₀= 38μ在大鼠腹膜巨噬细胞g / mL)。最后,与塞来昔布和布洛芬,调节考克斯2基因,flavocoxid强烈表达下降。这项工作表明,临床的有利影响flavocoxid管理的骨关节炎(OA)是通过同时修改多个相关的分子途径AA代谢,氧化诱导炎症和中和活性氧(ROS)。

1。介绍

骨关节炎是一种多因素疾病,经常造成伤害或重复的创伤,包括代谢以及炎症组件。不断“损坏”关节导致释放磷脂由解放军受损细胞,然后转换₂到AA (1]。饮食习惯,尤其是过度消费的AA的ω- 6脂肪酸,已被证明在人类影响的程度和进展OA (2]。通过考克斯和5-LOX酶的作用,从组织破坏和AA饮食是转化为炎症代谢产物如凝血恶烷(TX)、前列腺素(后卫)、环前列腺素(pc)和白细胞三烯(LTs) [3,4]。

Flavocoxid,销售Limbrel, USFDA-regulated处方医疗食品(21 CFR体积南加州大学(代码)section 360 ee (b)(3))的临床营养管理OA的代谢过程。中的分子flavocoxid被孤立的大规模筛选数以千计的天然提取物anti-PO, COX-1和cox - 2活动以及5-LOX酶抑制(5]。产品由一个私有的类黄酮分子黄芩苷混合物,提取黄芩儿茶素,金合欢儿茶,集中纯度大于90%(图1)[6]。

利用近期临床疗效试验藤黄属植物可乐(7),松树树皮extract-derived生物黄酮素(8,9],flavocoxid本身(10- - - - - -12]演示使用的兴趣重燃的天然分子办公自动化的管理。确切的flavonoid-based疗法的作用机制是未知的。使用各种在体外酶、细胞、基因表达和抗氧化剂化验,我们检查了flavocoxid的抗炎作用机理。Flavocoxid对解放军的抑制活性₂以及它的准确与考克斯的交互和5-LOX酶澄清。此外,flavocoxid的广泛的抗氧化能力及其对亚硝酸盐的影响生产在细胞模型中确定和相关的阻尼cox - 2基因表达与其它抗炎剂相比。flavocoxid的抗炎作用进行了讨论,这些多效性的关联在体外描述,在活的有机体内安全性和有效性的结果在人类临床管理的办公自动化。

2。材料和方法

2.1。材料

以下非甾体抗炎药买来Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国):meloxicam,钠盐(# 3935);萘普生钠盐(# 5160);双氯芬酸钠盐(# D6899);布洛芬,钠盐(# I1892)和ns - 398 (# N194)。万络被从默克公司购买& Co . Inc .(美国新泽西州怀特豪斯站),valdecoxib和塞来昔布从辉瑞(美国纽约)。Flavocoxid以及90%纯黄芩苷和90%纯儿茶素,博智金融所提供的药品,Inc .(美国亚利桑那州斯科茨代尔)。每个化合物溶解在100%二甲亚砜(DMSO溶液;Sigma-Aldrich)。Flavocoxid与不同分子量的化合物的混合物。因此,所有浓度给出μg / ml的化合物测试而不是微摩尔的浓度。

2.2。方法

2.2.1。动物和隔离腹膜巨噬细胞对亚硝酸盐的决心和磷脂酶A2化验

所有程序符合标准的动物保健和使用主题指南中规定的实验动物保健和使用(研究所实验动物资源,国家科学院的贝塞斯达,医学博士,美国)。腹膜巨噬细胞来源于男性Sprague-Dawley老鼠(250 - 275 g)通过洗腹腔RPMI 1640。这些细胞被离心两次,resuspended在同一介质的浓度/毫升巨噬细胞纯化2 h后粘附塑料培养皿(Nunc、鲁开德、丹麦)37°C。同质性和巨噬细胞的生存能力是大于98%,由微分染色和台盼蓝排斥。巨噬细胞刺激了6 h和1μ克/毫升的脂多糖(LPS)。Lipopolysaccharide-stimulated巨噬细胞与flavocoxid coincubated 10、20、50、100、200和500 g / mL或独自RPMI介质。

细胞生存能力
后腹膜巨噬细胞细胞生存能力,接触flavocoxid(10、20、50、100、200和500μ与1 g / mL)和(或)μg / mL有限合伙人在37°C,决心24 h后孵化的MTT [3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2、溴化5-diphenyltetrazolium)测定,如Mosmann所述13]。

磷脂酶A2化验
磷脂酶A2在胞质提取使用cPLA化验₂分析工具包(开曼群岛,安阿伯市,密歇根州,美国制造商的协议。简要细胞均质裂解缓冲(50毫米消息灵通的pH值7.4,1毫米EDTA),用然后离心机在10.000 g×15分钟在4°C。的上层清液被分析和存储在冰。吸光度是OD4读_14纳米,结果相比,解放军积极控制(蜂毒₂)。

2.2.2。纯化酶化验测试Flavocoxid COX-1和cox - 2环氧酶和过氧化物酶活动的影响和5-LOX抑制

COX-1和cox - 2环氧酶抑制试验
Flavocoxid溶解在100% DMSO在股票10毫克/毫升的浓度。Flavocoxid测试一式三份(0、0.1、1、10、50μ克/毫升。DMSO单独改变加氧酶的活动。因此,flavocoxid的最高浓度,可以测试使用oxygraph化验(开曼化学公司,Inc .)来确定CO-specific inhbition没有干扰是50μ克/毫升。吲哚美辛(MW = 357.8)和ns - 398 (MW = 314.4)运行的积极控制抑制COX-1和cox - 2,分别。吲哚美辛测试一式三份(0,3.6,18岁,36岁,180年,360 ng / mL。ns - 398进行了一式三份(0,3.1,15.7,31.4,157和314 ng / mL。这些抑制剂与酶反应缓冲pre-incubated AA的前一分钟。化验进行使用100单位的绵羊的COX-1或绵羊的cox - 2(一个单位的酶消耗一个nanomole 37°C的氧气每分钟0.1 Tris-HCl缓冲区,pH值8.0,包含20μEDTA M AA, 5毫米,2毫米苯酚,1μ米血色素)。化验是由添加20μM AA,耗氧量测量使用Gilson模型5/6H oxygraph配备了克拉克氧电极(14]。

COX-1和cox - 2酶抑制化验
过氧化劈得开的,发色团(N, N, N′N′-Tetramethyl-p-phenylenediamine盐酸盐(TMPD))(σ)是包含在分析测量对PO活性抑制剂影响COX-1和cox - 2在AA代数余子式(15]。每个抑制剂检测PO-specific抑制一式三份(剑桥生物医学研究小组,Inc .),在室温(25°C)浓度的范围从0到500μ使用绵羊的g / mL COX-1和cox - 2酶(由开曼群岛提供化工、来自美国密歇根州安阿伯市,美国),血色素(σ),TMPD(σ),和AA(σ)。吸光度的裂解TMPD衬底在OD读_570海里。平均结果为每个抑制剂浓度和抑制比例绘制,以及集成电路₅₀决定通过half-maximal点沿着等温线和相交的浓度设在。

5-LOX抑制试验
脂氧合酶抑制剂试验装备(开曼化学)是用于马铃薯5-LOX(开曼化学)代替大豆15-LOX通常出现在装备。磷酸缓冲也从缓冲区,酸碱Tris-HCl 6.8, 7.4缓冲区,用来测量5-LOX每个抑制剂的抑制。这个试验检测不稳定的过氧化物的形成,HPETEs,然后通过一个氧传感chromagen系统转换为LTs FeSO组成₄h·7₂O和NH₄视交叉上核,亮黄色的变化(16]。使用土豆5-LOX试验进行了一式三份(15.3单位),亚油酸(LA)作为辅助因子,和TMPD衬底与各种抑制剂滴定从0到500μg / mL和flavocoxid从0到1000μ在室温下g / mL。吸光度的裂解TMPD衬底在OD读_500海里。平均结果为每个抑制剂浓度和抑制比例绘制,IC₅₀决定通过half-maximal点沿着等温线和相交的浓度设在。

2.2.3。Flavocoxid的体外抗氧化能力测定

亚硝酸盐生产
亚硝酸盐水平,一氧化氮(NO)的分解产物,测定标准格里斯反应。简单地说,100年μL (LPS-stimulated巨噬细胞上清液有无flavocoxid孵化了同等体积的格里斯试剂naphthyl-ethylenediamine盐酸盐(1%对氨基苯磺酰胺和0.1% 2.5%磷酸)。10分钟后在室温下孵化,发色团的吸光度测量在OD_540海里使用microtitre板读者。亚硝酸盐浓度的计算是通过与一个标准的校准曲线与亚硝酸钠(NaNO₂:1.26 - 100毫米),控制基线上层清液的空白。

抗氧化试验
的在体外抗氧化活性的flavocoxid评估使用氧自由基吸收能力(ORAC)过程(布伦瑞克实验室、诺顿、质量,美国)。值表示为μ摩尔的Trolox等价物(TE)每克干重和相对于已知的维生素C和e . ORAC值分析提供了一个衡量抗氧化剂对过氧化氢自由基的清除能力,这是最常见的一种活性氧在体内发现。氧自由基吸收_水电反映了水溶性抗氧化能力和氧自由基吸收_脂肪是脂溶性抗氧化能力。水溶性维生素E模拟Trolox,用作校准标准,结果表示为μ摩尔TE / g干重。
减少铁/抗氧化能力(收紧)测定了如前所述[17]。对羟基自由基吸收能力验证试验(HORAC)也表现根据描述方法(18]。过氧亚硝基激进避免能力分析(NORAC)和超氧化物自由基避免能力(SORAC)化验进行如前所述[19]。
其他抗氧化能力分析中使用flavocoxid的抗氧化能力包括分析问题(trolox等效抗氧化能力),Rice-Evans小组开发的方法,广泛应用于食品样品分析20.]和DPPH [2, 2-di (4 -叔-octylphenyl) 1-picrylhydroxyl],一个简单和准确的方法经常用来测量水果和蔬菜汁和提取物的抗氧化能力(21]。

2.2.4。Flavocoxid、塞来昔布、布洛芬和Acetominophen cox-1和cox - 2基因表达

人外周血单核细胞(PBMCs)隔绝apheresis产品(COBE实验室,Inc .)使用Histopaque密度梯度(22)和cocultured ~ 4.5×10⁶细胞3毫升每在6-well生长介质板有限合伙人在10 ng / mL 37°C在潮湿环境中有5%的公司₂。样本收集18小时后处理。总rna是准备使用试剂盒RNeasy装备和使用ABI cDNA档案互补dna合成装备,之后的协议供应商。QPCR化验运行7700年ABI在重复序列检测器使用ABI TaqMan基因表达引物和探针集COX-1和cox - 2。Flavocoxid与塞来昔布、布洛芬和对乙酰氨基酚在3μg / mL的影响cox-1和cox - 2表达式。还有是用作相对量化的参考记录RNA基因表达水平正常化。

2.3。统计分析

所有的数据表示为均值±SD。评估的数据方差分析的多重比较结果。邓肯多个范围测试是用来比较的意思。在所有情况下,一个概率小于误差。05was selected as the criterion for statistical significance.

3所示。结果

中国人民解放军₂抑制活性
其他研究黄酮类化合物,如绿茶儿茶素和槲皮素可以抑制解放军₂因此调制AA从膜磷脂的生成23,24]。所知甚少,然而,关于黄芩苷或儿茶素的直接抑制作用解放军₂活动。因此,flavocoxid在巨噬细胞细胞试验测试其抑制解放军的能力₂活动。
Flavocoxid小,nonstatistical影响巨噬细胞细胞生存能力在200年和500年μ克/毫升(数据没有显示)。磷脂酶A2抑制水平纠正细胞生存能力。flavocoxid滴定时到LPS-stimulated鼠腹膜巨噬细胞文化,它表现出剂量反应抑制的解放军₂(集成电路₅₀= 60μ50 g / mL)的浓度,100,200,500μg / mL明显好于单独有限合伙人()(图2)。这个结果表明flavocoxid有能力调节AA的一代膜磷脂由组织的破坏发生在OA。

COX-1和cox - 2环氧酶抑制活性
考克斯蛋白质包含两个不同的酶代谢的半个AA,环氧酶(有限公司)和过氧化物酶(PO)。公司活动转换PGG AA₂和代谢PGG PO活动₂对PGH₂(25]。随后的血小板和细胞合成酶以及异构酶然后PGH转换₂TX以及后卫和pc。药物用于治疗OA,如传统的非甾体抗炎药和选择性cox - 2抑制剂,块PGG的生产₂,但不影响PO的网站。Flavocoxid测试特定的公司和阿宝使用纯化酶抑制在体外来定义它的特定anti-COX-1和cox - 2的效果。
Flavocoxid显示没有检测到首次cox - 2活动50μg / mL的下滑曲线和积累试验(图中的氧气3(一个))。选择性cox - 2抑制剂ns - 398,一个强大的,有一个公司cox - 2 IC₅₀0.095μ克/毫升。相比之下,吲哚美辛,这给公司COX-1 IC₅₀0.012μg / mL, flavocoxid IC₅₀25μ克/毫升。因此,吲哚美辛是超过2000倍强抑制公司比flavocoxid COX-1。这些结果表明,flavocoxid没有首次活动考克斯酶相比,良好的抗炎剂。

COX-1和cox - 2酶抑制活性
它已经表明cox - 2与失衡COX-1选择性cox - 2抑制剂的抑制各种AA代谢物的生成导致水肿,高血压,心肌梗死(26]。因此,特殊配方,专有的黄芩苷和儿茶素的混合物被设计为了平衡COX-1和cox - 2的AA关注代谢抑制这些酶的活动。过氧化劈得开的,发色团TMPD是用来评估的anti-PO活动flavocoxid纯化酶系统使用COX-1和cox - 2。
90%的纯黄芩苷分析用于制定flavocoxid略更有选择性cox - 2 (IC₅₀= 10μg / mL)相比COX-1阿宝活动(IC₅₀= 13μg / mL)活动(数据未显示)。90%纯儿茶素配方中使用,但是,显示优惠抑制活性的阿宝COX-1 (IC₅₀= 2.5μg / mL)和cox - 2 (IC₅₀= 15μg / mL)(数据没有显示)。为了平衡童博COX-1与cox - 2抑制活动,黄芩苷和儿茶素组合在一个专有的比例形成flavocoxid。Flavocoxid显示相对平衡抑制COX-1和cox - 2的活动与IC₅₀12.3和11.3的年代μ分别为g / mL(图3 (b))。这些结果以及公司活动的相对缺乏COX-1和cox - 2表明flavocoxid施加其影响通过调制的阿宝这些酶的活性。

5-LOX抑制活性
非甾体抗炎药和cox - 2抑制剂抑制5-LOX途径防止leukoattractive的积累和vasoconstrictive LTs (27]。抑制COX-1和cox - 2的非甾体抗炎药或选择性cox - 2抑制剂也已被证明能够“分流”AA新陈代谢5-LOX通路,导致过多的这些脂肪酸代谢产物可以影响多个器官(28]。LTs水平上升与多种病理条件包括哮喘、胃肠溃疡、肾功能不全、心血管并发症(29日,30.]。环氧酶酶抑制作用也已被证明能够增加LTB水平₄在滑液,也许诱导进一步损害软骨(31日]。Flavocoxid滴定和纯化5-LOX酶在氧气传感发色体的存在在体外检测不稳定HPETEs的形成,一个中间的LTs的形成。
个人测试中黄芩苷和儿茶素显示5-LOX抑制能力的差异。黄芩苷表现出的较强抑制5-LOX酶IC₅₀65年μ相比,g / mL儿茶素(IC₅₀= 300μg / mL)(图3 (c))。Flavocoxid,大概反映的比例这两个公式中的分子,抑制5-LOX酶IC₅₀110年μ克/毫升。除了已知的5-LOX抑制剂,phenidone (IC₅₀= 1.3μg / mL),作为一个积极的控制在这些化验,没有其他非甾体抗炎药或选择性cox - 2抑制剂,包括万络,valdecoxib,双氯芬酸,meloxicam,和阿司匹林(数据未显示),显示任何anti-5-LOX活动。布洛芬与少量的5-LOX抑制在最高浓度(没有集成电路进行测试₅₀可以确定)也显示相比,塞来昔布(图3 (c))。这些结果表明flavocoxid也从5-LOX调节LTs的形成,并可能防止的积累这些关键炎症因素造成组织损伤通过假定5-LOX分流与非甾体抗炎药。

抗氧化能力
非酶的脂质过氧化作用是AA代谢的另一个重要途径。当高架AA存在于生物体中,暴露于ROS, F2-isoprostanes和4-hydroxynonenal (HNE)生产以及提高丙二醛(MDA)的肾上腺素和胶原蛋白(32]。这些氧化转换产品高滑液,synoviocytes,血清OA患者与健康对照组相比,已被证明,以刺激生产cartilage-degrading基质金属蛋白酶(33]。没有非甾体抗炎药用于治疗OA拥有强有力的抗氧化性能,可以抑制诱导炎症(27]。Flavocoxid调节炎性细胞因子的产生和诱导氧化氮合酶(间接宾语)在细胞化验可能通过抗氧化剂的作用机制(5,34),但其抗氧化能力的程度从来没有被调查。评估flavocoxid的抗氧化能力,很多在体外抗氧化试验。
氧自由基吸收_总flavocoxid被发现高于控制抗氧化剂维生素C(氧自由基吸收_总= 2000μmolTE / g)和维生素E(氧自由基吸收_总= 1100μmolTE / g),享年3719岁μ与氧自由基吸收molTE / g_脂肪(19μmolTE / g)贡献小的整体分数(表1)。Flavocoxid HORAC值1326μ羟基自由基的摩尔CAE / g,也一直在与关节损伤。同样,过氧硝酸盐可能导致软骨细胞减少软骨蛋白多糖的合成。Flavocoxid, NORAC 1936的价值μmolTE / g,中和过氧亚硝基自由基具有很高的能力。相反,超氧化物自由基清除能力(SORAC) flavocoxid相对较低(表1)。Shieh等。(35)发现,黄芩甙元超氧化物阴离子具有更大的容量与黄芩苷相比。这也许可以解释flavocoxid SORAC值相对较低,黄芩苷、黄芩甙元,而是从flavocoxid肠道细菌分解产物吸收系统,进行了测试分析。对DPPH,我们与他人的结果表明黄芩苷和表儿茶素、儿茶素的立体异构体,坚强DPPH拾荒者(36]。Flavocoxid还显示一个收紧价值高。我们的研究结果还表明,flavocoxid 2456具有很高的问题μmolTE / g(表1)。

亚硝酸盐抑制Flavocoxid
稳定的亚硝酸盐作为衡量的生产从伊诺在OA滑膜巨噬细胞37]。一氧化氮可能参与破坏软骨的蛋白多糖诱导基质金属蛋白酶的生产(38]。评估flavocoxid对生产的影响的高活性氧化分子,LPS-stimulated鼠腹膜巨噬细胞表达高水平的伊诺被用于增加水平的类黄酮制备的存在。亚硝酸盐的格里斯反应和随后的光度分析测量flavocoxid没有阻尼能力。
flavocoxid滴定时到文化,它抑制亚硝酸盐在剂量依赖性的方式生产集成电路₅₀38μ与单独有限合伙人(g / mL文化相比)(图4),这表明flavocoxid会使直接生产或中和。Flavocoxid活动在减少生产通过阻尼伊诺(5)或通过失活的没有直接的抗氧化作用可以帮助防止软骨蛋白多糖的分解。

Flavocoxid Cox-1和cox - 2基因表达的影响
诱导炎症基因通常是上调诱导活性氧的生成nfκb我表达和激活释放的胞质κBα绑定NFκB从细胞质和随后的易位到核(27]。细胞因子(il - 1β,il - 6和肿瘤坏死因子α)以及cox - 2,5-lox和伊诺基因有NFκB结合位点基因的启动子区域。Cyclooxygenase-1不诱导基因表达,但通过基因内区监管元素产生结构性产物蛋白质在许多细胞类型。Flavocoxid已知潮湿诱导炎性基因和蛋白的生产5),但没有直接向其他非甾体抗炎药或止痛剂相比这个活动。因此,添加flavocoxid PBMCs固定浓度和直接塞来昔布相比,布洛芬和对乙酰氨基酚的影响cox-1和- - - - - -2表达式。
当flavocoxid添加3μg / mL的文化PBMCs与LPS刺激,有20倍下调cox - 2(图5),但只有三倍减少考克斯1的表达。在同一浓度,塞来昔布、布洛芬和acetominphen并未减少考克斯表达式。事实上,塞来昔布和布洛芬增加考克斯2表达与对乙酰氨基酚表现出2到3折不到一倍的基因表达。塞来昔布、布洛芬和对乙酰氨基酚也增加cox-1表达式1.2 - 5 - 8倍,分别(图5)。这些结果表明,flavocoxid可能调节炎症代谢产物,如PG,通过减少考克斯基因表达与塞来昔布相比,布洛芬和对乙酰氨基酚引起水平的提高cox-1和cox - 2表达式。

4所示。讨论

一般人群的饮食中摄入过多的AA的西方国家已经脂肪酸代谢的平衡转向增加促炎的代谢物生成通过考克斯和5-LOX酶通路(39,40]。这一直伴随着一个一代的脂质过氧化作用的产品增加了AA-oxidation由于贫穷的抗氧化状态。有一种强烈的联系代谢脂肪酸代谢缺陷或摄入过多的膳食脂肪酸和OA的发病率。例如,骨已被证明的脂肪酸水平高50 - 90%相比,OA患者控制(41]。可怜的氧化状态,以及生产AA的氧化脂质,也与软骨细胞凋亡,潜在的基质金属蛋白酶的激活,软骨基质降解由于upregulation炎症基因表达的38,42]。因此,抗炎剂与多效性的活动可以帮助调节这些诱发饮食因素。金等。43)审查这个问题,发现各种各样的类黄酮调节AA代谢酶的活动,如中国人民解放军₂,考克斯,5-LOX和不产生酶,进气阀打开。我们试图测试flavocoxid,处方产品,以确定它对这些通路的影响导致OA。

脂质过氧化反应,由于贫穷的氧化状态,造成细胞膜导致calcium-dependent解放军的感应₂磷脂hydrolytically攻击导致AA的代44]。在关节软骨细胞细胞膜的破裂为解放军提供底物₂转换至AA (45]。强有力的抗氧化能力,类黄酮可以中断氧化生成的AA磷脂和减少炎症代谢产物的下游生产AA代谢,诱导的氧化损伤,诱导炎症通路(34,46- - - - - -49]。在我们的研究中,flavocoxid减少两个解放军₂巨噬细胞的活动和亚硝酸盐水平。这表明flavocoxid可能采取行动限制的转换从受损细胞膜磷脂AA上游的考克斯和5-LOX代谢途径。此外,减少亚硝酸盐,分解产物不稳定,可能会阻止基质金属蛋白酶的生产巨噬细胞存在于滑膜(37]。支持这些发现,flavocoxid以前可以减少伊诺蛋白质生产的抗氧化机制(5]。因为它也知道,不积极的影响增加细胞因子水平生产(50),flavocoxid cytokine-reducing效应(5,48)可以抑制的增加伊诺表达和没有水平。

当前的实验表明,与非甾体类抗炎药,flavocoxid并不明显抑制公司的新陈代谢PGG AA₂。而它的作用通过一个平衡anti-PO COX酶抑制。有相互矛盾的报道,阿宝和公司活动是可分的考克斯酶(51,52]。创建了个人阿宝和突变体在体外(53]。阿宝站点突变时,有延迟代谢物生成暗示其他细胞过氧化物酶突变活动的一种补偿。因此,CO和阿宝活动耦合COX-1和cox - 2酶高效生产终端产品(54]。一个或两个活动的抑制反射调制的考克斯酶活性(55]。Flavocoxid下调两个铂族元素₂和LTB₄生产在炎症细胞和动物模型5,34,48,56]。然而,Flavocoxid没有阻止酸的生产₂在人类血小板功能研究(57),这表明存在另一个补偿机制,绕过它的阿宝在考克斯酶抑制活性允许PGH的一代₂中间然后转化成酸₂。这个微分阿宝和CO的机制抑制也解释了flavocoxid缺乏互动与阿司匹林阿司匹林专门修改COX-1结合位点(57]。

已经证明,膝OA患者已经高于正常水平的氧化物种和滑液中抗氧化酶(58]。纯茶儿茶素和(+)儿茶素,flavocoxid,是已知的强抗氧化剂高分数在13000年和20000年之间μ摩尔TE / g,分别59,60]。这些儿茶素分子也具有很高的收紧和DPPH值。黄芩苷是显示,然而,有一个低得多的~ 365分μmolTE / g (61年]。尽管flavocoxid较低的抗氧化能力与儿茶素本身相比,氧自由基吸收_总的分数仍然是大约3倍混合生育酚和几乎两倍的维生素c Altavilla et al。5表明flavocoxid的抗氧化能力降低细胞MDA转换的AA的肾上腺素和胶原蛋白通常OA患者升高。核因子-κB绑定到模型底物和我κBα蛋白表达也升高在同一实验表明flavocoxid恢复的细胞质抑制性控制ROS-inducible转录因子。一个不纯的黄芩苷和儿茶素的混合物也已被证明能够降低氧化物种滑液中人类与OA建议直接抗氧化作用的活性氧物种水平联合(62年]。Flavocoxid强大的抗氧化能力也会影响诱导炎性基因和蛋白质表达。

先前的实验已经证明,flavocoxid会使cox - 2和5-LOX蛋白表达,但不是COX-1 [5]。Tseng-Crank et al。63年)最近表明黄芩苷和儿茶素显著降低cox - 2和细胞因子的表达,但只有一个边际效应cox-1在人类细胞模型。我们发现flavocoxid也减少cox - 2在人类PBMCs言论~ 20倍,而有一个小得多的影响cox-1(~三倍)。然而,这项工作表明,塞来昔布,布洛芬提升明显增加cox-1和cox - 2,表明两种疗法可能会导致炎症诱导途径。当结合强大的抗氧化能力和以前发现阻尼炎症基因表达(5,34,48,63年),这里给出的结果表明,flavocoxid行为通过抗氧化机制来控制诱导炎症基因表达除了调节脂肪酸酶包括5-LOX处理。

华莱士和马64年]表明,代谢分流向5-LOX通路在人类胃损伤的主要因素。当胃粘膜刺激与钙离子载体或关节炎患者暴露于非甾体抗炎药,减少铂族元素的释放₂和增加leukoattractive LTB₄和vasoconstrictive LTC₄和有限公司₄(65年,66年]。兼容这些发现,长期的临床试验表明,flavocoxid少上消化道不良事件与萘普生(12,67年]。类似地,phase-IV-like上市后研究表明flavocoxid以前是良好的非甾体抗炎药(包括塞来昔布)不能容忍病人停止或减少gastroprotective使用超过30% (11]。沃尔顿et al。68年)进行了成本分析,表明这种安全优势将使flavocoxid便宜相比一般的萘普生医疗保险的人口在一年的时间框架。控制内镜研究需要明确法官flavocoxid胃肠道的安全。

Gambaro [69年]表明,双重抑制COX和5-LOX酶也可以提供优势的肾毒性,这也会影响心血管并发症。非甾体抗炎药和选择性cox - 2抑制剂都是导致肾损害。税等。12,67年)发现有统计学flavocoxid水肿比萘普生的机率更低。虽然没有达到统计学意义,肌酐水平呈现下降趋势flavocoxid组和更高的萘普生组。具体控制研究肾损害受试者需要真正评估flavocoxid在这些病人的安全。

Flavocoxid是唯一考克斯目前销售处方抗炎剂,调节酶通过anti-PO活动,抑制5-LOX-mediated LT生产,有一个广泛的,强大的抗氧化活性,会使诱导炎症基因表达以及中和活性氧氧化脂质从而防止AA的转换。Flavocoxid的假定的作用机理如图6和假定是有利的安全性的原因出现在临床试验和上市后监测。工作目前正在进行中,以确定如果这广泛的作用机制可以保护软骨的结构。

确认

我们要感谢克里斯托弗·k·泰勒博士,他的宝贵的意见,本文做准备。这项工作是由博智制药有限公司。伯内特,皮拉伊和利维是受雇于博智制药有限公司