文摘gydF4y2Ba

TOM1L Myb-1像(目标)被确认为有约束力的合作伙伴充分长度和catalytically-active Lck酵母混动筛查试验。在这里,我们表明,在Jurkat T细胞刺激通过CD3 / CD28 coligation TOM1L的表达式是减少lenti病毒mediated-siRNA导致显著降低生产- 2。治疗的siRNA - 2细胞的生产和PMA刺激/ ionomycin并不影响指示一个TOM1L参与途径识别和CD28的近端。菲英岛的coexpression TOM1L增加水平的磷酸化形式菲英岛表明TOM1L能够激活菲英岛。的能力TOM1L进一步激活菲英岛是一个激酶试验所示使用血管紧张素ⅱ作为衬底。通过共焦显微镜,我们表明,在摘要TOM1L海拉的表达和colocalizes SK-N-SH细胞线粒体膜而不是与溶酶体隔间或trans-Golgi网络。此外,我们表明,在Jurkat TOM1L细胞的表达增加,STAT3的表达。根据我们的研究结果,我们建议TOM1L是参与一个新的信号通路,对生产- 2 T细胞很重要。gydF4y2Ba

1。介绍gydF4y2Ba

的功能和属性TOM1L Myb-1像(目标)基因在很大程度上是未知的。TOM1L TOM1的假字(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba),属于一个新家庭的蛋白质含有一个氨基端位于VHS (Vps27p /小时/斯塔姆)域和一个中央手枪(GGA (Golgi-localizing,gydF4y2Ba -adaptin耳朵域相同,ADP-ribosylation因子(Arf)结合蛋白和汤姆)域。的手枪域TOM1L Tom1有泛素结合的能力和Tollip (Toll-interacting蛋白质),而Tom1-family蛋白c端区域的网格蛋白相互作用[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]。Tollip是负的下游信号调节器和toll样受体(il - 1受体gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。抑制由Tollip介导通过其能力抑制il - 1受体相关激酶的活性(伊拉克的)。当TOM1L-proteins coexpressed Tollip,它们与核内体,他们招聘相关网格蛋白(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]。TOM1L-proteins与泛素之间的相互作用,在排序蛋白质通过网格蛋白显示功能作用多泡体(多功能车辆总线)溶酶体和随后的退化。此外,蛋白质回收到trans-Golgi网络(TGN)或等离子体膜。质谱已被用于识别蛋白质特别是酪氨酸磷酸化,或与酪氨酸磷酸化蛋白混合时,由于纤维母细胞生长因子receptor-1 (FGFR-1)超表达在人类293 t细胞(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。在确定蛋白质Tom1L,此前还没有描述的FGFR信号,提出了一种新的分子对接FGFR-1信号(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

Src-family激酶的激酶活性大大增加了蛋白质的直接绑定SH3-domain不Src-family激酶的分子内结构(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。因此,因此重视识别蛋白质,含有绑定域名SH3域和确定他们是否能调节激酶活性。大多数SH2和/或SH3绑定增加体内Src-family活动和展览促有丝分裂的和/或转换活动(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

激活Src-family激酶Lck和菲英岛中央的起始细胞信号通路(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。的第一个信号事件激活(T辅助细胞gydF4y2BahgydF4y2Ba)抗原呈递细胞(apc), Lck成为磷酸化,从而激活。Lck如何激活细胞受体)在尚未完全定义。TCR-cross-linking还不足以刺激Lck自身磷酸化和CD45,这是一个重要的磷酸酶调节Src-family激酶的活性和信号在淋巴细胞(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba),不需要这个过程(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。CD4分子招募Lck t细胞/ APC接口,而CD28建议维持Lck激活(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

鼠标TOM1L同族体,Srcasm (Src激活和信号分子),已被证明与菲英岛的酵母二者混合屏幕小鼠角化细胞库(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。Srcasm作为衬底菲英岛和菲英岛激酶激活也可以相互交流Grb2的调节亚基磷酸肌醇3-kinase, p85, phosphorylation-dependent的方式gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

2。材料和方法gydF4y2Ba

2.1。细胞系gydF4y2Ba

Jurkat人类T细胞白血病线,表达了大T抗原SV40病毒生长在RPMI 1640中补充10%胎牛血清,2毫米谷氨酰胺,青霉素和链霉素。人类肾脏细胞,293吨,海拉SK-N-SH细胞在DMEM补充牛10%牛血清和青霉素和链霉素。gydF4y2Ba

2.2。Tom1L抗体和免疫组织化学gydF4y2Ba

远的片段c端结束TOM1L基因编码的氨基酸243 - 476在pGEX-KG克隆(Amersham法玛西亚生物技术)。TOM1L-GST融合蛋白表达在BL21或XL1-BluegydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba。GST融合蛋白与谷胱甘肽琼脂糖4 b (Amersham法玛西亚生物技术)中筛选了50 mM Tris-HCl pH值8.0包含5毫米减少谷胱甘肽(σ,密苏里州)。所有的DNA结构都验证了DNA序列分析。生产anti-TOM1L抗体,免疫兔子emulgate含有等量的pTOM1L-GST和矿物油。免疫后不同时间点,兔子是流血和血清分离。使用共焦荧光显微镜的免疫组织化学表现。细胞被放置在胶原蛋白i型涂布封面传票和3.7%多聚甲醛固定在PBS包含2%的蔗糖。这些细胞被anti-TOM1L抗体孵育2小时在室温下用PBS。其次是孵化的Alexa Fluor488(绿色荧光)或Alexa Fluor568(红色荧光共轭二次抗体(没有)。A11034,不。 A11036 Molecular Probes, Invitrogen, Carlsbad, CA) for 1 h at room temperature. MitoTrackerRed (no. M7512 Molecular Probes, Invitrogen, Carlsbad, CA) was used to visualize the mitochondria according to the procedure recommended by the manufacturer.

2.3。转染,免疫印迹和免疫沉淀反应gydF4y2Ba

准备完整TOM1L, DNA转染是RNA隔绝Jurkat T细胞(RNeasy容易装备,试剂盒)和用于随后的互补脱氧核糖核酸合成(Amersham生物技术)PCR紧随其后。TOM1L克隆到pCS3gydF4y2Ba 太六Myc-tags附加到氨基酸。如前所述(执行瞬时转染gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。293 t细胞被播种在3gydF4y2Ba 10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba细胞每6厘米gelatin-coated培养皿转染前的那一天。转染后48小时Lck (pCEP4),菲英岛(pCS3)单独或连同Myc-tagged TOM1L细胞resuspended 1毫升的裂解缓冲(Nonidet-P40 1%, 20毫米三pH值8.4,150毫米氯化钠,2毫米EDTA,和200年gydF4y2Ba 钒酸钠)。溶菌产物被离心澄清34000 g 30分钟gydF4y2Ba 。事先批准后蛋白质a Pansorbin细胞(Calbiochem, CA),溶解产物孵化30 - 40分钟gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba L指定主要抗血清紧随其后的是一个60分钟的孵化与蛋白质Pansorbin细胞。免疫沉淀反应在裂解缓冲洗两到三次。免疫沉淀反应和细胞溶解产物进行sds - page和转移到Immobilon-P(微孔,MA)免疫印迹(Bio-Rad, CA)。Immobilon-P过滤器被孵化在冲洗缓冲(10毫米三pH值7.4,150毫米氯化钠,和0.1% NaN3),补充3%的牛血清白蛋白,然后沾单克隆anti-Myc抗体,兔子anti-Lck抗体,或兔子anti-phosphotyrosine抗体。结合抗体检测gydF4y2Ba125年gydF4y2BaI-protein (Amersham淀粉微球生物科技,NJ)和台风8600变量模式成像仪(分子动力学,CA)。核的实验,细胞细胞溶解在裂解缓冲(NP-40 1%, 20毫米三7.6 pH值,150毫米氯化钠,5毫米EDTA在2gydF4y2Ba 10gydF4y2Ba7gydF4y2Ba细胞/毫升与磷酸酶抑制剂补充)(磷酸酶蛋白酶抑制剂(没有。SC 24948年,圣克鲁斯,CA))。细胞溶解产物进行sds - page和转移到硝酸纤维素(高债券发射极耦合逻辑,没有。613 - 3555年Amersham)免疫印迹(Bio-Rad, CA)。anti-TOM1L抗体被发现goat-anti兔免疫球蛋白结合与碱性磷酸酶(S3731、Promega WI)和西方蓝色稳定衬底(S3841、Promega WI)。gydF4y2Ba

2.4。酵母混动试验gydF4y2Ba

主管AH109酵母细胞gydF4y2Ba酿酒酵母gydF4y2Ba(美国Clontech,帕洛阿尔托,CA)包含四个报告基因(gydF4y2BaADE2、HIS3 lacZ MEL1gydF4y2Ba),三个不同的GAL4-responsive启动子的控制下被用于酵母菌混动试验。人胸腺cDNA库(人类胸腺媒人cDNA文库,pACT-2向量,Clontech)约为3gydF4y2Ba 10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba独立的包含激活域(广告)的克隆GAL4作为猎物。诱饵是pGBT9 Lck克隆质粒(Clontech)包含绑定域(BD)。选择广告含有质粒克隆是放大和核苷酸序列测定使用pACT-2特定的引物。gydF4y2Ba

2.5。慢病毒,核gydF4y2Ba

慢病毒是由上层清液的离心收获293 t细胞cotransfected HIV-based向量的第三代条件包装系统(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。两个64 -寡核苷酸(5gydF4y2Ba”gydF4y2BaGATCCCCATCCAACTTACCTTGTCACTTGAAGAGAGTGACAAGGTAAGTTGGATTTTTTGGAAA3gydF4y2Ba”gydF4y2Ba)形成一个发夹包含核和限制性内切酶序列的dna序列退火和克隆到pSUPER SK (gydF4y2Ba )H1-RNA启动子。这个序列包括H1-RNA子当时subcloned成向量cPPT-GFP转移(p156RRLsinPPTCMVGFPPRE)使用EcoR I / Kpn I . 293 t细胞转染了10gydF4y2Ba 克cPPT-GFP(包含核构造或空),6.5gydF4y2Ba 克pRRE, 2.5gydF4y2Ba 上一页,g和3.5gydF4y2Ba g pVSV-G向量(Inder Verma实验室的礼物,索尔克本月,拉霍亚)使用Lipofectamine 2000系统(表达载体,CA)。gydF4y2Ba

2.6。ELISAgydF4y2Ba

上层清液Jurkat细胞(2.5gydF4y2Ba 10gydF4y2Ba5gydF4y2Ba细胞/ TC 96孔板)在48小时后收获的刺激与板绑定anti-CD3 (MAB100)和可溶性anti-CD28 (MAB342)抗体(R和D系统,明尼阿波利斯,MN)。- 2在上层清液量量化eBiosciences提供的酶联免疫试剂盒,拉霍亚,CA。或者是Jurkat细胞刺激50 ng / mL的PMA + 0.5gydF4y2Ba 克/毫升ionomycin 48小时。数据代表一个执行的三个实验一式三份。学生gydF4y2BaTgydF4y2Ba以及用于统计分析。gydF4y2Ba

2.7。体外激酶试验gydF4y2Ba

免疫沉淀反应和5孵化gydF4y2Ba Ci (gydF4y2Ba -32 p) ATP (Amersham法玛西亚生物技术)和2毫米(Val5)血管紧张素II(σ)作为外源性底物1,4-piperazinediethanesulfonic酸(管道)激酶缓冲区(40毫米管道pH值7.0,10毫米MnClgydF4y2Ba2gydF4y2Ba)1、3和5分钟在室温下。反应停在指定的倍通过添加5%三氯乙酸和离心机,享年10000岁gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟gydF4y2Ba 。上层清液随后被吸收到P81磷酸纤维素纸(绘画纸,英国)。与0.5%磷酸磷酸纤维素纸被删除非公司(gydF4y2Ba -32 p) ATP。合并gydF4y2Ba -32 p用液体闪烁计数测量。gydF4y2Ba

2.8。荧光素酶分析STAT3的记者gydF4y2Ba

与0.6 t抗原Jurkat细胞转染gydF4y2Ba 克萤火虫荧光素酶记者STAT3 (Signal-transducer-andactivator-of-transcription-3)和0.6gydF4y2Ba g每个实验的质粒DNA。转染进行lipofectamine 2000(表达载体)。包含在每个转染25 ng的记者表达的方法gydF4y2BaRenillagydF4y2Ba荧光素酶的控制下gydF4y2Ba 肌动蛋白启动子。荧光素酶的测定进行了使用Promega Dual-Luciferase记者系统(Promega WI)。转染后48小时,大约2gydF4y2Ba 10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba100年在冷PBS和细胞溶解细胞被洗gydF4y2Ba L(裂解缓冲(Promega) 10分钟gydF4y2Ba 。二十gydF4y2Ba 从每个溶菌产物混合100 LgydF4y2Ba L分析缓冲区(Promega)立即阅读之前Berthold Lumat磅9507光度计(优秀的,MD)。通过添加100的荧光素酶化验就熄了gydF4y2Ba L的停下来,如果(Promega)。的活动gydF4y2BaRenillagydF4y2Ba荧光素酶在每个样本然后立即测量和荧光素酶规范化使用数据。gydF4y2Ba

2.9。统计分析gydF4y2Ba

数据提供方式和扫描电镜。学生gydF4y2BaTgydF4y2Ba以及用于分析数据。一个gydF4y2Ba 价值gydF4y2Ba 被认为是具有统计学意义。(*)gydF4y2Ba 价值gydF4y2Ba (* *)gydF4y2Ba 价值gydF4y2Ba 。gydF4y2Ba

3所示。结果gydF4y2Ba

3.1。TOM1L和菲英岛活动gydF4y2Ba

我们确定了TOM1L为约束力的合作伙伴在酵母混动Lck筛查试验使用完整catalytically-active Lck作为诱饵。七从人类胸腺cDNA克隆库包含DNA序列的TOM1L捡起绑定合作伙伴Lck(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。因为这个原因是TOM1L选择进一步功能研究。TOM1L克隆包含一个SH-3绑定域在氨基酸序列421 - 425 (LPPLP)和P-Tyr主题(YEEI)氨基酸460 - 463(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。与质粒转染293 t细胞转化为编码TOM1L单独或一起TOM1L Lck或菲英岛以检查的作用TOM1L Lck的活动和菲英岛。在从293 t细胞溶解产物TOM1L coexpressed了菲英岛(图gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba)或Lck(图gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba)、磷酸化蛋白质的数量(anti-PTyr染色)大幅增加,表明TOM1L的过度导致这些细胞整体激酶活性增加。Coexpression菲英岛或Lck TOM1L增加水平的磷酸化形式(anti-PTyr染色)anti-Fyn免疫沉淀反应菲英岛(图gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba)和anti-Lck免疫沉淀反应Lck(图gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba)。这表明TOM1L能够激活菲英岛和Lck虽然增加anti-Fyn anti-PTyr染色的免疫沉淀反应强得多比anti-Lck免疫沉淀反应。染色使用anti-Fyn抗体水平anti-Fyn免疫沉淀物从细胞转染TOM1L仅代表了内生的菲英岛(图gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba)。内生的Lck anti-Lck免疫沉淀物从细胞转染TOM1L独自没有可检测(图gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba


图1gydF4y2Ba
氨基酸序列的TOM1L克隆了七次酵母混动试验。SH3-binding域(LPPLP)和phosphotyrosine主题(P-Tyr) TOM1L糖基的标记。gydF4y2Ba
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图2gydF4y2Ba
(a) 293 t细胞转染质粒编码菲英岛单独或连同Myc-tagged TOM1L完整长度。菲英岛和TOM1L蛋白质被孤立使用anti-Fyn免疫沉淀反应,或由SDS anti-Myc抗体和化验−页面和免疫印迹中描述的材料和方法。免疫印迹分析原发性anti-phosphotyrosine (anti-PTyr) anti-Fyn或anti-Myc抗体,分别。(b) 293 t细胞转染质粒编码Lck单独或连同Myc-tagged TOM1L完整长度。Lck和TOM1L蛋白质被免疫沉淀反应使用anti-Lck或孤立anti-Myc抗体和SDS−页面和免疫印迹分析中描述的材料和方法。(c)激酶试验:Anti-Fyn免疫沉淀反应和5孵化gydF4y2Ba Ci (gydF4y2Ba -32 p) ATP和2毫米(Val5)血管紧张素II的外源性底物管激酶缓冲区1,3,5分钟在室温下。gydF4y2Ba

TOM1L大大磷酸化在anti-Myc免疫沉淀物溶解产物,TOM1L cotransfected了菲英岛(图gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba)或Lck(图gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba),这表明TOM1L菲英岛和Lck生长的基质。gydF4y2Ba

的能力TOM1L激活菲英岛一个激酶试验进一步研究使用基质血管紧张素ⅱ(图gydF4y2Ba2 (c)gydF4y2Ba)。菲英岛的能力使磷酸化血管紧张素ⅱ1 -,3 -或5分钟的反应大大增加anti-Fyn抗体沉淀的溶解产物菲英岛和TOM1L cotransfected相比anti-Fyn抗体沉淀的溶解产物菲英岛被转染空向量(图gydF4y2Ba2 (c)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

3.2。细胞内定位TOM1LgydF4y2Ba

为了检查TOM1L的胞内定位,一只兔子anti-TOM1L抗体和免疫组织化学进行了使用共焦荧光显微镜。SK-N-SH神经母细胞瘤和海拉细胞被用于免疫染色。gydF4y2Ba

的胞内表达了TOM1L染色SK-N-SH神经母细胞瘤细胞与兔子anti-TOM1L抗体(图gydF4y2Ba3(一个)gydF4y2Ba)gydF4y2Ba。检查anti-TOM1L抗体的特异性,相同的细胞染色正常兔血清(图gydF4y2Ba3 (b)gydF4y2Ba)或抗体TOM1L一起重组TOM1L蛋白质(图gydF4y2Ba3 (c)gydF4y2Ba)。我们得出的结论是,anti-TOM1L抗体在原子核周围细胞器特别是染色。gydF4y2Ba

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图3gydF4y2Ba
细胞表达的TOM1L SK-N-SH神经母细胞瘤细胞通过共焦显微镜检查。共焦成像与抗体的细胞染色TOM1L(红色)(a),正常兔血清(b)或抗体TOM1L一起重组TOM1L (c),细胞与DAPI染色(蓝色)在所有图像可视化细胞核的本地化。gydF4y2Ba

识别细胞器被anti-TOM1L抗体染色,我们使用的anti-TGN38 trans-Golgi网络数据gydF4y2Ba4(一)gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba4 (b)gydF4y2Ba)和anti-Cathepsin lysomal隔间(图D抗体gydF4y2Ba4 (d)gydF4y2Ba)。这些与anti-TOM1L抗体染色,但是,我们发现了一个很好的匹配时合并MitoTracker红染色anti-TOM1L抗体染色,如图gydF4y2Ba5 (c)gydF4y2Ba(SK-N-SH细胞)和图gydF4y2Ba5 (f)gydF4y2Ba(海拉细胞)。gydF4y2Ba

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图4gydF4y2Ba
共焦成像的海拉细胞染色与抗体TOM1L(红色)和anti-trans-Golgi网络。个人数码图像分离:(a) anti-TOM1L(红色),(b) anti-trans-Golgi网络(绿色),(c)和合并图像。(d)海拉细胞沾anti-TOM1L(红色)和anti-Cathepsin d抗体(绿色)。细胞与DAPI染色(蓝色)可视化细胞核的本地化。gydF4y2Ba
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图5gydF4y2Ba
与线粒体的细胞表达TOM1L colocalize。共焦成像SK-N-SH神经母细胞瘤细胞((一)——(c))或海拉细胞((d) - (f))沾MitoTracker红色和TOM1L抗体。个人数码图像分离:((a)和(d)) MitoTracker红(红色),(b)和(e) anti-TOM1L(绿色),和合并图像((c)和(f))。细胞与DAPI染色(蓝色)可视化细胞核的本地化。gydF4y2Ba
3.2.1之上。减少TOM1L表达的核和- 2生产gydF4y2Ba

因为菲英岛和Lck是主要表达在t细胞,我们执行siRNA实验使用Jurkat t细胞进一步调查TOM1L的功能作用。执行的siRNA实验lenti virus-mediated感染的发夹结构。TOM1L的表达式是有效地抑制Jurkat细胞感染发夹结构与细胞感染一个向量相比缺乏发夹结构(负控制(图)gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。检查TOM1L的作用效应t细胞激活,Jurkat细胞被刺激- 2生产板绑定anti-CD3抗体和可溶性anti-CD28抗体。我们发现生产- 2的水平显著低于siRNA-infected细胞相比,负控制(数字gydF4y2Ba7(一)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba7 (b)gydF4y2Ba)。这种效果不能被视为是在同一个siRNA-infected细胞与PMA刺激后加上ionomycin(图gydF4y2Ba7 (c)gydF4y2Ba),这表明TOM1L的功能是下游和TCR和CD28近端。gydF4y2Ba


图6gydF4y2Ba
TOM1L蛋白表达的全溶菌产物和免疫沉淀物溶解产物(anti-TOM1L抗体)进行免疫印迹分析Jurkat核治疗后细胞。执行的siRNA实验lenti virus-mediated感染的发夹结构。TOM1L的表达式是有效地降低细胞内感染了发夹结构(siRNA)与细胞感染一个向量缺乏发夹结构(向量)。gydF4y2Ba
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图7gydF4y2Ba
2生产刺激Jurkat细胞TOM1L降低了核的表达。2生产显著低于刺激细胞感染发夹结构(siRNA)与细胞感染一个向量缺乏发夹结构(向量)。(一)刺激板绑定anti-CD3 (1gydF4y2Ba g /) + 1gydF4y2Ba 克/毫升anti-CD28抗体,48小时内,(b)与板绑定anti-CD3刺激(1gydF4y2Ba g /) + 0.25gydF4y2Ba 克/毫升anti-CD28抗体,48小时内,(c)细胞与50 ng / mL的PMA刺激+ 0.5gydF4y2Ba 克/毫升ionomycin 48小时。gydF4y2Ba
3.3。TOM1L和STAT3的表达gydF4y2Ba

Jurkat细胞转染质粒编码的STAT3 (Signal-transducer-andactivator-of-transcription-3)萤火虫荧光素酶的记者和TOM1L。TOM1L表达的T细胞导致显著增加输出STAT3基因记者(图gydF4y2Ba8gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba


图8gydF4y2Ba
Jurkat细胞转染用萤火虫荧光素酶的记者STAT3 (Signal-transducer-andactivator-of-transcription-3)连同质粒编码TOM1L或空质粒构建。包含在每个转染表达记者构造gydF4y2BaRenillagydF4y2Ba荧光素酶的控制下gydF4y2Ba 肌动蛋白启动子。转染后48小时内,细胞被清洗和细胞溶解在光度计阅读紧随其后。的活动gydF4y2BaRenillagydF4y2Ba荧光素酶在每个样本用于规范化荧光素酶的数据。gydF4y2Ba

4所示。讨论gydF4y2Ba

TOM1L在T细胞的功能没有被前面描述;然而,作为负调节上皮细胞的有丝分裂发生与生长因子提出了刺激gydF4y2Ba18gydF4y2Ba,gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。有人提议Tom1L1负调节Src促有丝分裂的信号引起的血小板源生长因子(PDGF)调制Src-receptor协会(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。进一步提出,在协会与CHC(网格蛋白重链)将在小窝Tom1L1减少Src,从而防止其与PDGF受体,这需要有丝分裂发生的感应gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。我们的研究结果表明TOM1L T细胞的促有丝分裂的作用,极大地降低了生产- 2所示在细胞TOM1L降低了核的表达。在T细胞的促有丝分裂的函数TOM1L进一步表明STAT3的表达水平增加后TOM1L超表达。已知STAT3的衬底SFK成员(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba],SFK各癌肿瘤细胞株抑制STAT3活动导致的损失(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。STAT3与肿瘤发生密切相关,其作用在癌症是由众多证据的途径,包括STAT3调节基因的表达,调节扩散(例如,原癌基因和细胞周期蛋白D1),抑制细胞凋亡(例如,Bcl-xL和存活素),或促进血管生成(例如,VEGF)(综述(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba])。在全面的基因和表达分析研究中,乳腺癌细胞的染色体17 TOM1L最近被确认为一种新的候选基因(gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。对比结果的促有丝分裂的影响TOM1L暗示TOM1L是依赖于细胞的功能类型和细胞刺激的方式。gydF4y2Ba

重组蛋白质的t细胞/ APC的界面,称为免疫突触(是)形成中发挥着重要作用的初始步骤,持续激活t细胞(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。很少有人了解细胞器形成T期间分配gydF4y2BahgydF4y2Ba细胞,但是,非常有趣的是,它最近已被证明,TgydF4y2BahgydF4y2Ba细胞激活需要对免疫突触线粒体易位(gydF4y2Ba24gydF4y2Ba]。在这项研究中,作者表明,线粒体的再分配是必要的,以维持CagydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba在质膜和Ca涌入gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba端依赖t细胞激活。在目前的研究中,我们的免疫组织化学数据显示,TOM1L蛋白质局部休息和nontransfected线粒体膜的细胞。线粒体的易位是在T细胞激活可以假设作为TOM1L如何解释与菲英岛/ Lck体内。这种机制可能以来TOM1L Lck /菲英岛绑定到质膜和近端识别和CD28gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

5。结论gydF4y2Ba

综上所述,我们的研究结果暗示TOM1L Jurkat t细胞有促有丝分裂的影响,参与一个新颖的细胞信号通路- 2生产和STAT3表达是至关重要的。理解的机制,控制活动Lck /菲英岛T细胞是非常重要的对于理解癌症和自身免疫性疾病的进展。gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

特别感谢罗伯塔肖特的技术援助项目和教授巴特障碍科学监督。都是前同事在分子细胞生物学实验室,索尔克生物研究所拉霍亚,美国。这项工作是支持的培训由美国国立卫生研究院和马格努斯Bergvall基金会,瑞典。gydF4y2Ba