毒力质粒(pYV)相关表型的表达毒性在致病因素gydF4y2Ba鼠疫gydF4y2Ba物种:一种方便的方法,监测pYV文化条件下的存在及其隔离/检测中的应用gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba在食品gydF4y2Ba

文摘gydF4y2Ba

在gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba,gydF4y2Bay伪gydF4y2Ba,gydF4y2Bay enterocoliticagydF4y2Ba、表型表达的毒力质粒(pYV: 70 - kb)相关遗传因素可能包括低钙响应(电感电容电阻测量,精确的殖民地,大小= 0.36毫米),菌落形态(大小= 1.13毫米),结晶紫(CV)绑定(暗紫色的殖民地),刚果红(CR)吸收(红查明殖民地,大小= 0.36毫米),自身凝集(AA =细胞粘合),和疏水性(HP =聚集的细胞)。gydF4y2Bay伪gydF4y2Ba是染色体密切相关gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属;gydF4y2Ba然而,gydF4y2Bay enterocoliticagydF4y2Ba是染色体更远亲gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba和gydF4y2Bay伪gydF4y2Ba。所有三个物种证明电感电容电阻测量,简历绑定和CR吸收。菌落形态、大小、AA,和惠普都表达的特征gydF4y2Bay伪gydF4y2Ba和gydF4y2Bay enterocoliticagydF4y2Ba但不是在gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba。刚果红的吸收gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba证明只在calcium-deficient CR草酸镁胰蛋白酶的大豆琼脂(CR-MOX),而这种表型表达CR-MOX和低钙琼脂糖媒体gydF4y2Bay伪gydF4y2Ba和gydF4y2Bay enterocoliticagydF4y2Ba。这些表型检测37°CC在24小时内gydF4y2Bay enterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2Bay伪gydF4y2Ba但没有出现,直到48 hgydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba由于经济增长放缓速度37°CC。pYV是不稳定的(即。,e一个年代ily lost under a variety of culture conditions) in all three species but is more unstable in鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba。具体的CR吸收gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2BaCR-MOX和延迟的时间间隔来表达电感电容电阻测量和CR吸收提供了一种方式来区分gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba从gydF4y2Bay enterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2Bay伪gydF4y2Ba。这些差异在pYV表达式gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba可用于分离和检测的食物。gydF4y2Ba

1。介绍gydF4y2Ba

属gydF4y2Ba鼠疫gydF4y2Ba由11个物种,但只有gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba,gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba,gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba是对人类致病。gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba被认为是祖先地有关吗gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba;然而,gydF4y2Bay伪gydF4y2Ba行为表型与临床gydF4y2Bay enterocoliticagydF4y2Ba(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。三种非常不同在他们引起的疾病;gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba引起肠胃炎当食用受污染的食物和从腹泻病人身上分离出来。gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba鼠疫的代理,可以引起口咽瘟疫由于未充分煮熟的山羊和骆驼肉类的消费或处理从被感染的动物的肉gydF4y2Ba2gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。感染鼠疫的风险、发病率和死亡率的消费食品故意污染的gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba目前还不清楚但真正潜在的。此外,耐多药菌株的鉴定gydF4y2Ba6gydF4y2Ba),这种病原体的潜在用途的故意污染的食物可能导致鼠疫在庞大的人口。gydF4y2Ba

三个质粒是参与的毒性gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba:(a) pYV(毒力质粒,70 kb, Yops, III型分泌系统),(b) pFra / pMT1 (96.2 kb,小鼠毒素:磷脂酶,F1 capsule-like抗原),和(c) pCP1 / pPst / pPla (9.6 kb,纤溶酶原激活物)gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。在这些质粒,pYV-encoded III型分泌系统(Yops)促进细胞毒性和瘟疫的常见症状gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。所有三个物种的pYV是相同的大小和高度保守的基因(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。它编码的能力目标淋巴组织在感染和遗传因素对于感染和克服宿主防御机制(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。的三个物种,pYV负责运输calcium-dependent生长表型在37°C。pYV-bearing的培养细胞在低钙/ calcium-deficient媒体抒发一个毫克gydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}端依赖低钙响应(Lcr),导致生产pYV-encoded virulence-associated抗原(V和W),以及一系列的蛋白质(Yops)发布。低钙反应表达表型形成稳固的媒体的定位殖民地(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。此外,pYVgydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba与其他几个gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba的表型特征,表达了在37°C。特征明显的pYV-associated致病因素包括菌落形态/大小、电感电容电阻测量,结晶紫(CV)绑定,刚果红(CR)吸收,自身凝集(AA),疏水性(HP), mannose-resistant血细胞凝集,表达表面fibrillae和抗血清gydF4y2Ba11gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。然而,这些生理特征的表达在37°C也促进pYV和随之而来的失踪的表型相关。自gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba有几乎相同的染色体DNA序列和致病性的远亲吗gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba),本文的目的是审查是否pYV表达引起的表型特征gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba并确定所需的生长条件这些表型特征的表达。此外,检测和隔离gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba通过监测pYV-encoded Lcr和CR-uptake毒性表型进行了讨论。gydF4y2Ba

2。表达式pYV-Associated表型的致病因素gydF4y2Ba

在gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属、y .伪gydF4y2Ba和gydF4y2Bay enterocolitica,gydF4y2Ba表型的表达毒性特征是由pYV编码(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。临床的导数gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba(KIM5:伊朗库尔德人)菌株缺少102 - kb的Pgm染色体位点(色素),但窝藏这三毒力质粒(pYV pFra / pMT1, F1) (gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba),用于我们的研究。Pgm轨迹只是出现在gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba。这个压力是有条件地毒性(有条件的突变只感染如果接种静脉注射),可用于b12实验室设施(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。这株显示CR-uptakegydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba由于pYV的存在;然而,另一个临床菌株的导数gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2BaKuma应变,包含了染色体编码的行列式,PgmgydF4y2Ba^+gydF4y2BaCR-uptake但缺乏pYV [gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。临床分离株gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba(O血清型:3;应变蒙古包)和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba(O血清型:1 b;应变PB1 / +)也被在我们的研究中gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。pYV的存在gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba,gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba,gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba证实了PCR检测目标的一个关键调节基因,gydF4y2BavirFgydF4y2Ba、现在pYV(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,通道2、6、10)(gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。引物(5′-TCATGGCAGAACAGCAGTCAG-3′, 5′-ACTCATCTTACCATTAAGAAG-3′)的检测gydF4y2BavirFgydF4y2Ba基因(430 - 1020 -核苷酸地区)放大591碱基对(bp)序列的毒力质粒(gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2BaKuma应变没有显示PCR测定pYV的存在。gydF4y2Ba

图1gydF4y2Ba

virFgydF4y2Ba virFgydF4y2Ba YgydF4y2Ba enterocoliticagydF4y2Ba YgydF4y2Ba 伪gydF4y2Ba YgydF4y2Ba 耶,gydF4y2Ba YgydF4y2Ba enterocoliticagydF4y2Ba YgydF4y2Ba 伪gydF4y2Ba YgydF4y2Ba 耶尔gydF4y2Ba YgydF4y2Ba enterocoliticagydF4y2Ba YgydF4y2Ba 伪gydF4y2Ba YgydF4y2Ba 耶,gydF4y2Ba YgydF4y2Ba enterocoliticagydF4y2Ba YgydF4y2Ba 伪gydF4y2Ba YgydF4y2Ba 耶尔gydF4y2Ba 7gydF4y2Ba 确认pYV在原始菌株的存在,细胞在红色查明殖民地,细胞周围的白边红查明从CR-MOX菌落PCR试验针对一个关键的调节基因,gydF4y2Ba编码转录激活Yop51 pYV-encoded外膜蛋白的表达。引物对(5′-TCATGGCAGAACAGCAGTCAG-3′, 5′-ACTCATCTTACCATTAAGAAG-3′)的检测gydF4y2Ba基因(430 - 1020 -核苷酸地区)放大591碱基对(bp)毒力质粒的产品。巷,50 - 1000个基点梯子标记;车道,1、5、9显示591 - bp在细胞产品没有白色的边境gydF4y2Ba。gydF4y2Ba,gydF4y2Ba。,ggydF4y2BaydF4y2Ba。gydF4y2Ba分别;通道2、6、10显示591 - bp的存在产品的原始菌株gydF4y2Ba。gydF4y2Ba,gydF4y2Ba。,ggydF4y2BaydF4y2Ba。gydF4y2Ba分别在表型评价;车道3、7和11展示的存在591 - bp在红色细胞产品定位的殖民地gydF4y2Ba。gydF4y2Ba,gydF4y2Ba。,ggydF4y2BaydF4y2Ba。gydF4y2Ba分别和车道4、8和12显示591 -英国石油产品的存在细胞内红色的查明殖民地被白色边界所包围gydF4y2Ba。gydF4y2Ba,gydF4y2Ba。,ggydF4y2BaydF4y2Ba。gydF4y2Ba分别为(]gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

在我们的研究中,pYV-negative衍生品(PgydF4y2Ba^−gydF4y2Ba)gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2BaKIM5,gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba,gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba从大型持平殖民地,出现自发从pYV-positive (PgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba在37°C)文化发展脑心浸液与238年琼脂糖gydF4y2BaμgydF4y2BaM CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}(BHO) [gydF4y2Ba16gydF4y2Ba),被用来作为消极的控制。pYV-encoded遗传决定因素的表达gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba,gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪,gydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba是评估gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。当PgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba和PgydF4y2Ba^−gydF4y2Ba菌株培养在37°C为24 - 48 h在低钙脑心浸液琼脂糖和238gydF4y2BaμgydF4y2BaM CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}(BHO),低钙与311年大豆胰蛋白酶的肉汤琼脂糖gydF4y2BaμgydF4y2BaM CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}(TSO)和calcium-deficient草酸镁与胰蛋白酶的大豆琼脂(TSA)与20%琼脂D-galactose,草酸钠0.25米,0.25米氯化镁(氧化物),PgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba细胞的gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba产生精确殖民地(0.36毫米直径;图gydF4y2Ba2 (e)gydF4y2Ba(一)在24 h,而gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2BaPgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba形成精确殖民地在48 h。PgydF4y2Ba^−gydF4y2Ba从每个代表菌株细胞形成更大的殖民地(1.37毫米直径;图gydF4y2Ba2 (e)gydF4y2Ba(B),每个P的大小和菌落形态gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba当生长在75gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL刚果红(CR)包含BHO (CR-BHO)、TSO (CR-TSO),和1% CR包含(CR-MOX)显示相同的表达式的电感电容电阻测量以及CR-uptake(0.36毫米直径;图gydF4y2Ba2 (f)gydF4y2Ba(一)在这些条件下(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。CR-uptake被证明为亮红色查明殖民地gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba在这三个媒体(表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。然而,CR-uptakegydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba给了一个不太强烈的红色的相比gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2BaCR-BHO和CR-TSO(表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)gydF4y2Ba。gydF4y2Ba增加了CR 100年BHO和TSO浓度gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL, 150gydF4y2BaμgydF4y2Ba克/毫升和200gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL不会增加的颜色强度gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2BaPgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba殖民地与殖民地的gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba。色彩对比的基础上,菌落和媒介,CR-MOX显示CR-uptake更合适gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2BaCR-BHO相比(表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。PgydF4y2Ba^−gydF4y2Ba从每个代表菌株细胞未能结合CR和形成更大的殖民地(1.37毫米直径;图gydF4y2Ba2 (f)gydF4y2Ba(B)。CR-uptake的差异和时间的差异表达的电感电容电阻测量和CR-uptakegydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba便于区分这个物种gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba。calcium-adequate (1500gydF4y2BaμgydF4y2Ba米)CR-BHA(脑心浸液琼脂)和CR-TSA(胰蛋白酶的大豆琼脂),P的殖民地gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba和PgydF4y2Ba^−gydF4y2Ba菌株的gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba保持白色或浅橙色类似报道gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba(17)。钙浓度在CR-BHO (238gydF4y2BaμgydF4y2BaM CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba})和CR-TSO (311gydF4y2BaμgydF4y2BaM CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba})相对较低,而在CR-MOX,草酸钠用于隔离钙导致calcium-deficient媒介。因此,CR-uptakegydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba更依赖于钙损耗比gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba。此外,gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2BaKuma (PgmgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba,pYVgydF4y2Ba^{- - - - - -gydF4y2Ba})未能结合CR CR-MOX和形成大型白色或浅橙色殖民地(直径1.37毫米)(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

(一)结晶紫绑定gydF4y2Ba

(b)菌落形态/尺寸gydF4y2Ba

(c) Hydropholicity测试gydF4y2Ba

(d)自身凝集试验gydF4y2Ba

(e)低钙响应gydF4y2Ba

吸收(f)刚果红绑定gydF4y2Ba

(一)结晶紫绑定gydF4y2Ba
(b)菌落形态/尺寸gydF4y2Ba
(c) Hydropholicity测试gydF4y2Ba
(d)自身凝集试验gydF4y2Ba
(e)低钙响应gydF4y2Ba
吸收(f)刚果红绑定gydF4y2Ba

图2gydF4y2Ba

鼠疫gydF4y2Ba 7gydF4y2Ba 评估pYV-associated恶性表型的致病性gydF4y2Ba物种(]gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

在CR-MOX CR-uptake的表达是由pYV编码进一步证实使用衍生品的临床菌株的数量gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba(CDC A1122 CO99.3015、横滨、P12 D1, D3, D5, D7, D9, D13, D17)包含的Pgm但缺乏pYV (gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。这些的PgmgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba/ pYVgydF4y2Ba^−gydF4y2Ba菌株没有绑定CR-MOX CR。这些观察表明,CR-uptakegydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba生长在CR-MOX与pYV相关联。因此,pYV-encoded CR-uptake Pgm无关gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba和Pgm轨迹并不表示在CR-MOX 37°C。CR表型是由pYV编码只在calcium-depleted媒介。因此,CR-uptakegydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba生长在CR-MOX独立于染色体编码致病因素(Pgm CR绑定gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba),与pYV的存在有关。gydF4y2Ba

另一个特征的CR-uptake PgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba菌株的gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba圆周的外观是白色不透明的红色中心48 h后孵化在37°C (gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。这种特点的殖民地也观察到gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba经过48小时的孵化和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba72 h后孵化。的时机这殖民特征是另一个参数,可用于识别PgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba菌株的gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。红色的细胞定位殖民地(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba车道3、7和11)和红集中殖民地包围一个白边(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba、车道4、8、12)包含pYVgydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba类似于报告的细胞gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。细胞周围的白色边界(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba通道1、5、9)不包含pYV PCR做了演示。当pYV-bearing细胞恢复从红查明殖民地亚文化BHI肉汤(脑灌注肉汤)28°C 18 h,gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba聚合酶链反应(图显示pYV的存在gydF4y2Ba3gydF4y2Ba道2和3)和pYV-associated表型特征,gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba没有港口pYV(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,莱茵在同等条件下(表1)gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。这表明pYV更稳定gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba比在gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba。因此,CR吸收也可以用来隔离可行的PgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba细胞gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

图3gydF4y2Ba

virFgydF4y2Ba virFgydF4y2Ba YgydF4y2Ba 耶尔gydF4y2Ba YgydF4y2Ba enterocoliticagydF4y2Ba YgydF4y2Ba 伪,gydF4y2Ba 细胞中检测pYV恢复从红色查明殖民地和亚文化在脑心浸液肉汤聚合酶链反应试验针对28°CgydF4y2BapYV的基因。引物对(5′-TCATGGCAGAACAGCAGTCAG-3′, 5′-ACTCATCTTACCATTAAGAAG-3′)的检测gydF4y2Ba基因(430 - 1020 -核苷酸地区)放大591碱基对(bp)毒力质粒的产品。巷,50 - 1000个基点梯子标记;巷1显示没有591 -英国石油产品gydF4y2Ba。gydF4y2Ba;道2和3显示591 -英国石油产品的存在gydF4y2Ba。gydF4y2Ba和gydF4y2Ba。gydF4y2Ba分别。gydF4y2Ba

殖民地的洪水PgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba菌株在底部钻具组合,运输安全管理局,CR-BHO CR-TSO, CR-MOX生长在37°C 100简历溶液的浓度gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL表明PgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba细胞从所有三个gydF4y2Ba鼠疫gydF4y2Ba物种绑定的简历和产生暗紫色殖民地(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba;图gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba(A), PgydF4y2Ba^−gydF4y2Ba殖民地没有绑定的简历并保持白色(图gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba(B)。简历和CR-binding化验可以有效地识别个人pYV-bearing殖民地从一个混合文化的PgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba和PgydF4y2Ba^−gydF4y2Ba压力(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。简历绑定的CR吸收无关;这两个现象是独立以来简历吸收与电感电容电阻测量。gydF4y2Ba

的菌落大小PgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba细胞gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba小(1.13毫米直径;图gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba比相应的P (A)gydF4y2Ba^−gydF4y2Ba细胞生长在底部钻具组合和TSA 37°C(直径2.4毫米:图gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba(B) (gydF4y2Ba16gydF4y2Ba),而PgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba和PgydF4y2Ba^−gydF4y2Ba细胞的gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba大约是相同的大小(直径1.3 - -1.4毫米SD±0.11)在37°C。这可能是由于这一事实的最适生长温度gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba28°C(7、9、11岁、14岁)。疏水性乳胶粒子凝集是积极的(图gydF4y2Ba2 (c)gydF4y2BapYV-bearing (A)gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba但对P -gydF4y2Ba^−gydF4y2Ba细胞(图gydF4y2Ba2 (c)gydF4y2Ba(B)。gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba没有显示出惠普pregrown细胞从CR-BHO测试时,CR-TSO, CR-MOX,底部钻具组合和TSA(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。因此,惠普的gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba表达在低钙、calcium-deficient calcium-adequate媒体,表明惠普也是non-Lcr财产。gydF4y2Ba

鹰的自身凝集试验基本培养基补充10%胎牛血清是积极的(图gydF4y2Ba2 (d)gydF4y2BapYV-bearing (A)gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba但不是PgydF4y2Ba^−gydF4y2Ba细胞(图gydF4y2Ba2 (d)gydF4y2Ba(B)。gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba文化未能autoagglutinate(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。在惠普和AA测试,PgydF4y2Ba^−gydF4y2Ba三种菌株呈阴性。的解释缺乏表达惠普和AA在上述条件下表型特征gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba可能是由于缺乏合成pYV-associated表面因素必不可少的惠普和AA或由于结构/监管变化pYV [gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

六pYV-associated表型的评估结论,只有三个表型(电感电容电阻测量、CR-uptake和CV绑定)表示gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba,而所有六个属性表示gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba。这个微分表达pYV-encoded表型可能归因于gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba试验条件虽然pYV是这些物种的基因高度保守的gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba,gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。因此,pYV-encoded表型可以用作这些病原体毒性标记gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。虽然染色体DNA序列显示gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba几乎是相同的和密切相关gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba),后者展品的pYV-associated表型的表达更多的远亲gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba并显示类似的特征和临床症状gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

3所示。过程监控pYV的存在gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba细胞在存储和使用Lcr-CR-Uptake培养技术gydF4y2Ba

特征明显的pYV-associated致病因素可用于确定质粒维护、隔离/检测,表明不同血清型的pYV-bearing的毒性gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba在食品(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba,gydF4y2Ba22gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba25gydF4y2Ba),以及确定pYV的存在gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。pYV不稳定在所有三个病原体,和失去pYV无毒克隆培养或在食品加工结果后(不致命的老鼠;不会引起瘟疫)[gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba26gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。重复传递文化,扩展存储在4°C或−20°C,和实验室操作以及接种的gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba在温度> 30°C会导致的损失pYV [gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。此外,pYV更不稳定gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba比的,车道1)gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,通道2和3)gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。pYV导致的损失最终由细胞过度生长缺乏pYV和导致的损失的毒性和随之而来的失踪pYV-associated毒性特征(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba,gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

在一项研究的发展gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba在牛肉,发现文化失去了pYV期间准备的培养液gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。是不可能维持细胞pYV股票文化之前使用标准的程序开发(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。因此,很难进行研究gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶,gydF4y2Ba反映了pYV-bearing的实际行为gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba。在牛肉,少pYV细胞的增长速度分别为0.096和0.287 CFU / h 10到25°C,分别;(gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]然而,pYV-bearing细胞增长率0.057 CFU / h和0.233 CFU / h 10点25°C,分别为(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。增长率pYV-positive和pYV-negative菌株之间的差异gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba在较低温度下更加明显。没有增长的pYV-bearing应变在0和4°C的增长率相比pYV-negative菌株的0.003和0.016 CFU / h在0和4°C,分别在牛肉gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。因此,缺乏pYV导致更快的增长速度,并不代表真正的pYV-bearing应变的增长速度。因此,它是非常重要的维持pYVgydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba正确研究pYV-bearing菌株的生长行为为了发展这个食品中病原体的增长模式。pYV的不稳定的性质gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba需要考试pYV的存在及其毒性特征在实验室操作和调查。gydF4y2Ba

报告等。gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba)开发了一个程序来监视pYV的存在gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba细胞在存储和使用Lcr-CR-binding培养技术(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba)、PCR检测和pYV-associated毒性特征的表达。必须确认pYV实验文化的存在证明virulence-associated表型在场,确认pYV-encoded的存在gydF4y2BavirFgydF4y2Ba基因的PCR试验(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba巷3)(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。监控程序的存在pYV和区分pYV阳性克隆pYV-negative殖民地在实验室调查概述在表gydF4y2Ba3gydF4y2Ba(gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。如表中所述gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,第一步是文化gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2BaCR-MOX和CR-BHO孤立pYV-bearing克隆从冻结的股票文化。pYV-positive殖民地出现红查明殖民地(直径0.36毫米)显示两个电感电容电阻测量和CR-uptake而pYV-negative殖民地出现更大的白色或橙色殖民地(直径1.37毫米)(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。菌落形态和CR-uptake被用来区分pYV-positive克隆和pYV-negative殖民地。Lcr和CR阳性克隆PCR试验进一步证实了pYV积极的(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,莱茵4:CR-MOX和巷5:由pYV-associated CR-BHO)和电感电容电阻测量,CR吸收,CV-binding表型(见表gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。这些pYV-bearing克隆被接种到BHI肉汤冻和工作准备的股票文化如表所示gydF4y2Ba3gydF4y2Ba。冷冻储存和准备工作之前股票文化,文化在BHI肉汤准备28°C测试pYV的存在及其virulence-associated表型(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,巷6)。Lcr-CR-positive克隆CR-MOX被用作工作文化和股票可以用于实验室研究的15天。经过那段存储、红查明的殖民地gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba失去了pYV(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,莱茵11)。CR-BHO介质也成功地用于确保pYV的选择gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba尽管CR-uptake不是CR-MOX一样强烈。Lcr-CR阳性克隆被用作工作从CR-BHO股票文化,可以存储30天在2°C。确保选择pYV的这个过程的有效性gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba细胞,我们也检查和监控pYV稳定在嗨肉汤,pYV-bearing细胞的接种CR-MOX, CR-BHO。gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba从股票文化储存在2°C CR-MOX CR-BHO亚文化,解释图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba(gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。pYV的存在gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba细胞中、后每个通道是监控和确认每一步转移(没有文化。2 - 5)的PCR分析pYV和pYV-associated表型的表达毒性特征,包括电感电容电阻测量,CR吸收和简历绑定。PCR数据pYV如图的存在gydF4y2Ba1gydF4y2Ba(车道7 - 10)。PCR结果确认引物扩增591碱基对(bp)产品从pYV (gydF4y2BavirFgydF4y2Ba每个阶段的文化基因)如上所述,所有pcr阳性克隆CR-MOX和CR-BHO显示恶性表型特征包括电感电容电阻测量,CR-uptake,简历绑定。的存在gydF4y2BavirFgydF4y2Ba基因显示pYV的存在,赋予pYV-associated表型。gydF4y2Ba

图4gydF4y2Ba

YgydF4y2Ba 耶尔gydF4y2Ba virFgydF4y2Ba virFgydF4y2Ba ^{+gydF4y2Ba +gydF4y2Ba} 5gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba 30.gydF4y2Ba 确认pYV的存在gydF4y2Ba。gydF4y2Ba前的原始菌株接种,从CR-MOX CR-positive克隆,CR-BHO, BHI汤使用PCR试验针对一个关键的调节基因gydF4y2Ba从pYV。引物对(5′-TCATGGCAGAACAGCAGTCAG-3′, 5′- ACTCATCTTACCATTAAGAAG-3′)的检测gydF4y2Ba基因(430 - 1020 -核苷酸地区)放大591 - bp -产品从毒力质粒。的Lcr-CRgydF4y2Ba克隆从pYV显示591个基点的存在产品(通道2 - 10和12)。巷1,50 - 1000 bp梯子标记;巷2 -控制没有模板;巷3,原始KIM5应变作为积极的控制;道4、5、Lcr-CRgydF4y2Ba殖民地分别从CR-MOX和CR-BHO(图gydF4y2Ba;不。1);6巷BHI汤(图gydF4y2Ba;1号通道;不。2);巷7gydF4y2Ba超越文化CR-MOX(没有。3;1号通道);巷8股票文化CR-BHO(没有。3;1号通道);巷9 BHI肉汤(没有。4,第二段CR-MOX);莱恩BHI 10(没有汤。4,第二段CR-BHO); lane 11 (no. 5, 2nd passage on CR-MOX) showing the absence of 591-bp product, and lane 12 (no. 5, 2nd passage on CR-BHO) []。gydF4y2Ba

图5gydF4y2Ba

鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba 30.gydF4y2Ba 确认的pYV,gydF4y2Ba(]gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

总之,描述程序提供一种方法来确保pYV-bearing菌株的选择gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba和研究pYV-bearinggydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba不失pYV在实验过程中(gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]gydF4y2Ba。gydF4y2Ba尽管CR-BHO是更好的媒介接种pYV-bearinggydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba,pYV-bearing红色查明殖民地在CR-MOX由于更强烈更容易察觉吸收CR的细胞(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。因此,使用CR-MOX准备的股票文化和监控的选择pYV建议调查pYV-bearing的增长gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba在食物。因此,这个过程将只允许Lcr-CR-positive pYV-bearing克隆用于研究增长行为,经济增长模型,在食品及相关研究。gydF4y2Ba

4所示。CR-MOX隔离/检测中的应用gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba在食品gydF4y2Ba

鼠疫杆菌gydF4y2Ba可引起口咽瘟疫的消费或处理从被感染的动物的肉gydF4y2Ba2gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。因此,故意污染的食物gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba有一个重要的角色在人类的传播鼠疫。现有微生物媒体为选择性隔离/检测而设计的gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba食品中基于表型分析被发现是不令人满意。本节的目的是审查的发展为标识/隔离pYV-bearing替代方法gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba基于的能力gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba在特定条件下将CR在calcium-depleted CR-MOX。gydF4y2Ba

目前,世界卫生组织(世卫组织)(gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba)建议使用脑心浸液(BHA)羊血琼脂和MacConkey琼脂的隔离gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba。这些增长媒体适合无菌食品;然而,隔离的gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba从未经消毒的食物是复杂的存在背景植物争夺营养在中。因此,众多殖民地种植在这些非选择性媒体需要额外测试的识别病原体。MacConkey琼脂具有一定程度的选择性;但是简历和胆汁盐限制的增长gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]。gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba菌株表现出缓慢或根本没有增长gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba在两个cefsulodin-irgasan-novobiocin (CIN)琼脂和irgasan-nystatin琼脂(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba)选择性的媒体在我们实验室测试时(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。这可能是由于选择性物质使用在这个媒体的水平。殖民地上形成有选择性的媒体需要进一步测试,以确定他们gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba。这些测试耗时、昂贵和劳动密集型以来大量的假定的殖民地必须屏蔽。gydF4y2Ba

钙浓度在CR-BHO (234gydF4y2BaμgydF4y2BaM CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba})相对较低,而在CR-MOX,草酸钠用于隔离钙,使中钙不足(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。CR钙摄入不足的比较CR-BHO和calcium-depleted CR-MOX之间gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶,YgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪,gydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba表明这种毒性pYV-positive菌株的表型gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba只有当镀上calcium-depleted CR-MOX [gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。因此,CR吸收gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba更依赖于钙损耗比gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba。因此,特定的CR对CR-MOX吸收gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba可以用来区分gydF4y2Ba鼠疫耶尔森氏菌属gydF4y2Ba从gydF4y2Bay enterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2Bay伪gydF4y2Ba(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。这将提供诊断价值如下:疑似食品样品镀CR-BHO和CR-MOX。如果殖民地CR吸收只在CR-MOX在培养48 h后37°C,那么那些CRgydF4y2Ba^+gydF4y2Ba殖民地可以隔离和标识gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba压力(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。这种技术将提高隔离/检测gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba菌株在微生物群落竞争媒体的正确选择和孵化时间。的gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba克隆可以进一步证实了PCR瞄准gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba具体plasmid-encoded纤溶酶原激活物基因(gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]。CR吸收的特异性gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2BaCR-MOX,一些种类的细菌包括食源性病原体进行了测试。这些非gydF4y2Ba鼠疫gydF4y2Ba物种没有形成红色查明殖民地,没有形成一个白色边框的红色中心殖民地CR-MOX [gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。此外,这种隔离/检测方法gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba在食物被人为污染的生物复苏消毒验证牛肉(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。因此,CR CR-MOX摄入gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Ba提供了一个隔离/微生物方法检测病原体。总之,特定的CR吸收gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba耶尔gydF4y2Bacalcium-deficient介质提供了筛选中隔离,检测和区分这种病原体gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2BaenterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2BaYgydF4y2Ba。gydF4y2Ba伪gydF4y2Ba,这种方法也适用于食物。gydF4y2Ba

信息披露gydF4y2Ba

提到的贸易名称或商业产品在这个刊物的目的仅仅是为了提供特定的信息,并不意味着美国农业部推荐或认可。gydF4y2Ba

引用gydF4y2Ba

1. b·雷恩”yersiniae-a模型属研究细菌病原体的快速进化,”gydF4y2Ba自然评论微生物学gydF4y2Ba,1卷,不。1,55 - 64、2003页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
2. a·b·克里斯蒂·t·h·陈,s . s . Elberg“瘟疫在骆驼和山羊:他们的角色在人类流行,”gydF4y2Ba《传染病杂志》上的研究gydF4y2Ba,卷141,不。6,724 - 726年,1980页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
3. A . Arbaji s Kharabsheh s Al-Azab et al .,”一个12-case咽瘟疫爆发后食用骆驼肉,约旦,东北部”gydF4y2Ba《热带医学寄生虫学gydF4y2Ba,卷99,不。8,789 - 793年,2005页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
4. a . a b•本•赛义德:a . Al-Hamdan和r·e·方丹“瘟疫从骆驼吃生肝”,gydF4y2Ba新发传染病gydF4y2Ba,11卷,不。9日,第1457 - 1456页,2005年。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
5. t·莱斯利·c·a·怀特豪斯美国Yingst et al .,“肠胃炎爆发所致gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba在阿富汗,”gydF4y2Ba流行病学和感染gydF4y2Ba,卷139,不。5,页1 - 8,2011。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
6. m . Galimand a . Guiyoule g . Gerbaud et al .,“多药耐药性gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba由转移质粒。”gydF4y2Ba新英格兰医学杂志》上gydF4y2Ba,卷337,不。10日,677 - 680年,1997页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
7. 报告和c·h·索莫斯”检测gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba相比之下的毒力质粒(pYV / PCD)相关的表型gydF4y2Ba鼠疫gydF4y2Ba物种”,gydF4y2Ba《食品安全gydF4y2Ba,28卷,不。3、453 - 466年,2008页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
8. r·r·布鲁巴克”gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba和黑死病”gydF4y2Ba的原核生物gydF4y2Bam·德沃金,s . Falkow e·罗森博格和大肠Stackebrandt, Eds。,卷。6,ch一个pter 3.3.14, pp. 399–442, Springer, New York, NY, USA, 2006.视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
9. s . w . Bearden和r·d·佩里”实验室的维护和表征gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba”,gydF4y2Ba当前协议在微生物学gydF4y2Ba,没有。11日,5 b.1.1-5b.1.13, 2008页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
10. r·d·佩里和j . d . Fetherston。”gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba病原学的代理瘟疫”,gydF4y2Ba临床微生物学检查gydF4y2Ba,10卷,不。1、35 - 66年,1997页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
11. r . m . Robins-Browne。”gydF4y2Ba鼠疫enterocoliticagydF4y2Ba,“在gydF4y2Ba食品微生物学、基础和前沿gydF4y2Bam·p·道尔l . r . Beuchat, t·j·蒙特维尔。,pp. 215–245, ASM Press, Washington, DC, USA, 2nd edition, 2011.视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
12. 大肠Carniel。”gydF4y2Bay enterocoliticagydF4y2Ba和gydF4y2Bay伪gydF4y2Ba致肠病的yersiniae”gydF4y2Ba的原核生物gydF4y2Bam·德沃金,s . Falkow e·罗森博格和大肠Stackebrandt, Eds。,ch一个pter 3.3.13, pp. 270–398, Springer, New York, NY, USA, 2006.视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
13. 美国报告”,致病性gydF4y2Ba鼠疫enterocoliticagydF4y2Ba,“在gydF4y2Ba指南食源性病原体gydF4y2Bar·g·拉贝风和s·加西亚,Eds。,pp. 245–255, John Wiley and Sons, New York, NY, USA, 2001.视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
14. m·阿克特曼k . Zurth g . Morelli g . Torrea a . Guiyoule,大肠Carniel。”gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba瘟疫的原因,最近出现了克隆的gydF4y2Ba鼠疫的伪gydF4y2Ba”,gydF4y2Ba美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国gydF4y2Ba,卷96,不。24日,第14048 - 14043页,1999年。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
15. 美国报告”,比较PCR检测致病性的样品制备方法gydF4y2Ba鼠疫enterocoliticagydF4y2Ba从地面猪肉使用刷水和泥浆匀浆技术,”gydF4y2Ba分子和细胞探针gydF4y2Ba,17卷,不。2 - 3、99 - 105年,2003页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
16. 报告,c . Turner-Jones m·m·泰勒和r . v . Lachica”的简单分析钙依赖性的致命的质粒克隆gydF4y2Ba鼠疫enterocoliticagydF4y2Ba”,gydF4y2Ba临床微生物学杂志gydF4y2Ba,28卷,不。4、798 - 800年,1990页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
17. 报告,c . Turner-Jones和r . v . Lachica方便琼脂糖培养基同时测定的低钙响应的毒性菌株和刚果红绑定gydF4y2Ba鼠疫enterocoliticagydF4y2Ba”,gydF4y2Ba临床微生物学杂志gydF4y2Ba卷,29号10日,2341 - 2344年,1991页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
18. 报告,b·科特雷尔和a·r·皮卡德”使用一个单一的过程选择性富集,分离,和识别的质粒的毒性gydF4y2Ba鼠疫enterocoliticagydF4y2Ba从猪肉样品各种血清型的。”gydF4y2Ba应用与环境微生物学gydF4y2Ba,卷63,不。5,1657 - 1660年,1997页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
19. 报告和科特雷尔,“直接检测和隔离的质粒致命的血清型gydF4y2Ba鼠疫enterocoliticagydF4y2Ba从各种食物。”gydF4y2Ba应用与环境微生物学gydF4y2Ba,卷63,不。12日,第4955 - 4952页,1997年。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
20. 美国报告、l·k·康威和r . v . Lachica测定结晶紫绑定”毒性的质粒克隆的快速识别gydF4y2Ba鼠疫enterocoliticagydF4y2Ba”,gydF4y2Ba临床微生物学杂志gydF4y2Ba,25卷,不。6,1039 - 1042年,1987页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
21. t . Nesbakken g . Kapperud h . Sorum和k . Dommarsnes结构可变性40 - 50 Mdal毒力质粒gydF4y2Ba鼠疫enterocoliticagydF4y2Ba。质粒的地理和生态分布变异。”gydF4y2BaActa没有Microbiologica et Immunologica ScandinavicagydF4y2Ba,卷95,不。3、167 - 173年,1987页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
22. m . Fredriksson-Ahomaa和h . Korkeala“低致病性的发生gydF4y2Ba鼠疫enterocoliticagydF4y2Ba在临床、食品和环境样品:一个方法论的问题,“gydF4y2Ba临床微生物学检查gydF4y2Ba,16卷,不。2、220 - 229年,2003页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
23. k . Jurikova b . Gottwaldova s Jackova和j .Šubik”描述gydF4y2Ba鼠疫enterocoliticagydF4y2Ba孤立的口腔的猪在斯洛伐克,”gydF4y2Ba国际食品微生物学杂志》上gydF4y2Ba,24卷,不。3、419 - 424年,1995页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
24. e . Koeppel r·迈耶,j . Luethy Candrian,”致病的识别gydF4y2Ba鼠疫enterocoliticagydF4y2Ba通过结晶紫绑定和聚合酶链反应。”gydF4y2Ba在应用微生物学字母gydF4y2Ba,17卷,不。5,231 - 234年,1993页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
25. s . d . Weagant p .冯和j·t·StanfieldgydF4y2Ba鼠疫enterocolitica,鼠疫的伪在细菌学上的手册gydF4y2Ba,修订食品和药物管理局,采用AOAC公认的国际Gathersburg,医学博士,美国8日版,1998年。gydF4y2Ba
26. j·j·p·Kwaga可以和j . o .球队,”实验室调查中毒性菌株gydF4y2Ba鼠疫enterocoliticagydF4y2Ba和相关的物种从猪和猪肉产品分离,“gydF4y2Ba加拿大《微生物学gydF4y2Ba,38卷,不。2、92 - 97年,1992页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
27. 合作者,的s . c .史彻”low-CagydF4y2Ba^{2 +gydF4y2Ba}毒性反应的调节子人类病原yersiniae。”gydF4y2Ba微生物发病机理gydF4y2Ba,10卷,不。2、87 - 91年,1991页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
28. 合作者,的s . c .史彻e, g . v .普莱诺和j·b·Bliska Yops”gydF4y2Ba鼠疫gydF4y2Ba种虫害对人类致病。”gydF4y2Ba感染和免疫gydF4y2Ba,卷61,不。8,3105 - 3110年,1993页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
29. s .报告”效应在牛肉的脂肪增长和毒力质粒(pYV)稳定gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba”,gydF4y2Ba国际食品微生物学杂志》上gydF4y2Ba,卷136,不。3、372 - 375年,2010页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
30. 美国报告、k . Chaney-Pope和j·l·史密斯,”一个过程监控的存在毒力质粒(pYV)gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba在培养条件下,“gydF4y2Ba食源性病原体和疾病gydF4y2Ba,8卷,不。3、459 - 463年,2011页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
31. d·t·丹尼斯,k . l .计:格拉茨,j . d . Polan和e . TikhomriovgydF4y2Ba瘟疫手册:流行病学、分布、Surveillanceand控制gydF4y2Ba瑞士日内瓦,世界卫生组织,1999年。gydF4y2Ba
32. r .误码率、大肠Mamroud m . Aftalion et al .,“发展改善选择性琼脂培养基的隔离gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba”,gydF4y2Ba应用与环境微生物学gydF4y2Ba,卷69,不。10日,5787 - 5792年,2003页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba
33. c . Loiez s Herwegh f .钱包,阿尔芒,f . Guinet和r . j . Courcol”检测gydF4y2Ba鼠疫杆菌gydF4y2Ba实时PCR在痰。”gydF4y2Ba临床微生物学杂志gydF4y2Ba第41卷。。10日,4873 - 4875年,2003页。gydF4y2Ba视图:gydF4y2Ba出版商的网站gydF4y2Ba|gydF4y2Ba谷歌学术搜索gydF4y2Ba

版权gydF4y2Ba

版权©2011年环球报告和詹姆斯·l·史密斯。这是一个开放的分布式下文章gydF4y2Ba知识共享归属许可gydF4y2Ba,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。gydF4y2Ba