文摘

客观的。N⁶-Methyladenosine (m⁶)是最普遍的RNA表观遗传调制在真核细胞中,是一个关键的角色在不同的生理过程。新兴证据表明m的预后意义⁶监管者ZC3H13在肝细胞癌(HCC)。在此,本研究进行暴露的生物功能和机制的ZC3H13肝癌。方法。表达ZC3H13检查在收集肝细胞癌和正常组织,及其预后意义研究在公共数据库中。收益/损失功能化验了定义的角色ZC3H13 HCC进展。与PKM2的具体交互ZC3H13通过信使RNA在肝癌细胞中验证稳定性,RNA免疫沉淀反应,荧光素酶的记者和MeRIP qPCR化验。此外,救助实验揭示的机制。结果。ZC3H13肝癌中表达下调,其损失是相对于低迷的生存的结果。功能,过表达ZC3H13抑制增殖、迁移和入侵和肝癌细胞的凋亡水平升高。此外,ZC3H13过度敏感,顺铂和削弱了肝癌细胞的代谢重编程。机械,ZC3H13-induced m⁶修改模式实质上废除PKM2 mRNA的稳定性。ZC3H13促进肝癌细胞恶性行为通过PKM2-dependent糖分解的信号。结论。总的来说,通过m ZC3H13抑制肝癌的进展⁶A-PKM2-mediated糖酵解和敏化肝癌细胞对顺铂,肝癌治疗提供了新的见解。

1。介绍

肝细胞癌是最常见的致命的恶性疾病在全球范围内(1]。在所有肝细胞癌患者中,肝细胞癌(HCC)占据了90%以上(2]。患者的生存结果惨淡。仅仅5% - -15%的病人受益于彻底的切除,只有那些在早期阶段(3]。治疗策略包含动脉化疗对晚期病人(TACE)以及口腔索拉非尼(4]。然而,< 33%的病人不应对这种疗法以及开发标志着化疗耐药性在6个月内从开始治疗5]。此外,长期使用化疗药物引起的不良反应以及化疗无效(6]。因此,别说话和化疗药物都无法说提高肝癌的结果。需要深入探索寻找一种更好的方法来治疗肝癌。

N⁶-methyladenosine (m⁶)是最普遍的形式的内部mRNA修改(7]。米⁶修改已被建议作为最常见的化学改良型真核mrna (8),这是重要的控制等不同的细胞和生物事件RNA稳定、翻译、和拼接6]。估计,约0.1% -0.4%的mrna腺苷通过m可以变更⁶平均2 - 3米⁶修改网站/成绩单(9]。米⁶修改模式主要通过甲基转移酶复杂(“作家”),demethylase(“橡皮擦”),和rna结合蛋白(“读者”)10]。新兴的证据强调放松管制的重要性⁶修改在肝脏致癌作用9]。通过全面的分析⁶TCGA-HCC项目监管机构,刘等人提出,METTL3 YTHDF2, ZC3H13作为独立的肝细胞癌预后指标的结果(11]。METTL3表达表现出频繁upregulation在肝癌和促进肝细胞癌发展通过YTHDF2-dependent转录后的沉默SOCS2 [12]。另一项研究中提出的机制SUMOylated METTL3-mediated蜗牛mRNA在HCC进展[体内平衡13]。通过METTL3-dependent HBXIP引发肝癌细胞的代谢重编程⁶修改HIF-1α(14]。肝微环境促进肝细胞增殖和转移通过METTL3-mediated m⁶修改YAP1 [15]。YTHDF2引发肝癌干细胞表型以及转移通过调制通过一个m OCT4表达式⁶修改的方式(16]。YTHDF2删除引发炎症以及血管abnormalization在肝细胞癌(17]。YTHDF2削弱细胞增殖和生长通过扰动的表皮生长因子受体信使rna在肝细胞癌(18]。然而,迄今为止,没有实验证据证实ZC3H13在肝细胞癌发病机制的生物学意义。

在此,我们观察到的生物作用⁶监管者ZC3H13在肝细胞癌以及解决底层机制。我们的数据表明,ZC3H13抑制肝癌的进展与m⁶A-PKM2-mediated糖酵解和敏化肝癌细胞对顺铂。因此,我们的研究结果强调了ZC3H13-mediated m的关键功能⁶肝癌的修改和提供了一个有前途的治疗方案对肝癌。

2。材料和方法

2.1。病人和标本

原发性肝癌以及相邻控制组织标本30例人民医院的重庆长寿收获了这项研究。入选标准如下:(i)患者肝细胞癌的病理诊断和(2)病人治疗去除。与此同时,远处转移患者在诊断被排除在外。从每个病人知情同意被收购。本研究进行了符合伦理委员会的指导方针人民医院的重庆长寿和批准后,世界医学协会赫尔辛基宣言的道德标准。

2.2。生物信息学分析

基因表达分析互动分析(GEPIA) web服务器(19)是采用确定的mRNA表达ZC3H13在肝细胞癌和正常组织从癌症基因组图谱检索(TCGA)和基因型检测组织表达(GTEx)项目。生存分析的HCC患者的高、低表达ZC3H13提出了通过kaplan meier绘图机(https://kmplot.com/analysis/)。组间差异总体存活率与生存率较估计。

2.3。实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)

总RNA提取利用试剂盒试剂(Beyotime,中国)。总共500 ng RNA是通过HiScript反向转录II st-strand互补脱氧核糖核酸合成工具(豆类,北京)。RT-qPCR进行通过ChamQ通用SYBR qPCR大师混合(豆类、北京、中国)以及480年LightCycler乐器。引物的序列包括以下:ZC3H13: 5′-TCTGATAGCACATCCCGAAGA-3′(向前)和5′-CAGCCAGTTACGGCACTGT-3′(反向);PKM2: 5′- ATGTCGAAGCCCCATAGTGAA-3′(向前)和5′-TGGGTGGTGAATCAATGTCCA-3′(反向);和GAPDH: 5′- CTGGGCTACACTGAGCACC-3′(向前)和5′-AAGTGGTCGTTGAGGGCAATG-3′(反向)。数据是量化和比较Ct方法(2^−ΔΔCt)。

2.4。西方墨点法

组织和细胞标本细胞溶解与里帕缓冲区(Beyotime,中国)加蛋白酶抑制剂的鸡尾酒。细胞溶解提取蛋白质,蛋白质浓度进行评估与BCA试剂盒(σ,美国)。后来,同等数量的蛋白质有12% sds - page分离以及转移到聚乙二烯二氟化物膜(美国微孔)。被屏蔽后,膜被孵化主要抗体针对ZC3H13 (1/2000;ab70802;美国Abcam)、过剩(1/1000;ab156876;美国Abcam), LDHA (1/5000;ab52488;美国Abcam), LDHB (1/2000; ab264358; Abcam, USA), PKM2 (1/1000; ab85555; Abcam, USA), andβ肌动蛋白(1/5000;ab179467;美国Abcam)。然后,蛋白质乐队被二次孵化anti-mouse或anti-rabbit二级抗体(1/5000;ab7063 / ab7090;美国Abcam)。蛋白质乐队与发射极耦合逻辑分析可视化工具。

2.5。细胞培养

人类正常肝细胞L-O2以及人类肝癌细胞株HUH-7 Hep3B HepG2, smmc - 7721从写明ATCC(美国)检索。所有细胞都生长在杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)补充10%胎牛血清(的边后卫)以及1%链霉素/青霉素。5%的细胞生长在湿润环境有限公司₂在37°C。

2.6。转染

小核RNA)对合成ZC3H13以及PKM2特别沉默ZC3H13以及PKM2在Hep3B表达式和HUH-7细胞。肝癌细胞转染炒siRNAs作为si数控。的长篇ZC3H13互补脱氧核糖核酸合成然后subcloned pcDNA3.1向量建立pcDNA-ZC3H13超表达质粒(OE-ZC3H13)。质粒都从GenePharma检索(上海,中国)。瞬时转染通过Lipofectamine 3000进行了持续两天。

2.7。细胞计数Kit-8 (CCK-8)测定

Hep3B以及HUH-7细胞种植到96孔板(3000个细胞/)。符合协议的CCK-8工具包(Dojindo、日本),10μL CCK-8稀释到100年解决方案μL DMEM取代了以前的DMEM不同小时(24、48、72和96 h)。培养保护从37°C的光后持久的一个额外的两个小时,可行的细胞通过490纳米波长的吸光度。

2.8。克隆形成试验

Hep3B以及HUH-7细胞被播种到6-well板块(1×10³细胞/)。孵化后湿润有限公司5%₂环境在37°C持续2周,肝细胞被PBS轻轻洗两次以及4%多聚甲醛固定持续半个小时。后来,被结晶紫染色的细胞持续30分钟。(> 50细胞/殖民地)形成的殖民地被结晶紫治疗。

2.9。TdT-Mediated dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色

Hep3B HUH-7细胞种植到12-well盘子。肝癌细胞与4%多聚甲醛固定持久的在室温下15分钟,冲洗PBS,孵化3% H₂O₂在甲醇持续10分钟。之后,特里同x - 100肝癌细胞治疗0.1%持续2分钟50冰以及孵化μL TUNEL反应混合物持续60分钟37°C在黑暗中。被PBS冲洗后,核与DAPI标记。最后,图像捕获与荧光显微镜(日本奥林巴斯)。

2.10。Transwell化验

移民化验,Hep3B HUH-7细胞被播种到参议院以及DMEM加上20%的边后卫是添加到众议院。入侵检测、Hep3B和HUH-7细胞种植到参议院,其中包含一个人工基底膜涂膜(美国BD)。48小时孵化后,nonmigrative或非侵入性细胞被搬走了擦拭上面的膜利用无菌棉花花蕾;与此同时,migrative或入侵细胞低水平的膜被0.5%结晶紫染色。最后,肝癌细胞数为6随机选定字段的视图使用一个IX71倒置显微镜(×200)。

2.11。细胞生存能力分析

Hep3B以及HUH-7细胞种植到96孔板(3000个细胞/)。一夜之间被孵化后,DMEM加不同剂量顺铂(0,1,2,4,8,16岁,60岁和32岁μ米)取代了原始介质持续三天。后来,可行的细胞通过CCK-8化验了。药物半峰抑制浓度(IC50)值是最终决定。

2.12。测量葡萄糖摄取和乳酸生产

葡萄糖吸收以及乳酸产量分别测试通过葡萄糖吸收比色测定试剂盒(美国BioVision)和乳酸比色测定试剂盒(美国BioVision)在Hep3B HUH-7细胞后,制造商的协议。

2.13。信使rna稳定性试验

信使rna的稳定性分析在Hep3B HUH-7细胞均通过孵化与5μg / mL放线菌素D(美国σAct-D)。之后,细胞被收集在指定的时间点,和mrna RT-qPCR GAPDH是参考控制。

2.14。RNA免疫沉淀反应(RIP)测定

里帕化验与麦格纳把rna结合蛋白进行免疫沉淀反应包(美国微孔)符合制造商的指示。Hep3B以及HUH-7细胞细胞溶解利用里帕裂解缓冲。细胞溶解产物是通过anti-ZC3H13免疫沉淀反应的抗体或免疫球蛋白的婴孩来说在一夜之间在4°C。后来,核糖核酸纯化,RT-qPCR用于测量的PKM2转录水平ZC3H13或免疫球蛋白g immunocomplex。

2.15。荧光素酶报告实验

PKM2的启动子序列克隆到pEZX-PL01控制向量包含萤火虫荧光素酶以及Renilla荧光素酶。荧光素酶分析是利用Luc-Pair™Duo-Luciferase海关化验用品。总之,Hep3B预处理以及HUH-7细胞被ZC3H13-wild-type cotransfected (ZC3H13-WT)或ZC3H13-mutation-type (ZC3H13-MUT)以及250 ng pEZX-PL01记者质粒(Promega、上海、中国)在12-well盘子。转染后持续6 h,肝癌细胞被播种到96 -孔板。36小时后,细胞被收集和分析利用Dual-Glo荧光素酶检测系统。萤火虫荧光素酶的活性是评价规范化Renilla荧光素酶的荧光素酶和转录活动。

2.16。甲基化RNA免疫沉淀反应qPCR (MeRIP qPCR应承担的)

1μg·m⁶治疗和免疫球蛋白抗体蛋白G磁珠在反应1 x缓冲区在4°C持久3 h以及200年治疗μg孤立的RNA在4°C持久3 h。绑定rna被RNA-antibodies-conjugated珠+ 100通过孵化筛选了μ在室温下L洗脱缓冲持续30分钟。筛选了rna提取通过苯酚:氯仿方法符合乙醇沉淀。提取m⁶rip rna通过RT-qPCR reverse-transcribed以及量化。IPs丰富的记录确定数额的比率在IPs的输入产生的相同数量的细胞。

2.17。统计分析

进行了统计分析与GraphPad棱镜8软件(圣地亚哥GraphPad软件有限公司,美国)。学生的t以及一个或双向方差分析被用于对比组。kaplan meier方法进行测量的生存曲线,并与生存率较差异进行评估。值小于0.05是统计学意义的象征。

3所示。结果

3.1。ZC3H13显示肝细胞癌的低表达和与生存相关的结果

调查的潜在功能ZC3H13在肝脏致癌作用,本研究首先测试mRNA的表达⁶369年一个甲基转移酶ZC3H13 TCGA肝细胞癌组织和正常组织160和GTEx项目。在图1(一),ZC3H13表情明显相对于控制肝癌组织中表达下调。此外,类似ZC3H13 mRNA表达模式是验证我们的队列由30配对癌和正常标本(图1 (b))。免疫印迹分析显示,ZC3H13蛋白在肝细胞癌的表达降低正常组织(数字1 (c)和1 (d))。此外,我们的体外实验证实了减少mRNA的表达ZC3H13人类肝癌细胞株HUH-7 Hep3B HepG2, smmc - 7721相对于人体正常肝细胞L-O2(图1 (e))。kaplan meier分析发现,肝癌患者高ZC3H13表达式显示说生存优势利用在线生物信息学工具kaplan meier绘图仪(图1 (f))。与上述证据,ZC3H13表达说肝癌中表达下调,这可能与肝癌的发病和进展。

3.2。ZC3H13抑制肝癌细胞的细胞增殖

解决ZC3H13在HCC进展的影响,本研究沉默ZC3H13表达Hep3B HUH-7细胞(数字2(一个)- - - - - -2 (c)),它的表达调节两个肝癌细胞(数字2 (d)- - - - - -2 (f))由于其相对较低的表达式在所有肝癌细胞,确定RT-qPCR和免疫印迹。CCK-8结果表明ZC3H13缺乏增强细胞生长在Hep3B HUH-7细胞(数字2 (g)和2 (h))。相比之下,肝癌细胞的细胞生长是通过过表达ZC3H13缓解(数字2(我)和2 (j))。clonogenicity试验中所描绘的一样,Hep3B和HUH-7细胞的克隆形成说增强通过ZC3H13缺乏症(数字2 (k)和2(左))。相反的结果当ZC3H13过表达(数据调查2 (k)和2(米))。总的来说,ZC3H13可能抑制肝癌细胞的细胞增殖。

3.3。ZC3H13促进细胞凋亡和抑制肝癌细胞迁移和入侵

TUNEL分析被用于评估ZC3H13在肝癌细胞凋亡的影响。我们的数据表明,缺ZC3H13减少细胞凋亡,而ZC3H13过度增强细胞凋亡水平Hep3B HUH-7细胞(数据3(一个)- - - - - -3 (c))。Transwell化验显示,migrative Hep3B能力以及HUH-7通过ZC3H13缺乏细胞增强;与此同时,过表达ZC3H13缓解migrative肝癌细胞(数据的能力3 (d)- - - - - -3 (f))。我们也注意到Hep3B的入侵能力的增加和HUH-7细胞诱导ZC3H13击倒(数字3 (g)和3 (h))。然而,入侵能力减少ZC3H13过度(数字3 (g)和3(我))。综上所述,ZC3H13促进细胞凋亡以及抑制migrative和侵入性肝癌细胞的能力。

3.4。ZC3H13肝癌细胞对顺铂的敏感性增加

我们评估的影响ZC3H13在肝癌细胞对顺铂的敏感性。我们CCK-8数据建议可行的Hep3B以及HUH-7细胞抑制顺铂逐渐增加(数据4(一)和4 (b))。ZC3H13击倒显著减少顺铂在肝癌细胞的抑制率相对于控制。量化分析顺铂的IC50值表明ZC3H13击倒了增加顺铂的IC50 Hep3B和HUH-7细胞,表明对顺铂的敏感性(图4 (c))。与此同时,过表达ZC3H13引起相反的效果(数字4 (d)- - - - - -4 (f))。此外,我们的研究结果发现,Hep3B以及HUH-7细胞凋亡水平明显增强顺铂治疗后持续48 h(数字4 (g)- - - - - -4 (j))。然而,ZC3H13击倒削弱了抑制顺铂对肝癌细胞凋亡的影响;与此同时,过表达ZC3H13增强cisplatin-induced凋亡水平。以上数据表明,ZC3H13能够增强顺铂的肝癌细胞的化学敏感性。

3.5。ZC3H13降低肝癌细胞的代谢重编程

Warburg效应代表代谢重编程的癌症的迹象,在大多数肿瘤细胞表现出增强葡萄糖吸收以及乳酸生产当有足够的氧气供应20.]。生物能源上,我们测量的影响ZC3H13肝癌细胞的新陈代谢水平。我们的数据表明,缺ZC3H13 Hep3B和HUH-7细胞葡萄糖摄取增加,而ZC3H13过度降低葡萄糖的吸收(数字5(一个)和5 (b))。此外,我们注意到乳酸生产增强ZC3H13击倒,相反的结果调查当ZC3H13过表达(数字5 (c)和5 (d))。通过免疫印迹,表情glycolysis-related蛋白质过剩,LDHA, LDHB, PKM2在Hep3B和HUH-7细胞(图测量5 (e))。因此,ZC3H13过度说减少过剩的表情,LDHA, LDHB和PKM2蛋白在肝癌细胞(数字5 (f)- - - - - -5(我))。总之,ZC3H13调制肝癌细胞的代谢重编程。

3.6。ZC3H13-Mediated米⁶修改减少PKM2 mRNA的稳定性

ZC3H13-silencing和overexpressing肝癌细胞治疗行为d。我们的研究结果表明,ZC3H13击倒说增加了Hep3B其余PKM2成绩单以及HUH-7细胞(数字6(一)和6 (b))。相反,ZC3H13过度降低剩余PKM2记录在两个肝癌细胞(数字6 (c)和6 (d))。数据表明,ZC3H13可以减少PKM2 mRNA的稳定性。此外,把结果表明anti-ZC3H13抗体明显丰富了PKM2 mRNA水平相对于anti-IgG抗体在Hep3B和HUH-7细胞(图6 (e))。然而,GAPDH记录中没有检测到ZC3H13或免疫球蛋白g immunocomplex。因此,ZC3H13拥有绑定PKM2成绩单身体的能力。此外,我们进一步调查是否PKM2 3′未翻译区(3′utr)是所需ZC3H13减少PKM2的表达式。因此,dual-luciferase化验。我们的数据表明,ZC3H13过度说降低了荧光素酶的活动PKM2 3′utr记者向量Hep3B以及HUH-7细胞(数字6 (f)和6 (g))。然而,没有追究空向量的影响。因此,以上数据表明ZC3H13绑定到PKM2 3′utr。符合MeRIP qPCR应承担的结果,ZC3H13过度降低了m⁶的Hep3B PKM2 mRNA水平以及HUH-7细胞(图6 (h))。因此,研究结果表明,与一个m ZC3H13 PKM2 mRNA的稳定性下降⁶依赖的方式。

3.7。PKM2击倒削弱细胞增殖和代谢重编程ZC3H13介导的肝细胞

我们进一步研究了影响ZC3H13 PKM2在HCC进展的交互。我们首先确认成功击倒PKM2 Hep3B以及HUH-7细胞(图si-PKM2转染7(一))。后来,我们评估的细胞增殖通过CCK-8 PKM2在HCC ZC3H13互动。我们的数据表明,PKM2击倒诱导显著减少细胞的可行性。然而,PKM2击倒逆转细胞生长由ZC3H13 Hep3B不足和HUH-7细胞(数字7 (b)和7 (c))。肝癌细胞的克隆形成是削弱了PKM2击倒(数字7 (d)和7 (e))。然而,沉默ZC3H13说改善ZC3H13击倒的克隆形成诱导肝癌细胞。通过糖酵解的定量分析,我们注意到PKM2缺陷显著减少葡萄糖摄取和乳酸生产Hep3B HUH-7细胞(数据7 (f)和7 (g))。但沉默PKM2缓解葡萄糖摄取和乳酸生产ZC3H13不足引起的。综上所述,ZC3H13缓解肝癌细胞增殖的PKM2-dependent糖分解的信号。

3.8。ZC3H13 PKM2缺乏减轻迁移和入侵诱发的肝癌细胞

的影响ZC3H13 PKM2在肝癌转移的相互作用进行了量化的迁移和入侵通过transwell化验。我们的研究结果表明,缺PKM2说缓解Hep3B migrative能力和HUH-7细胞(数字8(一个)和8 (b))。此外,其缺陷引起的扭转migrative能力ZC3H13击倒在肝癌细胞。图中所描绘的一样8 (c)和8 (d),沉默PKM2导致说Hep3B和HUH-7细胞的侵入性能力下降。同时,PKM2缺乏逆转肝癌细胞的入侵由ZC3H13击倒。总的来说,缺PKM2缓解在肝癌细胞迁移和入侵ZC3H13引起的。

4所示。讨论

米⁶一层修改rna作为小说的表观遗传调制(8]。生化事件调节经济增长发挥重要角色,分化,阻力,通过调制和癌症的代谢重编程细胞RNA拼接,翻译,和稳定性(14,21,22]。一些证据提出了m⁶一种作为主要修改的mrna (23- - - - - -25]。在我们的研究中,我们的证据证实了m的重要角色⁶监管者ZC3H13在HCC进展和发现潜在的机制。我们的研究结果表明,中通过m ZC3H13削弱了肝癌细胞的恶性行为⁶A-PKM2-mediated糖酵解和增强的化学敏感性。

与生物信息学分析一致,ZC3H13表达下调在HCC及其损失相关的生存结果(26- - - - - -28]。ZC3H13削弱结直肠癌细胞的增殖和侵袭性能力通过灭活Ras-ERK通路(29日]。ZC3H13是预测的免疫表型和肾癌的治疗反应30.]。我们的数据表明,过表达ZC3H13缓解增殖,迁移,以及入侵加剧了对肝癌细胞的凋亡,确认ZC3H13加剧了恶性肝癌细胞的行为。肿瘤转移和药物抗性作为治疗失败的主要原因,增加了肝癌死亡率(31日]。符合精密医学的角度来看,这是一个紧急寻找新的分子靶点开发更有效的治疗方案。,ZC3H13超表达可以提高肝癌细胞对顺铂,为肝癌化疗提供了新的证据。

肝癌代表一个异构的恶性肿瘤,其特点是不同病因学因素,这是与代谢变化(32]。先前的证据证明代谢正常化肝癌抑制[的意义33- - - - - -35]。Warburg效应基础代谢重编程在HCC进展(36]。增强葡萄糖摄取和乳酸生产保持长期增长的癌症细胞。希望,肝癌细胞的重组可能体现新的见解发展针对肝癌治疗方案。我们的数据表明,ZC3H13通过调制在肝癌的潜在抑制糖酵解代谢重编程。我们进一步分析发现,ZC3H13-mediated m⁶修改大大缓解PKM2 mRNA稳定性以及中ZC3H13促进肝癌细胞恶性行为通过PKM2-dependent糖分解的信号。即便如此,更有选择性和有效的代理激活ZC3H13将在我们未来的发展在肝癌治疗研究。有几个限制在我们的研究中。首先,我们收集了30对肝癌标本和匹配nontumor标本,和我们的研究结果显示,ZC3H13表达下调在肝细胞癌标本。然而,样本容量很小。的表达ZC3H13将在大肝癌的群组研究中进行验证。其次,ZC3H13在肝细胞癌的生物学功能将通过体内实验研究进展。

5。结论

总的来说,我们的证据表明,过表达ZC3H13缓解肝癌细胞恶性行为和代谢重编程通过中介⁶修改PKM2 mRNA。因此,ZC3H13拥有潜在的对肝癌的治疗目标。有效治疗肝细胞癌可能的基础上进行新的分子机制提出了这些观察。

缩写

肝细胞癌:	肝细胞癌
别说话:	动脉化疗
米6答:	N6-Methyladenosine
GEPIA:	基因表达分析交互式分析
TCGA:	癌症基因组图谱
GTEx:	基因型检测组织表达
RT-qPCR:	实时定量聚合酶链反应
DMEM:	杜尔贝科修改鹰的媒介
siRNAs:	短干扰rna
CCK-8:	细胞计数kit-8
TUNEL:	TdT-mediated dUTP缺口末端标记
IC50:	半峰抑制浓度
Act-D:	放线菌素D
撕裂:	RNA免疫沉淀反应
MeRIP qPCR应承担的:	甲基化RNA免疫沉淀反应qPCR。

数据可用性

数据分析了在目前的研究可从相应的作者在合理的请求。

的利益冲突

作者宣称他们没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

Qibo王帮你们同样对本文亦有贡献。