传统分子遗传学方法和NGS在遗传性泌尿系肿瘤诊断中的应用领域

摘要

下一代测序(NGS)被广泛用于诊断遗传性癌症综合征。通常，外显子组测序和扩展基因图谱方法是唯一的方法，可以用于检测多种原发肿瘤、早期发病、癌症家族史或缺乏与特定综合征相关的特定体征的情况下的致病性生殖系突变。决定特定临床表型的癌基因和抑癌基因的某些种系突变可能发生在突变热点。此类病例涉及遗传性癌症，诊断不需要NGS，但可以使用PCR和Sanger测序。在为患者进行分子诊断测试时，应遵循为特定器官的遗传性癌症制定的诊断标准和专业社区指南。本文就生殖系突变相关的泌尿系肿瘤作一综述。总结了遗传性肾细胞癌、前列腺癌和膀胱癌的临床体征和遗传诊断实验室检测。虽然外显子组测序，或者相反，传统的分子遗传方法在某些情况下是选择的程序，但在大多数情况下，多基因面板测序专门用于检测早期肾癌、前列腺癌、而膀胱癌似乎是遗传性癌症分子遗传学诊断的基本解决方案。

1.介绍

肾细胞癌（RCC）、前列腺癌（PC）和膀胱癌（BC）的诊断是现代泌尿肿瘤领域的一个问题，因为它们在恶性肿瘤中的高发病率以及这些疾病的社会意义[1]与其他器官的癌症一样，随年龄增长而发生的孤立性散发性肿瘤占泌尿系统肿瘤病例的大多数。这些病例中只有1%到3%可以被认为是由于种系突变引起的遗传性癌症综合征的表现。然而，在许多情况下，RCC、PC和BC的遗传形式与早发、多种病变和特定的非泌尿系统症状有关，这使得鉴定种系突变对最终诊断至关重要[2，3.］．一些遗传性泌尿系统癌症综合征是由单基因点突变引起的单基因疾病，在某些情况下，在少数外显子中观察到的常见点突变可以使用相对便宜的常规分子遗传检测进行诊断，如聚合酶链反应(PCR)、多重连接依赖探针扩增(MLPA)和Sanger测序[4］．然而，最近通过对癌症患者基因组和外显子的下一代测序(NGS)，发现了一些由生殖系突变引起的遗传性泌尿系统癌症综合征的致病基因。NGS已经显示出作为一种有用的诊断技术的潜力，当一个多外显子候选基因或几个候选基因必须被检查以识别潜在的突变[5，6］．本文综述了遗传性RCC、PC和BC的特征(见表)1)，并为这些病例提出遗传诊断方法，包括那些合理平衡应用常规检测的方法和那些指出使用NGS的方法。

2.遗传性肾癌的临床和遗传特征

2．1．冯Hippel-Lindau综合症

Von Hippel-Lindau (VHL)综合征(OMIM 193300)是一种常染色体显性遗传性癌症综合征，在不同人群中每39,000至90,000新生儿中发生1例，60岁外显率>80% [7］．最常见的肿瘤是透明细胞RCC(通常是多灶性和/或双侧)、肾囊肿、中枢神经系统的血管母细胞瘤、视网膜血管瘤和嗜铬细胞瘤，而胰腺的神经内分泌肿瘤和囊肿以及内耳的内淋巴囊肿瘤则远不常见[8]VHL综合征是由基因突变引起的VHL肿瘤抑制基因，定位于3p25染色体，有三个外显子，编码一个含有213个氨基酸残基的蛋白质。VHL通常与CUL2、RBX1和延长素B和C结合，产生多蛋白复合物，促进缺氧诱导因子1/2的泛素依赖性降解α(HIF1/2α) ［9］．基因型-表型相关性是VHLVHL综合征分为1型(无嗜铬细胞瘤，但透明细胞RCC风险高)和2型(有嗜铬细胞瘤)。1型VHL综合征与框架移位、无义突变和错义突变有关，这些突变阻止成熟VHL蛋白的产生。相比之下，2型VHL综合征与点错义突变有关，这些突变聚集在编码HIF和VHL蛋白延长素C结合位点的区域[10，11］．VHL综合征的一个例子表明，病原病理种系突变的识别可以影响治疗决定。在散发性肾脏肿瘤中，在完成诊断试验和确定疾病分期后，切除原发肿瘤。因为开发多个肿瘤的风险,包括对侧肾脏,VHL综合症是相当高的,VHL综合症患者证实了分子基因检测治疗的原发肿瘤通过切除肿瘤一旦达到最大3厘米的尺寸以及某些禁忌症(12，13］．然而，在其他遗传性肾细胞癌中，早期转移是可能的，需要在诊断后立即手术。例如，遗传性平滑肌瘤病和肾细胞癌中的II型乳头状肾细胞癌(将在本综述的下一节进行描述)通常发展为单侧肿瘤，但其特点是进展迅速[14］．HIF在细胞中的积累，特别是HIF-2的积累α具有致癌特性的亚型引入了通过灭活引起的中间致病途径的治疗性抑制的可能性VHL．小型合成抑制剂已开发，以阻断HIF-2的异源二聚α用HIF-1β和它们的DNA结合，从而破坏HIF靶基因的激活，以及促进vhl独立的HIF降解的药物。这些药物(panobinostat, entinostat, vorinostat，硼替佐米等)在转移性透明细胞RCC患者的临床试验中与其他类型的靶向治疗一起使用[15］．

2．2.遗传性平滑肌瘤病与RCC (HLRCC)

HLRCC (OMIM 150800)与皮肤、子宫和RCC的多发性平滑肌瘤(某些情况下是平滑肌肉瘤)相关，在25%的HLRCC患者中被发现。有时合并肾脏囊肿。这种家族性癌症综合征中的肾脏恶性肿瘤通常为II型乳头状癌[16］．富马酸水合酶突变(跳频)肿瘤抑制基因与HLRCC有关。跳频位于染色体1q42上，编码一种参与Krebs周期的酶。错义突变解释了∼90%的相关突变，在全球大多数人群中未发现明显的热点（尽管在一些欧洲人群中，热点突变在密码子190中发现）[14］．HLRCC综合征的小形式已被描述。例如，在一个1.4 Mb缺失的患者中观察到II型乳头状肾细胞癌和血管母细胞瘤的结合，影响区域1q43，包括9个基因跳频［17］．值得注意的是胚系的作用跳频癌变的突变并不局限于HLRCC。平滑肌瘤病合并嗜铬细胞瘤1例[18，并且跳频被纳入一个由10个基因组成的小组，以寻找家族性嗜铬细胞瘤的种系致病性变体[19］．

２．３．Birt-Hogg-Dube综合征(有限公司)

BHDS (OMIM 135150)是一种常染色体显性综合征，主要表现为多发性纤维滤泡瘤。存在至少10个特征性皮肤肿瘤，包括一个组织学上确定的纤维滤泡瘤，以及该疾病的家族史构成了初步诊断BHDS的最低诊断标准。肾肿瘤通常是多灶性和双侧的，属于不同的病理形态类型，其中最常见的是嫌色癌和混合嗜酸细胞/嫌色肿瘤[20.，21］．BHDS是由卵泡素种系突变引起的(FLCN)，位于17p11.2号染色体上的抑癌基因。生殖系FLCN突变主要是功能缺失突变，如插入、删除和复制导致的帧移位，以及复杂的无义和剪接位点突变。错义突变仅在单个病例中被发现[22，23］．

2.4. 遗传性乳头状肾癌（HPRC）Ⅰ型

HPRC I型(OMIM 605074)是一种常染色体显性遗传病，与I型乳头状RCCs的发展有关，通常是多灶性和双侧的。虽然抑癌基因的失活是上述三种遗传性RCC形式的原因，但生殖系激活突变遇见，位于染色体7q31上的致癌基因，导致HPRC [4］．遇见在HPRC中观察到的种系突变导致受体细胞质结构域的结构性激活，并刺激细胞分裂，构成HPRC中乳头状癌发生的主要事件。因为遇见活化是HPRC发病机制中的一个关键事件，其治疗潜力已被建议用于MET抑制剂(如福替尼、tivantinib和volitinib)在转移性HPRC中的靶向治疗。cabozantinib和多激酶抑制剂crizotinib对乳头状肾细胞癌治疗疗效的研究也在进行中[24，25］．靶向MET抑制剂savolitinib可使乳头状肾细胞癌无复发生存率增加4倍遇见突变(26]此外，据报道，在10例转移性HPRC患者中，foretinib有很好的治疗效果，其治疗效果与散发性I型乳头状肾癌相当，甚至更高。因此，MET抑制剂，尤其是foretinib，可能适用于HPRC的靶向治疗[27］．

2．5．叫做PBRM1肾细胞癌的突变

在散在透明细胞RCC中发现了外显子组测序叫做PBRM1这是一种肿瘤抑制基因，是第二常被体细胞点突变改变的基因:38%的病例，紧随其后VHL(50-60%的个案)[28］．一组疑似遗传性透明细胞RCC的患者，排除VHL综合征，对其进行生殖系筛选叫做PBRM1突变。生殖系叫做PBRM1突变被证明是罕见的，在35个不相关的候选家族中，只有一个家族的灭活种系突变c.3998_4005del被确定为疾病的原因[29］．

2.6。BAP1肿瘤易感性综合征

根据ngs的研究，体细胞突变BAP1在10%的透明细胞rcc中发现。BAP1编码一种与肿瘤抑制蛋白BRCA1相互作用的去泛素化水解酶。此外,BAP1被认为是一种肿瘤抑制基因，尽管其功能仍在研究中。180个具有种系的>相关家族的资料BAP1近年来已收集到突变，从而能够识别靶器官、肿瘤类型，并将BAP1肿瘤易感综合征（BAP1-TPDS，OMIM 614327）描述为一种新的遗传性癌症综合征，由BAP1突变。BAP1-TPDS主要与间皮瘤、皮肤和葡萄膜黑色素瘤相关，一些患者发展为肾细胞癌[30.］．

2.7。遗传Pheochromocytoma-Paraganglioma

遗传性嗜铬细胞副神经节瘤是另一种与RCC相关的罕见遗传性肿瘤综合征。副神经节瘤发生在30万人中1人，其中约25%与生殖系突变有关(即该综合征的发生率为约1:20万)。这种综合征是由肿瘤抑制基因的种系失活突变引起的SDHA，SDHB，SDHC，SDHD,SDHAF2，它编码线粒体酶复合物琥珀酸脱氢酶的亚基。在某些病例中，各种病理形态类型的rcc多由SDHB和SDHD突变可能会发生[31，32］．生殖系突变引起的副神经节瘤SDHB不仅能在肾脏发育，还能在膀胱发育。根据免疫组化(IHC)分析，SDHB蛋白的缺失可以作为一种可能的筛选试验SDHB突变(33］．

2.8。结节性硬化症

结节性硬化症是一种以常染色体显性遗传为特征的多系统疾病，新生儿发病率为6 000至1万分之一。该疾病是遗传性肾肿瘤的例证，具有遗传异质性和两个多外显子候选基因。结节性硬化症的临床症状包括95%的低色素斑和40% - 90%的血管纤维瘤。80%结节性硬化患者发生多发性肾血管平滑肌脂肪瘤[34］．结节性硬化症的种系突变影响肿瘤抑制基因TSC复合体亚基(TSC）1和TSC2，分别编码hamartin和tuberin [35］．

3.遗传性肾癌的诊断方法

在怀疑遗传性肾细胞癌的病例中，肿瘤学家和遗传学家的任务是将患者转介到分子遗传学测试，以确定最有可能的肾细胞癌形式和寻找生殖系突变的候选基因。突变检测方法的选择和检测本身仍由实验室分子诊断专家负责。然而，应调查的基因编码序列的选择，因此，突变分析方法的选择只部分取决于疾病的临床表现。在前面的章节中列出的大多数遗传性肾细胞癌表现出特征性的临床表现，根据该综合征的经典表现可以认为是单基因疾病。在这种情况下，可能只在一个候选基因中寻找突变。特别是在典型的VHL综合征中，诊断需要对三者进行PCR扩增和测序VHL外显子(即每个样本有3个PCR和6个Sanger测序反应，连同分析的中间步骤在2个工作日内是可行的)。这种点突变分析使85%的VHL综合征家族能够确定疾病的病因[36- - - - - -38］．如果结果为阴性，则通过MLPA或实时PCR寻找部分缺失[39，40］．但是，再以VHL综合征为例，传统的分子遗传学方法也存在缺陷。例如，该综合征的2C亚型仅表现为肾上腺嗜铬细胞瘤，需要与其他遗传性癌症综合征进行鉴别诊断，如遗传性嗜铬细胞副神经节瘤和2型多发性内分泌瘤[31，41，42］．在这种情况下，有必要检查6个候选基因。此外,尽管VHL和受潮湿腐烂突变可以通过对多个PCR产品进行测序来检测，SDH家族基因与检测区域的互补立即将这些诊断转移到必须解决的任务类别，而不是传统的PCR和Sanger测序方法，而是多基因面板NGS [43］．

直到最近，其他单基因形式的RCC的诊断也通过PCR和Sanger测序进行，因为这是一个测序不超过10种不同的PCR产品的问题。特别是，HPRC的直接DNA诊断是基于对错义突变的鉴定遇见编码受体胞质结构域的外显子15至21(7个PCR产物)[12，44］．PCR扩增和Sanger测序跳频外显子可用于HLRCC的DNA诊断[45］．遗传病的实验室诊断是基于检测FLCN通过PCR扩增和桑格测序多肽编码外显子4至14。注意С₈11外显子单核苷酸束是一个突变热点FLCN，在该通道中发现约25%至50%的受影响家庭(即，外显子11在寻找潜在突变时被方便地测试)[46，47].除了检测基因的点突变外FLCN外显子，MLPA检测缺失，其频率在启动子区域FLCN直接测序结合MLPA可将BHDS家族的分子遗传学检测的临床敏感性从80%提高到95%[48]，而其他研究则报道了较低比例的已证实突变的患者[49］．

然而，近年来，对生殖系突变的研究遇见，FLCN,跳频越来越多地使用NGS的多基因面板，特别是TruSight癌症面板(Illumina)，其中包括94个主要致癌基因和肿瘤抑制基因[50］．这是由于在过去10年里进行NGS测试的成本和时间都有所减少，以及肿瘤的症状和组织学变异的相似性(见表)1)在不同形式的遗传性RCC中观察到。基本上，Illumina或Ion Torrent平台与x20-50阅读深度被用来检测种系突变[51，52］．在过去的15年里，对不同NGS平台的设备成本和生产率、测序价格(包括消耗品成本)、测序读取的错误率以及其他技术特征进行了比较[53，54]我们注意到，在许多方面，测试的价格及其执行时间取决于所用芯片和条形码的容量、每周使用测序器的频率（即，实际上取决于相同类型的测序库的数量）以及实验室专家在注释癌症相关突变方面的经验。

有趣的是，在散发性肿瘤基因组研究中引入NGS和寻找体细胞突变有时会提供与遗传性癌症综合征诊断相关的意外结果。在一项研究中,遇见在I型(可能是散发性)乳头状肾癌中检测到突变，17个突变中有3个证明是种系而不是体细胞[55］．这一发现表明了对种系的检测遇见突变在年轻的I型乳头状肾癌患者中是合理的，即使在肾脏中没有多发性原发病变。多基因测序尤其适用于包含数十个外显子的基因的突变筛选。叫做PBRM1外显子数是VHL并且缺乏突变热点，因此可以使用NGS来搜索突变。类似于叫做PBRM1，ВАР1包含17个外显子，缺乏复发性突变，证明了NGS是最佳技术，通过它可以在BAP1-TPDS诊断中识别病理突变[30.］．如上所述，为了诊断遗传性嗜铬细胞瘤-副神经节瘤，必须经常检查SDH家族的所有基因的突变;因此，通过适当的基因面板进行外显子组测序或检测是直接对该综合征进行DNA诊断的合适方法[43］．TSC1包含23个外显子TSC2包含42个，相关突变以规律的方式分布在编码区域，包括无义、错义、剪接位点突变，以及短插入/删除和扩展删除。因此，由于这些基因体积大且缺乏突变热点，NGS被认为是识别该综合征潜在原因的主要方法。当测序结果为阴性时，MLPA被用来方便地检测延伸缺失或重复。这些方法的结合能够有效地检测胚系突变TSC1和TSC280%至90%的结节性硬化症患者[56，57］．

与此同时，多基因组越大，鉴别出的可能难以在临床相关性方面分类的遗传变异的数量就越多，这一问题在外显子组测序中更加突出。目前，专业癌症协会的指南还没有将外显子组测序作为RC、PC或BC诊断算法的一个元素;因此，应将其视为诊断价值有限的附加检测。

最后，在没有已知遗传性癌症综合征的标准，但有家族病史、早期表现和/或多发性肿瘤的情况下，使用外显子组测序来寻找致病性生殖系突变可能是合理的。这使得在有肾癌家族史的少数候选基因中确定一个致病突变成为可能，或者确定这些基因的生殖系突变组合成为可能。例如，对一个患有乳头状甲状腺癌和透明细胞RCC家族的兄弟姐妹的外显子组进行测序，发现了两者的结合SDHA杂合突变伴随突变而来TGFB2和PARP1基因[58］．在另一个家族中，遗传性肾癌伴血管平滑肌瘤间质被描述为肾癌表现的一种非典型变异TSC2错义突变(59］．因此，初步诊断和筛选候选基因以寻找突变依赖于遗传性RCC的经典或非典型表现。这进而决定了对NGS、外显子组测序的多基因面板的选择，以及在极少数情况下，对点突变和总缺失的传统鉴定方法的选择。

4.遗传性前列腺癌的分子遗传学诊断

PC表现为一种遗传癌症综合征，由于生殖系突变，只有1%到2%的病例。航空公司的乳腺癌易感基因1和BRCA2基因突变是患PC的高风险因素BRCA2突变对遗传性PC的影响大于乳腺癌易感基因1突变(60，61］．林奇综合症(发病率，在欧洲和美国人口中370 - 1500人中有1人)，是由dna错配修复(MMR)基因突变引起的一种，MSH2，MSH6,PMS2，在某些病例中表现为早发性PC。与典型的Lynch综合征表现为遗传性非息肉病结直肠癌不同，遗传性PC中主要观察到种系突变MSH2和MSH6基因和更少的经常一种．的比例MSH2此类患者的突变率高达79%。然而，PC不在Lynch综合征中观察到的常见肿瘤中（在男女比例大致相等的混合队列中，6350名MMR基因突变携带者中，26名男性诊断为PC）。由于MMR基因突变而发展为这种癌症的风险仅高出三到五倍，而且这种疾病的第一个临床表现和死亡原因往往与结直肠癌有关，这可能导致低估了携带MMR种系突变的患者的PC发病率MSH2/6［62- - - - - -64］．除MMR基因外，c.251G > A (p.G84E)突变在HOXB13与PC的相对风险增加20倍有关[65］．其他被认为与遗传性PC有关的基因包括TP53，NBN公司禁止，BRIP1，以及其他DNA修复基因[66］．总的来说，根据国家综合癌症网络(NCCN;v.2.2019)，最好使用NGS对多基因面板进行测序，其中至少包括Lynch综合征突变的MMR基因和一些其他dna修复基因(BRCA2，乳腺癌易感基因1，自动取款机，CHEK2，PALB2，一种，MSH2，MSH6,PMS2）.这个小组可以用其他候选基因补充[67］．例如，在121例PC早期发病或有家族病史的病例中，对94个致癌基因和肿瘤抑制基因进行了测序，结果在14%的病例中观察到致病性和可能致病性的遗传变异。13名患者携带已知的遗传PC候选基因突变，而其他患者携带以前不认为是遗传PC候选基因的单一突变[68］．如果少量候选基因被排除，那么相关研究的数据表明，8%的年轻PC患者具有遗传性PC，遗传性PC的诊断面板至少应该包括在内乳腺癌易感基因1，BRCA2，自动取款机，BRIP1，CHEK2，NBN公司禁止（c.657del5），HOXB13（p.G84E），一种，MSH2，MSH6,PMS2［69］．

如果怀疑遗传性PC，建议进行分子基因检测的患者类别在过去3 - 5年的推荐中已明确。特别是Johns Hopkins组的标准包括至少3名一线亲属患有PC或三代中有PC病例，2名亲属患有PC且年龄≤55岁。美国医学遗传学学院(American College of Medical Genetics)在第一段中提供的检测指标与约翰霍普金斯小组(PC患者的三个或更多一线亲属)的指标一致，并包括以下风险组的分配:有两个或两个以上一级亲属诊断为PC且年龄≤55岁者;PC的Gleason评分为>7，至少有两名亲属患有乳腺癌、卵巢癌或胰腺癌。此外，Gleason评分被认为是显著的从NCCN推荐的前一个版本开始，其中包括三个测试可取性的标准:(1)Gleason评分≥7且至少有一个近亲属≤50岁的BC和/或浸润性卵巢癌PC;(2)任何年龄Gleason评分≥7的PC患者和同样患有Gleason评分≥7、BC和/或胰腺癌的患者亲属;(3)原发转移性PC患者[69，70].在原发性侵袭性肿瘤患者以及去势抵抗的PC患者中，致病性种系变异比PC中的平均值更容易被发现，这解释了与最初高Gleason分数的关联。尽管如此，诊断遗传性PC的主要标准仍然如下：年龄较小（55岁以下）的PC，具有确诊种系的家庭成员乳腺癌易感基因1和BRCA2突变，或出现与DNA修复基因突变相关的遗传性癌症综合征征象[70- - - - - -72］．在当前版本的NCCN建议(v.2.2019)中，定义了以下检测适应症:具有家族病史(与2018年版本一致，并添加了遗传性癌症综合征的特定体征)、导管内组织学型PC、中间或高危原发性PC、局部晚期或转移性原发性PC和种族背景如Ashkenazi Jew的患者[67］．在后一种情况下，建议是指具有重大突变的种群。总结这些标准，大多数作者建议搜索PC患者的种系突变，以下标准之一:年龄<55岁;有PC的直系亲属;家族史已经确定BRCA1/2突变或乳腺癌、卵巢癌或胰腺癌;根据NCCN指南，存在遗传性PC征象的PC Gleason评分为>7 [70］．

对于某些人群，这种方法可能有例外，其中由于创始人效应存在多个主要突变。在这些情况下，可以对主要突变PCR检测阴性的患者进行NGS诊断。这尤其适用于德系犹太人，他们有三个主要突变：c.6869del，c.5266dupC(乳腺癌易感基因1)和c.5946del (BRCA2）.在所有被检测的患者中，其携带者的比例为~ 20%。在无重大突变的患者中，NGS可检测其病原性乳腺癌易感基因1和BRCA2另有8%的病例出现突变[73，74］．另一个例子是c.5266dupC突变(在引用的出版物中称为5382insC)的频率增加乳腺癌易感基因1在俄罗斯的欧洲部分，有10%到17%的乳腺癌和卵巢癌病例是由这种基因引起的[75，76］．同样的现象也出现在一些与俄罗斯相邻的斯拉夫人口为主的东欧国家，尤其是乌克兰[77]及白俄罗斯[78］．将这些人群中两阶段检测的费用与基于NGS的一般方法进行比较，针对一个患者的遗传性PC诊断的针对性NGS小组的费用从250美元到1500美元不等，这取决于小组中还包括多少个基因座BRCA1/2［69］．由于东斯拉夫人人群中5382insC突变的比例可能超过50%，基于实时PCR的简单而廉价的检测(< 100美元)将允许确定主要突变乳腺癌易感基因1半数患者在1天内发生突变[79，80(不幸的是，相当一部分关于这个主题的出版物没有英文版本)。然而，我们强调，这种两阶段搜索的致病突变在BRCA1/2只有在临床、家谱和人口充分论证的情况下才能进行基因研究。一般来说，突变搜索的主要策略仍然是使用NGS对遗传PC候选基因的编码部分进行测序。

种系鉴定BRCA1/2突变不仅具有诊断意义，而且具有预后意义。病人BRCA1/2突变(生殖系或体细胞)对药物治疗的反应更好，药物抑制剩余的替代dna修复途径，包括PARP抑制剂，以及基于铂的抗癌药物。特别是88%的患者BRCA1/2基因突变对奥拉帕尼PARP抑制剂治疗有反应，而未发现基因突变的患者中有6%对奥拉帕尼PARP抑制剂治疗有反应。PD-1抑制剂pembrolizumab是一种免疫检查点抑制剂，可用于严重微卫星不稳定(MSI)的病例，无论肿瘤类型如何，也可能用于Lynch综合征患者[81，82］．

5.林奇综合症是遗传性膀胱癌的一种

在大多数病例中，遗传性BC的诊断降低到诊断尿路上皮癌，这是林奇综合征临床表现的一部分。林奇综合症是一种遗传性的癌症综合症，通常表现在较年轻的非息肉病结直肠癌。例如，在1624例林奇综合征患者中有75例发现尿路上皮癌，这是继子宫内膜样癌之后第二常见的小肿瘤[83］．如前所述，Lynch综合征是由编码MMR系统主要成分的肿瘤抑制基因的种系失活突变引起的。在林奇综合征的所有临床形式中，这些基因的突变频率总计为35%至45% (一种和MSH2)， 5%至10% (MSH6)和~ 5% (PMS2）.肿瘤中MSI的检测是一种相对简单的筛查试验，用于遗传诊断林奇综合征。另一种筛选试验是免疫组化分析，使用抗体板可以检测dna修复因子MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的缺乏表达。分子遗传MSI检测和免疫组化检测这些因素的结果一致性达到94%，这使得它们可以作为林奇综合征筛查几乎同等有效的方法[84］．MSI和IHC在实际应用中各有特点。特别是，当>30%的研究短串联重复序列标记显示存在异常等位基因(MSI- high)，而不存在异常等位基因(MSI- low)被认为是阴性结果时，诊断林奇综合征的MSI阳性结果被确定。已识别的不稳定基因座数量取决于微卫星面板;因此，建议使用单核苷酸标记而不是二核苷酸标记，至少5个位点。免疫组化能够识别缺失的修复因子;然而，评估样本的中间染色水平的问题仍然存在。因此，MSI与IHC的选择更多地取决于哪种方法在实验室中更常规:使用毛细管遗传分析仪的PCR和片段分析，还是使用自动化系统的IHC检测流，如Ventana [85，86］．应该记住，MSI和IHC都只是林奇综合征的筛查试验，仍然需要进行种系突变试验来确认诊断。

突变的MSH2Lynch综合征合并BC的发生率是基因突变的四倍吗一种，最常受Lynch综合征影响的候选基因（高达20%的患者患有MSH2突变有BC) [63，87］．NGS能够通过对林奇综合征和其他遗传性BC型候选基因的编码区进行测序，从而识别病理突变，使用的是综合癌症基因图谱或针对该疾病设计的小型定制基因图谱。这一事实MSH2在BC中，突变比其他基因的突变更频繁，这可能对选择一种更便宜的NGS协议和使用面板进行林奇综合征的靶向候选基因测序很重要[88］．

6.遗传性泌尿系统癌症的ngs诊断小组

患有某些泌尿系统癌症综合征的患者将受益于基于ngs的致病生殖系突变搜索。基于ngs的方法的第一种变体是利用遗传泌尿系统癌症候选基因的文献调查选择的基因面板。例如，对年轻RCC患者23个基因的测序显示，9.5%的患者中有10个基因存在致病性种系变异[6］．另一项研究使用了为遗传性RCC设计的靶向面板，其中包括19个基因:BAP1，跳频，FLCN见过,一种，MSH2，MSH6，MITF，PMS2，EPCAM，PTEN，SDHA，SDHB，SDHC，SDHD，TP53，TSC1，TSC2,VHL．在1,235例不同器官的疑似遗传性癌症患者中，6.1%的人发现了致病性遗传变异，在检查的病例中，43.7%的提交的组织学根据特定的基因改变与发表的文献一致。此外，在提供足够的个人和家族史的患者中，只有32.9%的患者对已鉴定的基因改变有强烈的怀疑。这表明，根据仅对一个候选基因的研究结果，相当大比例的遗传性RCC非经典表现病例可能是假阴性[89］．另一种方法是使用与各种肿瘤的癌变有关的主要致癌基因和肿瘤抑制基因的预制面板，并由主要NGS设备和试剂制造商提供现成的解决方案。小型50个基因和409个基因的扩展AmpliSeq面板由赛默Fisher Scientific和Illumina提供[90，91］．预制板具有可靠和可用的优点，但设计用于广泛的常见遗传性癌症综合征的检测，而不是遗传性泌尿系统癌症的特异性检测。整个基因列表只包含这里列出的20个基因，它们是引发遗传性泌尿系统肿瘤疾病的主要候选基因(见图)1）.显然，在泌尿肿瘤学中，小组中有45个不必要的基因，大组中有392个不必要的基因。这些发现表明，使用专为遗传性泌尿系统癌症综合征诊断设计的多基因面板作为最有效的诊断NGS方法。

NGS获得的种系遗传变异分析不可避免地会遇到以下问题:除了已证实具有临床意义和可能致病的变异，以及良性或可能良性的变异外，还存在一组临床意义不确定的变异(VUS) [92］．如果通过分析疑似遗传性RC、PC或BC患者的测序数据而检测到VUS，且没有致病/可能致病突变，则需要进行更深入的分析，并采取平衡的方法进行医学遗传咨询[93］．一般来说，通过测序检测到的遗传变异的初步分析，特别是Ion Torrent平台上的AmpliSeq面板，是使用Torrent Variant Caller进行的。对于可视化数据分析和人工人工过滤，整合基因组Viewer (http://software.broadinstitute.org/software/igv/)并使用ANNOVAR软件对已识别的遗传变异进行注释(https://annovar.openbioinformatics.org/en/latest/user-guide/download/）.变异注释使用了人类生殖系突变和多态性数据库(如ClinVar、HGMD和LOVD)，以及专注于特定疾病/基因的数据库(如BRCA1/2-CIMBA修饰体调查者联盟)。致病性分析的重要因素包括突变等位基因频率(MAF)和可变密码子的保守性。MAF <0.01和高度保守位点出现的氨基酸变化代表已鉴定遗传变异中的致病因子[94，95］．如果没有关于生殖系VUS在致癌过程中的作用的信息，那么在COSMIC数据库和癌症基因组图谱中可能有相同的体细胞驱动突变的数据[96］．通常，VUSs包括错义变体、无移帧的缺失/插入和剪接位点的核苷酸替换，其中大多数代表错义变体[97］．此外，VUSs可以分析两者在网上和在体外．

在第一种情况下，突变对蛋白质功能的影响和对新错义突变致病性的预测可以使用PolyPhen2、MutationTaster、SIFT和其他预测因子进行评估[98］．与临床数据和其他实验室检测结果的核对也有助于对VUSs进行重新分类。例如，在Lynch综合征的诊断中，系谱中与结直肠癌的共分离和msi -先验者肿瘤的高地位表明检测到的遗传变异的致病性质[97］．在第二种情况下，如果有适当的实验室设施，可用功能测试来分析新突变的致病性。特别是，VUS分析乳腺癌易感基因1，采用同源定向重组分析。在这种方法中，将VUS插入到表达载体中，引入HeLa-DR细胞中，内源性表达乳腺癌易感基因1被小干扰RNA抑制。然后用表达内切酶的载体转染这些细胞，使DNA断裂。如果VUS是致病的，细胞将不能合成具有功能活性的BRCA1并进行有效的DNA修复。结果，细胞发生凋亡，荧光减弱[99］．功能测试还包括甲基化耐受性测试，它允许对新的等位基因进行重新分类MSH2和一种在美国，疑似林奇综合征患者VUSs的比例可达30%。这就允许有问题的等位基因在MSH2 -或一种以及随后甲基化试剂的暴露。正常情况下，MMR蛋白的活性应该促进含有多个修饰的非互补碱基的细胞的死亡;因此，相当大比例的存活细胞表明受损MSH2/一种功能及VUS致病性[One hundred.］．如果有肿瘤材料可供实验室分析，且VUS定位于抑癌基因，则根据Knudsen理论，肿瘤DNA中参考同源等位基因的选择性缺失可视为杂合性缺失。这允许对VUS进行重新分类，从而提高致病性评分(如涉及的例子所示)BRCA2基因)[101］．

尽管有全外显子组测序检测突变的例子，但在多基因面板中检测到的VUs的丰富性及其在外显子组测序输出中的更大数量阻碍了基因组或外显子组测序在临床实践中作为诊断工具的使用。解释遗传变异的错误主要与h VUSs( ，比较五类遗传变异)[93]此外，在非洲、拉丁美洲、亚洲和大洋洲的人群中，VUSs的比例高于高加索人，因为高加索人已经发表了更多的基因研究结果[102］．此外，在多基因组中，VUSs在所有已鉴定的种系变异中所占的比例可能相当高(例如，遗传PC的12个候选基因组中，VUSs占37%)[71］．此外,在网上测试是有限的，而高度可靠的功能测试往往耗时费力，从而限制了它们在肿瘤分子遗传学测试中的应用。直到最近，主要的NGS方法仍然是基因面板测序，越来越多的已发表方法允许在肿瘤诊断中对VUSs进行重新分类遗传性RCC、PC和BC。

7.结论

生殖系突变引起的泌尿系肿瘤疾病构成了一系列广泛的肿瘤疾病，其中一些在临床上和遗传学上具有高度异质性。其中一些是由一种候选基因突变引起的和/或表现出特定的特征，包括非泌尿系统表现(VHL综合征、BHDS、HLRCC和HPRC)，而其他遗传性癌症综合征是由于可能影响一个候选基因(BAP1-TPDS)编码区的任何位点或几个基因中的一个(结节性硬化症、遗传性PC伴发)的突变BRCA1/2突变，林奇综合征与BC)，由>10外显子组成。在这种情况下，有必要对所有候选基因的编码区域进行排序。预先制定的目标测序癌症图谱包括与遗传性泌尿系统癌症综合征不直接相关的基因，这些基因占所有图谱基因的90% - 96%。一般来说，确定导致遗传性RCC、PC和BC的致病种系突变的主要诊断方法是可能的。在单基因疾病的典型表现和/或人群中存在主要突变的罕见病例(VHL综合征有三个短外显子的候选基因，BRCA1/2在德系犹太人和东斯拉夫人的突变和林奇综合征的MSI测试)，分析是可能的，至少在第一阶段，使用经典方法，如PCR, Sanger测序和MLPA。所有其他情况都需要使用NGS。在这些情况下，对数十个已知的遗传性肿瘤候选基因的编码区进行靶向测序是有效的。NGS的第一种方法是对预制面板进行测序，这些面板由几十个到广泛的已知导致遗传癌症综合征的基因组成。这种方法的一个优点是对大多数遗传性癌症综合征的候选基因进行测序，不断降低的检测成本，以及遗传实验室分析过程的可靠性。不利之处是大量的VUSs，因此，进一步的医疗和遗传咨询有困难。此外，并非所有遗传性肿瘤疾病的候选基因都包含在NGS面板中。另一种方法是使用包括几十个基因的有限的面板。这样一个小组的测序结果将更容易注释和解释为咨询，特别是如果实验室和咨询医生专注于遗传性癌症综合征的诊断。然而，在不包括在如此有限的面板中的一个次要候选基因中有遗漏致病突变的风险。 Therefore, the sequencing of multigene panels appears to be the basic solution for molecular genetic diagnosis of hereditary urological cancers.

披露

这项研究是在俄罗斯联邦的国家任务范围内进行的。

的利益冲突

作者声明本文的发表不存在利益冲突。

参考文献

1. F. Bray, J. Ferlay, I. Soerjomataram, R. L. Siegel, L. A. Torre，和A. Jemal，“2018年全球癌症统计:GLOBOCAN估计全球185个国家36种癌症的发病率和死亡率”，CA:临床医生的癌症杂志第68卷第2期6，第394-424页，2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
2. J. M. Kennedy, X. Wang, K. R. Plouffe等，“来自30例遗传性肾细胞癌综合征患者的60例遗传性肾肿瘤的临床和形态学回顾:来自当代单一机构系列的教训”，医学肿瘤学第36卷第2期9，第74页，2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
3. H. T. Lynch, O. Kosoko-Lasaki, S. W. Leslie等，“家族性和遗传性前列腺癌的筛查”，国际癌症杂志第138卷第1期11, pp. 2579-2591, 2016。浏览：出版商的网站|谷歌学者
4. E. R. Maher，“遗传性肾细胞癌综合征:诊断、监测和管理”，世界泌尿学杂志第36卷第2期12，第1891-1898页，2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
5. R. Kamps, R. Brandão, B. Bosch等人，“肿瘤的下一代测序:遗传诊断、风险预测和癌症分类”，国际分子科学杂志第18卷第2期2，页308,2017。浏览：出版商的网站|谷歌学者
6. 吴建军，王海华，陈建军等，“中国散发性早发性肾癌易感基因的种系突变及其与临床的相关性”，癌症，第125卷，第5期7, pp. 1060-1069, 2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
7. A. N. A. van der Horst-Schrivers, W. J. Sluiter, R. C. Kruizinga等人，“Von hipel - lindau病连续表现的发生率”，家族性癌症第18卷第2期3，第369-376页，2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
8. J.Findeis Hosey，K.McMahon和S.Findeis，“Von Hippel-Lindau病，”儿科遗传学杂志，第5卷，第5期。2, pp. 116-123, 2016。浏览：出版商的网站|谷歌学者
9. N. Varshney, A. A. Kebede, H. Owusu-Dapaah, J. Lather, M. Kaushik, J. S. Bhullar，《von hipel - lindau综合征综述》，肾癌和VHL杂志，第4卷，第4期。3，第20-29页，2017。浏览：出版商的网站|谷歌学者
10. I. Ben-Skowronek和S. Kozaczuk，《Von Hippel-Lindau综合征》，儿科激素研究(第84卷)3, pp. 145-152, 2015。浏览：出版商的网站|谷歌学者
11. J. Crespigio, L. C. L. Berbel, M. a . Dias et al， " Von hipel - lindau病:一个单一基因，几个遗传性肿瘤，"内分泌学研究杂志号，第41卷。1，第21-31页，2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
12. M. I. Carlo, A. A. Hakimi, G. D. Stewart等人，“家族性肾癌:新综合征和分子洞见的含义”，欧洲泌尿学，第76卷，第76期6, pp. 754-764, 2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
13. W. M. Linehan, L. S. Schmidt, D. R. Crooks et al，“肾癌的代谢基础”，癌症的发现，第9卷，第5期。8, pp. 1006-1021, 2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
14. L.Schmidt和W.M.Linehan，“遗传性平滑肌瘤病和肾细胞癌，”国际肾病和肾血管病杂志， vol. 7, pp. 253-260, 2014。浏览：出版商的网站|谷歌学者
15. O. Martínez-Sáez, P. Gajate Borau, T. Alonso-Gordoa, J. Molina-Cerrillo和E. Grande，“靶向HIF-2α透明细胞肾细胞癌:一种有前途的治疗策略肿瘤学/血液学评论，第111卷，第117-123页，2017。浏览：出版商的网站|谷歌学者
16. S.L.Skala、S.M.Dhanasekaran和R.Mehra，“遗传性平滑肌瘤病和肾细胞癌综合征（HLRCC）：HLRCC相关肾细胞癌鉴别诊断的当代回顾和实践讨论，”病理与检验医学档案，第142卷，第2期。10，第1202-1215页，2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
17. E. Dow和I. M. Winship，“遗传性平滑肌瘤病和肾细胞癌综合征中的血管母细胞瘤:VHL和HLRCC综合征之间的表型重叠”家族性癌症第18卷第2期1，页91-95,2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
18. S. Richter, L. Gieldon, Y. Pang等，“代谢体引导基因组学鉴定嗜铬细胞瘤和副神经节瘤中异柠檬酸脱氢酶、富马酸水合酶和琥珀酸脱氢酶基因的致病性变异”，医学遗传学第21卷第2期3，第705-717页，2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
19. E. Sbardella, T. Cranston, a . M. Isidori等人，“嗜铬细胞瘤患者的多基因常规遗传筛查”，内分泌，第59卷，第59期1, pp. 175-182, 2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
20. L.S.Schmidt，M.L.Nickerson，M.B.Warren等人，“Birt-Hogg-dubé综合征大家族的种系BHD突变谱和表型分析，”美国人类遗传学杂志，第76卷，第6期，第1023-1033页，2005年。浏览：出版商的网站|谷歌学者
21. P. R. Benusiglio, S. Giraud, S. Deveaux等，“Birt-Hogg-Dubé癌症易感性综合征患者的肾细胞肿瘤特征:一项回顾性多中心研究，”欧菲莱特罕见病杂志，第9卷，第1期，第163页，2014年。浏览：出版商的网站|谷歌学者
22. L. S. Schmidt和W. M. Linehan，“FLCN: Birt-Hogg-Dubé综合征的致病基因”，基因， 2018, vol. 640, pp. 28-42。浏览：出版商的网站|谷歌学者
23. L. S. Schmidt和W. M. Linehan，“Birt-Hogg-Dubé综合征的临床特征、遗传学和潜在的治疗方法，”关于孤儿药的专家意见，第3卷，第2期。1, pp. 15-29, 2015。浏览：出版商的网站|谷歌学者
24. Y. Miyata, A. Asai, K. Mitsunari et al， " Met in urological cancer， "癌症，第6卷，第2期4, pp. 2387-2403, 2014。浏览：出版商的网站|谷歌学者
25. G. Courthod, M. Tucci, M. Di Maio，和G. V. Scagliotti，“乳头状肾细胞癌:当前治疗前景综述”，肿瘤学/血液学评论，第96卷，第1期，第100-112页，2015年。浏览：出版商的网站|谷歌学者
26. 转移性非透明细胞肾细胞癌全身治疗的最新进展国际泌尿科杂志第26卷第2期9，第868-877页，2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
27. K. E. Smith和M. A. Bilen，“乳头状肾细胞癌和MET抑制剂综述”，肾癌，第3卷，第2期。3，页151-161,2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
28. W. M. Linehan和C. J. Ricketts，“肾细胞癌的癌症基因组图谱:发现和临床意义”，自然评论泌尿外科，第16卷，第9期，第539-55219页。浏览：出版商的网站|谷歌学者
29. P. R. Benusiglio, S. Couvé， B. Gilbert-Dussardier等人，“PBRM1种系突变易导致肾细胞癌，”医学遗传学杂志号，第52卷。6, pp. 426-430, 2015。浏览：出版商的网站|谷歌学者
30. S. Walpole, A. L. Pritchard, C. M. Cebulla等人，“生殖系临床表型的综合研究软面包卷₁全球variant-carrying家庭。”国家癌症研究所杂志号，第110卷。12, pp. 1328-1341, 2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
31. 王光，“琥珀酸脱氢酶缺陷肾细胞癌的研究进展”，病理与检验医学档案，第142卷，第2期。10，第1284-1288页，2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
32. B.Bausch，F.Schiavi，Y.Ni等人，“嗜铬细胞瘤和副神经节瘤易感基因的临床特征。”SDHA TMEM127,马克斯,SDHAF2gene-informed预防。”JAMA肿瘤学，第3卷，第2期。9，第1204-1212页，2017。浏览：出版商的网站|谷歌学者
33. A. Giubellino, K. Lara, V. Martucci et al， "膀胱副神经节瘤，"美国外科病理学杂志第39卷第3期11, pp. 1488-1492, 2015。浏览：出版商的网站|谷歌学者
34. 伊斯兰议员和罗奇，“结节性硬化症”，神经皮肤综合症，第132卷，第97-109页，2015。浏览：出版商的网站|谷歌学者
35. H. Pópulo, J. M. Lopes和P. Soares，“人类癌症中的mTOR信号通路”，国际分子科学杂志，第13卷，第2期第2页，1886-1918,2012。浏览：出版商的网站|谷歌学者
36. P. Chittiboina和R. R. Lonser， " Von hipel - lindau病"神经皮肤综合症，第132卷，第139-156页，2015。浏览：出版商的网站|谷歌学者
37. A. R. Webster, E. R. Maher和A. T. Moore，“von Hippel-Lindau病的眼部血管瘤病的临床特征和与种系突变的相关性”，眼科档案，第117卷，第117号3，第371-378页，1999。浏览：出版商的网站|谷歌学者
38. A. Rasmussen, S. Nava-Salazar, P. Yescas等人，“墨西哥小脑成血管细胞瘤患者Von Hippel-Lindau病生殖系突变”，神经外科杂志》，第104卷，第3期，第389-3942006页。浏览：出版商的网站|谷歌学者
39. 周宏儒。曹,c。Ki, J.-W。Kim，“通过多重结扎依赖探针扩增分析改进了韩国VHL患者生殖系突变的检测，”韩国医学杂志，第24卷，第2期1，第77-83页，2009。浏览：出版商的网站|谷歌学者
40. A. Ebenazer, S. Rajaratnam，和R. Pai，“检测大缺失VHLSYBR green的实时荧光定量PCR， "家族性癌症，第12卷，第2期3，页519-524,2013。浏览：出版商的网站|谷歌学者
41. 多发性内分泌瘤2型GeneReviews®M. P. Adam, H. H. Ardinger, R. A. Pagon等。，University of Washington, Seattle, Seattle, WA, USA, 2020.浏览：谷歌学者
42. S. Glasker, H. P. Neumann, C. A. Koch等，内文本， MDText.com, Inc.，南达特茅斯，马萨诸塞州，美国，2018。
43. 刘萍，李敏，关晓华等，“嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的临床症状和遗传筛查策略”，肾癌和VHL杂志，第5卷，第5期。4, pp. 14-22, 2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
44. k.a. w.w Wadt, a.m.。Gerdes, T. V. O. Hansen, B. G. Toft, L. Friis-Hansen, M. K. Andersen，“遗传性乳头状肾癌家族的新种系c-MET突变”，家族性癌症，第11卷，第5期。3, pp. 535-537, 2012。浏览：出版商的网站|谷歌学者
45. V. M. Raymond, C. M. Herron, T. J. Giordano, and S. B. Gruber，“家族性肾癌作为遗传性平滑肌瘤病和肾细胞癌综合征的指标”，家族性癌症，第11卷，第5期。1, pp. 115 - 121,2012。浏览：出版商的网站|谷歌学者
46. 侯昕，周勇，彭勇等，“FLCN基因突变的两个中国家庭的Birt-Hogg-Dubé综合征，”BMC医学遗传学第19卷第2期1, p. 14, 2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
47. E. C. Sattler, M. Reithmair, and O. K. Steinlein，“Birt-Hogg-Dubé综合征中的肾癌特征和基因型-表型相关性”《公共科学图书馆•综合》，第13卷，第2期12、文章编号e0209504, 2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
48. J. N. benhamou, C. D. Vocke, A. Santani等，“Birt-Hogg-Dubé综合征中FLCN基因内缺失和复制的鉴定”，基因，染色体和癌症，第50卷，第5期。6, pp. 466-477, 2011。浏览：出版商的网站|谷歌学者
49. 刘颖，徐志军，冯瑞峰等，“中国Birt-Hogg-Dubé综合征患者的临床和遗传特征”，欧菲莱特罕见病杂志，第12卷，第1期，第104页，2017年。浏览：出版商的网站|谷歌学者
50. I.W.da Cunha，W.H.da Costa，M.A.Morini等，“扩大遗传性平滑肌瘤病和肾细胞癌（HLRCC）的形态学和临床方面：一例具有异常形态学和临床表现的患者的病例报告，”维尔乔斯·阿奇夫，第473卷，第2期。6，第775-779页，2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
51. K. S. Price, A. Svenson, E. King, K. Ready，和G. A. Lazarin，“下一代测序时代的遗传癌症”，护理生物学研究，第20卷，第2期。2，页192-204,2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
52. j . Kim W.-Y。Park, N. K. D. Kim等人，“临床下一代癌症测序小组测试的良好实验室标准”，病理与转化医学杂志第51卷第1期3，页191-204,2017。浏览：出版商的网站|谷歌学者
53. E. M. Bahassi和P. J. Stambrook，“下一代测序技术:打破人类遗传学的音障”，诱变，第29卷，第2期5，第303-310页，2014。浏览：出版商的网站|谷歌学者
54. S.Ambardar、R.Gupta、D.Trakroo、R.Lal和J.Vakhlu，“高通量测序：测序化学概述，”印度微生物学杂志，第56卷，第4期，第394-404页，2016年。浏览：出版商的网站|谷歌学者
55. W. M. Linehan和P. T. Spellman，“乳头状肾细胞癌的综合分子特征”，新英格兰医学杂志第374卷2, pp. 135-145, 2016。浏览：出版商的网站|谷歌学者
56. 美国林,J.-B。曾,G.-X。中国结节性硬化症患者的表型分析和突变筛选TSC1/TSC2基因。”癫痫发作，第71卷，第322-327页，2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
57. E. N. suitsin, G. A. Yanus, M. Y. Dorofeeva et al，“模式TSC1和TSC2俄罗斯结节性硬化症患者的种系突变人类遗传学杂志，第63卷，第2期5, pp. 597-604, 2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
58. E. Nicolas, E. V. Demidova, W. Iqbal等，“具有早发透明细胞肾细胞癌家族史的种系变异的相互作用”，分子遗传学与基因组医学，第7卷，第5期3, p. 556, 2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
59. I.Bah，S.Fahiminiya，L.R.Bégin等人，“非典型结节性硬化综合征表现为家族性肾细胞癌伴平滑肌瘤性基质，”病理杂志:临床研究，第4卷，第4期。3, pp. 167-174, 2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
60. Z.Kote Jarai，D.Leongamornlert，E.Saunders等人，”BRCA2是导致年轻前列腺癌的中等外显率基因：对前列腺癌患者进行基因检测的意义，“英国癌症杂志第105卷第1期8, pp. 1230-1234, 2011。浏览：出版商的网站|谷歌学者
61. D. Leongamornlert, N. Mahmud, M. Tymrakiewicz等人，“生殖系乳腺癌易感基因1基因突变会增加患前列腺癌的风险。英国癌症杂志，第106卷，第2期。10, pp. 1697-1701, 2012。浏览：出版商的网站|谷歌学者
62. A.Lim，P.Rao和S.F.Matin，“林奇综合征和泌尿系统恶性肿瘤，”泌尿外科的最新观点，第29卷，第2期4, pp. 357-363, 2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
63. H. Goldberg, C. J. D. Wallis, Z. Klaassen, T. Chandrasekar, N. Fleshner, and A. R. Zlotta，“Lynch综合症在泌尿系统恶性肿瘤-泌尿科医生需要知道什么?”泌尿外科，第134卷，第24-31页，2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
64. M. Dominguez-Valentin, J. R. Sampson, T. T. Seppala等人，“6350名致病性错配修复变异携带者的基因、年龄和性别对癌症风险的影响:来自前瞻性林奇综合征数据库的发现，”医学遗传学第22卷第2期1, pp. 15-25, 2020。浏览：出版商的网站|谷歌学者
65. MacInnis, G. Severi, L. Baglietto等，“基于人群的前列腺癌风险估计的携带者HOXB13错义突变G84E。”《公共科学图书馆•综合》，第8卷，第2期2、文章ID e54727, 2013。浏览：出版商的网站|谷歌学者
66. R. Eeles和H. N. Raghallaigh，“易患前列腺癌的男性和基因筛查的作用，”翻译男科和泌尿学，第7卷，第5期1，页61-69,2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
67. J. L. Mohler, E. S. Antonarakis, A. J. Armstrong等，“前列腺癌，版本2.2019，肿瘤学NCCN临床实践指南，”国家综合癌症网络杂志，第十七卷，第二期5，第479-505页，2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
68. P.Paulo，S.Maia，C.Pinto等人，“靶向下一代测序确定了早发/家族性前列腺癌新基因中功能有害的种系突变。”公共科学图书馆遗传学第14卷第2期4、文章编号e1007355, 2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
69. J. T. Zhen, J. Syed, K. A. Nguyen等，“遗传性前列腺癌的基因检测:现状和局限性”，癌症号，第124卷。15, pp. 3105-3117, 2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
70. Heidegger, I. Tsaur, H. Borgmann et al，“遗传性前列腺癌基因检测的黄金时间?”癌症治疗的评论，第81卷，文章ID 101927，2019年。浏览：出版商的网站|谷歌学者
71. V. N. Giri, S. E. Hegarty, C. Hyatt等人，“实践中遗传性前列腺癌的种系基因检测:基因检测、精确治疗和级联检测的意义，”前列腺，第79卷，第5期。4，第333-339页，2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
72. L. Barber, T. Gerke, S. C. market等，“乳腺癌或前列腺癌家族史和前列腺癌风险”，临床癌症研究，第24卷，第2期23，第5910-5917页，2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
73. A. R.索拉诺，N. C. Liria, F. S. Jalil等人，”乳腺癌易感基因1和BRCA2阿根廷人口中德系犹太人的创始人等位基因以外的突变，“在肿瘤领域， 2018年，第8卷，第323页。浏览：出版商的网站|谷歌学者
74. R. Manchanda, M. Burnell, F. Gaba等人，“对德系犹太人人群中基于人群的BRCA检测的态度和影响因素:队列研究，”国际妇产科杂志，第126卷，第6期，第784-7942019页。浏览：出版商的网站|谷歌学者
75. Sherina, D. N. Ponomariova等人，“高频乳腺癌易感基因1,但不CHEK2或NBS1（NBN公司禁止)，俄罗斯卵巢癌患者的创始突变，”遗传性癌症的临床实践，第7卷，第5期1, p. 5, 2009。浏览：出版商的网站|谷歌学者
76. A. G. Iyevleva, E. N. suitsin, K. Kroeze等人，“非创始人乳腺癌易感基因1俄罗斯乳腺癌患者的基因突变，”癌症的信第298卷2，页258-263,2010。浏览：出版商的网站|谷歌学者
77. I. Gorodetska, S. Serga, N. Levkovich等人，“频率乳腺癌易感基因1乌克兰乳腺癌患者中的创始人突变c.5266dupC（5382insC）遗传性癌症的临床实践，第13卷，第2期1，页19,2015。浏览：出版商的网站|谷歌学者
78. A. Savanevich, O. Oszurek, J. Lubiński等，”乳腺癌易感基因1与白俄罗斯的卵巢癌相比，”家族性癌症，第13卷，第2期3, pp. 445-447, 2014。浏览：出版商的网站|谷歌学者
79. M. S. Anisimenko, G. A. Paul, A. E. Kozyakov et al.，“光谱乳腺癌易感基因1来自俄罗斯的早期乳腺癌患者的基因突变，”西伯利亚肿瘤学杂志，第17卷，第4期，第53-58页，2018年。浏览：出版商的网站|谷歌学者
80. r . Janavicius”创始人乳腺癌易感基因1/2欧洲的突变:对遗传性乳腺癌预防和控制的影响”电子探针杂志， vol. 1, no. 13，第397-412页，2010。浏览：出版商的网站|谷歌学者
81. S. Das, S. S. Salami, D. E. Spratt, S. D. Kaffenberger, M. F. Jacobs和T. M. Morgan，“将前列腺癌生殖系遗传学应用于临床实践”，泌尿学杂志号，第202卷。2, pp. 223-230, 2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
82. D.Stoppa Lyonnet，“BRCA突变的生物学效应和临床意义：我们从何处着手？”欧洲人类遗传学杂志，第24卷，第2期1, pp. S3-S9, 2016。浏览：出版商的网站|谷歌学者
83. C. Therkildsen, S. Ladelund, L. Smith-Hansen, L. J. Lindberg，和M. Nilbert，“林奇综合症的基因和性别风险估计;13种结直肠癌外类型的年龄特异性发病率，”英国癌症杂志，第117卷，第11期，第1702-1710页，2017年。浏览：出版商的网站|谷歌学者
84. J. M. Carethers，“通过微卫星不稳定性测试或免疫组织化学在所有私刑相关肿瘤类型中识别私刑综合征的高可预测性，”平移癌症研究，第8卷，第6期，S559-S563页，2019年。浏览：出版商的网站|谷歌学者
85. H.-l。黄，M. Christie, L. Gately等，“免疫组化错配修复缺陷评估:林奇综合征筛查和其他”，未来的肿瘤第14卷第2期26, pp. 2725-2739, 2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
86. V.R.Sarode和L.Robinson，“通过错配修复蛋白免疫组织化学筛选lynch综合征：不确定结果的意义以及与突变研究的相关性，”病理与检验医学档案，第143卷，第2期。10，第1225-1233页，2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
87. D. Huang, S. F. martin, N. Lawrentschuk, M. Roupret，“系统综述:林奇综合征中泌尿系统恶性肿瘤谱系的更新”，膀胱癌，第4卷，第4期。3，页261-268,2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
88. a . Phelan, a . Lopez-Beltran, R. Montironi等人，“遗传形式的膀胱癌:林奇综合症和其他遗传条件的综述，”未来的肿瘤第14卷第2期3, pp. 277-290, 2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
89. K. a . Nguyen, J. S. Syed, C. R. Espenschied等，“遗传性肾癌诊断的进展:多基因组检测的初步结果，”癌症号，第123卷22, pp. 4363-4371, 2017。浏览：出版商的网站|谷歌学者
90. https://www.thermofisher.com/life-science/sequencing/next-generation-sequencing/ion-torrent-next-generation-sequencing-workflow/ion-torrent-next-generation-sequencing-select-targets/ampliseq-target-selection/ready-to-use-panels.html2019年Ion AmpliSeq Ready-To-Use下一代测序(NGS)研究小组。
91. AmpliSeq for Illumina Ready-To-Use Panels, 2019，https://emea.illumina.com/products/by-brand/ampliseq/ready-to-use-panels.html．
92. M. B. Christensen, K. Wadt, U. B. Jensen等人，“探索丹麦肾癌遗传背景”，《公共科学图书馆•综合》第14卷第2期4、文章编号e0215725, 2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
93. V. N. Giri, E. Obeid, S. E. Hegarty等人，“对进行生殖系遗传前列腺癌检测的男性多基因检测结果的理解:对遗传咨询的意义”前列腺第78期12，第879-888页，2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
94. M. Rodríguez-Balada, B. Roig, M. Melé等，“通过对BRCAX患者进行下一代多基因测序，鉴定DNA损伤修复基因中的种系致病变异”，临床生物化学，第76卷，第17-23页，2020。浏览：出版商的网站|谷歌学者
95. T.R.Rebbeck，T.M.Friebel，E.Friedman等人，“一项对29700个基因突变家族的全球研究中的突变谱。”乳腺癌易感基因1或BRCA2突变。”人类基因突变第39卷第3期5，第593-620页，2018。浏览：出版商的网站|谷歌学者
96. T.K.K.Mamidi，J.Wu和C.Hicks，“利用基因组数据整合种系和体细胞变异信息，以发现前列腺癌的生物标记物，”BMC癌症第19卷第2期1，第229页，2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
97. L. Valle, E. Vilar, S. V. Tavtigian，和E. M. Stoffel，“结肠直肠癌的遗传易感性:综合症，基因，遗传变异的分类和精确医学的意义”，病理学杂志，第247卷，第2期5，第574-588页，2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
98. C. Van Marcke, R. Helaers, A. De Leener等，“肿瘤测序有助于改进未解释的高危乳腺癌家族的种系变异分析，”乳腺癌研究第22卷第2期1，第36页，2020。浏览：出版商的网站|谷歌学者
99. Lu，M.Xie，M.C.Wendl等人，“12种癌症类型中罕见种系变异的模式和功能含义，”自然通讯，第6卷，第2期1、文章编号10086,2015。浏览：出版商的网站|谷歌学者
100. D. Bouvet, S. Bodo, A. Munier等人，“基于甲基化耐受性的功能分析来评估未知意义的变异一种和MSH2确定林奇综合症患者的基因，”胃肠病学，第157卷，第1期2，第421-431页，2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者
101. S. Sorscher和S. Ramkissoon，“下一代测序，以便更好地描述意义不确定的BRCA变异，”肿瘤学病例报告，第10卷，第5期。2, pp. 634-637, 2017。浏览：出版商的网站|谷歌学者
102. M. K. Ndugga-Kabuye和R. B. Issaka，“多基因遗传癌症检测的不平等:与欧洲人相比，西班牙裔、非洲裔或亚洲和太平洋岛民的诊断率更低，VUS率更高。”家族性癌症第18卷第2期4，第465-469页，2019。浏览：出版商的网站|谷歌学者

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