文摘

背景。最近,免疫抑制多形核白细胞的识别(PMNL),传统上称为促炎细胞出现创伤后免疫领域的。理解他们的本地和远程分布创伤后,PMNL-subsets和免疫调节的影响俱乐部细胞蛋白(CC) 16与肺并发症评估。方法。C57BL / 6 n小鼠被分为三组,接受胸部钝伤孤立(TxT),接受TxT盲肠的结扎和穿刺(CLP,紧随其后 )24小时后,或虚假的经历analgosedation ( /组)。此外,每组分为三组接收没有治疗(ctrl)或气管内的中和CC16 anti-CC16-antibody的应用程序或应用程序的非特定的免疫球蛋白g控制抗体( /组)。治疗组在三后的时间点。分析后6 h post-CLP。PMNL CD11b通过表达特征,CD16、CD45、CD62L,并通过流式细胞术在Ly6G骨髓(BM)、血液、脾、肺、肝、支气管肺泡和腹腔灌洗液(BALF和PL)。细胞凋亡被激活(裂解)caspase-3评估。结果未经处理的ctrl和IgG-treated老鼠之间统计上可比相应的骗局,TxT, 组。结果。不成熟(CD16昏暗的CD62L明亮的在BM) PMNL显著增加,循环,TxT后和脾脏vs。虚假和肺部明显减弱,BALF、PL和肝脏。Classical-shaped (CD16明亮的CD62L明亮的)PMNL TxT后增加vs。虚假的外围组织,显著减毒在流通,提出伤害迁移成熟或外围分化不成熟PMNL的循环。免疫抑制(CD16明亮的CD62L昏暗的)在肺和脾PMNL大幅减少,同时系统TxT后增加vs。骗局。中电控股的 组减少免疫抑制PMNL在PL和增加他们的循环率vs。孤立的TxT,展示当地减少组织及其nonaffected增加组织的影响。CC16中和增强免疫抑制后PMNL TxT的分数vs。虚假的和在肺部post-CLP caspase-3下降 组,而凋亡细胞在肝脏post-TxT下降。创伤后CC16中和促进免疫抑制PMNL的子集和对抗他们的创伤后分布。结论。自CC16影响PMNL子集的分布和细胞凋亡在创伤后组织,它可能构成小说目标实益形状创伤后组织微环境和体内平衡改善的结果。

1。介绍

2016年,全世界超过300万人逝世后直接创伤或结果的临床并发症1]。创伤后的死亡率已经说明了两相的分布与直接或早期和晚期患者住院死亡率(2]。早死亡率主要造成的损伤程度、重伤创伤患者,幸存的初始阶段,处于高风险的并发症,例如,多器官功能障碍综合征,多器官功能衰竭(MOF),或脓毒症免疫失调造成的2,3]。伤害引起组织损伤引起大规模释放内源性启动有关的分子模式的分辨率不致病的病原炎症和随后的组织修复。同时大量的促炎州和补偿、抗炎症反应综合症的结果在一个复杂postinjury免疫反应。然而,系统性hyperinflammation可能诱发远程器官损伤和财政部4,5),而过度免疫抑制促进感染性并发症和脓毒症的发展(6,7]。这里,改进的理解发展的监管机制是至关重要的治疗策略,防止并发症造成的创伤后炎症失调。

众所周知,不同的蛋白质含量与特定的损伤模式,例如,系统性海拔俱乐部的细胞蛋白(CC) 16在创伤性肺损伤病人是8]。CC16 15.8 kDa蛋白质分泌主要由nonciliated俱乐部沿气管支气管的上皮细胞,尤其是在远端呼吸细支气管和终端(9,10]。这作为一种生物标志物可能表明创伤后继发性肺部并发症的发展,但也产生抗炎和免疫抑制特性11- - - - - -13]。由于其抗炎作用,CC16被描述在开发保护人类和小鼠的慢性阻塞性肺疾病(13,14]。

最新的研究结果表明,myeloid-derived抑制细胞(MDSC)与免疫抑制属性是增加患者遭受持续的炎症,免疫抑制和分解代谢综合症(图片),与巨噬细胞瘫痪和复发性感染15- - - - - -17]。异构MDSC种群分为细胞与单核细胞的特点,Mo-MDSC,和所谓的粒细胞——(G) MDSC或多形核的——与粒细胞(中性粒细胞)MDSC特征,分别为(18]。PMN-MDSC PMNL(被定义为一个群19),引入一个新的多样性最常见白细胞分数在人类循环,一直被认为是早期效应细胞的促炎的人口(20.]。然而,免疫抑制PMNL的识别仍然是具有挑战性的,因为不同的表面标记所示表明免疫抑制特性。在小鼠,MDSC称为Gr-1+CD11b+(21,22),与Ly6G- - - - - -Ly6C高定义Mo-MDSC和Ly6G+Ly6C低定义PMN-MDSC [18]。Ly6G是中性粒细胞标记只在小鼠PMNL表示,人类MDSC的识别,尤其是人类PMNL相似的免疫抑制功能更加复杂和仍然缺乏国际认可的统一面识别模式(23]。一个有前途的战略确定免疫抑制PMNL在人类被皮莱等人在健康志愿者与内毒素挑战,CD16诱导明亮的CD62L昏暗的表示人口的核形态hyper-segmented PMNL成熟。这种细胞群被证明展览immune-suppressive属性,因为它减少了t细胞增殖(24]。CD16昏暗的CD62L明亮的细胞不成熟PMNL的带状核形态描述(24),而CD16明亮的CD62L明亮的表现出一个经典,分段核形态,没有免疫抑制特性。PMNL正在迅速作出反应的免疫细胞(25),他们最近所描述的功能异质性是可能影响免疫调节和早期启动的长期创伤后免疫失调。

我们假设局部创伤会改变PMNL子集在受影响的动态分布和影响组织的小鼠创伤模型冲胸部创伤后脓毒症。由于其本地和系统性immune-modulating特点,我们也假设肺injury-associated CC16分布影响PMNL子集。因此,通过CC16可能预防创伤后免疫失调可能会揭开一个新颖的治疗方法来改善未来的结果。

2。实验部分

2.1。动物和道德

54岁的雄性C57BL / 6 n小鼠( ),Janvier实验室提供的6 - 8周的年龄,(法国)和举行的Zentrale Forschungseinrichtung法兰克福歌德大学的大学医院,德国。所有动物实验区域市政局的兽医部门批准Regierungsprasidium达姆施塔特并根据德国联邦法律,进行与到达同意指南(26]。小鼠获得水和食物随意。实验后,老鼠像之前描述的那样收到镇痛(27]。

2.2。组分配和实验模型

动物被随机分配到孤立冲胸部/胸外伤(TxT)组( )无菌剖腹手术,双重打击集团组成的TxT后续盲肠的结扎和穿刺(CLP, )( )或虚假的小组只接受analgosedation ( )。所有老鼠收到镇痛buprenorphin和一般的面具与异氟烷麻醉之前描述(27,28]。TxT和老鼠的双重打击组( )像之前描述的那样收到了双边胸部钝伤[28,29日]。短暂,懒散的定位后,气缸下2.5厘米,一个标准化的冲击波主要集中在胸部。空气冲击波穿孔0.05毫米聚酯薄膜聚酯薄膜,并提供空气吹到胸腔(杜邦,糟糕的小礼帽,德国)。

老鼠的假象,TxT或 组织进行了一个随机分成三个进一步子组 每组。一群老鼠没有接受治疗(ctrl, ),和第二组接受气管内的中和CC16 anti-CC16抗体的应用程序( ),而第三组收到一个未指明的免疫球蛋白g控制抗体( )。这种治疗随后TxT或相应的执行时机的虚假的子组。本地应用程序的50μl Uteroglobin / SCGB1A1 (CC16 Ab, LS生物科学)抗体干预组或50μl的免疫球蛋白(免疫球蛋白)控制抗体(10μg / ml,研发系统)管理使用气管内的被扣紧的气管插管的开头。抗体分布保证了定位的老鼠在仰卧位并保持彻底舌头一边。仔细管理抗体后,老鼠在反向仰卧30秒,以确保抗体分布在肺。24小时后,在全身麻醉(腹腔内应用氯胺酮,Zoetis,柏林,德国和xylazin,拜耳,勒沃库森,德国),双重打击组( )像之前描述的那样收到额外的CLP (28,30.]。短暂,平均剖腹手术后,远端盲肠结扎和刺接受25插管(布劳恩,Melsungen,德国)。三组进行无菌剖腹手术使用相同的全身麻醉。虚假的动物只有麻醉。六小时后所有小鼠腹腔内收到镇痛镇静如上所述,安乐死促进抽样。随机化的动物,一个动物每组进行了实验过程,通过这个协议,该组织分配完成。在图所示的实验设计1。评估相对PMNL分布的变化,虚假的动物收到没有抗体对TxT或比较 组织没有抗体的应用程序。结果与未经处理的控制和IgG-treated老鼠之间统计上可比相应的骗局,TxT, 组织;因此,在接下来的手稿,IgG-groups提供的数据。因此,检查CC16中和的效果,动物收到IgG-control抗体被引用队列,而动物收到anti-CC16抗体。

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图1
实验设计。虚假的组(a), 18动物接受analgosedation,而18动物被随机分配到孤立冲胸部/胸外伤(TxT)组( )与无菌剖腹手术(b)和18动物与随后的双重打击集团组成的TxT盲肠的结扎和穿刺( ,c)。在每一个组,三个进一步创建子组 每组。一个控制子群收到任何治疗抗体(ctrl),第二组收到一个未指明的免疫球蛋白抗体,第三组接受气管内的中和的CC16 anti-CC16-antibody的应用。随后执行治疗TxT或相应时间的假的子组。
2.3。抽样

腹腔灌洗(PL)获得通过刺穿腹膜23-gauge插管(布劳恩,Melsungen,德国),冲洗腹腔1.5毫升的磷酸盐(PBS)。收集支气管肺泡灌洗液(BALF),气管插管使用20量度留置静脉插管(布劳恩,Melsungen,德国)和肺部都刷新1.2毫升PBS。BALF和PL离心机在4°C 5分钟(1164克)。细胞球团矿在100年resuspendedμl PBS补充0.5%牛血清白蛋白(流式细胞仪缓冲区)。40μl是转移到聚苯乙烯流式细胞仪管(BD Pharmingen™)为进一步染色如下所述。

血液是由一个集合腔静脉穿刺23-gauge插管和肝素化注射器。样本离心机15分钟在1164 g和4°C。细胞颗粒在PBS resuspended (isovolume)和30μl(全血(WB)存储在染色流式细胞仪管。

灌注血液抽样后,小鼠20毫升PBS通过套管位于腔静脉。25毫克的一个肺叶,一个肝脏叶,和脾脏都被分单细胞分离和加工协议(发明生物技术,明尼苏达州,美国)。40μl的孤立和流式细胞仪缓冲resuspended单细胞丸是彩色流仪结果如下所述。骨髓(BM)采样、股骨骨拍摄,骨干都删除。骨腔后来刷新1毫升的PBS。去除剩余的骨头材料,骨髓是过滤使用单个细胞隔离设备过滤管(发明生物技术)。滤液离心机在1164 g在4°C 5分钟,和颗粒resuspended于100年μl流式细胞仪缓冲区。40μl被染色。

血液撤军后,一个肺叶一夜之间充满了4%福尔马林固定和immunohistological caspase-3染色如下所述。自肝左叶的结扎和流式细胞仪染色处理,其余的肝脏冲洗20毫升10%缓冲福尔马林溶液为免疫组织学和移除进一步处理如下所述。

2.4。流式细胞仪染色

所有样品都存储在冰和孵化Alexa萤石®647 -共轭anti-mouse CD11b抗体(Ab) (BioLegend,圣地亚哥,加利福尼亚州,美国),APC /火750共轭anti-mouse CD45 Ab (BioLegend),太平洋Blue-conjugated anti-mouse Ly-6G / Ly6C Ab (Gr-1, RB6-8C5 BioLegend), Alexa萤石®488 -共轭anti-mouse CD62L Ab (BioLegend)和藻红蛋白(PE)共轭anti-mouse CD16 / CD32 Ab(美国富兰克林湖BD生物科学)。30分钟后在黑暗中,5μl 7-AAD (BD生物科学)和样本孵化额外添加了15分钟。2毫升的流式细胞仪缓冲区用于洗涤在室温下(RT)与离心423 g。丢弃后上层清液1毫升流式细胞仪赖氨酸溶液(BD生物科学)添加到细胞颗粒和孵化10分钟rt, 7分钟的彩色样本离心机400克,洗两次2毫升流式细胞仪缓冲区。剩余的细胞颗粒resuspended于80年μl流式细胞仪缓冲和存储在冰上轻防护,直到流仪分析。

2.5。流式细胞仪分析和控制策略

彩色单细胞分解动作进行了分析使用BD流式细胞仪2章™和BD流式细胞仪天后™软件。否决了荧光强度设置通过使用相应的同形像控制抗体。在每个示例中,最低的 细胞被测量,尽管一些细胞总额较低的样本。汗衫被确定通过使用一个向前和侧散射扫描。生存能力被isotype-controlled 7-AAD消极。接下来,CD45+细胞被封闭的Ly6G-expression识别Ly6G的百分比+细胞(称为PMNL分数)。在PMNL分数,CD11b+细胞被除以它们的相对表达CD16 CD62L。在每个示例中,门是由个人表达强度根据皮莱细胞分布描述et al。24),如图2。Percental CD16分布昏暗的CD62L明亮的细胞(不成熟PMNL), CD16明亮的CD62L明亮的细胞(古典PMNL), CD16明亮的CD62L昏暗的细胞(免疫抑制PMNL), CD11b之一+PMNL测量。


图2
控制策略。单线态白细胞被使用前进和侧散射扫描识别。可行性是7-AAD发现的。然后,CD45+细胞(白细胞)Ly6G-expression识别Ly6G是封闭的+人口(PMNL分数)。在PMNL分数,CD11b+细胞被除以它们的相对表达CD16 CD62L, CD16和分布昏暗的CD62L明亮的(不成熟的PMNL), CD16明亮的CD62L明亮的(古典PMNL), CD16明亮的CD62L昏暗的(免疫抑制PMNL)细胞中可行的CD11b+PMNL测量。
2.6。Immunohistological Caspase-3染色的

的决心caspase-3表达式在肝脏和肺,石蜡包埋部分deparaffinized,水化,沾染了抗体如下所述。抗原检索是由R-universal解决方案(Aptum生物制剂)和蒸汽气氛下20分钟(寻回犬2010)。为了阻断内源性过氧化物酶活性、过氧化氢应用(过氧化物酶UltraVision块)。Anti-Cleaved Caspase-3 (Asp175)(# 9661,细胞信号技术)的抗体稀释剂与背景减少组件(Dako)被用作主要的抗体室温1小时。二级辣根peroxidase-linked抗体(兔子,Histofine简单的污点,Nichirei Biosciences Inc .)是用于检测caspase-3分开。3-Amino-9-ethylcarbazol (AEC, DCS创新Diagnostik-Systeme,汉堡)作为底物适用于检测特定的绑定。样品终于与苏木精复染色。积极染色细胞的平均数量/高功率场每张幻灯片评估来自25个不同的领域。

2.7。统计分析

统计分析了使用GraphPad棱镜6 (GraphPad软件公司,圣地亚哥,CA)。基于直方图和Shapiro-Wilk测试,非参数克鲁斯卡尔-沃利斯检验,不假设残差的正态分布,其次是邓恩的事后测试多个校正的应用比较。结果的平均值和标准错误意味着(SEM)。一个 值低于0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。主要发现

评估相对PMNL分布的变化,虚假的动物收到没有抗体对TxT或比较 组织没有抗体的应用程序。结果与未经处理的控制和IgG-treated老鼠统计同类之间相应的骗局,TxT, 组(数据没有显示);因此,在接下来的手稿,IgG-groups提供的数据。因此,检查CC16中和的效果,动物收到IgG-control抗体被引用队列,而动物收到anti-CC16抗体。

3.1.1。创伤诱导系统性的招募PMNL的骨髓

胸部钝伤后,PMNL分数显著降低骨髓( ,图3(一个))和显著增加血液中,脾脏,BALF、肺癌、PL和肝脏( ,数据3 (b)- - - - - -3 (g))。诱导系统性炎症后,PMNL分数趋势进一步衰减的骨髓,但显著增加血液中monotrauma相比,肺脾、BALF和PL。(图3 (c)相比),降低全身炎症导致PMNL孤立胸部创伤,而在肝脏(图3 (f))额外的CLP中 组诱导PMNL明显降低( )。

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图3
Percental PMNL分数比白细胞中虚假的酒吧(白色),孤立的胸部创伤(TxT,蓝色酒吧)和系统性炎症模型( ,红酒吧)评估骨髓(a), (b)的全血(WB)、肺(c), (d)在支气管肺泡灌洗液(BALF)、脾(f) (e),肝脏(g)和腹膜灌洗(PL) Ly6G的表达+流式细胞术。 vs。表示。(b - g # #)相应组织中和CC16抗体与气管内的应用程序。数据的表示 的意思。
3.1.2。生产和系统性的不成熟释放PMNL创伤引起的

在老鼠身上进行冲胸部创伤,不成熟的PMNL(图的相对水平4骨髓)显著增加,血,脾,而系统性炎症引起进一步显著增强骨髓和血液,但降低脾脏的虚假的水平( ,数据4(一),4 (b),4 (e))。TxT诱导成熟PMNL的显著降低BALF、肺癌、PL和肝脏( ,数据4 (c),4 (d),4 (f),4 (g))。在CLP中 集团、BALF中水平和肺仍然下降,而在PL显著水平进一步减弱。CLP增强肝的比例不成熟PMNL水平与虚假的(图4 (f))。

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Percental比不成熟PMNL CD11b之一+PMNL分数在虚假的(白色酒吧),孤立的胸部创伤(TxT,蓝色酒吧),和系统性炎症模型( ,红酒吧)评估骨髓(a), (b)的全血(WB)、肺(c), (d)在支气管肺泡灌洗液(BALF), (e)在脾脏,肝脏(f), (g)腹膜灌洗(PL)流式细胞术。 vs。表示。(b - g # #)相应组织中和CC16抗体与气管内的应用程序。数据的表示 的意思。
3.1.3。循环古典PMNL迁移在孤立的胸部创伤后组织和系统性炎症

Monotrauma诱导显著增加古典PMNL的骨髓,肺、PL和肝脏( ,数据5(一个),5 (c),5 (f),5 (g))改变创伤前水平PL CLP后和骨髓 组。肺的水平(图5 (c))明显在系统性炎症有所下降,但仍明显升高而虚假的动物( )。类似的趋势是肝脏(图中观察到5 (f))。Monotrauma和系统性炎症引起明显降低血液中的循环古典PMNL CLP后 组BALF中( ,数据5 (b)和5 (d))。

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在CD11b Percental古典PMNL的比率+PMNL分数在虚假的(白色酒吧),孤立的胸部创伤(TxT,蓝色酒吧),和系统性炎症模型( ,红酒吧)评估(a)在骨髓(BM), (b)的全血(WB)、肺(c), (d)在支气管肺泡灌洗液(BALF), (e)在脾脏,肝脏(f), (g)腹膜灌洗(PL)流式细胞术。 vs。表示。(b #, c#)相应组织中和CC16抗体与气管内的应用程序。数据的表示 的意思。
3.1.4。当地衰减造成的损害的免疫抑制PMNL受损组织和增加组织的影响

胸部创伤后免疫抑制PMNL的相对数量(图6肺和脾)显著降低( ,数据6 (c)和6 (e))。趋势增加水平检测在血液和肝脏(数字6 (b)和6 (f)),而这种效应是显著的BALF、PL和骨髓( ,数据6(一),6 (d),6 (g))。在CLP-induced系统性炎症在肺部 集团比显著增加而孤立的胸部创伤但仍显著降低而虚假的动物( ,图6 (c))。在血液中,有进一步增加的趋势而monotrauma和虚假的(图6 (b))。额外的CLP 集团在PL相比显著降低免疫抑制PMNL骗局和三组( ,图6 (g)),而这一比例在脾脏和骨髓对虚假的水平(数据规范化6(一)和6 (e))。

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在CD11b Percental免疫抑制PMNL的比率+PMNL分数在虚假的(白色酒吧),孤立的胸部创伤(TxT,蓝色酒吧),和系统性炎症模型( ,红酒吧)评估(a)在骨髓(BM), (b)的全血(WB)、肺(c), (d)在支气管肺泡灌洗液(BALF), (e)在脾脏,肝脏(f), (g)腹膜灌洗(PL)流式细胞术。 vs。表示。(b - g # #)相应组织中和CC16抗体与气管内的应用程序。数据的表示 的意思。
3.1.5。当地抑制CC16对抗创伤后免疫抑制PMNL的衰减

小鼠接受创伤后CC16 Ab的本地应用程序,分布PMNL分数增加BALF和肺相比,老鼠接收IgG-control抗体(数字3 (c),3(c#),3 (d),3(#))。Pulmonal CC16中和后TxT增加感应PMNL的分数在PL(数字3 (g)和3(g #))。对于不成熟的PMNL的变化分布,抑制CC16能够减少不成熟PMNL虚假BALF和PL在脾脏TxT和在CLP后的血液和肝脏 集团(数据4 (b),4 (d)- - - - - -4 (g)#,分别)。老鼠接受CC16 Ab老鼠接收控制抗体相比,增加的不成熟PMNL BALF CC16中和后被观察到了。在肺部(数字4 (c)和4(c#)),他们增加了对虚假的TxT和CLP后水平 组。古典PMNL的比率在小鼠接受CC16中和,脾细胞减少,PL和虚假的动物的血液(数字5 (b),5 (e),5 (g)#,分别)。CC16中和导致增加血液中的古典PMNL CLP后 组。在肺部(数字5 (c)和5(c#)),古典PMNL的比例并不是改变通过CC16 Ab TxT和CLP后应用程序 组。在肝脏(数字5 (f)和5(f#))、古典PMNL TxT和CLP后减少 集团CC16中和。关于免疫抑制PMNL,中和CC16减少虚假BALF的比率(数字6 (d)和6(#)),在肝脏和PL (TxT后数据6 (f),6(f#),6 (g),6(g #)), CLP后 组血液中(数据6 (b)和6(2 #))。CC16 Ab-related增加免疫抑制PMNL只是看到后的脾和肺TxT对虚假的水平(数字6 (c),6(c#),6 (e),6(e #))。

3.1.6。创伤导致受损细胞凋亡和远程器官

凋亡caspase-3阳性细胞明显胸部钝伤引起肺和肝脏( ,数据7 (b)和7 (c))。在肺,CLP TxT + CLP组显著增加细胞凋亡。肝细胞的凋亡率明显减弱但仍显著增加对虚假的动物( )。相比,caspase-3-positive小鼠细胞的数量接收pulmonal CC16中和减少后的肺和肝脏TxT和额外的CLP后肺 集团(数据7(2 #)7(c#))。

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图7
(a)动物体重毫克的骗局(白色的酒吧),孤立的胸部创伤(TxT,蓝色酒吧)和系统性炎症模型(TxT + CLP、红酒吧)。(b)凋亡数量(caspase-3-positive)细胞/高功率场(高通滤波器)在肺部。(c)凋亡细胞的数量/高功率场(高通滤波器)在肝脏。(# - c #):相应的组织和气管内的中和CC16抗体的应用。数据被表示为平均值±标准错误的意思。 :p < 0.05vs。表示。

4所示。讨论

4.1。创伤后中性粒细胞分布子集

造成显著影响免疫系统启动早期促炎的全身反应,出现在创伤后的第一天。这对创伤性损伤与一个强烈的炎症可能导致的伤害增加本地组织和远程器官损伤(5,31日,32]。同时,诱导免疫抑制反应,事实上又促进图片和创伤后感染(17]。虽然都是传统上称为后遗症发生,最近的发现表明促炎和免疫抑制反应的同时出现(33],从而强调的重要性,他们早期的监管,以防止潜在的失调和临床并发症。PMNL的能力调节早期炎症是第一批nonresidual细胞浸润的组织损伤和感染。所述前(32),我们观察到当地冲胸部创伤诱发系统性的招募PMNL的骨髓;然而,创伤后增加器官受损或远程PMNL的(32必须仔细重新考虑。考虑到系统性PMNL招聘,潜在的本地dysbalances异构PMNL分布在三个子集(34可能促进创伤后并发症。不成熟(CD16昏暗的CD62L明亮的PMNL endotoxin-induced和显示一个带状核形态(24]。与其他PMNL子集相比,他们拥有最高的细胞内细菌遏制能力(35,36]。最大的人口在循环PMNL古典(CD16明亮的CD62L明亮的)PMNL [24]。这些细胞具有分段核形态和称为成熟PMNL [37]。最近免疫抑制族群(CD16描述明亮的CD62L昏暗的),hyper-segmented核形态,降低细胞内细菌遏制能力(36),但可以通过直接信息交互抑制immune-meditating t细胞的增殖(24]。可能刺激人类,endotoxin-induced免疫抑制PMNL是移行细胞(IFN -γ),因为它刺激程序性死亡配体的表达(PD-L) 1。在免疫抑制PMNL PD-L1需要通过直接抑制t细胞增殖cell-cell-interaction [38]。在人类和老鼠,PMNL族群与调节PD-L1炎症免疫抑制特性提供诱导淋巴细胞凋亡。有趣的是,在小鼠PD-L1高人口,CD16调节,而CD62L是表达下调(39),确认coexpression CD16明亮的CD62L昏暗的表明在人类和小鼠免疫抑制特性。

与发现的人口(40),不成熟PMNL TxT和DH后被诱导骨髓、血液、脾(数字4(一),4 (b),4 (e)),而创伤影响他们减少受损和远程组织。仍然是难以捉摸的,无论是伤害减少的影响和影响组织可能是由于当地差异化归航之前或在早期炎症状态之间的时间延迟而古典PMNL细胞因子释放和招聘。然而,考虑到他们较高的细菌控制能力,增加循环不成熟PMNL可能抑制系统性细菌传播。古典PMNL的增加在几个器官后TxT和DH可能引起相关危险分子模式,这是已知' PMNL迁移向内皮屏障,促进其促炎的特征(41,42),显示早期警觉的免疫状态。减少额外的CLP后在PL可以系统性hyperinflammation免疫失调的迹象。有趣的是,胸部钝伤显著降低免疫抑制PMNL的肺、器官损伤的主要网站。类似衰减脾脏可能与这个器官的胸内的位置与胸部创伤的可能的机械损伤。因为脾的商店PMNL [43),创伤后免疫抑制PMNL的招聘可能会假定。自从衰减只是观察到胸廓内的受损的器官,表型变化由于细胞因子模式或移民可能是负责任的。增加免疫抑制PMNL影响器官,如PL、骨髓、血、肝后胸部创伤可能作为一个提供hyperinflammation内生机制。由于免疫抑制PMNL的迁移能力,他们可能将有效减少迁移到受影响的器官,出现在一个更高的比例影响组织在假设[35]。衰减后的PL额外CLP突显出当地的损害对免疫抑制PMNL的影响下降。增加免疫抑制后PMNL DH BALF中没有与我们的研究结果,提出一个特殊的角色BALF的肺损伤,突显出最新发现BALF PMNL行为差异和实质肺组织(44]。

我们的数据支持的存在伤害的分布异构PMNL与截然不同的特征子集,如上高亮显示。积累的细胞与特定的属性,区分损坏和影响组织,是一个潜在的方法来强调炎症和减轻创伤后的不受控制的系统性hyperinflammation。

4.2。在创伤后PMNL子集CC16分布的影响

超过50%的严重受伤患者生理问题遭受严重胸部创伤(45),而最后构成复杂的创伤后并发症的危险因素,例如、急性呼吸窘迫综合征(46]。尽管直接损害呼吸道活跃的组织,系统性免疫调节可能是参与相关后期死亡率(47,48]。局部创伤后全身效应似乎合理考虑肺部和血液之间的接触面积大。CC16主要产生在肺部(49),其系统性水平升高在肺损伤患者被发现,关联受损区域的大小(8]。CC16的确切功能并不完全理解,但其抗炎特性密切相关,例如,减毒IL-8-dependent PMNL趋化作用[50),抑制血清磷脂酶A2 (51),降低干扰素-γ(52),和高亲和力甲酰肽受体(玻璃钢)253]。作为长期低血清水平的基线CC16成人与肺功能恶化(54),是知之甚少的免疫作用严重胸部创伤后CC16水平升高。早期CC16水平升高的相关报道和CC16水平升高在创伤后肺炎的临床病程发展(11]表明CC16可能作为一种很有前途的目标,以防止在胸部创伤患者的手术并发症。尽管其已知的免疫抑制特性,我们发现CC16减毒免疫抑制PMNL,作为其早期胸部钝伤后造成中和规范化肺部免疫抑制PMNL的水平。类似的调查还发现系统和后脾脏TxT和PL CLP后。相应的免疫抑制PMNL的升高利率,利率的古典PMNL CC16中和后减少肺和脾。因此,我们建议CC16调解“促炎”属性在急性肺损伤PMNL的水平。这也突出显示了减少凋亡细胞的数量后早期应用中和CC16抗体和支持我们最近公布的数据表明早期CC16中和增加PMNL渗透但预防胸部钝伤组织学肺损伤后24小时内(55]。早期促炎属性并不完全异议与上面描述的消炎作用。高当地CC16增加可能影响FPR2干扰,随着FPR2提供促炎属性(56]或促炎细胞因子的coappearance可能对CC16调节免疫反应。自干扰素-γ被延迟的系统增加创伤后与其他促炎细胞因子(57],CC16也可能提供后期抑制干扰素-免疫抑制效应γ,而直接影响PMNL-differentiation可能,而促炎。增加的不成熟PMNL CC16中和在肺部后,BALF和血液可能与减少CC16对PMNL迁移的影响(58]。另一方面,它表明CC16的影响受到局部免疫状态,为PMNL分化不同组织的影响。减分数这是高亮显示的不成熟和古典PMNL CC16中和后的肝脏(数字4 (f)和4(f#)),在肝脏组织细胞凋亡减少。综上所述,本研究是第一种方法的不同角色PMNL的炎症(总结图8CC16)和进一步承诺的影响作为一个可能的因素在他们的分化和作为潜在的药物目标模型。然而,精确的分子机制仍然是难以捉摸的。

(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
(c)
图8
多形核白细胞(PMNL) (a)的特点是它们的相对表达CD16 CD62L进入三个子集(不成熟,CD16昏暗的CD62L明亮的;古典、CD16明亮的CD62L明亮的;和免疫抑制,CD16明亮的CD62L昏暗的)。(b)子集的变化分布在肺部创伤后没有和CC16中和代表组织的影响。(c)的相应变化腹膜细胞(PL)接受胸外伤(TxT)和额外的盲肠的结扎和穿刺(CLP)代表组织在CLP TxT和影响组织的影响。

作为这项研究的局限性,它必须考虑,传统的控制策略对小鼠MDSC (Gr-1+和CD11b+)和有前途的人类特征PMN-MDSC使用CD16和CD62L应用。Dunay等人两个嗜中性粒细胞趋化因子受体CXCR4和CD62L表达式应用于分层数量(59]。尽管小鼠CD16的结果明亮的CD62L昏暗的PD-L1+PMNL与免疫抑制特性,人类和小鼠CD16的比较明亮的CD62L昏暗的免疫抑制特色PMNL允许可转移性是必要的。一个可能的识别是CD62L[的脱落问题43),因为它会干扰CD62L-staining,脱落也可以PMNL分化的一个必要的一步。在我们的控制策略,因此延长了CD62L昏暗的门向低,isotype-positive荧光强度,通过考虑相对的形态表达强度。

5。结论

不成熟PMNL从骨髓中释放后创伤并接受网站的特定子集分化各自行动,不同的受损和损伤器官。在古典PMNL增加和远程器官受损,免疫抑制PMNL增加影响和减毒后受损组织当地冲胸部创伤(图8 (b))。CC16中和影响免疫抑制PMNL的分化抑制衰减后的肺TxT。早期胸部钝伤后造成CC16中和减少凋亡细胞的数量,因此可能是一种很有前途的目标在预防创伤后免疫失调,改善的结果。

数据可用性

数据在一个合理的请求到相应的作者BR。

信息披露

资助者没有作用的设计研究;在收集、分析或解释数据;写的手稿;或决定发布结果。部分研究已经发表的会议摘要。

的利益冲突

作者认为他们没有利益冲突。

作者的贡献

开国元勋之一B.R.安贝德卡对负责概念化。注意:,P.S., A.J., and K.K. are responsible for the methodology. A.J. and B.R. performed the formal analysis. N.B., P.S., and A.J. did the investigation. N.B. acquired the data curation. N.B. wrote the original draft preparation. K.K., J.T.V., K.H., I.R.D., C.N., I.M., and B.R. did the writing of the review and editing. N.B. and B.R. did the visualization. B.R. did the supervision. B.R. is responsible for the project administration. All authors have read and agreed to the published version of the manuscript. Jan Tilmann Vollrath and Borna Relja contributed equally to this work.

确认

我们感谢凯特琳Jurida和委员Kerstin Kontradowitz杰出的技术援助。这项工作是支持的DFG再保险3304/8-1格兰特。