来自烟曲霉属真菌通过调节影响Gasdermin-D-Dependent Pyroptosis肺的toll样受体2-Mediated调节性T细胞分化

文摘

目的。来自烟曲霉属真菌作为一个机会性真菌,开发了一系列逃避机制在宿主的免疫反应来获得营养和促进真菌生长在充满敌意的环境中。病原体的免疫逃避可能通过抑制炎症反应由调节性T细胞亚群)。本研究的目的是探讨是否答:来自烟影响Gasdermin-D-dependent pyroptosis调节肺的toll样受体2-mediated调节性T细胞分化。方法。收集患者的外周血答:来自烟。ELISA试剂盒用于检测il - 1的表达水平β,IL-2R il - 6和il - 10在血清和流式细胞术检测CD4的百分比⁺CD25⁺Foxp3⁺亚群患者的外周血单核细胞(PBMCs)。的小鼠模型答:来自烟感染是由气管滴注法。小鼠的肺部病变在显微镜下观察到。肺组织中的真菌负载是由平板菌落计数。酶联免疫试剂盒用于检测肺组织匀浆促炎细胞因子TNF -αil - 6, CCL2, VEGF。Q-PCR用于检测Foxp3的表达和TLR2基因在肺。采用免疫印迹检测TLR2的表达,Gasdermin-D (GSDMD), il - 1α,il - 1β在肺。流式细胞仪是用来检测脾脏CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺亚群。利用磁珠提取CD4细胞⁺从小鼠脾脏T细胞的影响答:来自烟分生孢子或区分CD4 TLR2抑制剂(C29)⁺T细胞体外测试。结果。Foxp3的表达和TLR2小鼠的肺组织中感染答:来自烟的比例增加,我们观察到在两个亚群答:来自烟感染病人和老鼠是调节。使用CD25中和抗体后,小鼠脾脏的亚群数量明显减少。然而,肺损伤是减少和清除肺部真菌的能力增强。我们发现的亚群老鼠显著降低和致命的剂量答:来自烟分生孢子并没有引起严重肺损伤老鼠。与野生型小鼠相比,真菌TLR2-deficient小鼠肺的负担减少的淘汰赛TLR2 GSDMD的表达改变,il - 1α,il - 1β在答:来自烟。在体外实验中,我们发现TLR2可减少Treg分化的抑制。结论。答:来自烟触发CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺Treg增殖和分化通过激活TLR2通路,这可能是一个潜在的逃避宿主防御机制答:来自烟。这种效应可以调节GSDMD-dependent pyroptosis,可能部分涉及TRL2信号。

1。介绍

来自烟曲霉属真菌作为一个机会性真菌,是环境中常见的分生孢子物种之一(1,2),可引起肺和系统性感染人类[3,4),大约200000例侵袭性曲霉菌(IA)患者每年在全球范围内(5,6]。调节性T细胞亚群)已被证明控制宿主的炎症反应。研究发现,小鼠在感染后亚群有显著增加答:来自烟(7)和显示,传统的数量和目标特异性T淋巴细胞反应(8- - - - - -10]。Treg细胞可以抑制过度的组织炎症通过抑制Th1和Th17反应在感染后的头几天答:来自烟(9]。然而,亚也促进免疫耐受和免疫逃避通过抑制人体的免疫反应增加细菌感染的敏感性(11]。TLR2属于模式识别受体(PRR)家庭和触发宿主反应(12,13),激活答:来自烟刺激。从目前的分析和研究,除了先天免疫细胞杀伤细胞、树突状细胞和巨噬细胞表现出TLR2相同的TLR2表达式出现在一些自适应像CD4免疫细胞⁺,CD8⁺T细胞(14),而CD4⁺Foxp3⁺亚[15]。CD4细胞的增殖⁺Foxp3⁺Treg细胞TLR2 / MyD88途径可以诱导的登革热感染(11]。在鼠标测试分析感染所致白色念珠菌,减少TLR2的表达降低CD4的数量⁺CD25⁺Treg细胞,减少真菌负担(16]。巨噬细胞有促炎细胞因子的分泌反应降低曲霉属真菌刺激生产的il - 10通过TLR2-dependent机制(17]。

因此,我们假设答:来自烟刺激活化诱导增加CD4 TLR2信号⁺CD25⁺FOXP3⁺亚群,从而调节肺部炎性环境变化,促进真菌的持久性。明确的假设,我们分析七临床样本答:来自烟感染。然后,我们创建了一个肺部感染的小鼠模型答:来自烟在野生型老鼠和老鼠和通过体外实验检测TLR2在CD4细胞的分化⁺T细胞。

2。材料和方法

2.1。临床样本收集

十四收集血液样本的研究。感染组的7个样本来自成人患者来自烟曲霉属真菌重庆医科大学第一附属医院感染,和七个健康研究的样本作为对照组。每个参与者提供他们的同意之前样本集合,和大学的临床研究伦理委员会批准了这项协议。号码是2020 - 850。

2.2。人类外周血单核细胞(PBMC)隔离

EDTA管是用来存储收集血液样本。样本离心机在2500 rpm 8分钟的密度梯度(Histopaqueσ)。根据指示,我们使用了人类外周血淋巴细胞分离解决方案工具包(TBDsciences)获得淋巴细胞。

2.3。人类血清细胞因子和外周血Treg / CD4细胞⁺测量

血液样本离心机在4°C 2000 rpm 15分钟获得上层的血清。il - 1的水平β,IL-2R il - 6和il - 10在血清和Treg / CD4细胞⁺(CD4的百分比⁺CD25⁺Foxp3⁺在CD4细胞亚群⁺T细胞)在分析了PBMCs临床分子测试中心的重庆医科大学第一附属医院的测量。

2.4。动物

C57 / BL6小鼠(男,6 - 8周,17-24 g)用于我们的实验获得来自重庆医科大学实验动物中心。TLR2基因敲除小鼠C57 / BL6背景从杰克逊实验室购买。所有程序都是批准的重庆医科大学动物保健和使用委员会制度。

2.5。株真菌和培养条件

的压力答:来自烟与所需的规格Af293用于感染和培养如前所述18]。简而言之,分生孢子成熟在Sabouraud葡萄糖琼脂板七天在37°C和5%的公司₂。准备一个孢子悬液,冲洗10毫升无菌PBS含有0.1%渐变20,轻轻刮了曲霉属真菌殖民地在培养皿中19]。然后,透过八层无菌纱布。调整后的真菌悬浮所需的浓度与血细胞计数器,分生孢子悬浮液储存在4°C。

2.6。的小鼠模型来自烟曲霉属真菌感染和组织样本收集

老鼠轻度麻醉,然后放置在一个平面位置和管理气管内的50浓度μl ( 可行的孢子,同时保持一个直立的位置作为研究模型引起的感染答:来自烟(20.]。1到2小时内注射后,老鼠恢复完全,有一个健康的外观。老鼠一直在SPF实验室和安乐死手术后24和72 h。血液收集retro-orbitally。肺组织和脾脏的老鼠获得后续研究。脾脏被老鼠的,轻轻的用筛网获得脾细胞进行后续研究。

2.7。Treg细胞体内的封锁

鼠标CD25 / IL-2Rα抗体(AF2438、研发系统、明尼苏达州、锰、美国)被用来抑制Treg细胞。1小时前答:来自烟感染,每个抑制剂组小鼠腹腔注射20μ克老鼠CD25 / IL-2Rα抗体,和控制老鼠注射抗体鼠IgG1 [21]。

2.8。组织病理学

肺的样本已经被固定在4%的甲醛。切片完成后样本嵌入石蜡。格罗克特乌洛托品银(GMS)是利用染色肺真菌检测的样品。组织学分析过程,肺与苏木精和伊红染色样品())。分析了通过使用COOLSCOPE数字光学显微镜(日本东京尼康有限公司),肺损伤是得分根据Mikawa标准定义et al。22如下:(1)肺泡充血,出血(2),(3)间隙或聚合的间隙或中性粒细胞,和(4)肺泡隔增厚或透明膜形成。肺炎肺感染分数近似通过发布的方法的评分标准Cimolai et al。23]。评分标准是基于(1)气管周围的炎症细胞的浸润程度和细支气管0 - 3,(2)质量的气管和细支气管渗透0 - 3,(3)渗入气管的炎症程度和细支气管腔0 - 2,(4)血管周围炎症细胞浸润,0 - 3,和(5)的肺实质炎症涉及范围0,3和5。炎症的严重程度成正比的大小。

2.9。体内的量化可行的分生孢子

小鼠的肺部真菌负担是由平板菌落计数法。分离小鼠肺无菌,权衡他们的湿重,加冰PBS,使均匀组织,组织按比例稀释。每个浓度梯度(10⁻¹和10⁻²)被添加到沙塔板中,每个浓度梯度接种两个菜和培育37°C 72小时。计算殖民地和乘以稀释因子。

2.10。细胞因子的测量

肺组织匀浆WT老鼠和(10倍稀释)老鼠收集。根据指令,肿瘤坏死因子(TNF)α、il - 6、VEGF和CCL2酶联免疫吸附试验后测量设备(ELISA)作为测量(4生物技术,中国)。

2.11。提取RNA,互补脱氧核糖核酸的合成,实时定量PCR

试剂盒(豆类生物、东京、日本)被用来从肺组织中提取总RNA, RNA浓度测量。实验注重防止污染的外生核糖核酸酶。结核病的具体实验过程按照说明绿色®预混料交货Taq™II(核糖核酸酶H + Tli)(豆类生物、东京、日本)。添加特定的引物反应系统执行rt - pcr包括TLR2, Foxp3,三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)。引物序列如下:TLR2向前5 - - - - - -GATGAAGTCAGCTCACCGAT-3 ;反向5 - - - - - -ACAGTTCCAAGATGTAACGC-3 ;Foxp3向前5 - - - - - -CCTATGCCACCCTTATCCGATG-3 ;反向5 - - - - - -CGAACATGCGAGTAAACCAA-3 ;GAPDH向前5 - - - - - -GGACACTGAGCAAGAGAGGC-3 ;和反向5 - - - - - -TTATGGGGGTCTGGGATGGAA-3 。使用一个25μl系统,增加结核病绿色预混料交货Taq II(核糖核酸酶H + Tli) (2 x),底漆,反向引物,DNA模板,RNase-free dH₂O根据指令。采用两步PCR反应程序,方法是用来确定相对目标基因的表达。

2.12。免疫印迹分析

利用均质器,同质化的肺组织1毫升50 mM Tris-HCl (pH值7.8)包含15%的甘油,150毫米氯化钠,Tween-20 0.1%,蛋白酶抑制剂是和离心紧随其后。蛋白质浓度估计通过使用bicinchoninic酸(BCA)蛋白质分析工具包(Beyotime、上海、中国)。上层清液(总蛋白)分离与钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page)和涂抹到聚乙二烯二氟化物膜。膜阻止了5% ( )脱脂牛奶然后孵化TLR2抗体(稀释1:300),Foxp3(稀释1:1000)抗体,Gasdermin-D抗体(稀释1:1000),il - 1α抗体(稀释1:1000),il - 1β抗体(稀释1:1000)或GADPH抗体(1:2000)6在4°C - h,然后,辣根peroxidase-conjugated二级抗体(稀释1:5000 ~ 8000)是在37°C反应1小时。膜暴露在增强化学发光试剂(ECL)。使用ImageQuant TL软件来检测蛋白表达。

2.13。CD4⁺T淋巴细胞分离、增殖,并分化成Treg细胞体外

的分生孢子答:来自烟热灭活后加热在65°C的60分钟。Sabouraud琼脂用于测试这些分生孢子的生存能力。研究表明,应该使用的试剂 (24]。脾脏样本应收集从C57 / BL6老鼠根据前面的方法(25]。CD4⁺T淋巴细胞分离的EasySep™鼠标天真的CD4细胞⁺T细胞隔离工具包(干细胞)。关于 CD4⁺T细胞接种在每个48-well板块。媒介RPMI 1640添加50 ng / ml转化生长因子-β(TGF -β)(PeproTech) 5μg / ml anti-mouse CD3 (eBioscience), 2μg / ml anti-mouse CD28 (eBioscience), 10 ng / ml细胞因子- 2(美国新泽西PeproTech,落基山),50毫米β巯基乙醇(Macklin、上海、中国),和2 mML-glutamine(干细胞技术,加拿大温哥华),有或没有C29,孵化在37°C, 5%的公司₂3天,然后进行流式细胞术检测,每组重复5次。C₁₆H₁₅没有₄美国新泽西州(C29)”(MCE)溶解在DMSO溶液为50毫米股票的解决方案(26]。

2.14。流式细胞术

培养T细胞、孤立PBMCs和脾细胞进行测试与荧光抗体,以确定在黑暗中孵化CD4的百分比⁺CD25⁺Foxp3⁺在CD4细胞亚群⁺T细胞。根据制造商的指示,收集细胞与PBS洗,离心机小球,然后沾抗体(anti-CD25-phycoerythrin-PE、anti-CD4-FITC anti-Foxp3-APC)和固定/透化作用工具包(eBioscience))在黑暗中用于流式细胞仪检测。至少10⁵细胞被收集并通过流式细胞仪检测到流式细胞分析仪(Becton, Dickinson)和数据分析是由FlowJo软件V10。

2.15。统计分析

使用SPSS 20.0统计分析完成(美国、IBM、纽约Armonk)和GraphPad Prism 8.0 (GraphPad软件、圣地亚哥、钙、美国)。所有的实验数据都表示为 偏差。与学生的未配对的双尾实验数据进行评估测试、单向方差分析或双向方差分析(方差分析)出席了图基事后测试。 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。来自烟曲霉属真菌感染导致免疫活性的小鼠肺损伤

我们发现,il - 1β( ),il - 6 ( ),和IL-2R ( )提高病人标本感染之一答:来自烟;il - 10在感染后略增加( ,图1(一))。然后,我们建立了小鼠肺部感染答:来自烟。的肺部感染答:来自烟在老鼠身上证实了GMS染色和真菌菌落的数量(图1 (b))。如图1 (c),我们发现)肺组织部分显示细支气管炎症细胞的浸润,血管周的,血管腔。肺损伤程度的半定量的损伤指数包括出血,肺泡充血,间质或中性粒细胞浸润或聚合,和严重的炎性细胞浸润答:来自烟肺炎相比控制老鼠。明显增加的大量的炎症细胞和增加肺组织病理学Mikawa分数和Cimolai分数被观察到答:来自烟感染组( )。与此同时,答:来自烟趋化因子和细胞因子的浓度显著增加,包括TNF -α( ),CCL2 ( ),il - 6 ( ),和VEGF ( )在小鼠的肺组织(图1 (d))。

3.2。增加Treg细胞比率答:来自烟的肺刺激免疫活性的老鼠

如图2(一个),Treg细胞感染的病人的数量答:来自烟略有增加( )。进一步了解亚群的参与肺答:来自烟,我们研究了蛋白质和mRNA水平Foxp3在肺部答:来自烟通过实时定量聚合酶链反应和免疫印迹的挑战。有调节表达Foxp3在小鼠的肺部受损答:来自烟感染与控制( ,图2 (b))。同时,我们发现,与未感染的老鼠相比,CD25⁺亚( )和CD25⁺Foxp3⁺亚( )在CD4⁺T细胞治疗的小鼠的脾脏答:来自烟显著增加感染后72小时内(图2 (c))。上述数据表明,Treg细胞比率的增加肺部有关曲霉病。

3.3。持续出现的真菌引起的肺损伤来自烟曲霉属真菌与亚

为了进一步阐明亚群的作用答:来自烟感染、腹腔内注射CD25-neutralizing抗体20μg是用来抑制Treg细胞在WT老鼠。CD25的数量⁺亚( )和CD25⁺Foxp3⁺亚( )减少在CD4⁺后脾脏T细胞CD25抗体相比之下,接受治疗的答:来自烟感染组(图2 (d))。后答:来自烟感染,我们发现老鼠CD25抗体治疗观察略低负荷答:来自烟在他们的肺相比答:来自烟感染组( ,(图2 (e))。如图2 (f)、更高的炎症细胞和肺泡出血被发现在小鼠治疗答:来自烟。然而,总的来说,抑制Treg细胞后,血管周围炎症细胞稍低,有轻度降低肺组织病理学Mikawa分数和Cimolai IgG1-treated小鼠的分数相比答:来自烟肺部感染( )。

3.4。TLR2增加小鼠的肺中处理来自烟曲霉属真菌

TLR2的细胞膜受体参与答:来自烟(27]。我们测量的蛋白质和mRNA水平TLR2在感染控制和野生型小鼠肺部免疫印迹和rt - pcr。相对TLR2 mRNA表达水平调节在感染小鼠肺相比对照组( ,图3(一个))。TLR2蛋白水平也增加了感染小鼠肺相比对照组( ,图3(一个))。这些结果证实,TLR2表达式后高答:来自烟感染小鼠的肺中。

3.5。免疫活性的老鼠更容易来自烟曲霉属真菌感染

理解TLR2是否参与了肺的Treg-mediated持久性答:来自烟,我们被感染老鼠 分生孢子接种的,与野生型小鼠相比;没有死亡发生在两组的3天内(数据没有显示)。令人惊讶的是,小鼠观察的略低负荷答:来自烟肺与控制( ,图3 (b))。如图3 (c)肺癌的组织学显示,主要是肺部浸润的巨噬细胞和单核细胞老鼠答:来自烟、肺泡充血和出血。然而,相比之下,老鼠、WT老鼠患有间质充血和出血,更明显答:来自烟被严重感染,中性粒细胞浸润。评估肺组织形态学的变化,增加肺组织病理学Mikawa评分( )和Cimolai分数( )在WT观察小鼠接受吗答:来自烟。如图3 (d)肿瘤坏死因子-α肺部和il - 6的分泌减少小鼠与野生型小鼠的控制答:来自烟感染( )。然而,CCL2和VEGF的表达水平统计不同与WT老鼠。

3.6。TLR2起着关键作用的诱导CD4细胞的扩散⁺CD25⁺Foxp3⁺亚群引起的肺损伤来自烟曲霉属真菌

调查Treg细胞分化的分子机制和核扩散TLR2造成的答:来自烟感染,如图4(一),CD25的比率⁺亚( )和CD25⁺Foxp3⁺亚( )在CD4⁺脾脏的T细胞老鼠明显低于那些WT老鼠。后答:来自烟感染,CD25⁺亚( )和CD25⁺Foxp3⁺亚( )在CD4⁺脾脏的T细胞老鼠也显著降低。结果与以往研究结果(11]。我们还发现Foxp3的表达在肺部感染后的老鼠答:来自烟。rt - pcr结果表明Foxp3的表达在肺部的对照组老鼠是减少比野生型小鼠(P < 0.001,图4 (b))。Foxp3的表达下降在没有感染的肺老鼠与控制(WT小鼠相比 )。此外,尽管Foxp3的表达调节后感染答:来自烟肺的老鼠和WT老鼠,这些的老鼠也减少了WT老鼠(相比 ,图4 (c))。

3.7。TLR2减少的抑制剂来自烟曲霉属真菌全身的CD4⁺CD25⁺Treg CD4细胞分化⁺T淋巴细胞

确认是否TLR2答:来自烟感染会影响CD4细胞的分化⁺T淋巴细胞进入Treg细胞,我们主要CD4获得⁺随后从小鼠脾脏T淋巴细胞在体外细胞培养实验。干预是通过添加C29 (TLR2抑制剂)的媒介。观察,流式细胞仪分析了72小时的文化之后,我们发现CD4的比率⁺T淋巴细胞分化成CD25⁺亚群和CD25⁺Foxp3⁺亚群C29治疗后下降( ,图4 (d))。

3.8。TRL2信号包括GSDMD-Dependent Pyroptosis来自烟曲霉属真菌

Gasdermin-D-dependent热解信号分子发挥重要作用由感染引起的肺损伤(28]。我们的肺部感染老鼠和WT老鼠 分生孢子和评估GSDMD, il - 1α,伊尔-β蛋白质免疫印迹。如图5GSDMD, il - 1α,伊尔-β在肺组织蛋白诱导后答:来自烟刺激,无论是WT老鼠还是TLR2基因敲除小鼠。除此之外,两个摘要意思的表达β和GSDMD老鼠老鼠的价格相比减少了WT ( )。

4所示。讨论

答:来自烟会导致各种疾病,过敏症侵入性感染。答:来自烟通常发生在重要的病人,这是伴随着免疫系统严重受损,长期嗜中性白血球减少症主要。尽管IA已经被认为是一种罕见的疾病在危重病人,最近的数据显示发病率高,应该重新考虑作为一个新兴的和毁灭性的ICU患者的传染性疾病。肺部感染是最常见的网站(94%)来自烟曲霉属真菌是最常见的孤立的物种(92%)29日]。IA由于答:来自烟与更大的严重程度、高死亡率和更频繁的器官支持。

目前,治疗疾病(如癌症和自身免疫性疾病),基于免疫逃逸机制,已成为生物医学领域越来越有吸引力。有动态和复杂的主机和之间的相互作用答:来自烟(30.]。免疫识别、逃避免疫识别和抵消主机构成的一系列机制后的反应答:来自烟入侵宿主。尽管炎症主要是防御病原体反应造成不利的后果,其下游效应,如新陈代谢的变化或大量免疫细胞,可能会忙的增长和组织传播病原体。Microbe-directed扭曲特定的免疫反应的信号可能会进一步减少病原体的抗菌效果和提高效益(31日]。在病原体感染,亚虽然防止infection-associated炎症和组织损伤也抑制病原体的保护性免疫反应,增强他们的持久性32]。亚群,专门针对答:来自烟描述了在人类33和老鼠9]。我们的研究发现,il - 1β、il - 6和IL-2R显著升高的临床生物样本答:来自烟病人(图1(一))。在老鼠答:来自烟肺部感染,数据显示,肺受损,增加了小鼠的细胞因子答:来自烟感染,(数字1 (b)- - - - - -1 (d))。然而,CD4的比率⁺CD25⁺Foxp3⁺亚群后被提高答:来自烟感染患者(图2(一个))。我们发现CD4的水平⁺CD25⁺Foxp3⁺亚群在肺脾和Foxp3表达增加答:来自烟感染(数据2 (b)和2 (c))。亚群已被证明抑制炎症。所以亚群的抗炎效果又扮演了什么角色在主机上答:f。感染免疫状态正常吗?亚群的增加的意义是什么,这是同步与肺损伤和炎性因子表达的增加,肺损伤后引起的吗答:来自烟感染?这是一个应对抗炎作用或其他可能的值?进一步了解亚群之间的关系和真菌坚持,我们使用CD25-neutralizing抗体抑制亚群(图2 (d)),发现肺部的真菌数量的负担减少小鼠接受CD25-neutralizing抗体(图2 (e))。研究表明,CD4细胞⁺CD25⁺Foxp3⁺亚不是B7-2中产生⁻或CD28⁻有缺陷的老鼠,这些老鼠能够有效地限制真菌生长(34]。在答:来自烟感染,真菌负担较高,炎性组织病理学在WT比CD4温和⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg-reduced老鼠(9]。病原微生物感染的免疫功能紊乱导致更糟糕的结果。部分损耗treg IL-17A升高,il - 1β,il - 6生产和降低il - 10的水平,从而降低了细菌负荷和衰减的肺损伤在次要的铜绿假单胞菌感染后脓毒症(35]。亚群的有害作用的先天免疫反应是强调改进的阻力白念珠菌感染(16]。我们的结果表明,肺可能部分获救后消耗的亚群(图2 (f))。这些结果可能暗示Treg细胞的影响是有害的病原体,如答:来自烟是持久的。

随着答:来自烟感染发展,通常引发抗菌宿主免疫反应。TLR2,作为一个重要的病原体模式识别受体,在感染起着至关重要的作用[10,24]。这是一个重要的受体能够识别的菌丝和孢子答:来自烟(17]。我们的研究发现,答:来自烟感染确实可以刺激TLR2表达增加(图3(一个))。我们观察到TLR2-deficient老鼠的易感性答:来自烟没有不同于控制,一个发现表明老鼠完全称职的先天级别的抗真菌耐药性,所记录的减少真菌生长在小鼠初级播散性念珠菌病(36]。有趣的是,3天之后答:来自烟感染,我们观察到的真菌负担和伤害小鼠肺相比下降在控件(数字3 (b)和3 (c))。这意味着答:来自烟可以通过TLR2-mediated信号可能逃避宿主防御。和TNF的表达α和il - 6在轻微受损老鼠(图3 (d))。它表明TLR437(clr) [], c型凝集素受体38- - - - - -40],galectin家族蛋白质参与答:来自烟全身的促炎细胞因子释放。不同的通常可能调节适应性免疫反应通过刺激或抑制Treg细胞功能。积累的证据表明,CD4细胞⁺Foxp3⁺亚群可以通过通常意义上病原体和修改他们的行为(41]。先前的研究已经表明,CD4细胞⁺Foxp3⁺亚能表达几个TLR mRNA的数组,包括TLR1、2, 4, 5, 6, 7, 8,但只有少数的刺激通常(如TLR2, TLR5 TLR8)影响扩散和/或抑制CD4的函数⁺Foxp3⁺亚[42,43]。il - 10诱发CD4的发展⁺亚群的聚集有关,TLR-dependent时尚在真菌感染44- - - - - -46]。研究表明,白念珠菌通过TLR2-derived诱发免疫抑制信号调解il - 10增产和Treg细胞的生存16]。和另一个证据表明登革热感染诱导功能CD4细胞的扩散⁺Foxp3⁺通过TLR2 / MyD88途径[亚群11]。我们的研究发现,TLR2-deficient亚群的老鼠明显降低脾(图4(一))和肺Foxp3的表达(数字4 (b)和4 (c))。另一方面,从幼稚细胞,CD4细胞⁺T细胞可以分化成各种效应细胞具有特殊功能的子集。亚群显示强大的可塑性让功能适应各种生理和病理环境在免疫反应(47]。TLR信号参与人口调控T细胞(16,48]。抑制TLR2通路后,从CD4细胞亚群的分化⁺T细胞被答:来自烟刺激减少(图4 (d))。它表明TLR2-mediated代Treg细胞信号是至关重要的。目前的数据提示答:来自烟感染诱导CD4细胞的扩散⁺CD25⁺Foxp3⁺亚通过TLR2通路的激活。

答:来自烟产生大量的孢子,能够激活多个inflammasomes [49]。它会导致宿主inflammasome激活,导致pyroptosis通路的激活50]。证据表明,真菌DNA、孢子和细胞wall-associated多糖是被inflammasome传感器(51,52),这常常会激活介导的胞质大分子信号平台释放促炎细胞因子il - 1、地震和乳沟的成孔蛋白Gasdermin-D (GSDMD)。Pyroptosis是一个高度因为il - 1的proform促炎的事件β处理inflammasome-dependent caspase-1激活和释放细胞死亡(53]。在以前的研究中,免疫活性的WT老鼠和老鼠缺乏inflammasome组件如NLRP3或缺席在黑色素瘤2 (AIM2)不屈服于感染答:来自烟(51]。我们的研究选择答:来自烟感染WT和老鼠,免疫能力。然后,我们发现GSDMD的表达,il - 1α,il - 1β增加了WT小鼠肺部感染后答:来自烟(图5)。的NLRP3 inflammasome单核细胞的刺激答:来自烟,菌丝上调pro-IL-1β表达和诱导il - 1β在人类单核细胞(分泌49]。研究表明,NLRP3的表达增加患者的肺组织过敏性支气管肺的曲霉病(ABPA) [54]。和inflammasome-mediated il - 1β分泌需要一些步骤,包括订婚TLR信号通过炎性刺激诱导细胞因子的proform inflammasome促进成熟的和激活细胞因子处理(41]。il - 1β信使rna是部分减少相比之下,WT巨噬细胞中梭状芽孢杆菌感染(55]。幽门螺旋杆菌激活inflammasome TLR2和NLRP3-dependent的方式,和幽门螺旋杆菌得益于inflammasome激活,确保持续感染(56]。在老鼠,pyrolysis-related蛋白质(GSDMD, il - 1α,il - 1β)调节显示,感染的免疫能力答:来自烟。但是他们感染后下降答:来自烟,而WT老鼠(图5)。尽管细胞内受体参与inflammasome激活和inflammasomes以响应的生理功能答:来自烟感染仍有待阐明,我们的研究结果提供了初步证据表明TRL2后的肺在GSDMD-dependent热解过程中发挥作用答:来自烟感染部分。

5。结论

易感性答:来自烟与CD4的数量吗⁺CD25⁺Foxp3⁺TLR2基因敲除动物的亚群。感染导致CD4细胞的增殖和分化⁺CD25⁺Foxp3⁺亚通过TLR2通路的激活。它是一个潜在的机制逃避宿主防御答:来自烟肺部的感染。这种效应可以调节GSDMD-dependent pyroptosis和可能涉及TRL2信号部分。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

魏燕、赵Yisi贡献同样这项工作。概念、假设和设计由玉兴,方许。数据采集和分析是由魏燕,赵Yisi,方许。手稿准备是由魏燕,方许。文献检索是由柯谢和魏燕。

确认

这项研究得到了医学研究项目的重庆市卫生和计划生育委员会(2020年gdrc001外汇)和重庆医科大学临床医学研究生联合培养基地重庆医科大学第一附属医院(lpjd202001)。

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