右美托咪定预处理对大鼠肾缺血-再灌注损伤伴核因子κ B信号双相改变的保护作用

摘要

急性肾损伤(AKI)是最常见、最棘手的围手术期并发症之一。右美托咪定(DEX)是一种有效的药物α2-adrenoceptor (α2-AR)具有抗炎和肾保护作用的激动剂。建立大鼠肾缺血再灌注损伤(IRI)模型。在再灌注后24小时，通过生物化学和组织学方法证实了iri诱导的损伤和DEX预处理的肾保护作用。核因子- κ B (NF-κB)，以及其下游的抗炎因子A20和促炎因子肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α),发现了。在给药前5min加入非选择性拮抗剂阿替帕唑，进一步分析DEX对NF-的影响κB和另一种抗炎药甲基强的松龙与DEX进行对比，进一步分析DEX对NF-的影响κB.不同浓度DEX (0 nM, 0.1 nM, 1 nM, 10 nM, 100 nM, 1μ10 M,μM)应用于体外预培养的人肾小管上皮细胞系(HK-2)细胞。缺氧复氧后，采用MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑)四唑和酶联免疫吸附法(ELISA)检测NF-水平κB下游抗炎细胞因子。结果表明，与甲基强的松龙不同，DEX预处理导致了NF-的时间依赖性双相变化(先激活后抑制)κ在大鼠肾IRI模型中给予25μg/kg i.p。伴随TNF-类似的双相变化αA20的早期和持续上调。在体外，DEX的细胞保护表现出浓度依赖的双相变化，在0 ~ 100 nM范围内具有保护作用，在浓度大于1时则相反μM. A20和NF-的变化κB信使RNA (mRNA)水平与DEX肾保护能力一致。也就是说，DEX预处理通过调节NF-的双相变化来保护大鼠肾IRIκB信号。

1.介绍

急性肾损伤(Acute kidney injury, AKI)是手术、失血性休克、心脏骤停和败血症后住院患者最常见和最棘手的并发症之一[1，2］．AKI不仅仅是与内皮损伤、细胞凋亡和氧化应激相关的单器官功能障碍;它还会引起炎症反应，包括中性粒细胞迁移和细胞因子释放。这可能导致肾外器官，如肺、心脏、肝脏和大脑的损害，并经常导致死亡率、住院时间和医疗相关费用的显著增加[3.- - - - - -6］．根据《肾脏疾病:改善全球结局》(KDIGO)定义，18.3%的住院患者和57%的危重患者发生AKI并发症，相关住院死亡率分别为11%和27% [7，8］．

肾缺血再灌注损伤(IRI)是AKI的一个主要病理过程，是核因子κ B (NF- κ B)引起的炎症反应κB)家庭起着关键作用。9- - - - - -15］．右美托咪定(DEX)，一种强效药物α2-adrenoceptor (α2-AR)激动剂，广泛应用于围手术期，最近发现对器官有保护和抗炎作用[16- - - - - -20.］．DEX的肾保护机制可能包括抑制NF-κB及其下游促炎因子[21，22］．有趣的是,α2-ARs是典型的鸟苷三磷酸(GTP)蛋白偶联受体(GPCR)。它们的激动剂主要与抑制亚基(G_我)．这导致了下游腺苷酸环化酶(AC)的抑制，接着是环磷酸腺苷(cAMP)的抑制，最后是NF-的激活κB信号(23- - - - - -25］．到目前为止，DEX和NF-之间的具体联系κB信号尚未阐明。以及许多关于可能的保护或破坏作用的研究α2-AR激动作用尚无定论[26，27］．似乎在NF-之间存在着多重的，有时是矛盾的关系κB,α2-AR激动，和器官保护。

以确定如何进行α2-AR激动参与了NF-的变化κ我们建立了经典的大鼠肾缺血再灌注模型，观察NF-的波动κIRI后不同时间点B信号转导。NF-甲基强的松龙的作用比较κB抑制剂和消炎药，有助于可能相关性的测定。第二，研究考察了不同剂量(亚临床、临床或更大剂量)DEX对NF-变化的可能关系的影响κB信号传导与细胞存活。

2.材料和方法

2．1．动物

实验方案按照中国医科大学《实验动物护理使用指南》执行。经中国医科大学动物实验伦理审查委员会(沈阳，辽宁)批准。7 ~ 8周龄健康雄性sd大鼠，体重220 ~ 270 g，无菌饲养。动物已适应实验室环境( ，实验前1周，光-暗循环12-12 h，自由取食、饮水)，操作前24 h禁食。

2．2.肾缺血-再灌注损伤模型

在1.5%异氟醚麻醉下，右肾蒂钳夹45 min，左肾切除诱发肾IRI。释放动脉夹后5分钟内肾脏颜色由深紫色变为红棕色，表明血流灌注恢复成功。切口缝合后皮下给予0.2%罗哌卡因。直肠温度维持在 用电热垫。用皮下电极监测心率。在左股动脉各放置24g套管针，监测有创动脉压。排除标准为平均血压(MAP)低于55 mmHg或心率低于每分钟200次(bpm)超过5分钟。每隔2小时给每只动物i.p.注射0.5 mL生理盐水，直至苏醒或标本采集。

2．3.试验协议

大鼠被随机分为六组(图)1)．组1 S(假手术组):双侧肾蒂清扫，不阻断肾血管。第2组，I (IRI)组:大鼠行左肾切除、右肾动脉钳夹45 min。第3组D+I (DEX预处理)组:25μg/kg DEX i.p.(根据以往研究[28])。4组，A+D+I(拮抗剂)组α2-AR拮抗剂阿替帕唑(250μG /kg)，于给药前5min腹腔注射μg/kg DEX, 30 min后建立肾IRI。5、D (DEX)组:给予大鼠25μg/kg DEX腹腔注射，30 min后与S组手术相同。第6组、M+I组(甲基强的松龙预处理):大鼠在肾IRI建立前30 min给予甲基强的松龙30 mg/kg腹腔注射。

2．4．肾功能评估

再灌注24小时后，每组5只动物(S、I、D+I、A+D+I、D、M+I)行全身肝素化(200 U/kg)并采血。此外，在4°C下，3000 rpm离心10分钟。对上清进行编号并保存在−70℃，用于生化分析仪评估肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)。

3.组织学研究

再灌注或假手术后24 h，每组处死5只动物。取每只大鼠肾脏，中性甲醛溶液固定24小时，然后浸泡在磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)溶液中。石蜡包埋组织，切成5段μ切片，苏木精伊红(HE)染色，光镜下观察。根据Paller等人所描述的修改标准评估肾脏损害[29］．×400放大镜下观察到5个非重复可见视野，每个视野内有10个肾小管评分。

3．1.核因子- kappa B p65信号通路的Western Blot分析

首先,NF -κ比较I组和D+I组在IRI后1、3、6、24 h B p65信号通路。这允许在NF-中变化最大的时间点κB p65信号是各组(S、I、D+I、A+D+I、D、M+I)比较的基础。在不同时间点处死大鼠。

肾均质，使用核蛋白和细胞质蛋白提取试剂盒(KGP-150;康晨,中国上海)。按照制造商的说明操作。样品经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离，电转移到硝基纤维素膜上。随后，用5%脱脂乳在室温下封闭膜2小时。随后用兔多克隆抗nf -培养过夜κB p65抗体(1:500,8242S, Cell Signaling Technology, USA)，兔抗tnf -α抗体(1:500,ab6671, Abcam, USA)，兔多克隆抗a20 /TNFAIP3抗体(1:500,5630S, Cell Signaling Technology, USA)，或兔多克隆抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)抗体(1:500,Santa Cruz, USA)。然后洗涤膜，用二抗，山羊抗兔酶标IgG (1: 4000, Cell Signaling Biotechnology, USA)孵育2小时。用增强化学发光(ECL)蛋白印迹检测试剂(Amersham, USA)观察印迹蛋白条带。带密度测量与蛋白表达相关，并归一化到GAPDH带密度。

３．２．核因子- kappa B p65和A20的免疫组化检测

再灌注或假手术后1小时，每只大鼠在深度麻醉下经心脏灌注冷生理盐水。分离右侧肾蒂，轻轻剥去肾包膜后取肾。然后肾脏被切成两部分。其中一部分在4%多聚甲醛中固定过夜，另一部分保存在−70℃，用于进一步的western blot分析。梯度脱水后，将组织浸泡在液体石蜡中并包埋，然后制备5μM厚石蜡切片。石蜡切片脱蜡，蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟。为了消除内源性过氧化物酶活性，3%的过氧化氢(H₂O₂)室温孵育5 ~ 10分钟。一抗NF-κ滴加B p65 (1: 500, Cell Signaling Technology, USA, 8242S)和A20 (1: 300, Abcam, ab13597)， 37℃孵育1 ~ 2 h。加入试剂1(聚合物辅助剂)，室温或37℃孵育20分钟。加入多过氧化物酶抗兔IgG，室温或37℃孵育20 ~ 30 min。

上述步骤结束后，用PBS冲洗3次，持续2分钟。然后加入显影剂(二氨基苄嗪，DAB)。这些切片用自来水完全冲洗、反染色、脱水和密封，然后拍照。A20蛋白主要表达于细胞质中，呈棕黄色颗粒状;NF -κB p65蛋白在细胞质和/或细胞核中表达，呈棕黄色颗粒状。

3．3．在体外实验中

3.3.1。细胞培养与缺氧复氧

人肾近端小管上皮细胞(HK-2，中国医学科学院)在含有10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100μg / mL链霉素(Sigma-Aldrich)。细胞在5% CO的湿化气氛中培养₂在37℃95%空气中培养24小时，70-80%汇合传代。在实验中，HK-2细胞被放置在含有10%胎牛血清的60mm培养皿中24h。然后将他们转入无血清培养基RPMI-1640，培养24小时。在治疗结束时，收集细胞进行进一步分析。

粘附过夜后，用含DEX的培养基处理细胞。为了便于检测时间依赖效应，将细胞处理30分钟。孵育结束时，用0.1 mL不含dex的RPMI-1640取代含药培养基，并在孵育4 h前每孔加入0.5 mg/mL MTT。

3．4．细胞生存能力

MTT法测定细胞活力。HK-2细胞在96孔板上，密度为 0.5 mg/mL MTT (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)孵育3 h。然后在室温下1800转离心10分钟，以去除上清。随后，用600 dL二甲基亚砜(DMSO)从球团细胞中提取福马赞15分钟。用酶联检测器测定光密度(OD)，检测波长为490 nm。每次处理均设置2-8口重复井，空白对照。根据OD值计算细胞活力: ．

3．5.实时反转录聚合酶链反应检测A20和核因子- κ B信使RNA

使用TRIzol试剂(Invitrogen Life technology，美国)和PrimeScript™RT试剂试剂盒(Takara，日本)对培养细胞进行逆转录聚合酶链反应(RT- pcr)分析，然后制备cDNA。使用的引物如下:human NF-κB p65，上游:5 -CTTCCTGCCCTACAGAGGTC-3 ，下游:5 -GAGCAGTCTGTTGCACTGGT-3 ；human A20 (TNFAIP3)，上游:5 -CACACAAGGACTTGGATC-3 ，下游:5 -CTGTAGTCCTTTTGAAGCAAGTACTG-3 ；和人类GAPDH，上游:5 -CCAGGCGCCCAATACGACCAAA-3 ，下游:5 -TTCTTTTGCGTCGCCAGCCGAG-3 ．在96孔光学反应板上进行实时PCR;使用SYBR Premix Ex TaqT MII (Takara，日本)。real-time PCR反应在Agilent Mx3000P QPCR系统(Agilent, CA)上进行。

3.6。缺氧持续时间的选择

HK-2细胞置于含5% CO的培养箱中₂和1%啊₂持续0、1、2、3或6小时。根据细胞活性变化(MTT法)选择50%以上死亡细胞最短的缺氧时间作为后续试验条件。

3.7。右美托咪定在人肾近端小管上皮细胞培养中的浓度

DEX浓度分别为0 nM、0.1 nM、1 nM、10 nM、100 nM、1μ米,或10μM)，随后进行缺氧再氧。细胞活性A20和NF-κ观察bp65信使RNA (mRNA)水平。

3.8。统计分析

所有统计分析在IBM SPSS Statistics for Windows, Version 23.0 (IBM公司，Armonk, NY, USA)中执行。组织学评分以中位数(四分位范围)表示，采用Kruskal-Wallis检验进行分析。定量数据以 (SDs)。通过使用单因素重复测量方差分析(ANOVA)与Bonferroni事后检验分析组间的多重比较。差异被认为在统计学上显著 ．

4.结果

4．1.右美托咪定预处理具有肾保护作用

再灌注后24 h, IRI组(I组)出现明显的肾脏损伤，BUN水平升高( 如表所示1， DEX预处理显著缓解BUN的恶化( 而阿替帕美唑可以完全逆转这一情况( vs. D+I和S组; 甲基强的松龙预处理产生的效果与右美托咪定相似，但保护性较低( 我与集团; 与S组相比)。在Cr水平方面也观察到了类似的结果。D组数值正常1)．

肾小管损伤的组织病理学评估由一名对实验方案不知情的研究人员进行。光镜下观察肾皮质与肾髓质交界处。IRI (I组)引起明显的病理损伤( 与S组相比)，包括肾小管明显扩张，肾小管上皮细胞肿胀或扁平，以及各种类型的细胞变性、脱落和坏死(图)2)．DEX (D+I组)显著降低肾IRI。镜下，整个肾小管结构相对完整。小管腔扩张，小管上皮细胞呈颗粒状或水样变性。非选择性的α2-AR拮抗剂阿替帕美唑(A+D+I组)显著抑制DEX的肾保护作用，表现为肾小管上皮细胞的广泛变性和明显的渗出物和管型。DEX (D组)未引起肾组织病理学改变。管腔只有轻微的扩张。甲基强的松龙(M+I组)也有良好的肾保护作用。结果与DEX组比较，差异无统计学意义。

4．2．右美托咪定预处理导致NF-的先活化后抑制的时间依赖性双相变化κB

来确定NF-中的变化κ分别于再灌注后1、3、6、24 h采集I组和D+I组的肾组织( 首先，在每个时间点，NF-κB核转移在I组和D+I组显著高于S组( DEX导致NF-的时间依赖性双相变化κB在第一次激活(3小时内，特别是IRI后1小时)，然后抑制(1小时， ；和3 h, 再灌注后6 h和24 h NF-κD+I组B与I组相似( 我与集团;数字3.)．

4．3．右美托咪定预处理持续增加A20表达，并暂时增加后显著抑制TNF-α表达式

NF-的分析κB下游抗炎和促炎蛋白(A20和TNF-α)，提示缺血再灌注后A20适度升高，在再灌注后3 h达到峰值。DEX预处理将峰值提前至再灌注后1小时( vs. S组)，并在其后保持较高水平( 各时间点vs. S组;数字3.)．

重要的促炎细胞因子TNF-的结果α更有趣。首先,TNF -αI组和D+I组显著高于S组( 而D+I组则表现出暂时性上调的双相变化( vs. S组)，然后显著下调( vs. S组)TNF-水平α这与NF-κB.这表明恢复到与上述DEX肾保护作用一致的抗炎状态(在6小时， ；在24小时， 与我)。

4．4.再灌注1小时后核因子- kappa B信号的比较

因为在NF-中变化最明显κ在IRI后1 h内观察B信号，选取该时间点进行S、I、D+I、A+D+I、D、M+I六组比较。DEX预处理可引起NF-的显著激活κB和A20的上调( 与S组;和 vs.第一组)。最重要的是，在没有IRI的情况下，DEX治疗也增加了NF-的核转位κB ( 与S组比较)，并轻度增加A20的表达( S组)。TNF-的变化α与A20的观察结果相似(图4)．

免疫组化结果显示NF-有一致的变化κB和A20在肾小管细胞中。NF-的核易位κI组大鼠肾小管胞浆中可见B和少量A20表达。DEX预处理(D+I组)显著增加NF-κB核易位与A20上调。阿替帕唑(A+D+I组)可明显减轻上述作用。没有IRI的DEX也诱导了一定数量的NF-κB激活，A20表达轻微增加。甲强的松龙作为抗炎药，对NF-有明显的抑制作用κB及其下游的A20。这说明其内在机制与DEX不同(图)5和6)．

4．5.右美托咪定预处理在细胞保护方面表现出浓度依赖的双相变化，并与核因子- kappa B和A20变异呈正相关

如前所述，在体内NF-的变化κ在有无DEX预处理的情况下，沿时间轴观察B信号通路。其次，在体外考察不同DEX浓度对NF-的影响κ观察到B信号通路。

首先，确定MTT法实验最适宜的缺氧时间。细胞活力明显下降至 (>50%)。 与无缺氧的对照组相比 )．延长缺氧时间至6 h对细胞存活率无显著影响( ， Vs. 3 h缺氧)。因此，确定3 h为后续实验的缺氧时间。选择中位浓度(100 nM)在缺氧暴露前检测DEX预处理不同时间(30 min、1 h、2 h、3 h)。MTT法确定DEX预培养时间为1 h为最佳、最短。细胞存活率为85% ( vs.非孵化组)。所有体外实验均选择复氧1 h。

DEX预处理不同浓度(0 nM、0.1 nM、1 nM、10 nM、100 nM、1μ米,或10μM) HK-2细胞缺氧-复氧1 h，比较细胞活力。在0 ~ 100 nM范围内，DEX浓度与细胞存活率呈正相关。它从 (0海里) (100海里)。当DEX浓度增加到1μM，细胞活力未进一步提高( vs. 100 nM组)。DEX预孵育10μM甚至导致细胞活力下降( vs. 100 nM组)。细胞活力的变化与NF-的变化呈正相关κB和A20(图7)．

5.讨论

这项研究产生了两个新的发现。首先，与甲基强的松龙应用不同，DEX预处理表现出NF-的双相变化κNF - B(激活κB在IRI作用3h内抑制NF-κ在大鼠肾IRI模型中给予25μg/kg DEX i.p。伴随A20早期和持续上调，TNF-早期上调α后期有明显的抑制。其次，DEX在体外也表现出双相细胞保护作用，在0 ~ 100 nM(临床剂量)范围内呈浓度正相关，在浓度大于1时呈负相关μM. NF-的变化κB、A20 mRNA水平与DEX肾保护能力一致。因此，DEX预处理通过对NF-的精细调节，对大鼠肾IRI具有保护作用κB信号。

DEX预处理(25μg/kg i.p.)导致NF-的双相变化κB p65信号转导不同于以往的研究。以下可能是原因。首先，本研究观察时间点与以往研究存在差异[22，30.］．很少有研究观察到NF-的变化κB信号在早期再灌注(特别是3小时内)。其次，实验动物、器官、DEX给药剂量和给药方式(i.p.或i.v，前或后适应)的不同，导致了用药前后的差异α2-AR激动,α2-AR表达水平，并最终改变NF-κB (22，30.- - - - - -32］．

是否NF -κB激活是器官损伤或保护的指示，不应仅仅被认为是好或坏。事实上,NF -κ信号系统提供保护免受外来的挑战。不幸的是，NF-提供的保护κb诱导的基因表达并非没有代价:诱导局部和全身炎症。原因是NF-的下游细胞因子κB不仅包括抗炎分子(如A20、CYLD)，也包括促炎分子(如趋化因子、细胞因子、粘附分子)[33- - - - - -35］．

NF-的系统性抑制κ各种方法均发现B对IRI有改善作用。然而，NF-的活化有两个方面κB:损坏和保护。在缺血预处理或药物预处理中，NF-κB还负责保护组织免受IRI [36- - - - - -42］．具体来说，缺血的严重程度和持续时间决定IRI的结果[15］．轻度或短暂缺血引起NF-的适度激活κ并促进细胞保护复合物的形成。严重或长期缺血导致NF-的强烈激活κB;大量炎症因子的释放;toll样受体(TLR)的识别、单核细胞或巨噬细胞浸润;最终产生IRI。

另外，一个有趣的结果是TNF-αDEX预处理3 h后开始升高，6 h后显著降低。在本研究中，早期NF-暂时性增加κB和肿瘤坏死因子-α起到保护作用这表明它们可能参与了炎症的平衡。其机制与缺血预适应相似[38，43］．因此，有可能维持适度的NF-κB活性在炎症早期或NF-的抑制作用κ在炎症失控的情况下激活B既有效又不矛盾。

在本研究的第一部分，比较甲基强的松龙和DEX的作用。甲基强的松龙和地塞米松在肾IRI中均具有肾保护作用，尽管它们在NF-中产生相反的变化κB活化和TNF-αA20蛋白表达。这再次证明了NF-的生理作用的二重性κB。

研究结果表明，DEX可能有一种更复杂但尚未被充分理解的潜在机制。这些发现被解释为GTP蛋白偶联受体和NF-之间的关系κB. G蛋白偶联受体(GPCRs)广泛分布于人体内。它们在调节转录和多种细胞功能方面发挥着积极的作用。GPCRs使用几种可能的非经典途径来激活NF-κB (23，24］．GPCR或NF-的异常调控κB信号轴导致许多疾病的发生，如癌症、炎症和自身免疫。的α2-ARs是经典的GPCR蛋白。G对AC的抑制作用_我是主要的信号转导机制吗α2-AR亚型(24］．一方面，它通过G直接抑制AC-cAMP-PKA通路_α我并抑制cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的磷酸化[35，44］．另一方面，G_β和G_γ亚基从G_α我激活磷脂酰肌醇3-激酶- (PI3K-)蛋白激酶B (AKT)通路、磷脂酶C、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK) [23，44- - - - - -47］．这两种途径最终都会导致NF-的激活κB (23］．因此，活化NF-κB，即使是暂时的，也应是DEX的合理激发的结果α2-ARs。

更有趣的是，研究结果显示α2-AR激动作用尚无定论[26，27］．一项研究发现，心肌梗死后应用地塞米松会增加心肌损伤[48］．Gu等人认为DEX后适应对器官的保护作用小于前适应[32］．Bunte等发现DEX后作用在0.3 ~ 3 nM范围内呈浓度依赖性。浓度大于3 nM不能进一步增强这种心脏保护作用[49］．这似乎是多重的，有时是矛盾的关系α2-AR激动和器官保护。我们推测，不同剂量和不同时间的地塞米松治疗可能是造成这种情况的原因。为了更好地理解，还需要进一步的研究。

之前的一些研究已经报道了AC或cAMP的双相反应α炎症时2-AR激动作用[24，26，50- - - - - -52］．研究结果表明α2-AR具有抑制和刺激成分。首先,不同的α2-AR亚型激动剂与G_我在同样程度上抑制交流。然而，如果给予高浓度激动剂或高受体表达，α2-ARs在物理和功能上都与G结合_年代并以明确的顺序激活ACα2 >α2 b >α2 c。因此，随着激动剂浓度的逐渐增加，AC先被抑制后被刺激，反之亦然。因此，有可能暂时激活NF-κ本研究中的B可能与DEX对AC的影响有关，原因是AC的变化α2-AR表达伴IRI引起的炎症或血浆浓度随时间的变化。文献综述表明，这是DEX和NF-特异性作用的第一个证据κB。

第二，另一个新的体外发现是DEX浓度依赖的双相效应对细胞活力。在0 ~ 100nm范围内，细胞活力，NF-κbmrna、A20 mRNA与DEX浓度呈正相关。当它超过1时μ米,NF -κbmrna、A20 mRNA水平及细胞活力均开始下降。巧合的是，Lai等人[42发现随着DEX浓度从10 nM增加到100 nMμM，诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2 (COX-2)、TNF-呈先升后降的双相变化α, il - 1β, il - 6。Nishina等[53]发现，当超过临床相关剂量时，DEX引起中性粒细胞凋亡。

在本研究和Lai等的研究中，DEX的最佳浓度均在10 ~ 100 nM范围内[42，这与临床剂量范围一致。Fraser等人还发现，在低浓度(1-100 nM)时，肾上腺素以受体密度依赖的方式减弱了forskolin刺激的cAMP积累，并在浓度高于100 nM时增加了cAMP水平[50］．因此，所有的结果都表明DEX与G同时耦合是可能的_年代和G_我在体内和体外肾IRI模型中进行预处理。这导致了NF-的时间和浓度依赖的双相变化κB信号。

近年来，A20被发现在肾IRI中具有保护作用。这是通过控制内源性损伤和维持促炎反应和抗炎反应之间的平衡来实现的[54- - - - - -56］．预测A20将成为防治AKI和慢性肾脏疾病的靶点之一。在本研究的体内期，发现DEX预处理在体外和灌注过程中持续上调A20的表达。不同浓度DEX作用下A20 mRNA水平与细胞存活率变化一致。这证实了A20在DEX保护中的重要性。观察DEX对非iri大鼠的影响。此外，A20的轻度上调被发现是无害的。A20是否是DEX保护作用的关键，有待进一步研究。

综上所述，本研究结果表明DEX预处理确实具有肾保护作用;然而，可能需要仔细考虑时机和剂量范围。考虑到DEX能增加NF-κB，它可能导致器官损伤，甚至增加癌症复发和转移的可能性[57，58］．需要进一步的研究来确定α2-AR子类型负责NF-中的变化κB信号;DEX后适应的再保护作用;以及G蛋白NF-的作用κB，和A20。

数据可用性

用于支持本研究发现的数据可由通讯作者要求提供。

的利益冲突

这份手稿的作者声明不存在利益冲突。

致谢

辽宁省教育厅科技攻关项目(no . LK201651)。

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