CD8基因敲除小鼠与WR201疫苗接种不受挑战,活减毒突变布鲁氏菌melitensis

文摘

CD8 + T细胞已报告在防御发挥重要作用b .流产感染小鼠模型。在本报告中,我们使用CD8基因敲除小鼠进一步阐明这些细胞的保护作用b . melitensis感染。小鼠免疫口头管理b . melitensisWR201,嘌呤营养缺陷型的减毒疫苗株,经与挑战b . melitensis16米。在一些实验中,持久性的WR201 CD8基因敲除小鼠的脾脏是稍长的比正常小鼠的脾脏。然而,anti-LPS血清抗体的发展,antigen-induced生产γ干扰素(IFN -γ)免疫脾淋巴细胞,防止鼻内的挑战,经济复苏没有免疫的动物从鼻内挑战正常和基因敲除动物之间是相似的。此外,主布鲁氏菌感染并没有加剧了穿孔素基因敲除和Fas-deficient老鼠和这些动物的反布鲁氏菌与正常小鼠免疫反应是没有区别的。这些结果表明,CD8 + T细胞不能起着关键作用,细胞毒性细胞或干扰素-γ生产商,但他们参与一个特定的免疫反应免疫的小鼠模型和挑战b . melitensis感染。

1。介绍

布鲁氏菌病引起家畜生产力的损失和威胁全球人类健康1]。威胁是在发展中国家最为明显,但即使是欧洲和北美保持在重大风险(2,3]。主要布鲁氏菌物种在动物和人类感染布鲁氏菌melitensis(4]。疫苗b . melitensis用于人类将有利于全球数以百万计的农业工人(5),可以防范生物恐怖主义的一个重要目标(6]。

到目前为止,最成功的布鲁氏菌病疫苗制剂(用于畜牧物种)的改性活衍生品的毒性布鲁氏菌(7,8]。然而,有些疫苗是人类致病(9]。此外,修改活牲畜疫苗可能引发流产,如果在怀孕期间服用或其他动物接触怀孕动物(10,11]。尽管可能不那么有效,亚基疫苗可能减毒活疫苗安全优势的候选人。免疫机制的描述负责诱发的保护可能关注的亚单位疫苗发展提出潜在的免疫相关和佐剂根据产生期望的反应。

免疫接种b . melitensisWR201减毒嘌呤营养缺陷型,能保护小鼠免受鼻内和致命的挑战b . melitensis16米(12]。保护与生产anti-lipopolysaccharide (LPS)抗体和干扰素的生产γ由antigen-stimulated免疫脾细胞。CD8 + T细胞保护的贡献没有检查这个模型。

抗体的O-polysaccharide布鲁氏菌有限合伙人已牢固确立作为一个反的重要中介布鲁氏菌在二级免疫小鼠模型的影响(13,14]。然而,细胞免疫也起着关键的作用[15,16]。干扰素的生产γ对保护至关重要,间隙和生存的致命吗布鲁氏菌挑战在小鼠模型17]。干扰素-γ生产在活的有机体内主要由CD4 + T细胞和CD8 + T细胞在较小程度上(16,18,19]。CD4 + T细胞和CD8 +具体回应b .流产在老鼠身上,CD8 + T细胞可以作为特定的细胞毒性细胞布鲁氏菌病所致b .流产(16,20.,21),而一项研究表明,免疫调制可能导致一个有效的CD8 + t细胞的作用在二级免疫(22]。另一方面,其他的研究似乎表明,CD8 + T细胞的作用是相对较小的免疫反应b .流产(17,23]。两种毒性机制之一b .流产(24),b . melitensis(25可能逃税的CD8 + T细胞适应性免疫,和b . melitensis抗原表位的CD8 + T细胞干扰素-γ生产和细胞毒性已确定(26]。相比之下,CD8 + T细胞在初选的模型似乎是可有可无的b . melitensis感染(27]。这里的研究报告进一步阐发CD8 + T细胞在布鲁氏菌病的作用通过评估需求造成二次免疫细胞类型的改性活生物体免疫的小鼠模型b . melitensis。

我们发现CD8 + T细胞免疫小鼠专门生产大量的干扰素-γ在体外。然而,我们还发现,这些细胞不是必不可少的间隙减毒或毒性b . melitensis也不是为WR201-induced防止鼻内的挑战。此外,细胞毒性的关键CD8 + T细胞介质(穿孔素和Fas)似乎没有作用消除b . melitensis在这些研究中。这些数据表明更有限的作用二次免疫的CD8 + T细胞b . melitensis比已经从曾建议使用b .流产。

2。材料和方法

2.1。细菌和细菌的产品

b . melitensis16 m和WR201从我们的文化集合准备如前所述12]。WR201从股票冻结在一夜之间50%甘油孵化布鲁氏菌汤在一个瓶瓶在37°C。一毫升整除的这种文化被镀布鲁氏菌琼脂和孵化37°C的额外三天。细菌“草坪”然后从琼脂表面刮resuspended在0.9%氯化钠溶液(生理盐水),颗粒状,与生理盐水洗两次,基于光学密度的调整集落形成单位(CFU) /毫升生理盐水。在我们的经验中这是最安全、最方便的方法来获得在这些高浓度brucellae。另一方面,b . melitensis16米从股票冻结在一夜之间50%甘油孵化布鲁氏菌汤在一个瓶瓶在37°C,颗粒状,用生理盐水洗净,并稀释CFU / ml浓度直接从汤容易获得。CFU验证了连续稀释浓度和电镀布鲁氏菌琼脂。粗糙的布鲁氏菌溶菌产物(RFBL)和布鲁氏菌有限合伙人准备如前所述[12]。

2.2。小鼠免疫和挑战

六个C57BL / 6, B6.129S2-cd8a^tm1Mak(CD8淘汰赛)C57BL / 6-Pfp^tm1Sdz(穿孔素基因敲除),B6.MRL-Fas^lpr(Fas受体缺陷突变体)小鼠获得杰克逊实验室(美国我巴尔港)。一对的实验中,男性使用,评估免疫动力学和挑战进行正常C57BL / 6小鼠相比CD8淘汰赛。一双后续实验中,使用雌性,而间隙的动力学WR201 CD8和穿孔素基因敲除,Fas突变,正常C57BL / 6小鼠。动物被安置在动物生物安全三级设施。免疫和挑战过程进行如前所述[28]。简单地说,老鼠地适应一周,然后用200强饲法μL 2.5%碳酸氢钠其次是10¹¹200年CFU WR201也μl . Sham-immunized老鼠收到同等体积(200μL)碳酸氢钠和盐水。7或8周免疫接种后,小鼠安乐死来获取组织在体外化验或挑战。挑战,小鼠麻醉0.3毫克甲苯噻嗪氯胺酮和1毫克。在30个CFU 16米μL然后一滴一滴地注射到外部鼻孔微量吸液管。

2.3。测定细菌感染和免疫反应

从小鼠安乐死血液通过心脏穿刺获得有限公司₂麻醉和允许凝块。血清是由离心分离和消毒通过0.2微米过滤器过滤。Anti-LPS抗体效价是由ELISA如前所述12]。机关处理和CFU-per-organ由串行稀释和电镀如前所述29日]。

2.4。细胞因子的生产

在一些实验中,干扰素的生产γ由antigen-stimulated脾细胞免疫或sham-immunized老鼠决心如前所述12),除了以下几点:总从7组小鼠脾细胞池孵化/在24好组织培养板2毫升rpmi - 1640组织培养基补充10%胎牛血清,2毫米谷酰胺,50μM 2-mercaptoethanol, 10μg / mL庆大霉素有或没有2μg / mL伴刀豆球蛋白A (conA)或2μ克/毫升RFBL。整个单核细胞群一起孵化后24小时(以模拟细胞因子发生的环境在活的有机体内),不依从收集细胞,颗粒状在临床的1200 rpm离心机(Sorvall) 7分钟,并使用mac分离分离系统(Miltenyi生物技术)或resuspended新鲜培养基和拨出冰(未分离的细胞)。分离CD8和CD4 + T细胞和未分离的细胞被取代原浓度的单核细胞附着脾细胞和孵化是持续了额外的48小时,以允许细胞因子的生产从单个T细胞亚型。相同的细胞被孵化conA或RFBL再次孵化与这些兴奋剂这额外的48小时期间,如果细胞再次孵化与媒介。文化上层的液体被收集和消毒通过0.2微米过滤器过滤。干扰素-γ浓度是由ELISA如前所述12]。

2.5。流式细胞术

CD4和CD8 + T细胞制剂的纯度进行直接的双色免疫荧光染色。细胞被冻结在1%二甲亚砜在细胞培养基和存储在−80°C直到他们被染色。细胞被加热到4°C,通过离心浓缩,然后resuspended methanol-free甲醛4%。细胞培养在甲醛一小时以确保不育,然后集中,用0.1%牛血清白蛋白在磷酸缓冲盐(PBS / BSA)。细胞被preincubated 15分钟在4°C纯化鼠anti-mouse CD16 / CD32(鼠标FC块)(Pharmingen),以减少非特异性结合。然后细胞染色30分钟在4°C CD4 FITC和CD8 PE抗体和匹配同形像免疫球蛋白(Pharmingen)。染色后的清洗与PBS / BSA为了消除游离抗体。收购前细胞resuspended PBS / BSA在流式细胞分析仪。10000事件是获得FACSort (Immunocytometry系统,正欲圣何塞、钙、美国)和分析使用CellQuest (Becton Dickinson)软件。数据得到的阳性细胞百分比设定一个象限为非特异性染色标记。

2.6。统计方法

在免疫和挑战的研究中,来自两个独立但相同的实验的数据。器官感染强度在口服免疫后2周,当大多数器官包含brucellae,是表达的意思SD日志₁₀CFU。统计学意义的差异意味着由学生决定以及。当原始CFU /器官是零,日志转换值的赋值为零,但是这个值仅用于图形表示,不进行统计比较。在所有时间点后免疫清除感染了一些动物来收获的器官,每个器官感染的频率确定和组织之间的差异的重要性是评估使用确切概率法。此外,CFU /脾在那个时间点是描述性的分析。干扰素-γ浓度表示的意思是一式三份或重复样品和描述性的分析。

3所示。结果

3.1。WR201结关

在这两个重复的实验来确定间隙进行免疫应变和随后的感染,防止挑战WR201持续8周2 5 CD8基因敲除小鼠的脾脏,但清除所有5正常(C57BL6 / J控制)动物在这个时间点。感染强度小于100 CFU感染脾脏。使用这两个实验的数据相结合,这种差异显著(,确切概率法)。没有其他器官在这个时间点两组被感染。在另一组实验中,我们免疫组10女穿孔素基因敲除,Fas突变,CD8淘汰赛,正常小鼠。在第一个两个实验,每组的所有10个老鼠已经完全清除WR201 8周。在重复实验中,我们检查了感染水平七周,发现WR201持续低水平的少数所有组的脾脏。所有老鼠仍然感染感染水平在这个时间点还不到10 CFU /器官。之间没有统计上的显著差异方面的组织间隙或意味着日志CFU /脾。这些研究表明,雄性老鼠不同,雌性老鼠之间的清晰WR201 7和8周后免疫和穿孔素和Fas间隙没有作用。

3.2。免疫和CD8基因敲除小鼠的挑战

我们执行两个独立但相同的实验中,男性CD8淘汰赛和正常C57BL / 6小鼠接种口服WR201或sham-immunized。八周后,所有老鼠毒性16米,鼻内发起了挑战。我们收获的脾脏,肺,肝脏从老鼠1,2,4,8周后挑战评估感染的强度和频率。在一天后的挑战,所有的老鼠布鲁氏菌在肺部,但不是在肝脏或脾脏(图1)。感染的进程CD8敲除小鼠和正常(图几乎没有区别1)。免疫的小鼠脾脏和肝脏感染的改良,而免疫清除毒性没有影响布鲁氏菌从肺。在任何情况下文化结果C57BL / 6小鼠明显不同的结果从CD8基因敲除小鼠(免疫或天真)(表1)。

使用单独的实验数据相结合,与WR201保护免疫C57BL / 6和CD8基因敲除小鼠()感染在肝脏和脾脏2和4周后的挑战,但CD8基因敲除小鼠没有保护脾脏在2周。2的数据实验相结合,没有显著差异在任何器官保护老鼠之间的任何时间点相同的免疫状况,也就是说,天真的C57BL / 6和天真的CD8基因敲除小鼠免疫C57BL / 6和CD8基因敲除小鼠免疫。

在八周后的挑战,使用数据从两个实验相结合,脾脏C57BL / 6和CD8基因敲除小鼠有显著(表保护1)。小鼠没有明显区别相同的免疫状况。而免疫导致显著的C57BL / 6小鼠肝脏的保护(),但不是CD8基因敲除小鼠,这一发现的重要性是不确定的,因为大多数两株未接受免疫接种的动物也从这个器官清除感染8周。

应变差异的进一步评估,我们分析了CFU /脾在八周后挑战个人的老鼠。免疫和没有免疫组动物个体之间的最高脾CFU发现CD8基因敲除小鼠(没有显示)。尽管这似乎暗示减少反模式布鲁氏菌活动在基因敲除小鼠,Mann-Whitney的分析试验表明,这一趋势不显著。

3.3。在小鼠免疫细胞和体液免疫反应

确定免疫T细胞亚群的应对能力布鲁氏菌抗原,我们收集了从女性C57BL / 6小鼠脾细胞免疫与WR201早8周。细胞与抗原或有丝分裂原孵化中描述的方法。在两个实验中,未分离的脾细胞和CD4和CD8 + T细胞免疫小鼠产生干扰素,γ比未接受免疫接种的老鼠的细胞(数据没有显示)。细胞分离是非常有效的。通过流仪分析,T细胞亚群是至少82%的纯和污染的不到1%的其他T细胞子集。独自贴壁细胞,所有的细胞都没有孵化RFBL未能产生可衡量的干扰素-γ(没有显示)。所有的天真和免疫细胞反应类似于conA刺激(没有显示)。

我们测量反布鲁氏菌有限合伙人免疫球蛋白和IgG2a(如图所示,分别地。,in parentheses as mean calculated titer ± SEM) in CD8 knockout (,,)、穿孔素基因敲除(,,)、Fas突变(,,)和完整免疫C57BL / 6 (,,)小鼠免疫与WR201 7或8周以前。这些研究没有任何明显的差异中抗体水平组。

4所示。讨论

因为我们发现持久性的减毒brucellae一些男性CD8基因敲除小鼠的脾脏的时间点人随后挑战,它必须承认,明显的保护部分可能是由于持续的巨噬细胞激活。这个异常可能反映了不同的传播模式CD8基因敲除小鼠的脾脏与控制动物。后续实验应该需要更长的滞后期挑战之前为了澄清这个问题。尽管如此,在挑战实验中,天真的CD8基因敲除小鼠表现出非常相似的毒性brucellae传播动力学和间隙比正常C57BL / 6小鼠。重要的是要注意,第一天主要数据表明接种的忠诚,没有相关性的评估保护。

CD8 + T细胞已被确定为一个重要的中介或组件布鲁氏菌病的免疫反应所致b .流产在先前的研究中(15,16,20.- - - - - -22,24,25,30.,31日]。由于物种基因密切相关,似乎这细胞类型将响应中发挥类似的作用b . melitensis。如果是这样,CD8 + T细胞疫苗似乎是一个有用的目标发展。CD8 + T细胞可能优先表达costimulatory分子和肽刺激下,CD8 + T细胞在非专业的吞噬细胞(即特定的抗原表位。,细胞分化为巨噬细胞)或通过提供抗原病毒载体(32]。优惠的刺激CD8 + T细胞可能是有利的,因为CD4 + T细胞的刺激导致混合辅助T 1和辅助T 2反应,也就是说,同时生产干扰素-γ和il - 1018,30.]。前者对反反应是重要布鲁氏菌免疫力,而后者可能发挥counterregulatory或抑制作用。

在初步研究[33),我们无法检测免疫CD8 + T细胞的细胞毒性J774巨噬细胞感染粗糙b . melitensis应变WRR51。本研究旨在确定是否CD8 + T细胞起着关键作用在活的有机体内通过检查WR201-induced抵抗b . melitensis。我们的结果表明,这些细胞不保护我们的模型的关键。除了明显的差异(b . melitensis与b .流产),有很多其他的方法之间的差异的研究,显示出影响很小,和他人使用的,他们观察到一个强大的影响(15,16,30.]。首先,可能会有一个根本区别的免疫反应引起的免疫与粗糙的应变,RB51,光滑像WR201应变。其次,我们使用在C57BL / 6小鼠的背景,虽然一些其他研究用动物BALB / c背景。在一些系统中,BALB / c小鼠显示相对持久的感染,这可能表明固有免疫应答的差异(18]。从我们的团队在有限的研究中,C57BL / 6小鼠往往比BALB / c对鼻内的挑战,尽管没有显著差异(29日]。此外,这可能是一个研究MHC类我敲除小鼠作为代理用于CD8-deficiency可能错误地认为有缺陷的布鲁氏菌CD8 + T细胞免疫。虽然这些老鼠CD8 + T细胞缺陷,他们可能有其他的缺陷(例如,贫穷的CD1-binding抗原)这也许可以解释他们的能力受损控制感染(34]。第三,我们的免疫和挑战不同的路线;我们免疫口头和挑战鼻内,而其他组织免疫和注射的挑战。15,30.]。可能挑战nonmucosal路线,与先前的研究,高估了CD8 +细胞的影响。这些变量的相对重要性可以评估额外的研究。我们的结果不排除CD8 + T细胞的作用自然获得了布鲁氏菌病或其他实验系统但表明他们并不WR201-mediated预防鼻内的关键b . melitensis挑战。

然而,有一些建议在这些研究中,CD8 + T细胞可能导致反布鲁氏菌在我们的模型的影响。在研究雄性老鼠,感染WR201略,但值得注意的是,更多的长期正常动物相比,CD8淘汰赛。同样,有趋势更高强度的感染和更高频率的脾脏免疫和感染没有免疫16 m-challenged CD8相应基因敲除小鼠与正常小鼠。这些差异是很小的,然而,表明CD8 + T细胞,而不是一个主要的贡献作用。淘汰赛之间的几乎相同的其他器官的感染和正常小鼠,然而,支持这样的观点,这种贡献是有限的重要性。研究使用穿孔素和Fas基因敲除小鼠也不支持CD8 + T细胞的细胞毒性作用,免疫的一个重要的决定因素布鲁氏菌在协议与研究b .流产模型(17,35]。值得注意的是,我们没有看到差异基因敲除使用雌性小鼠和正常小鼠的研究。虽然这种变化可能反映了性别之间的固有免疫反应的差异,这也反映了在这些组织不同程度的压力。压力是经历了由群居饲养更多的雄性老鼠,不同程度的个体在给定组的老鼠,和在免疫反应中起着至关重要的作用36]。被假定CD8 + T细胞的主要作用是抑制生产辅助T 2型细胞因子(30.]。这可能是环境因素,例如,压力在雄性老鼠,影响辅助T响应的总体趋势,在某些情况下,CD8 + T细胞起着补充作用。

可能扮演的角色的CD8 + T细胞在小鼠感染b .流产不适用于感染b . melitensis在目前的研究(15,16,30.,31日]。也许是免疫反应b .流产更多的依赖CD8 + T细胞。这可能源于不同寻常的属性b .流产有限合伙人交叉链接mhc ii分子,抑制CD4 + T细胞反应(37]。干扰素-γ对生存至关重要的毒性布鲁氏菌体内(17减少)和调节细胞内感染培养的巨噬细胞(38,39]。然而,先前的研究与CD4 + T细胞,表明,CD4 + T细胞干扰素的主要生产商γ在布鲁氏菌病16,18,19]。我们确认这些研究b . melitensis免疫小鼠和扩展他们证明CD4 +和CD8 + T细胞产生干扰素-γ针对特定抗原,这表明两种细胞类型应该为保护反应。这些研究提出新疑问CD8 + T细胞在防御的重要性布鲁氏菌和建议应重新审视了这个问题b .流产。他们还表明,疫苗策略旨在敏化CD8 + T细胞可能价值有限,尽管这个问题也值得进一步调查。

信息披露

本文所包含的意见或断言是作者的私人看法和不被视为官方或反映部门的意见军队,海军,空军,或国防部。研究符合动物福利法案和其他联邦法律、法规有关动物和实验动物和坚持原则规定指导实验室动物保健和使用的NRC出版,1996年版。

确认

这项工作是支持的资金从国防部军事传染病研究项目。作者博士纪念已故Ela Zelazowska的不可估量的贡献。

引用

1. m . l . Boschiroli诉Foulongne, d .奥卡拉汉,”布鲁氏菌病:一个世界性的人畜共患病,目前看来在微生物学,4卷,不。1,58 - 64、2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. j . Godfroid和a . Kasbohrer”布鲁氏菌病在欧盟和挪威的二十一世纪,“兽医微生物学,卷90,不。1 - 4、135 - 145年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. e·莫雷诺,”布鲁氏菌病在中美洲,“兽医微生物学,卷90,不。1 - 4,31-38,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. m . Refai”发病率和布鲁氏菌病在近东地区的控制权,”兽医微生物学,卷90,不。1 - 4、81 - 110年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. m·巴耐:“小反刍动物布鲁氏菌病的控制使用布鲁氏菌melitensisrev .疫苗:实验室方面和野外观察,“兽医微生物学,卷90,不。1 - 4、497 - 519年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. b . Robinson-Dunn“微生物实验室的作用,应对生物恐怖主义,“病理学和实验室医学档案,卷126,不。3、291 - 294年,2002页。视图:谷歌学术搜索
7. j . a . Montaraz和a . j .冬天,“生活比较和无生命的疫苗流产布鲁氏菌在BALB / c小鼠,”感染和免疫,53卷,不。2、245 - 251年,1986页。视图:谷歌学术搜索
8. y詹,a .凯尔索微分激活和c干杯。布鲁氏菌活性CD4⁺T细胞通过布鲁氏菌感染或免疫用抗原提取。”感染和免疫,卷63,不。3、969 - 975年,1995页。视图:谷歌学术搜索
9. m·j·托臂,”布鲁氏菌病:概述”,新发传染病,3卷,不。2、213 - 221年,1997页。视图:谷歌学术搜索
10. f·m·m·Aldomy k . l .贾汗和黄懿慧Altarazi隔离的布鲁氏菌melitensis在约旦来自反刍动物流产。”比较病理学杂志,卷107,不。2、239 - 242年,1992页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. n . f . Cheville”、开发、测试和商业化的新的牛布鲁氏菌病疫苗,”纽约科学院上卷,916年,第153 - 147页,2000年。视图:谷歌学术搜索
12. d·l·胡佛,r·m·克劳福德l . l . van de年间et al .,“保护老鼠对布鲁氏菌病疫苗接种布鲁氏菌melitensisWR201 (16 mΔpurEK),“感染和免疫,卷67,不。11日,第5884 - 5877页,1999年。视图:谷歌学术搜索
13. c .欢呼和m . Ho“抵抗,易受细菌感染的老鼠。第四。功能特异性自然抵抗兼性胞内细菌,”RES网状内皮组织的协会杂志》上,34卷,不。4、299 - 309年,1983页。视图:谷歌学术搜索
14. m . Plommet和a . m . Plommet”小鼠免疫进化serum-mediated影响布鲁氏菌病”,感染和免疫第41卷。。1,第105 - 97页,1983。视图:谷歌学术搜索
15. 阿瑞亚l . n, p . h . Elzer g·e·罗·m·Enright和a . j .冬天,“时间发展的保护细胞和体液免疫BALB / c小鼠感染流产布鲁氏菌”,免疫学杂志,卷143,不。10日,3330 - 3337年,1989页。视图:谷歌学术搜索
16. y, r . Vemulapalli a . Zeytun和g . g .史锐克诱导特定的细胞毒性淋巴细胞在小鼠接种疫苗流产布鲁氏菌RB51。”感染和免疫,卷69,不。9日,第5508 - 5502页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. e·a·墨菲j . Sathiyaseelan m . a .家长,b .邹和c·l·鲍德温干扰素-γ对生存至关重要流产布鲁氏菌感染耐药C57BL / 6和感染BALB / c小鼠,”免疫学,卷103,不。4、511 - 518年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. d·m·费尔南德斯x江,j·h·荣格和c·l·鲍德温”比较小鼠感染T细胞细胞因子在抗性和敏感的毒性流产布鲁氏菌菌株2308,“《免疫学和医学微生物学,16卷,不。3 - 4、193 - 203年,1996页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. y詹,j·杨和欢呼,“细胞因子反应的t细胞亚群流产布鲁氏菌老鼠来华的可溶性布鲁氏菌蛋白质,”感染和免疫,卷61,不。7,2841 - 2847年,1993页。视图:谷歌学术搜索
20. k . a . Pasquevich s . m . Estein c . g . Samartino et al .,“免疫与重组布鲁氏菌物种外膜蛋白Omp16或Omp19佐剂诱发特定的CD4细胞⁺和CD8⁺T细胞以及系统性和口腔防护流产布鲁氏菌感染。”感染和免疫,卷77,不。1,第445 - 436页,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. d·高尔,诉Rajendran, p . c . Ghosh和r·博”细胞介导免疫反应后挑战Omp25脂质体免疫小鼠有助于防止毒性流产布鲁氏菌544年,“疫苗没有,卷。31日。8,1231 - 1237年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. x d, t·陈,李j.y. d·h . Yu h . Cai和y(一个IL-15佐剂增强结合DNA疫苗的功效布鲁氏菌通过增加CD8⁺细胞毒性T细胞的反应,”疫苗,28卷,不。12日,第2415 - 2408页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. a . p . m . s .巴f·s·奥利维拉,n . b .卡瓦略et al .,“主机易感性流产布鲁氏菌干扰素-感染更明显γ淘汰赛il - 12 /β2-microglobulin double-deficient老鼠。”临床免疫学和发展ID 589494条,卷。2012年,7页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. p .巴里m . v . Delpino r . g . Pozner l . n .委拉斯开兹j . Cassataro, g . h . Giambartolomei。”流产布鲁氏菌诱发细胞内保留人类巨噬细胞down-modulating细胞毒性CD8的mhc i分子⁺T细胞反应,”细胞微生物学,15卷,不。4、487 - 502年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. m·德沃德g . Radhakrishnan j .危害c . Bareiss d·马格纳尼和g . a .分配器,“主动逃避CD8细胞毒性t淋巴细胞介导的杀戮和低质量的反应⁺T细胞造成持久性的布鲁氏菌病”,《公共科学图书馆•综合》,7卷,不。4篇文章ID e34925 2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. m·a·德沃德j .危害d·m·马格纳尼l . Eskra和g . a .分配器”不一致布鲁氏菌melitensis抗原产量同源CD8 T细胞体内。”感染和免疫,卷78,不。1,第176 - 168页,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. m·a·Vitry c . De特雷泽盖,s .成员国et al .,“至关重要的作用γ产生CD4⁺Th1细胞CD8的但可有可无的功能⁺T细胞、B细胞、Th2和Th17反应的控制布鲁氏菌melitensis感染的老鼠。”感染和免疫,卷80,不。12日,第4280 - 4271页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. m . j . Izadjoo a . k .保护c . m . Paranavitana t·l·哈德菲尔德和d·l·胡佛”口服接种布鲁氏菌melitensisWR201能保护小鼠免受鼻内和致命的挑战布鲁氏菌melitensis16米。”感染和免疫,卷72,不。7,4031 - 4039年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. m . j . Izadjoo y Polotsky, m . g . Mense et al .,“损害控制的布鲁氏菌melitensis感染Rag1-deficient老鼠。”感染和免疫,卷68,不。9日,第5320 - 5314页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. c·奥利维拉和g . a .分配器”CD8⁺1型CD44^嗨CD45 RB^罗T淋巴细胞控制细胞内流产布鲁氏菌感染主要组织相容性复合体中演示类I -和类II-deficient老鼠,”欧洲免疫学杂志,25卷,不。9日,第2557 - 2551页,1995年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. h·巴甫洛夫,m .贺加斯f·c·麦肯齐和c欢呼,“体内和体外效果Ly抗原的单克隆抗体免疫感染,”细胞免疫学,卷71,不。1,第138 - 127页,1982。视图:谷歌学术搜索
32. s e·汤森和j.p. Allison肿瘤后拒绝CD8的直接聚集有关⁺T细胞通过B7-transfected黑色素瘤细胞,”科学,卷259,不。5093年,第370 - 368页,1993年。视图:谷歌学术搜索
33. s . l . YingstCD8的角色⁺T细胞免疫应答的布鲁氏菌小鼠melitensis[博士。论文)基本医疗科学部门,普渡大学兽医学院,2003。
34. m . j . Soloski m . e . Szperka a·戴维斯和s . l .木制“宿主免疫反应细胞内细菌:角色MHC-linked class-Ib受体分子,”实验生物学和医学,卷224,不。4、231 - 239年,2000页。视图:谷歌学术搜索
35. e·a·墨菲m .家长,j . Sathiyaseelan江x,和c·l·鲍德温,“免疫控制流产布鲁氏菌2308感染BALB / c小鼠,”《免疫学和医学微生物学,32卷,不。1,第88 - 85页,2001。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. k . m . Wonnacott和r·h·邦”压力的影响在记忆细胞毒性T lymphocyte-mediated保护在粘膜网站,对单纯疱疹病毒感染”大脑、行为和免疫力,16卷,不。2、104 - 117年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. c·弗f . Deleuil n . Lapaque e·莫雷诺,j.p. Gorvel。”流产布鲁氏菌脂多糖对小鼠腹腔巨噬细胞作为装置的T细胞的激活,“免疫学杂志,卷165,不。9日,第5210 - 5202页,2000年。视图:谷歌学术搜索
38. m . o .法国埃兹l .元,r·m·克劳福德et al .,“调理素作用和影响γ干扰素对经济增长的布鲁氏菌melitensis16 m在小鼠腹腔巨噬细胞体外。”感染和免疫,卷68,不。1,第263 - 257页,2000。视图:谷歌学术搜索
39. 江x和c·l·鲍德温,“细胞因子对细胞生长的影响流产布鲁氏菌”,感染和免疫,卷61,不。1,第134 - 124页,1993。视图:谷歌学术搜索

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