PAC-Mediated阿基保护关键介导但并不完全取决于细胞衍生微泡

文摘

介绍。急性肾损伤)显著恶化住院病人的预后。近年来,基于单元的策略建立了作为一个可靠的选择对提高阿基在实验结果。我们以前的研究集中在所谓proangiogenic细胞(pac)。机制,有助于PAC-mediated阿基保护包括生产/分泌细胞外囊泡(MV,微泡)。此外,最有可能的细胞行为由paracrinic流程检查参与组成分泌腺()。当前的研究评估是否阿基可能被管理的预防检查参与组成分泌腺PAC-derived MV和/或孤独。方法。阿基诱导男性C57 / Bl6N老鼠(8 - 12周)双边肾缺血(IRI-40分钟)。同基因的小鼠pac与褪黑激素,刺激而或2,或与骨形成protein-5 (BMP-5)一小时,分别。PAC-derived MV和vesicle-depleted上层清液随后被收集和注射。缺血后又。分析了老鼠48小时后。结果。IRI诱导显著的肾排泄功能障碍所反映的高血清半胱氨酸蛋白酶抑制物C的水平。唯一的措施,改善阿基是MV的注入,从本地pac。下列条件后缺血性肾功能进一步恶化:MV + Ang-1 MV + BMP-5 MV +褪黑激素,检查参与组成分泌腺和MV + + Ang-1。结论。在一起,我们的数据表明,PAC-mediated阿基保护大大取决于细胞衍生MV的可用性。然而,由于先前的数据显示改善AKI-protection pac与特定细胞预处理后介质(Ang-1和2,褪黑素,BMP-5)机制除了专门vesicle-dependent机制必须参与PAC-mediated阿基保护。

1。介绍

住院发生率的阿基(急性肾损伤)增加了在过去的10 - 15年。在中欧,它被估计,将近15%的受试者在医院治疗期间获得阿基的疾病1]。然而并没有显著改善预后自1990年代初;特别高的死亡率在恶性肿瘤患者阿基已报告,败血症,透析(2]。因此,世界各地的临床与实验研究人员努力确定新的战略AKI的诊断和管理。细胞衍生的疗法已经用于实验阿基;结果是有前途的。关于间充质干细胞(msc),甚至一些临床试验启动(3]。另一个新兴的细胞群所谓的诱导多能干细胞(万能)4]。研究在阿基的细胞则是罕见的,只局限于动物模型(5,6]。其他几个调查关注proangiogenic细胞(pac),多年来被定义为早期内皮祖细胞(7]。系统性PAC政府明显减毒鼠阿基,在这两个术语,排泄功能和肾形态(8]。但是有某些问题与阿基细胞疗法。首先,细胞隔离和扩张可能需要几天。其次,细胞的确切时间点注射仍难以预测。最后,细胞,分离出某个捐赠,必须接受一个人患有阿基。因此,细胞,无论他们的确切生物学特性,将很有可能不会利用AKI的治疗以直接的方式在不久的将来。与细胞疗法最近一直在讨论有关的问题(9]。

同时,pac行动的机制在缺血后微环境阐述了更多的细节。2012年,Cantaluppi和他的同事们10)确定细胞衍生微泡(MV) AKI的保护至关重要。MV独自管理实质上从阿基保护动物。Cantaluppi的研究以来,许多其他研究者报道kidney-protective角色的特定类型的细胞外囊泡,来自异构类型的细胞如间充质干细胞、内皮细胞集落形成细胞,诱导多能干细胞,和其他人11- - - - - -18](Bruno,周,Herrera,科里纳,汉堡,张Ranghino,元)。同时,细胞衍生泡因此被接受作为介质在各种情况下的组织保护。几年前,拉赫曼et al。19)发现了一个异构组体液因子产生和分泌pac (epc)。它随后被认为一个特定组蛋白,所描述的术语secretome,可能介导vasomodulatory细胞的影响。今天,检查参与组成分泌腺相对MV的角色和组织保护仍然是未知的。因此,我们旨在分析这两个组件在小鼠AKI的有效性。总体目标是确定哪些细胞分泌的产品可能在未来用于治疗的目的。一些关于使用的术语来描述自然总论/生物细胞衍生的囊泡需要前缀。2018年,延伸等。20.立场声明公布国际社会的细胞外囊泡(ISEV)的“最小信息研究的细胞外囊泡2018”或MISEV2018。关于提供的详细讨论,在我们的研究中使用的多孔结构应该最有可能被称为“细胞外囊泡”(EV)。我们不过维护术语MV(微泡)在整篇文章中。

2。材料和方法

2.1。动物模型

在以前的动物研究,所有协议根据德国研究所的指导方针进行护理和健康指导的机构批准的使用实验动物和动物保健和使用委员会哥廷根大学的。所有的实验中,我们使用男性C57 / Bl6N小鼠(8 - 12周)。老鼠在当地动物饲养设施哥廷根大学医院。动物被单独关在笼子里,12:12 h明暗周期和免费的水和食物在整个研究。

2.2。外科手术

麻醉是300年执行的解决方案μl 6毫克/ 100克盐酸氯胺酮+ 0.77毫克/ 100甲苯噻嗪盐酸盐,应用腹腔内。老鼠放在加热手术垫在整个过程。直肠温度是永久维持在37°C。腹腔开放midlaparotomy 1.5厘米。肾脏受到和夹紧的肾激素进行microserrefines(美国良好的科学工具,福斯特)40分钟,分别。MV的夹子被释放和恒定体积或SECR含缓冲/媒介(隔离检查参与组成分泌腺(MV)和细胞衍生的微泡的先决条件(SECR)从本地和pac)尾静脉注入,因此,进入体循环。腹部切口关闭4 - 0缝合,手术主食。在每个实验小组,10动物进行了分析。动物被牺牲了48小时后。Euthanization是由注射三倍剂量的麻醉,其次是解剖隔膜。

2.3。检查参与组成分泌腺孤立细胞衍生的微泡(MV)和(SECR)从本地的先决条件和pac

这两个组件,PAC-derived微泡检查参与组成分泌腺(MV)和(SECR),从同源的小鼠pac被孤立。这些细胞被孤立和扩展(详细如前所述21]。然而,我们将简要描述过程。小鼠单核细胞(跨国公司)是由密度梯度离心浓缩使用Biocoll解决方案(Biochrom,柏林,德国)外周血和脾脏细胞提取物。收集细胞的两个隔间的原因是最大化的意图可供注射的细胞总数。单核细胞混合,不同以前的4×10的协议⁶细胞被使用(21),25×10⁶细胞被镀上6-well文化盘子涂有人类纤连蛋白(σ,圣路易斯,密苏里州)和维护在内皮细胞medium-2 (EGM-2;Clonetics、Lonza Walkersville医学博士,美国)补充与内皮生长介质包含5% FCS Single-Quots (……)。4到5天后,培养确定pac的吸收DiI-labeled乙酰化低密度脂蛋白(acLDL)(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)和同时绑定FITC-labeled BS-1凝集素(BS-1)(σ诊断,圣路易斯,密苏里州)。SECR:在手术的日子(初始细胞播种后5 - 6天),pac被孵化的下列物质:他们(250 ng / mL);angiopoietin-2 (250 ng / mL);骨形成protein-5 (bmp - 5 - 100 ng / mL);褪黑素(5μMol / L)。孵化项目进行1小时在37°C,和介质应用于新的EGM-2,分别。上层清液收集和过滤(孔隙大小0.8μ米)。滤液随后离心机6分钟13000 rpm auf (Vivaspin 500 100000 MWCO-Satorius VS0142)。SECR注入实验,每只老鼠收到100μL /尾静脉注射。0.8 MV:上层清液过滤后(孔隙大小μ米),细胞衍生微泡收集使用ExoEasy工具包(试剂盒76064)根据制造商的协议。最后,总额MV-containing洗出液是应用于单个鼠标/尾静脉注射。

2.4。验证的MV隔离

为了验证MV的存在之前的过程后,上层的最初使用一个过滤器过滤为0.8μ孔隙大小。接下来的步骤进行ExoEasy工具包的试剂盒®(76064)。两点5毫升的滤液混合2.5毫升XBP缓冲区,其次是invertation(5次)。的解决方案是利用离心力分离1分钟使用一个exoEasy旋转列500克。列是洗一次10毫升XWP缓冲区,紧随其后的是另一个离心步骤在500 g(5分钟)。接下来,400年μl (XE缓冲区是应用于列,其次是孵化1分钟和离心5分钟在500 g。最后一步是重复一次。500年Vivaspin洗出液是在13000 rpm管和离心液6分钟。所有下面的步骤进行Exosomen ELISA CD63成套装备的检测系统生物科学®(EXOEL-CD63A-1)。分析根据制造商的指示。因此,我们描述了过程在一个简短的方式。洗出液与200年孵化μl的外来体绑定缓冲20分钟37°C。96 - Elisa板充满了50μl /好,孵化了一夜之间在37°C。三个清洗步骤。Anti-CD63添加(1:100)1小时在RT,其次是三个进一步的清洗步骤。进行二次孵化与山羊anti-rabbit合为1小时(1:5000)沿井又洗了三次。接下来,50μl(三甲(3、3′,5、5′-tetramethylbenzidin)增加了45分钟,在rt,反应了50μl的挡车器。在45纳米井随后被分析。

2.5。组织学和免疫荧光染色的组织部分

以下系统的方法被用于量化的纤维化(马森三色的)和内皮alpha-Smooth肌肉肌动蛋白(aSMA)或alpha-Tubulin()表达式。所有分析使用ImageJ®软件。纤维化:每个肾脏皮质区域的记录,和地区没有被覆盖的组织并没有考虑。分析量化的总面积像素的总数。特定的颜色范围内的所有像素(这里:绿色)量化和相关总感兴趣的像素数量。结果给出了图像像素总数的百分比。Co-localization分析(结合aSMA或者CD31):在每一个肾脏部分,至少三个不同的小血管以个体的方式进行评估。内皮表面被计数量化红色像素的总数(CD31)。黄色区域也被量化,根据定义的颜色范围。黄颜色反映了各自的标志对内皮细胞的兴趣,和黄色像素的绝对数量与红色像素的绝对数量,分别在百分比(结果)。 Kidney fibrosis was examined in formalin fixated, paraffin-embedded tissue sections after Masson trichrome staining. Endothelial expression of aSMA and aT was also analyzed in formalin fixated, paraffin-embedded tissue sections after deparaffinization, followed by incubation in 3% H₂O₂10分钟。citrate-buffer治疗后(微波、5次3分钟,pH值6.0),部分被沾染了老鼠anti-mouse CD31 (PECAM-1-CloneSZ31 Dianova),和兔子anti-Smooth肌肉肌动蛋白(EMELCA)或鼠标anti-alpha微管蛋白(Abcam-ab24610)为初级孵化和Alexa萤石488山羊anti-rabbit免疫球蛋白(Dianova)和Alexa萤石594山羊anti-rat免疫球蛋白(Dianova)或Alexa萤石488 anti-mouse免疫球蛋白(Dianova)二次孵化,分别。初级孵化了一夜之间在4°C,而二次孵化为1小时在室温下进行。核,形象化与DAPI复染色组织部分。

2.6。量化的管周毛细血管密度(PTCD)

PTCD量化,专门皮质不含肾小球的记录。感兴趣的总面积是像素的绝对数量评估。CD31染色后(见组织学和免疫荧光染色的组织部分),红色是量化如上所述,相关感兴趣的总面积(红色像素作为所有像素单位面积的百分比)。

2.7。血清半胱氨酸蛋白酶抑制物C的量化

血清半胱氨酸蛋白酶抑制物C水平量化使用商用设备(BioVendor RD291009200R)根据制造商的指示。

2.8。PAC隔离和治疗蛋白质组学分析

pac从野生型小鼠血和脾被孤立和扩大5 - 6天的文化EGM-2-medium (Lonza、cc - 3156 cc - 4176)。无血清培养系统中吸气,取而代之的是prewarmed 10毫升EGM-2-medium每10厘米/菜。的无血清EGM-2-medium取代新鲜培养基3次,每一个潜伏期持续120分钟的有限公司₂。最后,媒介取代FCS-free EGM-2包含Ang-2 (200 ng / ml)或BMP-5 (100 ng / ml)。治疗进行了48小时的有限公司₂孵化器在37°C。随后,条件培养基收集和离心5分钟在4°C, 300克和上层的收集和储存在−80°C。

2.9。蛋白质沉淀和浓度估计

检查参与组成分泌腺丰富蛋白质,上层清液的控制和治疗pac(10毫升)分别集中2毫升Vivaspin 20超滤单元(缝匠肌哥廷根,德国)。由此产生的样本然后使用蛋白质沉淀,降低音量,丰富的蛋白质。降水是通过添加3卷的冰冷的丙酮含10%甲醇和孵化隔夜−20°C。离心沉淀蛋白质是颗粒状的在4°C 12000 g 45分钟。球团干燥和解决在尿素缓冲区(30毫米Tris-HCl pH值8.5,9.5 M尿素,2%的家伙)。根据布拉德福德蛋白质浓度测定方法使用BSA作为校准器。

2.10。sds - page、凝胶中胰蛋白酶的消化和质量检查参与组成分泌腺PAC-Derived的光谱分析

蛋白质提取物控制样品和不同治疗方法1 d-sds-page分开。凝胶是沾Coomassie蓝色和可视化蛋白质车道在20-band切除部分每受到与胰蛋白酶(12.5 ng /凝胶消化μl)。结果提取胰蛋白酶的消化和分析使用热科学问Exactive。所有MS / MS样品进行了分析使用吉祥物(矩阵科学、英国伦敦;2.4.1版本)。吉祥物是搜索碎片离子质量公差为0.020 Da和父离子公差10.0 PPM。支架(Scaffold_4.8.9版),蛋白质组软件公司,波特兰,或者,被用来验证基于MS / MS鉴定肽和蛋白质。该软件可实现MS / MS之间的数据样本。这使我们能够比较样本之间的蛋白质的丰度。标准化方案适用于使用常见的实验情况个别蛋白质可能是调节或表达下调,但每个样本中所有蛋白质总量差不多就像在我们的实验。标准化是女士做样品的水平。脚手架使用的归一化法是和每个女士的“未加权谱计数”样本。 These sums are then scaled so that they are all the same. The scaling factor for each sample is then applied to each protein group and adjusts its “unweighted spectrum count” to a normalized “quantitative value.”

2.11。生物信息学分析

检查潜在的蛋白质功能类别和通路显著调节蛋白质,我们使用以下公共蛋白质进行了生物信息学分析软件:大卫功能注释生物信息学微阵列分析(http://david.abcc.ncifcrf.gov/字符串),蛋白质相互作用网络软件10.5 (https://string-db.org)和Kegg通路分析软件(https://www.genome.jp/kegg/)。

2.12。统计分析

所有的结果意味着±SEM。两组比较的手段使用学生的测试。三个或更多的团体之间的差异进行了分析与方差分析测试。意义是如果的假设值低于0.05。

3所示。结果

结果将之前,需要指出,重大不良事件并没有观察到任何实验小组。因此,不需要动物euthanization之前收集分析物。

3.1。pac释放微泡(MV)

微泡的识别,报告了几个方法。其中一个方法就是染色的CD63 [22]。在这项研究中,我们决定检测MV与商用设备在材料和方法部分报道。三个分析。相应的结果是4.6×10⁸,3.4×10⁸和3.8×10⁸MV /样本(平均3.9±SEM×10⁸)。

3.2。PAC-Induced阿基保护是由MV,来源于原生细胞

控制老鼠的意思是显示血清半胱氨酸蛋白酶抑制物C水平的342±20 ng / ml。缺血后肾功能显著恶化(696±26 ng / ml, )。三个不同的治疗策略定义:政府检查参与组成分泌腺的(SECR)或微泡(MV)单独或SECR和MV的总和。组件都是孤立的原生细胞或者刺激pac。因为我们先前的研究显示,大量PAC争胜的影响而/ 2 (23,24],骨形成protein-5 [25),而褪黑激素(8],我们决定利用这四种介质的每个个体的一系列实验。因此,我们进行了15个介入组的总数。而本地SECR或SECR / MV结合没有改善缺血后肾功能(671±26和25和630±696±26 ng / ml; 和 ),MV源自如果细胞水平显著降低血清半胱氨酸蛋白酶抑制物C(593±17和696±26 ng / ml; )。而(Ang-1): PAC预处理与Ang-1 1小时没有改善疗效SECR或MV。相反,如果从刺激细胞应用MV,肾功能进一步下降(IRI + MV + Ang-1 IRI + SECR + MV + Ang-1与IRI 922±34和875±28 ng / ml vs 696±26 ng / ml; 和 )。Angiopoietin-2 (Ang-2): Ang-2刺激没有导致任何改进或post-ischemic肾功能进一步恶化。中给出的数值结果不得文本(见图1)。刺激骨形成Protein-5 (BMP-5): PAC与BMP-5加剧阿基如果MV单独应用(IRI + MV-BMP-5与IRI 799±32和696±26 ng / ml; )。褪黑激素:相对BMP-5,褪黑激素刺激导致恶化的阿基“IRI + MV +梅拉”集团(IRI + MV +梅拉与IRI 872±34和696±26 ng / ml; )。半胱氨酸蛋白酶抑制物C结果总结在图1。

3.3。早期的间充质转分化的内皮细胞由本地MV减毒

阿基恶化的预后各自学科在短期和长期的。长期预后关键取决于AKI-associated血管稀疏和间质纤维化。后者的发病机制是复杂的。然而,间充质转分化的内皮细胞(EndoMT)通常被视为一个重要fibrogenetic事件(26]。因此,我们旨在评估内皮alpha-Smooth肌肉肌动蛋白的表达(aSMA)缺血后早期(48小时)。结果给出了内皮(CD31的百分比⁺)细胞区(绿色像素的数量),由aSMA。控制老鼠的平均比例为2.9±0.8。Post-ischemic动物(IRI)显示更高值(14.9±2.2%; )。注入的原生SECR没有显著地调节内皮aSMA (18.4±0.9%;值与“IRI”0.17)。管理本地MV相比减少内皮aSMA(9.3 - 1.2和14.9±2.2%; )。如果本机SECR和MV同时注入,11.2±0.6%的内皮表面覆盖的aSMA (值与“IRI”0.12)。对于所有其他介入组,只有一个显著差异发生“IRI”组相比:“IRI + SECR + MV + BMP-5”显示内皮aSMA低丰度(8.9±0.9和14.9±2.2%; )。图2总结了EndoMT分析。此外,我们量化间质基质沉积在所有组马森三色的染色发布之前(21,27]。矩阵积累的控制和没有显著差异之间的各自post-ischemic组或任何“IRI”和一个或多个介入组。我们避免提及数值结果的文本,但见图3。

3.4。MV管理与早期管周毛细血管稀疏

除了间质纤维化,管周毛细血管的损失(管周毛细血管膨胀)是一种进行性肾病的标志特征。结果经常从急性肾缺血28]。我们评估管周毛细血管的密度(PTCD)有关CD31 +区域总视图字段。我们只分析了肾皮质,不包括肾小球。我们的分析显示类似的毛细血管密度的控制和在任何介入组(图4)。唯一的区别发生在post-ischemic动物收到本地MV单独或MV和SECR如果细胞结合。在这两组中,PTCD较低甚至比控制动物,分别(MV 0.48±0.1%和0.51±0.1%和1.2±0.3%; 和 )。图4详细显示了数据。

3.5。IRI后早期内皮Alpha-Tubulin丰度不不同

我们以前讨论的减少内皮alpha-Tubulin()表达式反映了内生自卫的过程(21]。然而它需要被提到各自分析数周后IRI(1、4、6周)。在当前的研究中,内皮完全量化在缺血后48小时。内皮alpha-tubulin之间没有显著差异的控制和任何相应的post-ischemic组或“IRI”与一个或多个介入组(相对间隙矩阵accumulation-see上图)。我们再次避免提及数值结果的文本,但见图5。

3.6。蛋白质组学的分析检查参与组成分泌腺PAC-Derived

为了更好地探索pac的保护作用,我们调查了PAC-secretome在本机和刺激条件下的改变。为此,深蛋白质组进行调查。我们从控制,生成secretomes BMP-5和Ang-2 pac处理。凝胶的过程包括1后面d-sds-page分离消化和质/女士为每个样本光谱账户进行了量化。为了获得一个快速概述检查参与组成分泌腺的组成,我们绘制褶皱变化和意义生成火山的阴谋。这允许一个快速检查参与组成分泌腺的识别蛋白质显著 改变他们的水平在刺激。比较补充表中表示的质谱数据S1允许检查参与组成分泌腺大变更和概述的识别的蛋白质数量只有secretomes中标识的Ang-2或BMP-5 pac处理。

至于Ang-2刺激蛋白质被认为是孤独,结果interactome高度复杂的(图6(一))。然而(扩大)路径分析显示一组蛋白质可以分为五大类:组织细胞外基质,先天免疫系统,中性粒细胞脱粒,代谢和免疫系统。网络分析的蛋白质,分泌抑制Ang-2治疗后,检查参与组成分泌腺导致更少的复杂蛋白质参与凝血级联与血小板激活(图6 (b))。BMP-5 pac的治疗导致减少大量蛋白质,主要是参与途径几乎相同(先天免疫系统,免疫系统,止血,血小板脱粒,血小板激活,信号和聚合)Ang-2分析(图中发现的6 (c))。的比较,Ang-2 BMP-5 secretomes,显示upregulation蛋白质的参与共同通路(图6 (d))。

4所示。讨论

最有趣的发现在当前的研究中只在改善肾功能post-ischemic从原生细胞注入MV后完全缺乏刺激效应的四个MV或SECR介质。需要得出两个结论:MV充分参与调停阿基保护,但细胞衍生细胞外组件很可能不是单独负责改善急性肾脏功能障碍情况。

过去,我们显示,阿基保护作用的注入pac在众多实验研究[8,29日,30.]。所有协议使用到目前为止使用完整的细胞,没有或药理预处理后。多年来,我们确定了一些介质,大大提高了细胞的治疗能力在阿基8,23,24]。当前的研究,避免注入活细胞,没有证实这些观察。因此,我们必须得出这样的结论:在肾细胞的存在PAC-associated肾脏保护很重要,特别是在情况下预处理协议被应用。领域的PAC (EPC)介导的阿基保护大大受益从Cantaluppi和他的同事们的研究10)确定了关键作用的细胞来源微泡在IRI (MV)。作者不仅证明阿基可能被注射预防MV孤单但也提取某些微rna分子的水泡分数。通过RNA损耗MV政府之前,保护作用的囊泡消失了。负责组织讨论细胞机制保护不仅在阿基不仅对pac已经持续了很长时间。2003年,拉赫曼等人表明,上层清液从培养内皮祖细胞明显丰富了血管生成生长因子如血管内皮生长因子、肝细胞生长因子,和粒细胞集落刺激因子和集落刺激因子(19]。从那时起,细胞被认为大大影响发生在一种间接的方式。在随后的几年,蛋白质组学分析显示额外的体液介质包括胸苷磷酸化酶、基质金属蛋白酶9,引发,前b细胞增强因子,和巨噬细胞迁移抑制因子(31日,32]。因此,检查参与组成分泌腺”“进化的概念。检查参与组成分泌腺的深刻的调节作用是突出Goligorsky的研究小组。在2015年发表的一篇文章中,EPC - / MSC(间充质干细胞)派生细胞因子显著影响巨噬细胞的表型和生物学行为(33]。检查参与组成分泌腺的结论,部分介导的保护LPS-induced阿基。后来的研究显示,endothelium-derived体液因素也参与肾纤维发生(34]。在2015年发表的文章(33),一个重要的问题有关的任何细胞治疗方法在阿基强调:细胞交付的问题。因此,MV乍看起来像是一个有前途的选择,尽管体外代这样的高度复杂的结构的问题必须解决。此外,我们的分析不完全显示有益的MV终点的影响。例如,半胱氨酸蛋白酶抑制物C水平增加,anti-mesenchymal效果消失如果MV预处理细胞(Ang-1,梅拉,BMP-5)应用。最后,从本地pac MV显著影响血管结构尽管排泄功能改善。

在最后一段,我们想讨论我们的蛋白质组学数据。只有少数研究评估检查参与组成分泌腺的作用和成分来源于所谓的内皮祖细胞(:pac)在过去。在2015年发表的一项研究中,(33),hydrogel-embedded内皮祖细胞在LPS-treated小鼠皮下植入,在特定情况下导致阿基保护。虽然这项研究解决系统性动物细胞因子水平,作者没有检查参与组成分泌腺获取数据本身。然而认为paracrinic行动(嵌入式)内皮祖细胞最有可能调解生物细胞的影响。MV-dependent活动的可能性,不讨论了。2018年出版的上下文中去检查参与组成分泌腺的调查分析了EPC少突细胞修复(35]。作者进行了详细的蛋白质组学研究和确定了异构组细胞所分泌的蛋白质。那些血管生成素,基质衍生因子- 1 (SDF-1),血小板源生长因子,血管内皮生长因子b (VEGF-B)和基质金属蛋白酶(MMP)。因此,他们发现介质与实质性proangiogenic活动。需要提到的第三个研究集中在EPC secretome-enriched纳米颗粒在血管修复(36]。记录,检查参与组成分泌腺缺氧刺激生产的蛋白与血管生成属性。对比这些报告,我们的分析显示介质参与凝血级联的浓缩和血小板激活。重大刺激影响血管生成的蛋白质没有变得明显。不符的发现可能导致的人工条件用于我们的调查。菲利斯和他的同事们(36),并将这些细胞暴露于低氧条件下当我们受到pac特定介质,显示大幅增加的阿基防护活动完整的细胞(8,23- - - - - -25]。有关的事实,我们的研究没有显示任何检查参与组成分泌腺的有利影响,整个细胞的数据明显表明renoprotective效应最有可能需要完整的肾脏pac的存在,特别是预处理协议在使用。

在一起,我们的数据表明,PAC-mediated阿基保护大大取决于细胞衍生EV的可用性。然而,由于先前的数据显示改善AKI-protection pac与特定细胞预处理后介质(Ang-1和2,褪黑素,BMP-5)机制除了专门vesicle-dependent机制必须参与PAC-mediated阿基保护。

数据可用性

所有数据都可以要求通讯作者(d.patschan@klinikum-brandenburg.de)。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

高清执行所有的蛋白质组学分析和纠正手稿;KS执行所有外科手术和组织学分析;SP分析数据及修正手稿;GAM纠正手稿和提供实验室空间;或提供金融支持和纠正手稿;MZ帮助额外研究CD63检测;DP设计研究,收到资金,写的手稿。

确认

支持的研究是德意志Forschungsgemeinschaft (DFG)(格兰特收件人:DP (PA1530/8-1))。

补充材料

详细补充表S1:蛋白质组学分析。下面的表显示了结果刺激条件:安吉人/ Ctro (angiopoietin-2与控制),只有在AngII(仅angiopoietin-2), BMP5 / Ctr(骨形成protein-5与控制),AngII / BMP5 (angiopoietin-2与骨形成protein-5)。(补充材料)

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