文摘
在目前的调查,比较不同香料的抗菌活动,姜黄,生姜,各种薄荷,和中药材,如Withania somnifera,Rauvolfia serpentina,兰officinalis,榄仁树属阿诸那,积雪草的评估。不同提取溶剂(丙酮、甲醇、乙醇和水)和提取进行使用蜡样芽胞杆菌,沙雷氏菌属sp。红酵母mucilaginosa,黄曲霉,青霉菌citrinum分离出果汁。提取草药和香料的重要活动。b的仙人掌是最敏感r . mucilaginosa是最耐药微生物测试。Ethanolic和methanolic提取的c . asiatica显示最大直径对细菌和酵母的抑菌圈和菌丝的抑制百分比与模具。本研究证实潜在的选择提取有效的天然食品防腐剂的香料汁液。
1。介绍
出现的新技术在食品保存导致减少防腐剂的水平和促进使用“自然派生抗菌素的动物、植物和微生物的起源(1]。抗菌化合物来源于植物被用于世纪食品保存。埃及人、中国人和印度人用香料和精油自古以来。一些薄荷等香料,大蒜,生姜还练习在替代健康疗法在印度2,3]。据估计,大约250到50万植物物种存在地球上,只有1 - 10%的人是由人类和其他动物作为食物(4]。香料和草药用于食品调味剂,除了提高风味,作为民间药物和食品防腐剂。香料和草药延长食物的保质期限制酸败通过其抗氧化活性或通过他们的抑菌和杀菌活性5]。
香料、香草和他们的选民通常recogonised一样安全(肝)和批准的一些监管机构如美国食品和药物行为,欧盟标准,食品法典委员会和印度食品安全和标准管理局(3]。在印度,食用香料和香草的趋势在食物或使用它们作为医学旨在保持适当的卫生,健康,卫生和增加长寿的生活。等香料ajowan、丁香、生姜、黑胡椒,孜然,阿魏是常用的在印度的饮食(3,6,7]。文献引用的工作几个作者对各种植物的抗菌活性细菌,酵母,霉菌(2,3,8- - - - - -20.]。香料和香草的一般描述本研究中使用列在下表中1。
香料和草药,由于自然起源,吸引更多消费者的注意,关于化学防腐剂的安全性有疑问。几种植物提取物近年来势头由于其生物活性主体和形成制药和食品加工行业的基础(17,21]。
未经高温消毒的果汁消费增加了在过去的几十年里,这是由于内容的抗氧化剂,维生素和矿物质。新鲜果汁是极易腐败,因为流体组件接触空气和微生物环境,同时处理(22]。果汁腐败细菌包括耐酸细菌如醋酸菌、乳酸菌,梭状芽胞杆菌,芽孢杆菌肠杆菌科的家人(克雷伯氏菌sp。枸橼酸杆菌属sp。沙雷氏菌属sp),和一些耐热菌等Alicyclobacillus acidoterrestris和丙酸菌属cyclohexinicum。在酵母中,毕赤酵母属、假丝酵母、酿酒,红酵母属通常遇到属负责损坏的果汁。某些常见的模具等青霉菌sp。曲霉属真菌sp。Eurotium,链格孢属,枝孢属,拟青霉属,葡萄孢属也被损坏报告的果汁。致病性细菌和真菌毒素的存在在果汁生产模具不能排除一直负责增加食源性暴发与新鲜果汁的消费在过去二十年(14,23,24]。
因此,本研究的主要目的是检查在体外抗菌活性不同的香料和草药提取物,比较不同溶剂的影响抗菌活性的提取方法。
2。材料和方法
2.1。植物材料
三个印度香料,pudina saunth, haldi, Yamunanagar从当地市场采购,哈里亚纳邦,印度。婆罗米语四种药用植物草药,印度醋栗,ashwgandha, arjun,收集和sarpagandha Ch。戴维Lal Khizrabad公园,Yamunanagar、哈里亚纳邦,印度。博士证实了这些植物的分类标识b . d . Vashishta植物分类学者、教授的植物学、Kurukshetra Kurukshetra大学。植物的学名和测试部分8详细表1。
2.2。提取的植物材料
四种不同的溶剂,即乙醇、甲醇、丙酮、水(冷热),用于提取和植物提取物是准备根据Sharma描述的方法等。25]。
2.3。测试微生物
在前面的研究(24),微生物分析果汁是由连续稀释琼脂板技术。的百分比的基础上发生的微生物汁样品,一个革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌,酵母,两个选择模具检查香料的抗菌活性。确定了菌株革兰氏染色法的基础上和生化和分子特征(16 s rRNA测序)23]。酵母是染色的基础上发现,形态、文化特征和分子特征(28 s rRNA排序)。模具被确定形态和文化特点的基础上,进一步识别被CABI国际真菌学的研究所证实,英国。
两个细菌,即沙雷氏菌属(),蜡样芽胞杆菌KRC1 (KC67408),酵母,红酵母mucilaginosa(KC67409)和两个模具,黄曲霉(),青霉菌citrinum(504473),被确定。细菌分离株在营养琼脂和亚文化r . mucilaginosa flavus,p . citrinum亚文化在马铃薯葡萄糖琼脂和耗氧孵化37°C和25°C,分别。嗨的媒体采购媒体实验室pvt Ltd .,孟买,印度核苷酸序列的微生物已经提交给基因库数据库提供基因库加入数字,KC67407-KC67409;国际真菌学的研究所参考号)。
2.4。筛选抗菌活性对细菌和酵母
丙酮,甲醇,乙醇,热的和冷的水提取物对不同植物被用于评价抗菌活性的琼脂扩散法。在这种方法中,一个纯粹的隔离细菌和酵母的生长在NA和PDA板块和孵化37°C和25°C 24 h和72 h,分别。一个盘子的微生物被和殖民地被转移到生理盐水在无菌条件下(0.85%)。每个微生物悬浮液密度等于10的调整6cfu /毫升(0.5麦克法兰标准规范)和使用的培养液进行琼脂扩散试验。100年μL(每个测试微生物的培养液是传播到琼脂板,实现融合性的增长。琼脂板被允许干和8毫米井是用无菌接种琼脂板钻。每个油井密封的下半部分熔融琼脂培养基。干提取被重组20%二甲基亚砜(DMSO) 100毫克/毫升的最终浓度的生物测定分析。一个100μL的每个提取直接推到井(一式三份)的接种琼脂板为每个测试有机体。盘子被允许站在室温下1 h (40°C)提取成琼脂扩散和孵化37°C和25°C 24 h和72 h,分别。苯甲酸钠(100毫克/毫升)作为积极的参考标准,以确定每个微生物物种的敏感性测试。无菌DMSO作为消极的控制。抗菌活性,表明包含提取一个周围的抑菌圈,被记录,如果区域大于8毫米。实验进行了一式三份和抑制区域的直径的平均值±标准差计算(34]。
2.5。筛查对模具抗菌活性
植物提取物在不同溶剂的antimould活动被毒食品技术访问。100年μL的植物提取物浓度为100毫克/毫升注入无菌培养皿(90毫米直径)和15毫升的熔融马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)添加到培养皿和涡旋状的实现均匀混合,允许他们在室温下固化。固化琼脂板与真菌接种中心盘(6毫米直径),从测试的积极增长的一周大的殖民地获得真菌,与培养液朝下放置在每个培养皿的中心无菌和孵化点25°C为7天。DMSO作为消极的控制和化学防腐剂苯甲酸钠作为阳性对照。每个提取的抗真菌活性是评价通过测量径向生长的真菌菌丝直径和表达为百分比抑制由应用下面的公式(35- - - - - -37]: 在哪里是真菌群落的平均直径-控制盘子和平均直径的真菌菌落提取增加了盘子。
2.6。确定最低抑制浓度
最低抑制浓度(MIC)为每个测试生物体是由汤macrodilution方法(38]。
2.7。统计分析
实验结果是重复三次每次一式三份,并表示平均数±标准差和结果统计评估使用SPSS软件版本16在5%的显著水平。意味着使用图基同时测试集的比较。
3所示。结果与讨论
3.1。植物提取物的抗菌活性
饮食药草和香料作为食品添加剂在食品不仅改善食品的感官特征,还增加货架寿命减少或消除致病细菌的生存2]。
在目前的研究中,不同的植物提取物的抗菌活性溶剂检查。熟读数据表2显示的平均直径的抑制区植物提取物对两种细菌和酵母和菌丝抑制百分比与两个模具。有显著变化()观察之间的丙酮,甲醇,乙醇,冰冷的水,和水热溶剂的抗菌活动的每一个植物提取物和微生物测试。
为b的仙人掌(KC67408), 18 DIZ值提取(占45%的40测试提取)是19.6毫米和29.3毫米和16之间提取物(40%)12.3毫米和19.3毫米之间。然而,6提取没有抑制活性。Ethanolic提取的c . asiatica表现出最强的抗菌活性(DIZ = 29.3毫米),其次是methanolic提取(DIZ = 26.3毫米)和ethanolic提取的r . serpentina(DIZ = 25.3毫米)(表2)。
为沙雷氏菌属(KC67407),总共25提取物(62.5%)表现出抑制活动DIZ值从11.3毫米到22.6毫米,和47提取活性较低。剩下的15提取没有抑制活性(表2)。抗菌活性最强的样本是methanolic提取的t·阿诸那(DIZ = 22.6毫米),其次是醋酮提取的r . serpentina(21.3毫米)。
为r . mucilaginosa(KC67409) DIZ 9提取物(22.5%)的值范围从13.3毫米到25.3毫米(表2)。31提取物(77.5%)没有显示出抑制活动。Ethanolic提取的c . asiatica显示最强的抑制活性(DIZ = 20.6毫米),其次是methanolic提取的t·阿诸那(19.3毫米)。
这两个模具测试,答:flavus菌丝的抑制百分比8提取物(20%)变化从20.6毫米到26.3毫米。九提取物(22.5%)低抑制活动(菌丝的抑制百分比介于11.6毫米和19.3毫米)。其他23提取物(57.5%)没有显示出抑制活动。Ethanolic提取的c . asiatica表现出最强的antimould活动(菌丝的抑制百分比= 26.3毫米),其次是methanolic提取的c . asiatica和t·阿诸那(24.6毫米)。为p . citrinum8提取物表现出高抑制活性(菌丝的抑制百分比= 19.6 mm - 24.3 mm)和九提取物具有抑制活动(菌丝的抑制百分比介于10.3毫米和19.3毫米),而其他23提取没有抑制活性。Methanolic提取的c . asiatica(24.3毫米)显示,抑制活性最强,其次是ethanolic提取的c . asiatica和w . somnifera(23.3毫米)。
文献检索了在体外和在活的有机体内植物提取物的抗菌活动和精油对食源性病原体但很难比较由于使用不同的提取方法,溶剂、微生物菌株,抗菌测试方法(3,5,16,17,39,40]。在目前的分析,4植物,c . asiatica,大肠officinalis,薄荷,t·阿诸那微生物,表现出广谱活性测试。目前的结果符合前面的观察工人(5- - - - - -7,15- - - - - -17,41,42]。Methanolic和ethanolic提取的c . asiatica表现出最大抑制区对所有测试微生物在目前的调查。抗菌药物的潜力c . asiatica观察了Arumugam et al。43)的一项研究中检查的抗菌疗效c . asiatica对b的仙人掌,金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌在四个不同的溶剂如甲醇、氯仿、水和丙酮和他们发现methanolic提取的c . asiatica叶子在50的浓度μ克每毫升显示活动(毫米)24日对所有微生物测试。的抗菌功效c . asiatica是由于萜类化合物的存在44]。醋酮的提取t·阿诸那显示最大抑制区(16-28毫米)年代。葡萄球菌,不动杆菌,铜绿假单胞菌,变形杆菌相比其他提取物(methanolic、ethanolic和水提取);然而,所有提取缺少活动白色念珠菌(32]。在目前的调查,methanolic和ethanolic提取物t·阿诸那表现出抗菌活性对所有测试微生物由于黄酮类化合物的存在(毛地黄黄酮)45,46]。
Ethanolic提取的大肠officinalis叶子显示更多的活动铜绿假单胞菌,变形杆菌,金黄色葡萄球菌,b的仙人掌相比ethanolic提取的薄荷叶子在100毫克/毫升的浓度47]。然而,在目前的调查,ethanolic提取的薄荷相比呈现出更多的活动大肠officinalisethanolic提取在100毫克/毫升的浓度。抗菌药物的潜力E。officinalis和米。薄荷是由于hydrolysable单宁和薄荷醇的存在,分别为(48]。尽管如此,在当前的调查,r . serpentina和w . somnifera显示抗菌和antimould活动但缺乏antiyeast活动,几个作者确认抗菌和抗真菌的潜力w . somnifera和r . serpentina(31日,33,49,50]。
Sunilson et al。15观察到的抗菌活性c·巴隆和z officinalis在四种不同溶剂(石油醚、氯仿、甲醇和水)对食源性病原体。溶剂提取的c·巴隆和z officinalis显示抗菌和antiyeast活动;然而,在目前的调查,c·巴隆和z officinalis具有抗菌活性。
从植物中提取生物活性复合材料在很大程度上是依赖于溶剂提取过程中使用的类型。目前的研究显示,有机提取物提供了更强大的比水提取物抗菌活性。中有机提取物,酒精提取物显示最好的抗菌活性与醋酮提取(表2),从而取代工人认为早些时候的发现甲醇和乙醇提取的最佳溶剂抗菌化合物从植物其次是丙酮和水5,15,16,25]。几个化合物、单宁、黄酮、香豆素thiosulfinates,芥子油和皂甙,孤立的从这些植物次生代谢物负责抗菌和药用植物的属性(2,3,8,17]。
3.2。敏感性测试的五个微生物
b的仙人掌,沙雷氏菌属,r . mucilaginosa,答:flavus,p . citrinum揭示不同敏感性的40个测试提取(表2)。关于b的仙人掌34提取物显示,抑制活性和16提取没有活动。在的情况下沙雷氏菌属,25日提取显示抑制活动和15提取物显示没有活动。r . mucilaginosa是最耐药微生物的测试。九提取物表现出抑制活性和31日提取没有抑制活性。对两个模具(17提取显示抑制活性答:flavus和p . citrinum)。基于植物提取物的抑制活性,革兰氏阳性细菌b的仙人掌展示更多的敏感性比革兰氏阴性细菌和真菌提取物。目前发现的结果是一致的工人早些时候报道说,植物提取物对革兰氏阳性细菌比针对革兰氏阴性细菌更活跃(3,5,16,17,48,51- - - - - -53]。这是归因于不同的革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌的外层。革兰氏阴性细菌拥有一个外膜和一个独特的细胞周质间隙没有找到在革兰氏阳性细菌5,54,55]。
3.3。确定最低抑制浓度
31日的最低抑制浓度测定活性植物提取物,显示对微生物的抗菌活性与果汁(表相关联3)。麦克风31日活跃的植物提取物显示麦克风范围3.12毫克/毫升至50毫克/毫升的有机提取物和25至50毫克/毫升的水提取物。当比较的麦克风值测试植物,ethanolic提取c . asiatica似乎是最有效的最低抑制浓度为3.15 mg / mLb的仙人掌。Methanolic提取的c . asiatica,薄荷,r . serpentina是第二个最有效的植物提取物6.25毫克/毫升的麦克风。许多植物提取物显示麦克风在25 - 50毫克/毫升的范围,从而更有效对抗微生物分离出果汁。它已经建立,麦克风结果并不总是相关的值那个开荒者看起来蛮不错嘛,但在目前的调查,观察麦克风与DIZ值可能是由于采用纸片扩散试验对抗菌活性和麦克风测定植物提取物(16]。类似的结果不同植物在不同溶剂的麦克风所观察到的几位作者对不同微生物3,5,9- - - - - -13,16,56,57]。
4所示。结论
现在工作的结果,所有的植物提取物具有抗菌活性测试对选定的微生物与果汁。酒精提取等中药材c . asiatica阿诸那,r . serpentina显示抗菌活性优于化学防腐剂苯甲酸钠;因此这些植物提取物有可能延长保质期或他们在果汁作为天然防腐剂。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
承认
作者感谢Kurukshetra大学Kurukshetra,为金融援助。