亮氨酸、二甲双胍,西地那非治疗非酒精性脂肪肝疾病和性脂肪肝小鼠

文摘

Sirt1, AMPK,以挪士调节肝脏能量代谢和炎症发展的关键球员纳什。变构Sirt1激活L-leucine,加强与低剂量的二甲双胍或西地那非AMPK-eNOS-Sirt1通路反向温和的非酒精性脂肪肝的临床前小鼠模型。我们测试了一个可能的多组分协同作用能产生更多的治疗效果在非酒精性脂肪肝/纳什。肝细胞和巨噬细胞或粥样硬化饮食诱导纳什小鼠模型是处理双向和三向组合。三方组合Sild-Met-Leu增加肝脂肪酸氧化和减少脂肪生成的基因表达和炎症标记在体外。在老鼠身上,Sild-Met-Leu降低ALT的饮食诱导增加,TGFβ、PAI-1摘要意思β,肿瘤坏死因子α、肝胶原蛋白表达和几乎完全逆转肝细胞膨胀和甘油三酯积累,而所有双向组合只有温和的影响。因此,这些数据提供临床证据的治疗效果Sild-Met-Leu治疗非酒精性脂肪肝和纳什。

1。介绍

非酒精性脂肪肝炎,进步形式的非酒精性脂肪肝病(NAFLD),特点是存在的微小脂肪> 5%,炎症和肝细胞膨胀(1]。其患病率增加与肥胖和糖尿病的发病率,因此代表了一个严重的公共卫生问题2,3]。约30 - 40%的纳什肝纤维化或肝硬化进展,导致高风险心血管和liver-related发病率和死亡率(3]。然而,目前仅限于生活方式干预治疗,批准治疗方案缺乏和代表着重大的未满足的需求。

Sirt1酶和AMPK能量代谢有重要的调控作用,调节肝葡萄糖和脂质代谢。此外,Sirt1调节等多种炎症通路NF -κB和肿瘤坏死因子α(2]。因此他们发挥重要作用在非酒精性脂肪肝的病理生理学和纳什2,4,5]。肝脏特异性删除Sirt1的结果在小鼠的肝脂肪变性和炎症6],而治疗Sirt1活化剂或Sirt1的超表达改善脂肪肝和减少脂肪生成的基因表达(5,7]。

我们以前证明亮氨酸充当直接Sirt1激活剂通过降低活化能河畔⁺并与其他AMPK /使coactivation Sirt1激活物从而减少必要的浓度为每个单独的化合物(8,9]。协同与亮氨酸也表明二甲双胍(遇到),糖尿病的一线治疗药物,效果也由合并AMPK / Sirt1通路(10,11]。因此,治疗Met-Leu组合导致减少脂质积累在体外和肝脂肪变性的逆转在活的有机体内在HFD-induced非酒精性脂肪肝小鼠模型(12]。

内皮一氧化氮合酶、一氧化氮和环鸟苷酸(eNOS-NO-cGMP)信号通路也已被证明能够影响非酒精性脂肪肝,纳什的进展。减少高脂肪饮食喂养eNOS-NO信号在非酒精性脂肪肝模型小鼠和大鼠的肝脏。这是先例肝脏炎症和胰岛素抵抗的发生和预防了西地那非的日常管理13,14]。

西地那非的主要作用是抑制磷酸二酯酶5 (PDE5)水解cGMP,从而终止cGMP信号。此外,西地那非激活以挪士导致增加NO / cGMP信号cGMP-dependent连续激活的蛋白激酶(pkg)诱导血管扩张性、抗炎和抗增殖效果(15- - - - - -18]。

这个途径也与sirtuin蛋白交互途径,因为它刺激Sirt1,虽然Sirt1似乎脱去乙酰基并激活以挪士,从而提升水平;因此,西地那非的影响可能是由Sirt1激活(17,19- - - - - -21]。此外,亮氨酸加强PDE5抑制剂对放大AMPK和Sirt1激活下游的影响葡萄糖和脂肪代谢以及逆转肝脂肪变性和炎症在体外和在活的有机体内(22]。因此,本研究的目的是评估的影响三方互动亮氨酸,二甲双胍,西地那非AMPK Sirt1 /以挪士对肝细胞代谢途径和保护作用在纳什小鼠模型。

2。方法

2.1。细胞培养

人类肝癌HepG2细胞(写明ATCC,马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国)是生长在杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM, 5.5毫米葡萄糖)含10%胎牛血清的边后卫和抗生素在37°C (penicillin-streptomycin 1%) 5%的股份有限公司₂在空气中。鼠标AML-12肝细胞(写明ATCC马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国)种植和维护在1:1的混合物DMEM和火腿的F12培养基为0.005毫克/毫升胰岛素,转铁蛋白0.005毫克/毫升、5 ng / mL硒、40 ng·毫升地塞米松,10%的边后卫,抗生素在37°C (1% penicillin-streptomycin) 5%的股份有限公司₂在空气中。老鼠生264.7巨噬细胞(写明ATCC马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国)种植和维护在含10%胎牛血清的DMEM(的边后卫)和抗生素(1% penicillin-streptomycin) 37°C的5%股份₂在空气中。媒体取代新鲜中每2到3天。在1:细胞分裂4比70年80%的融合。

HepG2细胞脂质积累被孵化25毫米葡萄糖诱导DMEM媒体48小时。AML-12细胞脂质积累和炎症反应和生264.7与500年巨噬细胞被刺激诱导μ游离脂肪酸(FFA、palmitic-oleic酸混合物1:2)和脂多糖(LPS 1 ng / mL)为24小时。

治疗(二甲双胍0.1毫米、亮氨酸0.5毫米和西地那非1海里)为进一步增加了24至48小时。

2.2。Coculture

鼠标AML-12肝细胞和原始264.7巨噬细胞被播种在一起比4:1。第二天,脂质积累和刺激引起的炎症反应是500μ游离脂肪酸(palmitic-oleic酸混合物1:2)和有限合伙人(1 ng / mL) 24小时。细胞被视为表示为24小时。

2.3。MCP1和肿瘤坏死因子α测量在媒体

AML-12和/或原始264.7巨噬细胞被播种,如上所述。在治疗结束时,媒体是收获。单核细胞趋化蛋白- 1 (MCP)和肿瘤坏死因子(TNF)α分泌测定MCP1鼠标酶联免疫试剂盒和tnf鼠标酶联免疫试剂盒(Abcam、剑桥、马、美国),分别根据制造商的指示。

2.4。免疫印迹

Sirt1 phospho-AMPK (Thr172), AMPK, FAS, SCD1 PPAR -α,PPARδSREBP1, TNF -α抗体得到从细胞信号(丹弗斯,MA)。蛋白水平的细胞提取物被bicinchoninic酸试验(BCA)测量设备(热费希尔科学Inc .,沃尔瑟姆,MA)。免疫印迹,10 - 50μg蛋白在4 - 15%解决梯度聚丙烯酰胺凝胶(标准预制凝胶,Bio-Rad实验室、大力神,CA),转移到PVDF膜或硝基,孵化阻碍缓冲(TBS) 5%的脱脂奶粉,然后孵化主要抗体(1:1000稀释),水洗,与辣根过氧化物酶-孵化或fluorescence-conjugated二级抗体(1:10000稀释)。可视化进行了使用Li-COR奥德赛Fc成像系统(Li-COR生物科学、林肯、NB)和带强度评估使用数量(Bio-Rad实验室、大力神、CA)、背景校正和加载控制。

2.5。脂肪酸氧化

细胞耗氧量测量使用海马生物科学XF24分析仪(海马生物科学、Billerica, MA)在24-well盘子37°C。HepG2细胞被播种在40000细胞/。引起脂质积累是48小时孵化与葡萄糖25毫米。细胞治疗与暗示治疗24小时,洗两次与nonbuffered carbonate-free pH值7.4低葡萄糖(2.5毫米)DMEM包含肉碱(0.5毫米),平衡与550年μL non-CO相同的媒体₂孵化器30分钟,然后插入仪器进一步平衡的15分钟。O₂消费在连续三基线测量在测量前八分钟间隔注射棕榈酸酯(200μ米决赛浓度)。Post-palmitate-injection在3小时内测量周期组成的10分钟休息和三个连续测量O₂消费。曲线下的面积计算。

2.6。动物和饮食

六到八周大的雄性C57BL / 6 j小鼠从杰克逊实验室购买。第一纳什是所有动物中诱导(低脂肪饮食控制动物(低频)除外)通过喂养高脂肪硬化的饮食(HC: 60%的热量来自脂肪,1.25%胆固醇、胆盐和0.5%)6周。此诱导期后,在HC动物随机分为下列组动物10 /组之一,继续他们的实验饮食额外6周(12周总):高脂肪粥样硬化饮食(HC);HC +西地那非(25毫克/公斤食物,人类等效剂量的计算为1毫克/天)(HC +银);HC +亮氨酸(24 g / kg饮食)+西地那非(HC +低浓缩铀+银);HC +亮氨酸+二甲双胍(0.25克/公斤食物,计算作为一个人类等效剂量250毫克/天(HC +低浓缩铀+满足);HC +二甲双胍+西地那非(HC +了+银);HC +亮氨酸+二甲双胍+西地那非(HC +低浓缩铀+了+银)。如果动物继续他们的饮食一个额外的6周。

动物被安置在聚丙烯笼子的室温22°C和12 h光/暗周期。动物们可以免费获得水及其实验食物在整个实验过程。每周体重测量。结束的时候治疗期(6周)所有动物人道安乐死有有限公司₂吸入。收集血液收集通过鼻子出血和组织为进一步实验如下所述。

本研究和所有动物程序进行机构的赞助下动物保健和使用委员会批准协议按照小灵通的乔治亚州立大学和政策指导和建议。

2.7。肝脏组织学

肝脏组织在中性10%福尔马林固定,石蜡嵌入式,切成5µ米的部分。部分处理的苏木精和伊红染色())和组织学图像记录使用尼康Eclipse E800与蔡司显微镜AxioCam相机。

2.8。肝脏甘油三酯的测量

肝脏脂质进行了提取与少量修改(如前所述23]。短暂,~ 100毫克的肝脏被解冻,剁碎,玻璃管的加权。2:1中脂质提取CHCl₃/甲醇室温下过夜。脂质部分当时干下N₂和重新溶解测量体积的2:1 CHCl₃/甲醇。稀释硫酸添加到样本,当时涡和离心机分裂阶段。水上层阶段是吸气和丢弃,整除的底部阶段是干下来,溶解在2% Triton x - 100。甘油三酸酯含量是衡量使用TG工具包/ l型TG M(美国Wako化学品)和归一化肝重量。

2.9。ALT测定

血清ALT水平以老鼠的饮食治疗4周后用鼠标从BioVision ALT酶联免疫试剂盒。

2.10。肝脏CD68和胶原蛋白染色

肝脏组织在中性10%福尔马林固定,石蜡嵌入式,切成5µ米的部分。炎症免疫染色,幻灯片和CD68免疫印迹(1957年Bio-Rad MCA)作为主要抗体和Biotin-SP-AffiniPure鼠标Anti-Rat二级抗体免疫球蛋白。其次是immunoperoxidase技术的应用与向量工具包。染色与ImageJ量化和表示为百分数的区域。肝纤维化Picro天狼星红染色,幻灯片是脱蜡和水化,Weigert苏木精染色8分钟,Picro-Sirius红(Picro天狼星红染色设备,Abcam,猫# ab150681)染色一小时。酸化水清洗应用。幻灯片脱水三个变化100%乙醇和清除在二甲苯和安装在树脂中。所有的组织学图像记录使用尼康Eclipse E800与蔡司显微镜AxioCam相机。染色与ImageJ量化和表示为百分数的区域。

2.11。基因表达

2.11.1。在体外数据

细胞生长在96孔板。细胞溶菌作用、逆转录和rt - pcr进行使用TaqMan®基因表达细胞™工具(生活技术,猫# 4399002)根据制造商的指示。基因表达是评估通过rt - PCR使用StepOnePlus™PCR系统(热费希尔科学)和TaqMan基因表达分析,AMPK(生活技术,猫# Mm01264789)和Sirt1(生活技术,猫# Mm01168521)。

2.11.2。在活的有机体内数据

肝脏的总RNA提取使用Tri-Reagent工具包(分子研究中心,辛辛那提,哦)和基因表达进行定量逆转录- PCR (RT -) (ABI普遍PCR主结构,应用生物系统公司,促进城市,CA)使用Stratagene Mx3000p thermocycler (Stratagene拉霍亚,CA)。还有用于标准化的基因表达数据。中使用的引物和探针集化验从应用生物系统公司购买/生命技术(大岛,纽约)。

2.12。统计分析

所有数据都表示为±SEM。单向方差分析,分析的数据和明显不同组手段()被最小显著差分离测试使用GraphPad棱镜version 6(美国加州La Jolla GraphPad软件,www.graphpad.com)。

3所示。结果

基于我们之前的结果在体外和在活的有机体内显示亮氨酸的交互影响与低剂量二甲双胍或PDE5抑制剂(icariin,西地那非)肝脂质代谢,在这项研究中我们测试了亮氨酸的三方互动,二甲双胍,西地那非。正如所预料的那样,孵化HepG2细胞高葡萄糖(25毫米)中48小时AMPK /衬衫的差别显著对这些信号引起的。这完全逆转了三方组合Sild-Met-Leu而Met-Leu双向组合和Sild-Leu产生了重大影响较小(数字1(一)和1 (b))。单个组件没有影响。因此,palmitate-induced HepG2细胞耗氧率,测量下游Sirt1 / AMPK活化的影响,显著增加了三方组合。这种效应大于施加的双向组合或单个化合物,这没有影响(图1 (c))。此外,基因和蛋白质表达的脂肪生成的酶(FAS, SCD1和ACCα),2 - 3重的调节与高葡萄糖中孵化后,被Sild-Met-Leu显著抑制(图2)。此外,高葡萄糖诱导增加SREBP1,脂质合成的关键转录因子,被Sild-Met-Leu逆转(图3 (c))。相比之下,PPARα和三角洲,转录因子调节脂肪酸氧化,增强了Sild-Met-Leu(数字3(一个)和3 (b))。此外,Sild-Met-Leu治疗显著降低的比率phospho-NF -κNF - BκB,表明减少炎症反应(图3 (d))。

接下来我们测试这些影响是否可以重复使用不同的诱导方案和不同的肝细胞细胞系。诱导脂质积累与FFA和有限合伙人有类似影响Sirt1, AMPK信号HepG2细胞治疗高葡萄糖(数据未显示)。此外,治疗Sild-Met-Leu Sirt1在鼠标AML-12肝细胞蛋白表达增加,减少脂肪生成的蛋白质的表达SREBP1, SCD1, FAS HepG2细胞类似于我们的观察(数据没有显示)。这些治疗效果并不显著变化所引起的细胞生存能力(数据未显示)。

自激活巨噬细胞NASH的发病机制中起着重要的作用,我们用小鼠肝细胞(AML 12细胞)和老鼠巨噬细胞(264.7原始细胞)作为一个在体外纳什的典范。诱导脂质积累和炎症反应,细胞生长单独或与游离脂肪酸coculture和刺激(十八烯/棕榈酸的混合物)和/或有限合伙人。刺激与有限合伙人和FFA减少coculture PPARα和三角洲(数字4(一)和4 (b))和治疗Sild-Met-Leu推翻了这种效应。Sild-Met-Leu也增加了PPARα和三角洲的巨噬细胞(数字4 (c)和4 (d)),而只有一个趋势(增加27%)PPAR三角洲和PPARα(数据没有影响4 (e)和4 (f))在AML的12个细胞。分泌的炎症介质MCP-1增加与FFA刺激的细胞后,有限合伙人,或结合FFA和有限合伙人。Sild-Met-Leu完全推翻了这种效应在AML的12个细胞和AML /原始coculture(数据5(一个)和5 (b))。Sild-Met-Leu phospho-NF——的比例也减少了κ总NF - B /κB在AML 12细胞正常控制水平。然而,原始的巨噬细胞的比率并没有改变,因为Sild-Met-Leu减少两个,道达尔和phospho-NF -κB(数据5 (c)和5 (d))。此外,FFA和LPS诱导肿瘤坏死因子α分泌和蛋白表达显著减少了Sild-Met-Leu原始巨噬细胞(数字5 (e)和5 (f))。

基于在体外数据,我们评估了在活的有机体内影响Sild-Met-Leu与Met-Leu相比,Met-Sild和Sild-Leu纳什小鼠模型。喂食高脂肪的粥样硬化饮食(HC)肝脏重量增加,肝脏甘油三酯和ALT水平(6倍),显示明显的肝细胞损伤,在治疗Sild-Met-Leu组合大大削弱了这些影响。虽然双向组合和西地那非对ALT水平本身有一些影响,三方组合产生了很大的影响相比,所有其他组(图6)。组织学染色证实脂滴明显增加和膨胀引起的肝细胞HC饮食相比,低脂饮食控制。而减弱这些影响双向组合,三重组合Sild-Met-Leu大幅逆转肝病(图7(一))。此外,Met-Leu和Sild-Met-Leu PPARα表达增加肝脏双重(图7 (b)),符合激活肝脂肪酸氧化。评估肝脏的炎症水平,部分肝和CD68染色。HC饮食增加6倍CD68染色在肝脏引起的部分,代表一个大幅增加枯氏细胞激活(图8)。所有双向组合明显减弱这种影响,只有三方组合完全逆转水平不显著不同于低脂喂养动物(图8)。与此一致的是,炎症标记物,如摘要意思β,tnf, MCP-1,和PAI-1被Sild-Met-Leu降至正常水平,但不是由双向组合(图9)。接下来,我们通过小天狼星红染色评估肝纤维化的部分。增加纤维HC饮食引发的变化被Sild-Met-Leu大幅逆转,在较小程度上的双向组合(图10)。按照这个,纤维化标志物Col1a1基因表达式,Col1a2, Col4a1,鉴定及Sild-Met-Leu下降到正常水平,但只有部分减少Met-Leu和Sild-Met(图11)。

4所示。讨论

我们的数据表明,亮氨酸的三重组合,二甲双胍,和西地那非大大退化肝脂肪变性、炎症、纤维化和比双向组合施加更大的影响,表明这种组合可能提供一个新的治疗方法来治疗纳什。

纳什的病理生理学的发展被认为是一个“支安打的过程,”在多个环境,饮食,和遗传因素与人交流24]。过剩的脂质在肝脏的积累被认为是第一步,后续事件的先决条件,导致发展从简单的脂肪变性到纳什的严重形式在非酒精性脂肪肝患者的30%左右。在其他因素导致纳什的发展,炎症中起着重要作用[25]。慢性损伤肝细胞或肝细胞死亡由于过量的游离脂肪酸涌入导致常驻巨噬细胞激活(枯氏细胞)以及其他浸润的单核细胞和巨噬细胞释放促炎细胞因子,包括TNF -α、il - 1β和il - 6, profibrogenic TGF -等因素β进而导致激活肝星状细胞和纤维化进展(26,27]。

三方组合Leu-Met-Sild目标AMPK-Sirt1-eNOS网络,如图12。AMPK, Sirt1,以挪士肝的关键调节能量和脂质代谢,以及炎症、氧化应激、细胞增殖、关键因素简单的非酒精性脂肪肝纳什和肝纤维化的进展(2,14,28,29日]。Downregulation衬衫,AMPK,或以挪士促进纳什的进展,而激活这个网络可以改善肝脂肪变性和炎症。例如,eNOS-knockout高脂肪饮食的老鼠显示更广泛的比野生型小鼠肝脂质积累和炎症(30.),白藜芦醇治疗,一个已知的Sirt1 AMPK活化剂,预防和逆转脂质积累,氧化应激和炎症在体外和在活的有机体内(31日,32]。我们发现的三重组合Sild-Met-Leu上调AMPK和Sirt1增加palmitate-stimulated氧气消耗和减少脂肪生成的基因的表达如FAS, ACC, SCD1 HepG2细胞。此外,治疗Sild-Met-Leu降低肝脏甘油三酯和逆转HFD-induced脂肪变性的小鼠,纳什发展的前提条件。此外,我们将展示一种减少炎症标记物在体外和在活的有机体内以及规范化的CD68在肝脏样本染色,单核细胞和巨噬细胞表达的一个标志。这也是对F4/80重复标记在后续老鼠研究(数据未显示),其中F4/80被Sild-Met-Leu喂养水平不降低40%统计不同控制低脂喂养动物。因此,三重组合也极大地提高了炎症,为推动发展的关键因素之一。支持这一点,HC-induced纤维化完全逆转通过与Sild-Met-Leu补充,由天狼星红阳性面积的百分比表示肝脏。

AMPK和肝代谢Sirt1是众所周知的监管机构。然而,有越来越多的证据,以挪士和NO / cGMP信号发展的肝脂肪变性、炎症和纤维化进展(14,30.]。肝脏是一个高度血管组织和eNOS-derived没有从正弦内皮细胞(SEC)调节血管阻力,增殖,迁移,以及施加对邻星状细胞旁分泌的影响。作为第一个细胞暴露于门静脉组件和细菌脂多糖(LPS)来自肠道,秒可以发生戏剧性的表型的变化,可以引起炎症和肝星状细胞激活(33]。以挪士是表达交会起来从而没有在维护中扮演着关键角色的生理表型秒和星状细胞14,34]。非酒精性脂肪肝与减少以挪士激活(35]。此外,内皮功能障碍和降低生产之前发现了炎症和纤维化在非酒精性脂肪肝大鼠模型(13]。相比之下,激活以挪士以及增加生产改善NASH-related肝纤维化的进展(36,37]。我们之前证明Met-Leu组合在AMPK信号的放大效应和降低肝脂肪变性DIO-mice [12]。同样,亮氨酸PDE5抑制剂,淫羊藿)浓度(西地那非,增加脂肪代谢,降低肝脂质积累在DIO-mice增加生产除了AMPK / Sirt1激活,表明PDE5抑制剂的行动收敛这个途径(8,22]。在这项研究中,我们证明Sild-Met-Leu组合施加更大的影响比Met-Leu或Sild-Leu炎症和纤维发生的参数组合,表明以挪士/不/ cGMP通路的刺激可能导致额外的影响AMPK / Sirt1的信号。

的过氧物酶体proliferator-activated受体(PPAR)α和三角洲转录因子精细调节能量通量和代谢途径38]。PPAR -α肝脏中高度表达,调节脂肪酸分解代谢和脂肪生成,以应对营养需求。PPAR -α缺乏小鼠发展更严重的肝脂肪变性、炎症和纳什当美联储HFD与野生型小鼠相比(39,40),而政府的PPAR -α受体激动剂逆转肝脂肪变性和纤维化41,42]。PPAR -δ持续表达和调节的吗β在肌肉氧化。在肝脏,它控制肝葡萄糖和脂蛋白代谢,发挥抗炎作用38,43]。PPAR -有益的影响δ受体激动剂在改善肝脂肪变性和炎症在小鼠模型已报告的纳什44]。三方组合的研究表明重大upregulation PPAR -α和- - - - - -δ在体外和PPAR -α在老鼠的肝脏。这可能是一种间接治疗效果中等AMPK / Sirt1的刺激,因为AMPK和Sirt1 PPAR -交互α和- - - - - -δ(6,45,46]。

我们最近演示了Met-Leu组合的功效和亮氨酸的结合,淫羊藿在减少浓度PDE5抑制剂肝脂质积累和炎症在HFD-induced非酒精性脂肪肝小鼠模型(12,22]。在这项研究中,我们使用高脂肪硬化的饮食(60%的脂肪、胆固醇1.25%和0.5%胆盐)诱发更严重形式的纳什,这个饮食诱发肝胰岛素抵抗,进步的脂肪变性、炎症、纤维化和6到24周,模仿人类疾病病理(47]。在这项研究中使用的动物发明了一种重要的脂肪变性~ 7倍增加肝脏甘油三酯,肝脏炎症和纤维化在12周的研究中,这是与其他研究使用这种形式的饮食诱导纳什(48- - - - - -50]。

这项研究有一些局限性。我们使用不同形式的诱导的脂质积累HepG2(高葡萄糖)和AML细胞(高浓度的FFA),这限制了这些细胞系之间比较结果的能力。此外,与FFA AML和原始细胞被刺激,有限合伙人,或两者的结合在不同实验中,尽管我们显示在图3(一个)有类似的效果。最后,并不是所有的在体外参数测量在活的有机体内由于有限的可用性和自组织我们已经演示了AMPK / Sirt1激活之前的双向组合在老鼠身上的研究(12,22]。

总之,我们将演示的有利影响三方组合Sild-Met-Leu肝脂肪变性的逆转,炎症和纤维化纳什小鼠模型,所有三个组件对于最大效应是必要的。这些影响是由针对AMPK / Sirt1 /以挪士网络从多个网站,每个贡献一个温和的效果总体结果,总结在图12。这种方法允许大量剂量减少每个化合物浓度,已很少或根本没有独立对测量结果的影响。因此,单个化合物的相关副作用的风险就会下降。基于AMPK / Sirt1的关键作用在肝脏代谢和以挪士网络这种动物的研究的有前景的结果,Sild-Met-Leu组合提供了一个新的治疗方法来治疗非酒精性脂肪肝和纳什。

缩写

以挪士:	内皮细胞一氧化氮合酶
没有:	一氧化氮
GMP:	鸟苷酸
cGMP:	环鸟苷酸
国网公司:	可溶性鸟苷酸环化酶
包裹:	cGMP-dependent蛋白激酶
PDE5:	磷酸二酯酶5。

信息披露

投资者没有参与数据收集和分析,但参与研究设计,决定发表,和准备的手稿。

相互竞争的利益

Antje Bruckbauer、Jheelam Banerjee和迈克尔·b·泽梅尔是NuSirt生物制药公司的员工和股东。Antje Bruckbauer和迈克尔·b·泽梅尔也有专利报道相关工作。其他作者所宣称不存在利益冲突。

确认

NuSirt生物制药公司提供的金融支持。http://nusirt.com)。施Bingzhong雪和挂接到NuSirt基金生物制药进行动物研究。

引用

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