研究文章
复发性CHEK2作为新的易感性基因的种系突变患者嗜铬细胞瘤和副神经节瘤
表1
PCR引物四CHEK2遗传突变。
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(a) PCR扩增外显子2的条件,6日,基因内区9如下:predenaturation 5分钟在95°C,变性在95°C 30年代,退火54°C / 52°C / 64°C 30年代,和扩展在40年代的72°C。总共35周期进行,最终在72°C扩展了10分钟。(b)嵌套PCR扩增外显子11的条件如下:(1)远程PCR: predenaturation 5分钟在98°C,变性在95°C 30年代,30年代退火在68°C,在72°C扩展为3分钟。总共35周期进行,最终在72°C扩展了10分钟。产品远程PCR被用作模板来使用相应的寡核苷酸引物扩增外显子11。(2)与接地PCR扩增PCR的条件如下:predenaturation 5分钟在95°C,变性在95°C 30年代,退火在64°C 1分钟(每周期下降了0.5°C),在72°C和扩展了40年代在9周期,,接下来,predenaturation 5分钟在95°C,变性在95°C 30年代,退火60°C 1分钟,在72°C和扩展了40年代在25个周期。共有34个循环进行,最终在72°C扩展了10分钟。(c) PCR产品确定1.5%琼脂糖凝胶电泳和发送到北京SinoGenoMax公司净化和测序。序列是由ABI 3730 xl的乐器。 |
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