研究文章
拉一个连接酶的“帽子”:pCAF协调二级反式激活因子的泛素化
图6
pCAF增强CIITA泛素化的乙酰化零突变体。零CIITA突变体(a)乙酰化水平的增加使下降的泛素化在pCAF的存在。在活的有机体内泛素化分析。因为细胞与Flag-K141R cotransfected、K144R K141/144R CIITA,和Myc-pCAF。18个小时转染后,MG132被添加到显示样品为了抑制26 s蛋白酶体。收获细胞,细胞溶解、事先批准,免疫沉淀反应anti-Flag抗体(巷2 -控制,免疫沉淀反应与免疫球蛋白)。西方墨迹图进行免疫沉淀反应样本使用antiubiquitin抗体免疫印迹。溶菌产物控件(底部两个面板)演示表达WT国旗CIITA, Flag-K141R, K144R K141/144R, Myc-pCAF。数据显示裁剪图像从一个免疫沉淀反应凝胶和一个溶菌产物凝胶和代表三个不同的实验。零突变体(b) CIITA乙酰化水平增加了K48具体链接泛素化pCAF的存在。15μL从相同的示例与anti-Flag抗体免疫沉淀反应和免疫印迹anti-K48特定泛素抗体。(c)测密度术(a)和量化数据。微进行三个独立的实验中,平均数±标准差,。(d)测密度术(b)和量化数据。微进行三个独立的实验中,平均数±标准差,。区域微密度分析选择从CIITA的分子量150 KDa以上的标签。
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