一个微核糖核酸连接人类黑色素细胞介导的过早衰老

文摘

最近的癌症基因组高通量测序鉴定致癌突变BRaf基因位点melanomagenesis的关键事件之一。正常细胞的活动BRaf是严格监管。功能基因突变与黑色素瘤中发现经常导致增强细胞存活和无限制的增长。的激活突变BRaf也会诱导细胞衰老。然而,致癌的机制BRaf诱发衰老障碍定义仍然不佳。小分子核糖核酸有监管职能向重要致癌基因的表达。在这里,我们表明,几个小分子核糖核酸的表达改变的致癌版本BRaf介绍了培养主要黑色素细胞,这些细胞经历细胞过早衰老。这些包括八个microrna的表达率显著刺激和三个压抑。虽然大多数诱导小分子核糖核酸的记录的负面影响细胞周期进展,压抑的小分子核糖核酸证明致癌功能之一。异位表达出这些诱导微衰老标记物的表达和诱导增长逮捕和初级黑色素细胞的衰老。综上所述,我们的研究结果表明,微rna表达率的变化可能在衰老引起的致癌发挥至关重要的作用BRaf。

1。介绍

不受监管的癌基因表达在癌症发展导致癌症细胞过早地开始衰老,gene-directed程序不可逆转地诱导细胞周期阻滞(1- - - - - -4]。第一次描述了在细胞培养(5),oncogene-induced衰老(OIS)已经得到证实在活的有机体内作为一个重要的机制,限制了许多肿瘤的恶性进展(3]。不受监管的癌基因蛋白促进衰老通过激活效应程控和致癌基因特定的通路。确定不同监管电路的OIS最近的进展,但仍有待学习(6]。癌症基因组的高通量测序鉴定BRaf激酶是最常见的突变(50 - 70%)在黑色素瘤(癌基因7]。大约90%的功能BRaf基因突变与谷氨酸(E)在600位置插入为缬氨酸(V) (7]。BRaf是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶功能直接上游下游的小GTPase Ras和MEK和ERK增殖作用的蛋白激酶(MAPK)级联。这种突变显著增加BRaf对MEK激酶活性,导致本构BRaf-MEK-ERK信号(7,8]。的BRaf功能需要Val Glu突变细胞生存能力,anchorage-independent增长和扩散阳性细胞研究和黑色素瘤细胞系在活的有机体内小鼠模型(9- - - - - -11]。此外,第一阶段临床试验的有效抑制剂激酶表明BRaf存在BRaf突变黑色素瘤高度依赖激酶活性(12]。除了它频繁出现在黑素瘤,也存在于82%的突变melanocytic痣衰老的经典标志(13]。重要的是,持续表达在人类黑色素细胞诱导过早衰老(13]。功能的突变BRaf可能会造成增长在痣被捕。事实上,在研究转基因小鼠模型,激活等位基因起着因果的作用在促进良性melanocytic增生在活的有机体内(14,15]。然而底层驱动机制介导黑色素细胞衰老仍未定义的。

小分子核糖核酸是小非编码RNA物种-核苷酸的关键功能在无数的生物过程(16- - - - - -19]。异常表达的小分子核糖核酸也报告了melanocytic痣(20.]。鉴于新兴重要作用的小分子核糖核酸在肿瘤发生和细胞循环逮捕,小分子核糖核酸可能起到关键作用全身的衰老在melanocytic痣。全身的衰老与多个组件需要转录的激活程序(21- - - - - -23]。的机制,不同的组件集成到一个协调一致的反应突变仍是未定义的。每个微目标~ 200信使rna分子(18]。因为他们的多向性的势,小分子核糖核酸有吸引力的候选人作为过早衰老的主监管机构转录程序。在这项研究中,由ectopically表达在主要的黑色素细胞,我们确定了8种不同的小分子核糖核酸的表达与功能BRaf的活动。时发现小分子核糖核酸,重要的是,两个单独表示,足以引起的原发性黑色素细胞过早衰老的缺失BRaf突变。

2。结果与讨论

确定假定的小分子核糖核酸参与OIS,我们发现小分子核糖核酸诱导在黑色素细胞使用集中pcr芯片系统,使评估52小分子核糖核酸(SABiosciences)。正如所料,表达在人类黑色素细胞诱导持续高水平的初级ERK1/2磷酸化(图1(一)促进经济增长被捕(图1(b))和衰老检测到senescence-associated的表达β牛乳糖(SA -β加)(图1(c))、Dec1 p16、p15, DcR2(数字1(一)和1(d))。在一个时间点检测衰老前,我们收集总RNA和丰富的小分子RNA作为推荐的制造商。丰富的小分子rna,这个系统的目的是检测成熟的微rna表达水平。每个微rna是量化的水平相对于四个小rna控制的水平。52小分子核糖核酸中,我们检查,13被显著诱导和三(miR-10b、-15 b和-16)极大地压抑了在初级黑色素细胞(数据没有显示)。随后,实时定量PCR(存在)是用于进一步检查的影响这些小分子核糖核酸的表达与特定的引物为每个单独的微rna。八的刺激在最初的13个屏幕被一直诱导2倍以上(图2)。根据记录的这些小分子核糖核酸的表达在临床melanocytic痣,我们选择四个深造20.,24,25]。

检查他们的因果作用在黑色素细胞细胞衰老,我们表示个人小分子核糖核酸主要人类皮肤黑色素细胞通过逆转录病毒转导。证实了小分子核糖核酸的表达与特定的引物(图中存在3(a))。个体的影响微表情五衰老标记物的表达由存在决定(数字3(b) -3(e))。四分之三的小分子核糖核酸测试有显著影响的表达至少衰老的标志之一。这些小分子核糖核酸是143年,34岁,29岁。虽然miR-34a的表达增加, DcR2,和Dec1成绩单,mir - 143的表达,或增加了29和DcR2成绩单(图3(c) -3(e))。直接调查他们的角色在细胞衰老,我们通过量化测量细胞增殖黑色素细胞表达的数量增殖标记蛋白质ki - 67由于mir - 143的表达,34岁,或29。表达mir - 143年或-34年而不是-29或-100年导致黑素细胞增殖减少以ki - 67增殖标记蛋白质的表达。重要的是,减少ki - 67的表达与SA -强烈的活动β加(图3(f))。

致癌BRaf诱导过早衰老与随之而来的黑色素细胞衰老标记物的表达,、Dec1 DcR2。此外,我们表明,致癌BRaf也显著增加mir - 143的表达,miR-34a, let-7c, miR-15a, miR-29a, mir - 100, mir - 181 a, mir - 181 d。由特定的沃森克里克碱基配对的种子区域之间在mRNA 3′UTR微rna和网站,每个微rna可能目标不同组的mRNA的监管。表达mir - 143、-34或-29年导致增加一些衰老标记的表达。因此可能的综合表达式确定小分子核糖核酸负责观察upregulation致癌的衰老标记BRaf表达黑色素细胞。

小分子核糖核酸所引起的BRaf功能突变,只有mir - 143年或-34年就足以促使增长逮捕和衰老时ectopically主黑色素细胞中表达。miR-34a负调节细胞周期G1 / S过渡细胞周期蛋白D1基因,细胞周期蛋白E2,到,CDK6和G1逮捕原因(26- - - - - -28)当人类初级二倍体成纤维细胞中表达。在人类癌症细胞,mir - 143是最著名的肿瘤抑制miR-RNAs之一,可直接抑制癌基因喀斯特翻译和阻止下游信号通路(29日]。恢复mir - 143表达抑制增殖和诱导细胞凋亡通过瞄准BCL2 [30.,31日]。在协议与这些研究中,我们表明,miR-34a或-143诱导人类黑色素细胞过早衰老在初级。异位表达miR-34a表达增加,、Dec1 DcR2。不像miR-34a, mir - 143只的表达增加和DcR2。自-143年miR-34a和衰老引起的表达,它可以推断的表达式或Dec1不是必不可少的致癌BRaf-mediated过早衰老。想法一致的存在之前也发现不需要功能衰老引起的吗BRaf黑色素细胞的突变(13]。目前不清楚这mrna, miR-34a或-143年镇压在黑色素细胞的目标,也不知道致癌BRaf引发他们的表情。

针对不同子集的基因调控,小分子核糖核酸可以致癌基因或肿瘤抑制基因功能。正如预期的那样,所有确定诱导miR-RNAs肿瘤抑制功能。例如,miR-29,有三个家庭成员,负面影响着癌细胞生存直接针对mrna的调节亚基PI3激酶(p85a)和CDC42对监管。miR-29a也可以直接减少CDK6表达和引起G1 / S增长逮捕[32]。符合其肿瘤抑制作用,miR-29表达式是经常在多个癌症表达下调。然而尽管它证明作用在细胞周期调控,表达miR-29a不足以导致黑色素细胞衰老。可能需要miR-29a但不足以致癌BRaf全身的衰老。也有可能的影响在细胞周期进程cell-context miR-29a依赖。

我们的理由,如果微rna是机制的一部分,不同的组件集成到一个协调一致的反应突变,致癌的差别我们还应该观察对这些小分子核糖核酸。事实上,miR-10b,增加致癌基因的表达RhoC通过直接针对其转录阻遏HOXD10 [33),一直压抑在黑色素细胞窝藏突变。除了miR-10b外,我们还观察到的表达水平miR-15b和-16个表达下调。miR-15/16属于一群非常独特的小分子核糖核酸。miR-16有2个transcripts-one叫做miR-16-1位于染色体(杆)13和同样的成绩单miR-15a形成miR-15a / 16集群。其他miR-16 miR-16-2命名,连同miR-15b位于杆3 miR-15b / 16集群。有趣的是尽管miR-15b和16个表达下调,miR-15a调节黑色素细胞中表达。因为我们miR-16引物检测miR-16-1和成绩单到了它目前尚不清楚miR-16被致癌基因表达下调BRaf表达式。miR-15/16家族是已知的对细胞增殖有负面影响,针对各种cell-growth-associated基因mrna (34- - - - - -36]。因此miR-15b和-16年的差别不清楚为什么对这些被看好在黑色素细胞,衰老的。或者也有可能miR-5b / 16身份不明的致癌基因的目标。

尽管很明显,BRaf诱发衰老在黑色素细胞通过激活MEK和ERK的下游效应器细胞抑制剂效果仍有待确定(13,37]。介导的衰老也需要额外效应途径涉及一些免疫和生长介质如白细胞介素6、IL8, IGFBP7 [6]。然而,机制,整合不同的路径有一个坐标致癌刺激尚未定义。在这项研究中,我们确定了几个小分子核糖核酸的表达率受到致癌的刺激BRaf。四个microrna的表达诱导表达senescence-surrogate标记。其中,mir - 143年或-34年就可以诱导增长逮捕和衰老时主黑色素细胞中表达。

黑色素瘤是一种黑色素细胞和癌症是最致命的皮肤癌。转换的黑色素细胞恶性黑色素瘤是一个逐步的过程受突变的积累至关重要的生长和存活监管基因。良性的发展从黑色素细胞痣是第一个能被探测到的表型变化在正常的黑色素细胞恶性黑色素瘤的发展。研究小鼠模型已经证明的因果作用激活等位基因在促进良性melanocytic增生(14,15]。底层驱动机制转换的黑色素细胞癌前痣知之甚少。因为小分子核糖核酸有多个监管目标(18),我们的结果与这些小分子核糖核酸的表达在临床melanocytic痣(20.)强烈建议确定小分子核糖核酸可能发挥重要的协调作用BRaf -诱导衰老在melanocytic痣。可想而知,良性的痣转化成黑色素瘤的不受控制的增长之后的突变灭活致癌B-Raf-mediated衰老途径。全面了解致癌的BRaf诱导衰老的分子机制将使我们能够阐明驱动转换的黑色素细胞肿瘤出现前的痣和黑色素瘤。

3所示。材料和方法

3.1。细胞系和试剂

人类黑色素细胞级联生物制剂(波特兰,或美国)或耶鲁细胞培养核心设施。人类黑色素细胞种植在媒体254年增长补充剂(级联生物制剂)补充道。

3.2。质粒结构

逆转录病毒表达载体(miR-vec) mir - 100, miR-15a /启用以来,-181年是鲁文阿加密的一种礼物。microrna的小基因-29 a、-34 a、-143、-181 d, -15 b,和-15 b /是从人类基因组DNA, PCR amplifided取得下游miR-vec CMV启动子的克隆,序列验证。microrna的小基因克隆的引物如下:miR-29a转发:5′-gcGGATCCCTGGAACCAATCCCTCAAmiR-29a逆转:5′-gcGAATTCGCTCCTTTCCCATCATCTmiR-34a转发:5′-gcGGATCCGGCTGGTCTTGAACTCCTmiR-34a逆转:5′-gcGAATTCCACTGGCTACTATTCTCCCTA向前mir - 143: 5′-gcGGATCCTCAAGGTTTGGTCCTGGGTGmir - 143逆转:5′-gcGAATTCCGTGAAGCAGATCGTGGCmiR-15b转发:gcggatccAAGGGGATGATTATGAAGmiR-15b相反:gcgaattcAGTGGAACAAGTATGTCAGTmiR-15b向前/ 16:gcggatccGACTTGGACCATAATAGAmiR-15b / 16逆转:gcgaattcTAGGTGCTTAGGTAAATCmir - 181 d转发:gcggatccGACCGTTGAGTGGACCCmir - 181 d反转:gcgaattcTCCAGCCAGAGCCCATCC

3.3。隔离主要黑色素细胞的基因组DNA

10厘米培养盘subconfluent主要黑色素细胞被胰蛋白酶消化收获。胰蛋白酶随后中和和细胞被离心收集和PBS洗。洗cell-pellet是resuspended 1.2毫升细胞再悬浮缓冲(10毫米Tris-HCL, 10毫米氯化钠,1.5毫米MgCl₂通过上下轻轻吸量。细胞消化8毫升的蔗糖/蛋白酶K裂解缓冲(27%蔗糖1 xssc 1毫米EDTA, 1% sds, 200 ug /毫升蛋白酶K)一夜之间在37°C。第二天,消化细胞提取10毫升苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)和DNA异丙醇沉淀1卷。DNA溶解和提取酚/氯仿/异戊醇又紧随其后的是7.5米的沉淀与1/3体积醋酸铵(pH值7.4)。沉淀DNA用70%乙醇和溶解在TE (pH值7.4)。

3.4。SA-b-Galactosidase活动的分析

培养细胞的senescence-associated b-galactosidase活动与染色检测设备购买的细胞信号技术根据制造商的规格。

3.5。ki - 67染色

细胞被镀在laminin-coated封面(2020年L层粘连蛋白,σ)。48小时后,细胞被洗的PBS和固定的100%冷甲醇10分钟。固定细胞培养在屏蔽解决方案(0.1% BSA在PBS) 30分钟。主要抗体,200 - 300μL(1: 100块解决方案),具体ki - 67 (sc - 15402, Santa Cruz)被添加到每个封面和孵化一夜之间在4°C。主要antibody-stained细胞被洗3次3分钟每0.1% BSA-PBS阻塞的解决方案。洗细胞随后被孵化FITC-conjugated二级抗体(1:200稀释在屏蔽解决方案)在室温下1小时后跟一个洗屏蔽解决方案3分钟,两个PBS冲洗3分钟,两个与dH洗₂o .细胞核ki - 67与DAPI染色细胞可视化(4μ在dH g / mL₂O)染色10分钟。细胞与dH冲洗₂O两次安装到玻璃幻灯片DAKO荧光安装介质(DAKO s3032)。玻璃幻灯片干在5 - 10分钟。盖玻片的边缘被密封的指甲油抛光机和干的罩一个10 - 20分钟。

3.6。抗体

多克隆抗体BRaf来自北部(07 - 453)。的Phospho-p44/42 MAPK (Thr202 / Tyr204) (E10)鼠标马伯(编号为9106)和p44/42 MAP激酶抗体(9102)从细胞信号。Dec1 (s-8) (sc - 101023), p16 (JC8) (sc - 56330),和p15 (C-20) (sc - 612)抗体来自圣克鲁斯。DcR2多克隆抗体(aap - 371)从试验设计。单克隆抗α微管蛋白克隆B-5-1-2从σ(t - 5168)。

3.7。实时定量rt - pcr

细胞总RNA提取试剂盒的试剂(表达载体)和反向转录使用随机六聚物引物(应用生物系统公司)。由此产生的互补混合使用SYBR-Green大师PCR用于PCR(试剂盒)一式三份。PCR和数据收集进行ABI7500(应用生物系统公司)。β肌动蛋白、GAPDH和产生HPRT被用作内部标准。gene-specific引物如下:人类的好R: 5′猫广汽CTG GTC TTC标签棉酚GC-3′F: 5′ccc TCG TGC TGA TGC TAC TGA-3′人类p15R: 5′gca TGC有条件现金援助TGT TCT有条件现金援助CG-3′F: 5′-GGG AAA棉酚GGG亚美大陆煤层气有限公司AGT GTC GTT-3′人类p16R: 5′ggt TGT GGC GGG GGC AGT条t - 3′F: 5′-GGG GGC ACC AGA GGC AGT-3′人类DcR2R: 5′20 GGG手枪GGT GGC AGA GT-3′F: 5′公司治理文化TCG AGC gg GCG CTA TC-3′人类Dec1R: 5′cga TGA GCC GGT GCG GCA 3′F: 5′20 GGA CTG GAG CAC GGA GA-3′b-actinF: 5′-ATCTGGCACCAGACCTTCTACAATGAGCTGCG-3′R: 5′-CGTCATACTCCTGCTTGCTGATCCACATCTGC-3′glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶F: 5′-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3′R: 5′-GGCATGGACTGTGGTCATGAG-3′

3.8。实时PCR检查microrna的表达水平

互补脱氧核糖核酸的合成获得的microrna使用RT²microrna的第一链工具包(SABiosciences)。microrna的使用量是200 ng。使用miRNA-specific底漆的cDNA被放大。RNU6 SNORD 44, SNORD 48被用作控制。实时PCR结果使用ddCT方法进行了分析。

3.9。microrna的隔离

小RNA从黑色素细胞主要是准备使用RNeasy迷你包协议(试剂盒)。细胞收获RNA使用试剂盒(表达载体)。氯仿是添加到包含匀浆管使用的试剂盒的体积(20%)。管大力颤抖后,管子在RT孵化2 - 3分钟,离心机(12000×g) 15分钟在4°C。上部水层被转移到新管和1体积的70%乙醇添加。样本混合和应用于RNeasy minispin列和离心机在8000×g (10000 rpm) 15 s rt,较大的rna绑定到列过滤器。microrna包含的主要材料,并进一步纯化根据制造商的规格(试剂盒)。

作者的贡献

帮派任和冯精卫的贡献同样这项工作。

确认

作者感谢Drs。Yin-Yuan Mo,丹尼尔嘀咕,鲁文阿加密逆转录病毒表达载体。这项工作由美国癌症协会支持部分,俄亥俄州,冯y。

引用

1. 成田机场和s . w .劳“衰老的年龄,”自然医学,11卷,不。9日,第922 - 920页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. c·a·施密特”衰老、凋亡和therapy-cutting癌症的生命线,“自然评论癌症,3卷,不。4、286 - 295年,2003页。视图:谷歌学术搜索
3. n . e .沙普利斯和r . a . DePinho“癌症:罪与罚,”自然,卷436,不。7051年,第637 - 636页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. m . s . Soengas“癌症:进进出出的肿瘤控制,”自然,卷454,不。7204年,第587 - 586页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. j . Campisi和f . D 'Adda di Fagagna”,细胞衰老:当坏事情发生良好的细胞,”自然评论分子细胞生物学,8卷,不。9日,第740 - 729页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. t . Kuilman d s嘀咕,“检查参与组成分泌腺Senescence-messaging:短信外细胞压力。”自然评论癌症,9卷,不。2、81 - 94年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. h·戴维斯·g·r·Bignell c·考克斯et al .,“BRAF基因突变在人类癌症,”自然,卷417,不。6892年,第954 - 949页,2002年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. n Dhomen r . Marais说,“新的见解BRAF突变在癌症,”当前在遗传学和发展意见,17卷,不。1 - 39,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. m·j·加内特和r . Marais说“有罪指控:b - raf是人类致癌基因,”癌症细胞》第六卷,没有。4、313 - 319年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. c . Wellbrock s Rana h·帕特森h . Pickersgill t . Brummelkamp和r . Marais说“致癌BRAF调节黑色素瘤扩散通过血统MITF特定因素,”《公共科学图书馆•综合》,3卷,不。7篇文章ID e2734 2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. c . Wellbrock l .奥美d·哈德利·et al .,“V599EB-RAF是黑色素细胞的癌基因,”癌症研究,卷64,不。7,2338 - 2342年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. g . Bollag p . Hirth j .蔡et al .,”英国皇家空军抑制剂的临床疗效需要广泛的目标封锁BRAF-mutant黑色素瘤,”自然,卷467,不。7315年,第599 - 596页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. c . Michaloglou l·c·w·Vredeveld m . s . Soengas et al .,“BRAFE600-associated senescence-like人类痣细胞周期阻滞,”自然,卷436,不。7051年,第724 - 720页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. d . Dankort d·p·科里,r . a . Cartlidge et al .,“BrafV600E合作与Pten损失引起转移性黑色素瘤,”自然遗传学第41卷。。5,544 - 552年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. n . Dhomen j . s . Reis-Filho s•罗查迪亚斯et al .,“致癌braf诱导黑素细胞衰老小鼠黑色素瘤,”癌症细胞,15卷,不。4、294 - 303年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. d·巴尔的摩m . p . Boldin r·m·奥康奈尔·d·s . Rao和k·d·Taganov”小分子核糖核酸:免疫细胞发育和功能的新监管机构,”自然免疫学,9卷,不。8,839 - 845年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. a . Esquela-Kerscher f . j .松弛,“Oncomirs-MicroRNAs癌症的作用,”自然评论癌症》第六卷,没有。4、259 - 269年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. l .他和g . j . Hannon“小分子核糖核酸:小分子rna基因调控中一个重要的角色,”自然遗传学评论,5卷,不。7,522 - 531年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. e·a·Miska“MicroRNAs-keeping细胞形成,”自然细胞生物学,10卷,不。5,501 - 502年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. m . Glud m·克劳森r . Gniadecki et al .,“微rna表达melanocytic痣:formalin-fixed的实用性,石蜡包埋材料MicroRNA的微阵列分析”皮肤病学研究杂志》上,卷129,不。5,1219 - 1224年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. j·c·阿科斯塔a . O 'Loghlen a Banito et al .,“趋化因子信号通过受体CXCR2加强了衰老。”细胞,卷133,不。6,1006 - 1018年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. t . Kuilman c . Michaloglou l·c·w·Vredeveld et al .,“Oncogene-induced衰老interleukin-dependent炎症网络传送来的。”细胞,卷133,不。6,1019 - 1031年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. 朱n . Wajapeyee r·w·塞拉,x, m . Mahalingam和m·r·格林”致癌BRAF诱发衰老和细胞凋亡通路介导的蛋白质分泌IGFBP7,”细胞,卷132,不。3、363 - 374年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. n . r . Christoffersen r . Shalgi l·b·弗兰克尔et al .,“P53-independent upregulation oncogene-induced衰老期间miR-34a压制MYC,”细胞死亡和分化,17卷,不。2、236 - 245年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. l . n .索和m . b . Jarstfer microrna的概要文件复制衰老,延长细胞培养,和异位人包皮成纤维细胞端粒酶的表达情况,”《公共科学图书馆•综合》,5卷,不。9篇文章ID e12519 2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. f .太阳,h .傅问:刘et al .,“Downregulation CCND1和CDK6 miR-34a诱导细胞周期阻滞,”2月的信,卷582,不。10日,1564 - 1568年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. g . t . bom,即Gerin, y冯et al .,“p53-mediated激活miRNA34候选肿瘤抑制基因,”当代生物学,17卷,不。15日,第1307 - 1298页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. l .他x, l . p . Lim et al .,“微组件的p53肿瘤抑制基因网络,”自然,卷447,不。7148年,第1134 - 1130页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. 郭x, x, h . Zhang et al .,“针对喀斯特mir - 143在结直肠肿瘤发生中的作用,“致癌基因,28卷,不。10日,1385 - 1392年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. h . h .张x Cai, y . Wang, d, f .霁,“微- 143,抑制在骨肉瘤,促进细胞凋亡和抑制肿瘤发生学通过瞄准bcl - 2,“肿瘤的报道,24卷,不。5,1363 - 1369年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. s . Ugras e·布里尔a . Jacobsen et al .,“小RNA序列和功能特征揭示了微RNA - 143肿瘤抑制脂肪肉瘤的活动,“癌症研究,卷71,不。17日,第5669 - 5659页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. j . j .赵j .林t·伦et al .,“MicroRNA的表达谱和识别miR-29预后标记,通过针对CDK6套细胞淋巴瘤发病的因素,”血,卷115,不。13日,2630 - 2639年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. 马l . j . Teruya-Feldstein, r·a·温伯格“肿瘤浸润和转移由microRNA-10b在乳腺癌,”自然,卷449,不。7163年,第688 - 682页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. o . Rissland s . j .香港,d . p . Bartel“微扰动使miR-16家族的动态调节细胞循环变化,“分子细胞,43卷,不。6,993 - 1004年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. 今后p s赶到现场,j . Schelter j . et al .,“成绩单microRNA-16家族的目标协同调节细胞周期进展,”分子和细胞生物学,27卷,不。6,2240 - 2252年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. 问:刘、傅h . f .太阳et al .,“miR-16家庭诱导细胞周期阻滞通过调节多种细胞周期基因,”核酸的研究,36卷,不。16,5391 - 5404年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. v . c . Gray-Schopfer s . c .畅h . Chong et al .,“细胞衰老在痣和黑色素瘤不朽:p16的角色?”英国癌症杂志》,卷95,不。4、496 - 505年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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