流行病学和分子类型乳李氏杆菌病病例在伦巴第,意大利,在未来10年期间(2005 - 2014)

文摘

在发达国家,与怀孕有关的李氏杆菌病占总入侵李氏杆菌病的20 - 43%。本工作描述第一妊娠相关李氏杆菌病调查在意大利两个数据源的基础上,也就是说,强制性的通知系统和区域实验室网络。610李氏杆菌病病例报告在10年期间,40是妊娠相关(6.6%)。其中,29日妊娠相关隔离并且与血清学分型进行了分析,Pulsed-Field凝胶电泳,Multi-Virulence-Locus序列类型。没有孕产妇死亡记录,但11(29.7%)妊娠导致胎儿死亡、流产或胎儿出生后立即死亡。平均妊娠相关李氏杆菌病的发病率为每100000人4.3例出生、乳素的比例和李氏杆菌病少数民族相比明显高于普通人群(30.0%比3.5%,)。l . monocytogenes隔离属于血清型1/2a 1/2b,和4 b,后者与怀孕相关的隔离中更普遍。20个不同pulsotypes杰出和16 29隔离是分为七个集群。总共16毒性类型(VTs)被确定。五个VTs占病例总数的45%,与此同时那些先前描述的流行克隆(ECs)l . monocytogenes。

1。介绍

单核细胞增多性李斯特氏菌是一个因果代理侵入性感染的主要食源性起源。即食食品,特别是,一致被认为是高风险的来源l . monocytogenes(1- - - - - -4]。世卫组织估计,2010年全世界李氏杆菌病导致23150人患病,5463人死亡,172823失能调整寿命(残疾)5]。在欧盟(EU)在2012年报告了1676例确诊病例,整体情况率为0.39每100000人口和优势情况下超过65年(6]。通知入侵李氏杆菌病自1990年以来一直在意大利强制性和2012年全国每100000人口(0.15)低于大多数国家在欧盟(6]。同年,然而,意大利北部的伦巴第地区大约1000万居民显示更高的0.46年通知率情况下每100000名居民(7]。

入侵李氏杆菌病主要影响免疫功能不全的受试者、老人、孕妇和新生儿(8]。孕妇是一个关键的目标族群l . monocytogenes感染。确实,怀孕与一个有关妊娠18倍增加患病的风险比女性(3,9,10]。乳一般情况下也被更多的发现少数民族(11]。孕妇可能会经历发热、流产、早产或死胎但通常无症状3]。因此,很可能乳李氏杆菌病可以诊断的情况下,特别是当感染发生在怀孕的前三个月或感染以一个早期自然流产。尽管女性与并发症风险较高,大多数情况下发生在健康孕妇(9,12]。

近年来,与怀孕相关的李氏杆菌病的流行病学调查在一些发达国家,如英格兰和威尔士(13)、法国(14),美国(3)、荷兰(15),以色列(16]。之间的比例20.7%5)和43% (17的l . monocytogenes侵入性感染是与怀孕有关。先前研究入侵李氏杆菌病在伦巴第报道,约11.0%的确诊病例是妊娠相关18]。年度的主要指标用于描述与怀孕相关的李氏杆菌病的发病率是病例数每数量的活产率。从1984年到2011年在法国这个指标降至60每100000活产5例,这是一个下降12倍(14]。相反,在1998年- 2007年的年发病率乳李氏杆菌病在以色列范围从5.5到25.2每100000名新生儿中发生情况下(16]。在美国,应用程序的预防措施(“零容忍”)自1985年以来减少了44%的围产期李氏杆菌病,从17.4/100000到8.6/100000活产8]。

分子亚型已经广泛流行病学的知识l . monocytogenes通过描述隔离和跟踪源和传播途径,并帮助建立更有效的预防战略。对照的技术历来Pulsed-Field凝胶电泳(但是脉冲场凝胶电泳的出现)19]。然而,近年来一些互补子类型化方法,如茎序列类型(MLST)和Multi-Virulence-Locus序列类型(MVLST),正在申请流行病学的目的(20.- - - - - -22]。特别是MVLST允许识别流行克隆(ECs),相关的基因和大概的共同祖先隔离,已涉及地理和时空上无关的爆发(23- - - - - -25]。只有少数研究接近的分子特征l . monocytogenes从妊娠相关隔离感染病例。这些研究的结果表明,妊娠相关情况下不与特定的分子类型16]。

本研究描述的临床和流行病学特征进行乳病例记录在2005年和2014年之间在伦巴第和分子特性和毒性基因的模式l . monocytogenes隔离。

2。方法

2.1。数据来源和病例定义

乳素李氏杆菌病病例,从2005年到2014年从(i)中提取区域强制通知网络传染病系统(MAINF) [7)和(2)的实验室监测的区域网络l . monocytogenes感染(实验室)。MAINF收集所有可用的信息关于怀孕和nonpregnancy李氏杆菌病的情况下(即。、年龄、临床症状、疾病和结果)在数据库中。实验室是基于自愿转诊临床分离的区域参比实验室卫生科学大学的米兰。l . monocytogenes隔离住院临床病例的收集和使用标准化报表收集人口,临床和微生物数据。

妊娠相关李氏杆菌病病例根据通知的标准定义,即兼容的临床症状和隔离的存在l . monocytogenes从临床样本的孕妇或胎儿死产和新生儿年龄< 28天(MAINF)。此外,案例也被隔离的基础上定义的l . monocytogenes从临床样本的孕妇或胎儿死产和新生儿年龄< 28天(实验室)。

确诊病例隔离l . monocytogenes从母亲和婴儿都算作单独的病例。

2.2。l . monocytogenes隔离的特征

l . monocytogenes从李氏杆菌病例孤立在选择媒体和证实了生化测试套件(API李斯特菌,bioMerieux)医院实验室参与监测网络,随后被称为区域参比实验室。

2.2.1。血清学分型

血清学分型进行妊娠相关和non-pregnancy-related隔离在史Superiore di Sanita(意大利罗马)。复合pcr (MUX-PCR)测定进行了分离l . monocytogenes菌株分为四个不同的血清型:1/2a和3;1/2c和3 c;1/2b和3 b;和4 b、4 d和4 e [27]。随后,传统血清学分型被用来确认中的特定血清型血清型,使用李斯特菌抗血清(Denka Seiken有限公司,东京,日本),根据制造商的指示。为了研究分离血清型血清型4 b / e的seroagglutination被认为是血清型4 b,后者是疾病导致血清型。

2.2.2。Pulsed-Field凝胶电泳(但是脉冲场凝胶电泳的出现)

但是脉冲场凝胶电泳的出现进行妊娠相关和non-pregnancy-related隔离根据PulseNet协议(19]。简单地说,DNA样本第一次被限制使用Asc我的酶,然后在1%的琼脂糖凝胶电泳分离,使用但是脉冲场凝胶电泳的出现CHEF-MAPPER®系统(Bio-Rad)。美国心理学协会我酶的使用Asc我资料是没有区别的。聚类分析进行BioNumerics 6.6软件(应用数学、Sint-Martens-Latem、比利时)通过使用未加权的两组配算法(UPGMA)和骰子相关系数与1.5%的公差。在这项研究中,隔离被认为属于同一集群时一个相似度值≥90%。确定集群的编号与前面的研究(18]。

2.2.3。Multi-Virulence轨迹序列输入(MVLST)

MVSLT进行所有妊娠相关隔离(如前所述)(23]。基因内区六毒性基因(clpP,木豆,inlB,inlC,lisR,和prfA)被IGA放大和测序技术服务(意大利乌迪内),使用ABI 3730 xl DNA分析仪。多重序列比对进行分子进化遗传分析软件使用大型6 (26),然后与先前输入的序列l . monocytogenes可以从MVLST数据库(28]。新等位基因序列,也就是说,至少有一个核苷酸的差异,是由具有任意毒性类型(VTs)。使用neighbor-joining neighbor-joining树构建方法在大型6 (26)基于核苷酸差异的数量。

2.3。统计分析

要么方测试或Fisher精确检验(Epi-Info 6.04软件,疾病控制和预防中心,亚特兰大,乔治亚州,美国)被用来评估分类变量之间的关联。时被认为是具有统计学意义的差异< 0.05。

3所示。结果与讨论

3.1。临床和流行病学数据

在十年期间在研究(2005 - 2014),610例侵袭性李氏杆菌病被集成的数据记录在伦巴第两个监测区域系统(MAINF和实验室)。四十的妊娠相关(6.6%)。母亲的平均年龄是35岁(范围17-45)。生存的结果是已知的37例(表中1);其中没有孕产妇死亡记录,而怀孕11(29.7%)导致胎儿死亡、流产或死胎。在32例(80%),症状在女性怀孕25周后开发的。对胎儿和新生儿情况下,21例发生怀孕24周后。所有5例发生在13日和24日星期是致命的。在一个致命的情况下怀孕的周是未知的。

与怀孕相关的李氏杆菌病在十年间的平均发病率是每100000人4.3例新生儿(从2009年的每100000人1.0例新生儿诞生在2012年的每100000人8.7例),估计基于意大利国家研究所的人口数据统计(多)29日]。在2010年、2011年和2012年,尤其是发病率相比几乎翻了一倍的平均发病率为整个时期(> 8/100000)(图1)。病例中观察到的12个省份的伦巴第地区,观察发病率最高的贝加莫其次是克雷莫纳和米兰(9.7,6.9,和5.7每100000个出生、职责)。相比之下,未记录在李氏杆菌病病例科莫省,曼图亚,帕维亚,Sondrio(图2)。妊娠相关的比例李氏杆菌病少数民族(包括移民来自厄瓜多尔、秘鲁、阿尔巴尼亚、匈牙利、罗马尼亚、乌克兰、摩洛哥和沙特阿拉伯),高出十倍,普通人群(30.0%和3.5%)()。

3.2。微生物和分子类型

微生物和分子类型的结果如表所示2。总共有304l . monocytogenes收集分离;在这些人中,29人妊娠相关。后者是血清型1/2a (51.7%)4 b (44.8%),1/2b (,3.5%)。4 b血清型是与怀孕相关的隔离中更普遍(妊娠相关隔离的44.8%和18.1% ()nonpregnancy隔离,)。20个不同Asc我pulsotypes是公认的。美国心理学协会我的概要Asc我的资料没有确认100%相似,但强调密切相关相似性比例高于70%。十六岁的29隔离被分为七个集群(图3)。当考虑妊娠相关和non-pregnancy-related隔离,只有集群6显示明显的妊娠相关隔离患病率(4/5;表2)。

总共16个VTs, 10是独一无二的,和6有多个隔离,标识在29l . monocytogenes隔离。MVLST证实分离株之间的关系属于集群3,5,和13,而其他集群包括隔离与不同的管理系统。总体而言,48% ()l . monocytogenes隔离系统表明,先前与ECs有关。

neighbor-joining树两个主要组透露,根据血清型(图清楚地分开4)。获得的基因序列被存入数据库(基因库30.加入]的数字:KP789770-KP789944。

的国家意大利评估妊娠相关李氏杆菌病病例的比例在全国范围内不可用。本研究显示,6.6%的确定李氏杆菌病病例在伦巴第妊娠相关等频率较低利率相比其他国家(英国12%;美国16.9%;法国18%;西班牙32.5%;以色列35%)(3,11,14,16,31日)和荟萃分析由梅尔滕斯de Noordhout et al。5)(20.7%)。不清楚这个比例低是真实的或者它可能是由于underdiagnosis或漏报的问题。Underdiagnosis可能是更有可能的是,考虑到大多数情况下诊断在第三学期,尽管早期流产可能很少研究。事实上,这项研究在妊娠前三个月无病例报告,只有在第二个报告了5例。然而,妊娠相关病例的比例在10年期间增加到10%的李氏杆菌病病例从实验室被认为只有数据。这个值是能够观察到类似Mammina et al ., 201318),并建议更高灵敏度的实验室相比MAINF检测妊娠相关情况。

母亲的年龄似乎并未感染的危险因素l . monocytogenes。另一方面,感染的相关性的存在基础疾病不能准确评估考虑到有限数量的病例和临床信息的不可用。

值得注意的是与怀孕相关的李氏杆菌病的比例高于一般人群是少数民族之一。Ethnicity-related变化获得李斯特是有据可查的风险和相关的饮食和食物消费习惯的差异(32]。此外,乳发病率李氏杆菌病已经与社会经济特征(如社区剥夺)和食品消费行为(例如,从便利或当地商店购买食品)都更频繁的少数民族(11,13]。

在这项研究中血清型4 b是妊娠相关案件中更普遍相比non-pregnancy-related病例。显然这并不影响妊娠结局。类似的结果也出现在其他国家(奥地利,1997 - 2000;以色列,1998 - 2007),血清型4 b和特定的但是脉冲场凝胶电泳的出现类型与妊娠相关李氏杆菌病没有任何血统和怀孕的结果之间的相关性16,33]。1992年在法国大利斯特氏菌病暴发被报道,这是由于血清型4 b和特点是大量的妊娠相关病例(33%,92年的279例)(14]。

22岁的29隔离属于八集群之前观察到一个更大的研究l . monocytogenes隔离从人类临床病例在伦巴第18)(表2)。集群包括隔离从妊娠相关病例的发现和隔离李氏杆菌病病例与怀孕无关促使当地卫生当局开展流行病学调查,以识别可能的食物来源与怀孕有关的案件。没有发现相关与假定的食物来源。

集群,但是脉冲场凝胶电泳的出现和MVLST取得了良好的一致性,与一些例外。使用MVLST,不同管理系统分配给集群中的所有隔离分组2和集群6。有趣的是,13隔离被分配到五个不同的ECs (23,25]。的“偏爱”l . monocytogenesECIV怀孕已被先前的观察研究(16),但这项研究似乎并没有证实这一发现。事实上,16个29隔离不属于任何当前公认的ECs。

保证连续与以前的研究(18)应用了相同的参数进行比较分析。这导致配置文件之间的差异明显不是100%相似和软件分析(例如,隔离248年和225年;图3),这项研究的局限性。但是脉冲场凝胶电泳的出现结果的解释并不总是简单;因此,序列方法MVLST等有利,因为解释结果和实验室之间共享的数据更加可靠和准确的波段的方法相比23]。

4所示。结论

虽然研究只进行了伦巴第,这个地区的1000万居民人口占整个意大利的17%。然而,由于主要的迁移规律和饮食习惯的差异与其他地区相比,这项研究的结果可以推广意大利北部。此外,区域监控系统不协调和组织不同地区之间的差别很大,在许多情况下,不提供信息分离株的分子亚型。

总的来说,这项研究的结果证实的“类型”l . monocytogenes特别是与妊娠相关感染不识别。总之,本研究强调了公共卫生与怀孕相关的李氏杆菌病的重要性和其流行病学行为的复杂性,通过分离株的分子分析如图所示。预防战略的实施有针对性的少数民族,特别注意饮食习惯的孕妇,强烈建议。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

弗吉尼亚Filipello和埃托雷阿马托的贡献同样这项工作。

确认

作者要感谢教授Caterina Mammina,导致他们过早。她不仅是一位杰出的人士为她的科学文化和专业知识(她极大的促进了分子技术的引入为感染性疾病的研究和监测在意大利),还因为她的简单的自然和开放和友好的态度。谢谢也由于m . Gianfranceschi和a·加图索在微生物食源性危害单位兽医公共卫生和食品安全部门,史Superiore di Sanita在罗马常规血清学分型和m . Gramegna和a . Piatti总局伦巴第地区的福利在流行病学调查他们的帮助。

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