定量蛋白质组学分析表明，脱氧胆酸能诱导胃上皮细胞凋亡并触发胃癌发生

摘要

背景。由于胆汁酸存在，病理十二指肠胃部回流可以诱导或加剧胃炎。胆汁回流通常被认为与肠道胰腺癌和胃癌有关。然而，胆汁酸对胃粘膜的致病机制仍然未知。方法。为了探索胆汁酸诱导胃粘膜病变的机制，我们检测了胃上皮细胞系GES-1的细胞凋亡，并使用蛋白质组学方法研究了GES-1细胞在胆汁酸去氧胆酸作用下的蛋白谱变化。利用DAVID和STRING程序分析不同表达蛋白谱的变化。结果。我们发现去氧胆酸可明显诱导GES-1细胞凋亡。采用液相色谱/串联质谱(LC-MS/MS)方法，在胆酸处理的GES-1细胞中鉴定出134个上调蛋白和214个下调蛋白。生物信息学分析揭示了这些差异表达蛋白的相互作用和信号网络。结论。这些发现可改善胆汁酸的对胃粘膜的致病性的分子机制的理解。

1.介绍

胆汁的回流是慢性胃炎患者胃粘膜病变的病理生理过程中的主要病因因素之一[1］．胆汁返流性胃炎（BRG）已被公认为是一种化学胃病由于过度十二指肠胃反流。生理十二指肠胃反流不含胆汁酸，但只包含和IgA，这可能对胃黏膜的保护功能[2］．然而，可以通过许多因素来引起病态的十二指肠胃部反流，例如幽门解剖结构的异常和盆地和十二指肠功能性，连续胆汁酸分泌。病理十二指肠胃部回流可以由于胆汁酸存在而诱导或加重胃炎，并且高浓度的胆汁酸可能在胃中诱导肠道中胰岛素（IM）中起重要作用。此外，还认为胆汁回流用作胃癌的引发剂[3.］．

一些研究发现，十二指肠的胆汁酸和其他内容在慢性胃炎与胃酸和胃酸的发展中协同作用幽门螺杆菌感染 [4，5］．据报道，细胞凋亡和氧化还原反应与胆汁酸诱导的胃炎有关[6，7］．由胆汁回流诱导的胃线被认为是癌前胃腺癌病变，并且与环氧氧酶-2（COX-2）的诱导有关。然而，胆汁酸影响胃粘膜的确切致病机制仍然不清楚。

在这项研究中，我们评估了胆汁酸脱氧胆酸对胃上皮细胞系GES-1的影响，并且蛋白质组学分析用于鉴定脱氧胆酸对胃粘膜致病作用的生物学方法和分子途径。

2.材料和方法

2．1．细胞、培养条件和去氧胆酸处理

GES-1细胞和AGS细胞均以补充有10％（v / v）胎牛血清（Hyclone，Logan，US）的RPMI1640生长培养基，在37℃下在5％（v / v）CO.₂．A 10 mM deoxycholic acid (Sigma, St. Louis, MO, USA) stock solution was prepared in PBS and was incubated in a water bath at 37°C for 30 min before each use.

在脱氧胆酸治疗前一天，细胞在生长培养基中接种。对于细胞和脱氧胆酸的共蜂化，在加入新鲜生长培养基之前用PBS冲洗一次细胞。浓度为200 μM和400. μM中使用脱氧胆酸在初步实验中使用（在在线提供的补充材料中所示的补充图中所示http://dx.doi.org/10.1155/2016/9638963400） μ在下面的研究中选择了m。在400的最终浓度下向细胞培养基中加入脱氧胆酸。 μM, and the cells were maintained under normal growth conditions for 10 h. Untreated GES-1 cells were used as controls.

2.2。细胞凋亡测定

GES-1细胞和AGS细胞接种在6孔平板接种两者（在1.2×10的密度⁵细胞）。在用脱氧胆酸孵育细胞10小时后，使用膜蛋白V-FITC / PI双染力凋亡检测试剂盒（Becton Dickinson，Franklin Lakes，NJ，USA）根据制造商的说明标记细胞。未经处理的GES-1细胞用作阴性对照。用冷PBS洗涤细胞，200 μ中加入膜联蛋白V结合缓冲液中的L.后，将细胞用10染色 μL fitc标记的annexin v和5 μL PI，它们立即通过流式细胞术分析。

2.3。蛋白质提取和SDS-PAGE

收获用或不含脱氧胆酸培养的GES-1细胞。对于蛋白质提取，将细胞悬浮在含有蛋白酶抑制剂混合物的细胞裂解缓冲液中，并在冰上摇动30分钟。将细胞裂解物在4℃下以15,000×g离心10分钟，收集上清液。使用BCA蛋白质测定试剂盒（Thermo Fisher Scientific，Waltham，Ma，USA），通过Bradford方法测量总蛋白质浓度。蛋白质（200. μg)用15% (w/v) SDS-PAGE分离。然后用考马斯亮蓝G-250 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)对凝胶进行染色，观察含脱氧胆酸和不含脱氧胆酸的GES-1细胞总蛋白的差异。

2.4。Nanolc-MS / MS和数据分析

在这项研究中，高特异性和灵敏的液相色谱/串联质谱（LC-MS / MS）用于方法标识GES-1有无胆汁酸培养的细胞差异表达的蛋白质。根据蛋白质分子量的凝胶分为15个相等的片。蛋白质然后用胰蛋白酶消化和肽施加到线上耦合到ESI-LTQ-OrbitrapVelos质谱仪（赛默飞世尔科技）易于NLC系统（Proxeon生物系统，赛默飞世尔科技）大多先前所描述的[8］．通过捕集柱洗脱肽，并用C-18 Reprosil 3填充分析柱 μM树脂使用从100％相A（水中的0.1％甲酸）至35％相B（乙腈中0.1％甲酸）中的梯度150分钟。使用数据相关的自动（DDA）测量MS扫描和串联质谱（MS / MS / MS）采集以阳性模式以阳性模式获得质谱。DDA调查扫描是的m / z范围350-2000和60000分辨率的1×10的目标值⁻⁶离子。使用碰撞诱导的解离（CID），测量扫描之后是LTQ中15个最强烈离子的MS / MS，并且动态碎裂离子30秒。使用MaxQuant软件（1.2.2.5版本）对瑞士人的人蛋白质组数据库进行搜索原始数据。采用以下参数进行搜索：胰蛋白酶水解，两个错过的切割，蛋氨酸氧化为可变改性，碳酰胺甲基化为固定改性，肽耐受10ppm的肽耐受性。随后通过搜索引擎处理器工具处理/过滤搜索结果[9]使用1％的虚假发现率（FDR）。

将鉴定的蛋白在NCBI非冗余数据库中进行BLAST搜索。差异表达蛋白的本体论分析使用搜索工具DAVID (http://david.abcc.ncifcrf.gov/）.字符串(http://string.embl.de.）用作预测信令网络和蛋白质相互作用的数据库，如前所述[10.］．

2．5．免疫印迹分析

两组的蛋白质样品通过蛋白印迹进行验证差异表达的蛋白质。对于蛋白质提取，将细胞悬浮在含有蛋白酶抑制剂混合物的细胞裂解缓冲液中，并在冰上摇动30分钟。The cell lysate was centrifuged 15,000 ×g at 4°C for 10 min, and the supernatant was collected. The total protein concentration was measured by the Bradford method using a BCA Protein Assay kit. Proteins (70 mg) were separated on 12% (w/v) SDS-PAGE gels and electrophoretically transferred onto PVDF membranes. The membranes were blocked in 5% (w/v) fat-free milk in Tris-buffered saline, 0.5% (v/v) Tween-20, at room temperature for 1 h and incubated overnight at 4°C with antibodies against SOS1 (Flarebio, China; 1 : 500), PTK2 (Flarebio; 1 : 500), ATP12P (Flarebio; 1 : 500), H2AFY (Flarebio; 1 : 500), andα-Tubulin（MBL，日本; 1：2000）。在加入0.1％（v / v）吐温-20的PBS中洗涤后15分钟，将膜与二抗，山羊抗兔IRDYE 680或山羊抗小鼠IRDYE 800CW（甲贷款; 1：5000）一起温育，室温下为1小时。通过使用Odyssey成像仪（Li-Cor Biosciences）扫描膜来鉴定蛋白质。

2.6。统计分析

使用学生分析两组之间的差异T.- 最低。数据表示为三个独立实验的平均值±SD。所有的统计分析均采用SPSS 21.0软件进行。值<0.05被认为是统计学意义的。

结果

3.1。脱氧胆酸诱导GES-1细胞的细胞凋亡

细胞凋亡检测试剂盒被用于检测细胞凋亡由400感应 μM在GES-1细胞中的脱氧胆酸的最终浓度。结果（图1(一))提示去氧胆酸诱导GES-1细胞凋亡(）.以与GES-1细胞相同的方式测量AGS细胞（图1 (b)）.

3.2。蛋白质纯化和鉴定

的GES-1细胞的蛋白质组，使用SDS-PAGE用考马斯亮蓝染色和LC-MS / MS异形。如果一个蛋白的比例为>在与胆汁相对于阴性对照细胞的酸处理过的细胞2.0或<0.5，该蛋白质被认为是差异表达的。总共348克差异表达的蛋白质进行鉴定，其中包括214克下调的蛋白质和134个上调蛋白（在补充数据显示）。14种不同的蛋白质的比为> 5.0或<0.2，其中包括6克下调的蛋白质（表1）和8克上调的蛋白质（表2），这表明它们受到严格的监管，并特别感兴趣的。

３．３．胆汁酸调节蛋白的聚类分析

根据获得的348个差异表达蛋白的数据构建热图。对胆汁酸处理细胞中差异表达蛋白的聚类分析提供了证据，证明编码这些蛋白的基因受脱氧胆酸的调控(图)2）.

3.4。胆汁酸度蛋白的功能性分类和富集

将鉴定的差异表达的蛋白质分为图中所示的功能类别3.参与磷酸化和乙酰化的蛋白质是最高比例。更有意义地，显示线粒体蛋白占约6％的鉴定蛋白，其可能在细胞凋亡中发挥作用。为了进一步阐明受胆汁酸影响的生物学过程，这些诱导蛋白质被注释为David数据库，以便在生物过程，细胞组分和分子功能方面进行富集分析（图4）.

3.5。信令网络的分析

然后在串酸处理后进行差异表达的蛋白质，并在串数据库中搜索，341个蛋白质在数据库中匹配。所选择的置信水平（字符串得分）为0.4。合并的网络如图所示5．蛋白质在网络中的重要功能是RNA结合、核糖体的结构组成、核酸结合和蛋白激酶调节活性。ACIN1、AKAP17A、Clorf52、CID是RNA结合和核酸结合的重要蛋白。MRPL10、MRPL16和MRPL17是核糖体结构组成的重要蛋白。ANKRD54、CALM2和CDKN2A是蛋白激酶调节活性的重要蛋白。该程序预测了一组特定蛋白质的关联。

3.6。核实四种鉴定的蛋白质

为了支持上述结果，进行Western印迹分析以监测在DNA修复和细胞周期中涉及的四种鉴定的蛋白水平的变化（图6）.与阴性对照比较，核心组蛋白宏h2a .1(H2AFY)经脱氧胆酸处理后下调。7 - less homolog 1 (SOS1)、focal adhesion kinase 1 (PTK2)和ATP合成酶线粒体F1复合体组装因子2 (ATP12P)上调。这些结果与定量蛋白质组分析结果一致。

4.讨论

有胆汁酸在十二指肠胃反流的浓度和胃食管反流病（GERD）的程度之间有很强的相关，和胆汁回流是Barrett食管一个主要危险因素[11.，12.］．胆汁酸暴露可以加剧胃粘膜病变，例如由活性或慢性炎症引起的耐胃粘膜病变。此外，胆汁酸暴露的时间长度与胃粘膜中病理变化的严重程度相关[1］．此外，胆汁酸直接诱导肠上皮化生和进展到食道和胃[的瘤形成5，13.，14.］．

虽然胆汁酸被认为是胃粘膜疾病发病机制至关重要，但胆汁酸在胃中诱导转化的机制仍然不明确[15.］．与胃粘膜的研究相比，还有许多研究侧重于胆汁酸诱导的食管粘膜疾病的机制。最近的研究表明，调节细胞增殖或细胞表型的免疫应答和/或信号传导途径会导致食管上皮细胞的损伤或元平[16.］．在离体/体外研究，胆汁酸刺激食管细胞产生炎症介质（例如，IL-8和COX-2）和引起氧化应激，DNA损伤和细胞凋亡。胆汁酸也诱导的鳞状细胞改变其基因表达模式类似于肠型细胞，并引起巴雷特细胞增加的肠型基因的表达[17.］．然而，在胃粘膜中，存在腺上皮细胞，其与食管粘膜中的鳞状细胞不同。

胃中胆汁酸的发病机制是否与食道中胆汁酸的发病机制相同尚未得到证实。胆汁酸诱导胃细胞死亡的机制尚存争议。在本研究中，我们使用蛋白质组学分析了胆汁酸去氧胆酸处理的人胃粘膜细胞系，以研究其机制。据报道，去氧胆酸约占总胆汁酸的27%。主要游离的二级和一级胆汁酸的存在可能导致bilroth手术后残胃中癌症的高发生率和胆汁返流的存在[18.］．未缀合的胆汁酸脱氧胆酸和赤铁氧胆酸在Barrett的食道发育过程中可能会显着影响食管细胞，尤其是脱氧胆酸[19.］．一些研究人员使用脱氧胆酸来建立慢性胃炎动物模型[20.］．这可能表明去氧胆酸是最具细胞毒性的胆汁酸之一，过去曾被用于研究胆汁酸或胆汁酸。基于这一考虑，我们在本研究中使用去氧胆酸。以前的研究报道，在100μm或200 μ中号脱氧胆酸曝光[21.，22.]，以及浓度较高的去氧胆酸(500μM-1 mm）已被用于研究胃细胞和肝细胞的损伤[23.］．此外，远端胃切除术后残胃中的脱氧胆酸浓度约为370μ因此，我们采用浓度为200μM和400. μ在初步实验中，M持续5小时，10小时和24小时（在补充图S中显示）并选择400 μ最后10小时。结果表明，去氧胆酸可诱导胃粘膜细胞系GES-1和AGS细胞凋亡，以后者AGS细胞避免细胞特异性效应。一些研究表明，脱氧胆酸对胃细胞的影响是一种坏死途径[22.，24.，25.]，而另一些人建议的影响是由于细胞凋亡6，26.］．本研究表明，细胞凋亡可能是脱氧胆酸诱导的胃粘膜细胞死亡的主要机制。

然而，尚未确定含有胆汁酸对胃黏膜胆汁酸的炎症和癌症诱导作用的机制。本研究中的蛋白质组学分析揭示了总共348种不同表达的蛋白质，其被发现参与不同的生物过程，包括核糖体的RNA结合，结构组分，核酸结合和蛋白激酶调节剂活性。据报道，一些已鉴定的蛋白质参与炎症和肿瘤。下调核心组蛋白微粒蛋白质连接酶UHRF1，据报道，据报道，与DNA修复和核苷酸代谢的阻塞有关，从而诱导基因突变或表观遗传缺陷[27.，28.］．参与细胞增殖的蛋白质，包括膜相关蛋白N-Chimaerin [29.，七兄弟的儿子[30.，31.和局灶粘连激酶1 [32.被调节。相反，细胞死亡拮抗剂Bcl2则下调。我们的观察结果表明，胆汁酸处理可引起细胞增殖。这些细胞可能经历基因组事件，导致小凹增生，这是反流性胃炎的重要组织病理学特征之一，也是肿瘤发生的必要条件[33.］．ATP合酶线粒体F1还上调复合组件因子2，表明增强的氧化磷酸化和加速能量代谢[34.，35.]，这与细胞增殖的增加一致。此外，一些研究报告说，当刺激细胞增殖时，细胞凋亡同时易于诱导。同时可以使细胞使细胞对细胞凋亡更敏感。细胞增殖和细胞凋亡的程序与彼此联系[36.- - - - - -38.］．彼此相信胆汁回流作为胃癌发生的引发剂[39.，40］．本研究结果提示胆汁酸可促进胆汁反流性胃炎甚至胃癌的发生发展。

总之，我们的结果表明，胆汁反流是胃粘膜病变的主要发病因素之一，应进一步关注。去氧胆酸可诱导胃粘膜细胞凋亡。蛋白质组学分析鉴定了脱氧胆酸处理的GES-1细胞中不同表达的蛋白。这些发现提高了我们对去氧胆酸对胃粘膜细胞作用的分子机制的理解。未来的研究还需要在患者身上进行，以进一步研究从体外研究中鉴定的蛋白的临床关系。

5。结论

总之，我们的综合分析显示了脱氧胆酸处理的胃粘膜细胞中不同表达蛋白质的概况。此外，功能富集分析的结果显示，这些蛋白质中的一些可能具有与脱氧胆酸诱导的胃粘膜疾病的发展有关的生物学功能，包括在RNA剪接，大分子复合亚基组织和核心组织中。信号网络分析可能有助于进一步理解胆汁酸诱导的胃病变的潜在调节机制，包括胃癌。

利益争夺

提交人声明没有关于本文的出版物的利益冲突。

致谢

这项研究是通过在重点实验室资助幽门螺杆菌国家自然科学基金面上项目(no. 201412071202);基金资助:国家自然科学基金资助项目(批准号:BZ0371);81270475)。

补充材料

参考

1. S.-L。陈,J.-Z。密苏里州,Z.-J。曹,X.-Y。陈和告诫。肖，“胆汁反流对消化不良或慢性胃炎患者胃粘膜病变的影响”世界胃肠病学杂志，第11卷，第5期。18，页2834-2837,2005。查看在：出版商网站|谷歌学术
2. J. Dalenbäck, H. Abrahamson, B. Björnson等，“人类十二指肠胃反流、后蠕动和MMC，”美国生理学杂志监管综合与比较生理学号，第275卷。3，第R762-R769，1998年。查看在：谷歌学术
3. M. J.公园，K. H.金，H. Y.金，K. Kim和J.昌“通过同源结构域转录因子和CDX1孤儿在人胃癌细胞核受体SHP COX-2的胆酸诱导表达，”致癌物，第29卷，第2期12，页2385-2393,2008。查看在：出版商网站|谷歌学术
4. A. Zullo，五里纳尔迪，C.哈桑，五劳里亚和A. F. Attili“，在胆囊切除胃癌病理：角色幽门螺杆菌和胆汁反流”临床消化病的，卷。27，不。4，第335-338，1998。查看在：出版商网站|谷歌学术
5. T. Matsuhisa和T.Tsukui，“胆汁酸回流到胃和胃粘膜萎缩，活组织检查标本中的肠青细胞膜之间的关系，”中国临床生物化学与营养杂志，卷。50，不。3，pp。217-221,2012。查看在：出版商网站|谷歌学术
6. M. J. Redlak，M. S.丹尼斯，和T. A.米勒，“细胞凋亡是脱氧胆酸盐诱导的胃粘膜细胞死亡的主要机制，”美国生理学 - 胃肠道和肝脏生理学，卷。285，没有。5，PP。G870-G879，2003。查看在：出版商网站|谷歌学术
7. Y. Xu, T. Watanabe, T. Tanigawa等，“胆汁酸通过farnesoid X受体诱导胃上皮细胞中Cdx2的表达，”中国临床生物化学与营养杂志，卷。46，没有。1，pp。81-86,2010。查看在：出版商网站|谷歌学术
8. C.B.Pinheiro，M. Shah，E.L. Soares等，“培养的蛋白质组分析，从而培养的麻疹Curcas L的种子”，“蛋白质组研究杂志，第12卷，第2期11, pp. 5137-5145, 2013。查看在：出版商网站|谷歌学术
9. 。P. C.卡瓦略，J.S。G.费，T. Xu等人，“搜索引擎处理器：过滤和组织肽谱匹配，”蛋白质组学，第12卷，第2期7，pp。944-949,2012。查看在：出版商网站|谷歌学术
10. W.邓，M.严，T. Yu等人，“在非小细胞肺癌的miR-193A-3P的转移抑制机制的定量蛋白质组分析，”细胞生理学和生物化学第35期5, pp. 1677-1688, 2015。查看在：出版商网站|谷歌学术
11. M. F.Vaezi和J.e.Richter，“酸和十二指肠的作用在胃食管反流疾病中反流，”胃肠病学，卷。111，没有。5，PP。1192-1199,1996。查看在：出版商网站|谷歌学术
12. D.Nehra，P. Howell，C.P.Ineriams，J.K. Pye和J. Beynon，“胃肠道反流疾病中的有毒胆汁酸：胃酸的影响”胆量，卷。44，不。5，pp。598-602，1999。查看在：出版商网站|谷歌学术
13. P. M. Newberne, G. Charnley, K. Adams等人，“胃和食道癌发生:识别风险和保护因素的模型，”食品和化学毒理学，卷。24，不。10，pp。1111-1119，1986。查看在：出版商网站|谷歌学术
14. T. Matsuhisa，T.Arakawa，T. Watanabe等人，“胆汁酸反流入胃部的关系以及萎缩性胃炎和肠道细胞的风险：多中心研究2283例”消化内窥镜检查，第25卷，第2期5，页519-525,2013。查看在：出版商网站|谷歌学术
15. Y. Yuasa，“对肠道分化和肠型胃癌发生，”自然评论癌症，卷。3，不。8，pp。592-600,2003。查看在：出版商网站|谷歌学术
16. R. F.索萨，“酸的作用和胆汁反流性食管炎中和巴雷特的化生，”生物化学社会交易，卷。38，不。2，pp。348-352，2010。查看在：出版商网站|谷歌学术
17. K. R. McQuaid, L. Laine, M. B. Fennerty, R. Souza, S. J. Spechler，“系统综述:胆汁酸在胃食管反流疾病和相关肿瘤发病机制中的作用，”消化药剂学与治疗方法，卷。34，没有。2，pp。146-165,2011。查看在：出版商网站|谷歌学术
18. L. Domellof，B. S.雷迪，和J. H. Weisburger，“菌群和在部分切除术后碱性反流的胆汁酸去缀合，”美国外科杂志，卷。140，没有。2，pp。291-295,980。查看在：出版商网站|谷歌学术
19. Y. Hu, V. A. Williams, O. Gellersen, C. Jones, T. J. Watson, and J. H. Peters，“Barrett食管的发病机制:继发性胆汁酸上调食管细胞中肠分化因子CDX2的表达”，中国胃肠外科杂志，第11卷，第5期。7，pp。827-834,2007。查看在：出版商网站|谷歌学术
20. Z. Xiang，J.-M。si，和h.-d.黄，“慢性胃炎大鼠模型和诱导因素的作用”世界胃肠病学杂志，卷。10，没有。21，第3212-3214，2004年。查看在：出版商网站|谷歌学术
21. A. J. Dziki，S. Batzri，J.W哈蒙，和M. Molloy的，“蜂窝高钙血症是在兔胃粘膜细胞的脱氧胆损伤的早期事件，”美国生理学 - 胃肠道和肝脏生理学，卷。269，没有。2，第1部分，PP。G287-G296,1995。查看在：谷歌学术
22. E. R. Kokoska，G. S.史密斯，A. B. Wolff等人，“在适应性细胞保护和细胞损伤对人胃癌细胞的脱氧胆酸盐诱导的钙的作用，”美国生理学 - 胃肠道和肝脏生理学号，第275卷。2，第G322-G330，1998。查看在：谷歌学术
23. K.冈野，K. J.艾维，T. Sugimoto等人，“前列腺素E的刺激₂通过脱氧核酸钠从培养的兔胃细胞中释放“前列腺素，第47卷，第47期。6，页423-436,1994。查看在：出版商网站|谷歌学术
24. A. J. Dziki，S. Batzri，J.W哈蒙，和M. Molloy的，“蜂窝高钙血症是在兔胃粘膜细胞的脱氧胆损伤的早期事件，”美国生理学杂志 - 胃肠道和肝脏生理学，卷。269，没有。2，第G287-G296，1995。查看在：谷歌学术
25. E. R. Kokoska，G. S.史密斯，C. L. Rieckenberg，Y.德什潘德，A.巴南，和T. A.米勒，“针对在体外培养的人胃细胞脱氧胆酸盐诱导的损伤适应性细胞保护：是有内源性前列腺素的作用？”消化系统疾病与科学，卷。43，不。4，第806-815，1998。查看在：出版商网站|谷歌学术
26. 学术界。Cho和J.-Y.王，胃肠粘膜修复和实验治疗方法，卷。25，卡格尔医疗和科学出版商，2002年。
27. W. Qin, H. Leonhardt，和F. Spada，“Usp7和Uhrf1控制泛素化和维持DNA甲基转移酶Dnmt1的稳定性，”细胞生物化学杂志，第112卷，第112期。2, pp. 439-444, 2011。查看在：出版商网站|谷歌学术
28. S. Magdeldin, T. Yamamoto, I. Tooyama，和E. M. Abdelalim，“NPR-A在调节胚胎干细胞自我更新中的作用的蛋白质组学新见解”，干细胞评论和报告，卷。10，没有。4，第561-572，2014。查看在：谷歌学术
29. N.三宅，J.奇尔顿，M. Psatha等人，“人类突变CHN1 hyperactivateα2-chimaerin并导致杜安萎缩综合征，“科学第321卷2008年，第839-843页。查看在：出版商网站|谷歌学术
30. h。Jeng, L. J. Taylor和D. Bar-Sagi，“致癌Ras通过sos介导的野生型Ras交叉激活对肿瘤发生至关重要。”自然通讯，卷。3，2012年第1168号。查看在：出版商网站|谷歌学术
31. M. Poltorak，I. Meinert，J. C. Stone，B. Schraven和L. Simeoni，“SOS1规范了持续的TCR介导的ERK激活”欧洲免疫学杂志，卷。44，不。5，pp。1535-1540,2014。查看在：出版商网站|谷歌学术
32. U. Pongchairk，J.-L。关和V. leardkamolkarn，“HGF诱导的HGF增殖和侵袭人胆管癌细胞系Hucca-1的局灶性粘附激酶和SRC磷酸化”世界胃肠病学杂志，第11卷，第5期。37，第5845-5852，2005年。查看在：出版商网站|谷歌学术
33. M.F. Dixon，H. J. O'Connor，A.T. R. Axon，R. F. King和D. Johnston，“回流胃炎：明显的组织病理实体？”临床病理学杂志第39卷第3期5，第524-530页，1986。查看在：出版商网站|谷歌学术
34. A. Power，N. Pearson，T.Pham，C. Cheung，A. Phillips和A. Hickey，“高温心脏内的氧化磷酸化和ATP合酶逆转”，“生理报告，第2卷，第2期9, pp. 1298 - 1298, 2014。查看在：出版商网站|谷歌学术
35. 学术界。Su, G. P. McStay和A. Tzagoloff，“当Atp9p由Atp9p- cox6p复合物提供时，酵母线粒体ATP合酶转子成分的组装增强，”生物化学杂志，卷。289，没有。45，pp。31605-31616，2014。查看在：出版商网站|谷歌学术
36. J. Flint和T. Shenk，“病毒转激活蛋白”，遗传学年评，卷。31，第177-212，1997。查看在：出版商网站|谷歌学术
37. N. D.珀金斯，L. K. Felzien，J. C.贝茨，K.梁，D.H。Beach和G. J.纳贝尔，“NF-的调控κ乙由与p300的共活化剂相关的细胞周期蛋白依赖性激酶，”科学号，第275卷。5299，第523-527页，1997。查看在：出版商网站|谷歌学术
38. W. W. Marhin，陈实，L. M. FACCHINI，A. J. Fornace酒店Jr.和L. Z.佩恩，“Myc蛋白阻遏生长停滞基因GADD45，”癌基因，卷。14，不。23，PP。2825-2834,997。查看在：出版商网站|谷歌学术
39. M. Tatsugami，M.伊藤，S. Tanaka等人，“胆酸促进肠化生和胃癌，”癌症流行病学生物标志物和预防，卷。21，不。11，pp。2101-2107,2012。查看在：出版商网站|谷歌学术
40. W.Cao，W. Tian，J.Hong等，“胃腺癌胆汁酸受体Tgr5的表达”美国生理学 - 胃肠道和肝脏生理学，卷。304，没有。4，第G322-G327，2013。查看在：出版商网站|谷歌学术

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