茶多酚的构树诱导细胞凋亡HepG2细胞通过ERK和一种蛋白激酶信号通路的失活

文摘

的提取构树被证实有抗肿瘤活性。然而,这种现象的潜在机制仍不清楚。本研究旨在阐明HepG2细胞的凋亡机制诱导的多酚构树(是)。结果显示,是抑制HepG2细胞的增殖存在剂量依赖的相关性和时间的方式。流式细胞仪分析显示是HepG2细胞的细胞凋亡率显著增加。是增加细胞内活性氧(ROS)生产和减少细胞内超氧化物歧化酶(SOD)水平HepG2细胞。是诱导细胞周期阻滞在G1期。免疫印迹显示,是调节的比例伯灵顿/基类库2的表达水平半胱天冬酶3,激活p53 HepG2细胞。增殖相关信号的抑制蛋白激酶B (PKB / AKT)和生存相对信号(细胞外signal-regulated激酶(ERK)也被观察到PBP-treated HepG2细胞。我们的研究表明,HepG2细胞诱导的细胞凋亡是通过失活mitochondria-mediated ERK和一种蛋白激酶信号通路。

1。介绍

肝细胞癌(HCC)是最常见的原发恶性肿瘤的肝脏,导致全球沉重的医疗负担。此外,肝细胞癌估计是第二个最常见的癌症死亡原因(1]。肝癌的发病率和死亡率增加在北美和欧洲多个地区,然而下降在传统高风险的国家和地区,包括日本和中国部分地区2,3]。肝细胞癌的预后仍然差,5年生存率仅为18%。当早期发现,肝癌患者的手术切除;然而,切除术后5年复发率约70% (4]。如今,现代合成最广泛使用的有针对性的化疗药物经常调用的副作用(5,6]。因此,有效和安全的极大关注代理商开发对肝癌的预防和治疗。

天然产品已经越来越多地用于药物开发的主要来源和铅化合物。天然植物化学物质用于癌症治疗正在成为重要的药物发现和研究[7]。使用草药作为替代产品在中国很受欢迎,在世界各地8]。构树落叶树,自然生长在中国和泰国等亚洲和环太平洋国家(9]。它的根,叫,和水果自古以来被用作中药。生物活性成分提取构树有抗菌10),抗氧化剂(11),anti-nociceptive,抗炎12),和抗肿瘤13)活动。的提取构树叶子展品对HepG2细胞毒性细胞(14]。与此同时,n丁醇的比例构树抑制结肠癌细胞株的增殖HT-29细胞(15]。然而,HepG2细胞诱导的细胞凋亡机制的提取构树还没有完全理解。

在这项研究中,多酚构树(是)准备,是对HepG2细胞增殖和凋亡的影响进行了研究。与此同时,底层的机制进行了研究。

2。材料和方法

2.1。化学品和材料

甲酸(高效液相色谱级)和乙腈(高效液相色谱级)购买的费舍尔(沃尔瑟姆,马萨诸塞州,美国)。杜尔贝科的修改鹰介质(DMEM)收购HyClone实验室。胎牛血清(的边后卫)购买的σ,所以3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyltetrazolium溴化(MTT) propidium碘(π),和2,7-dichlorofluorescin二乙酸(DCFH-DA)。膜联蛋白FITC /π凋亡检测设备采购从MultiSciences生物技术有限公司有限公司(杭州,浙江,中国)。总SOD的检测设备是购自南京建成生物工程研究所(南京、江苏、中国)。M-MLV从Promega公司获得,SYBR^R预混料从豆类Taq™。蛋白酶和磷酸酶抑制剂鸡尾酒购买从罗氏公司(美国)。抗体的特定伯灵顿,基类库2,半胱天冬酶3,p53从圣克鲁兹采购。兵,p-ERK AKT、p-AKTβ肌动蛋白,HRP-conjugated二级抗体购自细胞信号技术。

2.2。准备的是

新鲜树皮构树在托儿所收集广东海洋大学(湛江,广东,中国)。适当的干燥能力是由65%的乙醇溶液提取根据以前的报告(16,最佳的固液比1:30。净化进行了如下:phenol-dissolved液体集中足够的旋转蒸发器(re - 2000 a、上海Yarong生化仪器工厂,上海,中国)之前的最终浓度75%的酒精液体添加。陆AB-8大孔树脂(Kang记录药业有限公司,有限公司,山东、中国)列是用来净化粗提取液。之后,浓缩的液体在透析袋透析1000分子量截止(MWCO 1000,上海Toscience生物技术有限公司,上海,中国)和冻干冷冻干燥机(美国VIRTIS ES2k)。的相对丰度的量化孤立进行酚类植物化学物质通过UPLC分析,这是进行AcquityTM超高效液相色谱系统(水域,美国),和一个安捷伦ZORBAX-SB C18(100毫米×4.6毫米id, 1.8μ米)是用于所有分离。洗脱液组成的流动相,0.1%甲,甲乙腈洗脱液B 0.1%解决方案,应用在接下来的梯度洗脱程序:0分钟,95%,30分钟,70%,40分钟,5%,41分钟,95%。分离温度保持不变在30°C,流量和样本数量设置为0.8毫升/分钟和3μL,分离都是监控在254纳米11]。不同化合物的保留时间t_R)被记录。确认山峰,但是实验使用三重TOF 5600和质谱仪(美国AB SCIEX)进行。最好的结果是获得当电喷射在负离子模式下和质量范围如下:米/z100 - 1500;GS1, 50磅力/ in2;GS2 50磅力/ in2;坏蛋,35磅力/ in2;TEM, 550°C;−4500 V。

2.3。细胞培养和治疗

HepG2细胞由广东医科大学附属医院(湛江,广东,中国)和10%的边后卫在DMEM培养补充37°C公司5%₂湿润的气氛。是溶解在DMEM培养基,然后用一个0.22中被消毒μm膜过滤器。刚做好了工作介质稀释适当的体积与基底原液中含有10%的边后卫。

2.4。细胞生存能力分析

细胞生存能力被MTT试验评估。总之,1×104个细胞/被播种到96孔板。完整的粘附后,是被分别测试浓度的62.5,125,250,500μ12 g / mL 6 h, h和24 h。细胞被沾染了20μL MTT(5毫克/毫升)4 h在37°C的5%股份₂湿润的气氛。浮在表面的丢弃,150μL(添加DMSO和混合轻轻10分钟。570海里的吸光度测量的标仪(美国生物Tek ELx808)。

2.5。细胞凋亡检测

HepG2细胞被播种在6-well板块(5×105细胞/)和处理在不同浓度的62.5,是125和250μg / mL 24 h。然后收集细胞,洗两次与冰冷的磷酸缓冲盐(PBS, pH值7.4)和彩色异硫氰酸荧光素(FITC)和PI解10分钟在黑暗中根据指令的膜联蛋白FITC /π凋亡检测设备。最后,测定凋亡细胞用流式细胞分析仪(BD FACSCanto™II,正欲Dikson,美国)。

2.6。细胞周期分析

HepG2细胞被播种在6-well板块(5×105细胞/)和处理是在浓度为62.5和125μg / mL 24 h。细胞被收获,用冰冷的PBS,暂停3毫升70%乙醇,一夜之间,放在−20°C。然后,固定细胞被沾染了0.25μg / mLπ解30分钟前在冰上流式细胞仪根据前面的研究(17]。

2.7。测量细胞内的活性氧

细胞内活性氧的生产监控使用荧光探针DCFH-DA氧化剂敏感。短暂,HepG2细胞被播种在6-well板块(5×105细胞/)和处理是在浓度从62.5到250μ6 h g / mL。细胞被收获,沾染了10μ在37°C m DCFH-DA 30分钟5%的股份有限公司₂湿润的气氛。细胞内活性氧的生产被流式细胞仪检测。

2.8。测量细胞内总SOD活性

HepG2细胞被播种在6-well板块(5×105细胞/)和处理是在浓度从62.5到250μg / mL 24 h。细胞收获和resuspended在水里,然后样品在液氮冷冻和解冻室温反复三次得到上层的细胞内SOD活性的分析根据设备指令。的吸光度测定波长550 nm的标(美国生物Tek ELx808)。

2.9。总RNA分离和定量实时PCR分析

HepG2细胞培养在6-well盘子和接触是在100年μg / mL 12 h。总RNA提取试剂盒试剂。总RNA浓度由SmartSpec +分光光度计(美国Bio-Rad)和完整性是可视化在1%琼脂糖凝胶。的合成第一链cDNA 1μ克使用M-MLV总RNA逆转录酶和益生元(dT) 18个引物根据制造商的协议。根据指令,1μL模板互补脱氧核糖核酸是12.5添加到最后一卷μL反应混合物,和实时PCR的参数如下:1分钟在95°C紧随其后40周期在95°C涉及变性20年代,20年代退火60°C,伸长为20年代72°C。引物的序列的具体设置伯灵顿,基类库2,p53 (18),原癌基因,半胱天冬酶3,β肌动蛋白(19在这次调查如表所示1。每一个基因的表达水平是标准化的β肌动蛋白基因和计算2^−ΔΔCt方法。所有实时PCR实验进行了一式三份,和数据表示的意思是至少有三个独立的实验。

2.10。蛋白质提取和免疫印迹

HepG2细胞是在不同浓度处理后24小时的潜伏期。被冰冷的PBS,收集细胞和细胞溶解在冰中30分钟修改里帕细胞裂解缓冲包含50 mM Tris-HCl (pH值7.4),150毫米氯化钠,1毫米EDTA, NP-40 1%, 0.1% SDS, 0.25%钠脱氧胆酸盐,蛋白酶和磷酸酶抑制剂鸡尾酒。整个细胞溶解产物被离心澄清在4°C 12000 rpm 15分钟,和蛋白质浓度测定BCA化验。总蛋白质加热5分钟在98°C, 12% SDS-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page)分离,并转移到聚乙二烯二氟化物薄膜(PVDF)(美国微孔)。被屏蔽后5%的脱脂牛奶1 h在室温下,一夜之间,膜被孵化在4°C的具体主要抗体。膜清洗与PBS / 0.1% Tween-20解决方案然后孵化peroxidase-conjugated二级抗体(稀释1:2000),再次清洗,使用一个增强化学发光试剂盒开发(ECL,微孔)。蛋白质的乐队与ChemiDoc可视化成像系统(美国Bio-Rad)。

2.11。数据和统计分析

数据被当作平均数±标准差。分析之间的差异治疗组和对照组,单向方差分析应用于计算统计学意义。与的区别小于0.05被认为是具有统计学意义的价值。所有统计数据进行GraphPad Prism 5.0(美国GraphPad,圣地亚哥,CA)。

3所示。结果

3.1。PBP成分

提出了图1UPLC的色谱图显示每个成分的变化和相对数量。的决心和成分分析是经质/女士。的主要组件是绿原酸和dicaffeoylquinic酸。总酚类提取物的浓度是由相对UPLC色谱图的峰面积。这些化合物的结构鉴定与发布是通过光谱分析和比较数据。所有分数的乙醇提取构树产生酚类植物化学物质由大孔树脂纯化如上描述。这些结果表明,构树树皮包含显著酚醛含量高。表2显示,选民是不同类型的绿原酸(73.99%)包括绿原酸(52.22%);其他的包括isoquercetrin(4.34%)和broussonetineA和C (3.67%)。酚类植物化学物质隔绝是和他们的结构如图2。

3.2。HepG2细胞增殖和抑制细胞凋亡是引起的

的影响是对HepG2细胞生存能力被MTT试验检测。发现HepG2细胞的增殖是显著地抑制了在存在剂量依赖的相关性和时间的方式(图3(一个))。此外,500年μg / mL是表现出明显的细胞毒性。与对照组相比,在500年HepG2细胞治疗的可行性μg / mL是6 h仅为28.57%。它是63.48%、48.11%和20.17%,分别暴露在62.5,125年和250年μg / mL是24 h。与对照组相比,细胞生存能力的差异在统计学上意义重大。然而,高浓度的是导致HepG2细胞的坏死。

流式细胞术分析来检测细胞凋亡HepG2细胞治疗是通过膜联蛋白FITC /π凋亡检测设备。正常细胞,坏死细胞的比率early-apoptosis细胞,late-apoptosis细胞四象限图所示。HepG2细胞诱导的细胞凋亡是与PBP剂量和增加。HepG2细胞的早期和late-apoptosis比率分别为13.6%,47.4%,和70%,分别对应,至62.5,125年和250年μ克/毫升PBP治疗24小时。HepG2细胞表现出不同程度的凋亡增加PBP浓度(图3 (b))。这些结果表明,诱导细胞凋亡是HepG2细胞剂量依赖性的方式(图3 (c))。

3.3。是对HepG2细胞氧化还原平衡的影响

细胞内氧化还原体内平衡是非常重要的细胞的扩散。我们评估HepG2细胞的氧化还原状态之前和之后是曝光。与对照组相比,HepG2细胞治疗62.5μg / mL 6 h显示细胞内ROS含量略有增加。是浓度增加,ROS水平显著增加。HepG2细胞治疗是在250年μg / mL 6 h ROS水平最高,显著高于对照组的(图4 (b)),细胞内SOD的活性也显著的抑制是治疗HepG2细胞(图4 (c)),这暗示HepG2细胞的凋亡与中断引起的细胞内氧化还原平衡增加ROS水平和降低抗氧化能力。

3.4。是对HepG2细胞细胞周期的影响

的影响是对HepG2细胞周期检测到流式细胞术分析。62.5 HepG2细胞治疗μg / mL是24 h,在G1期细胞比例为85.34%,125年当处理μg / mL是,比例为95.96%,显著高于控制。,在年代和G2期细胞比率也相应减少,这意味着是对HepG2细胞的细胞周期G1期(图被捕5)。

3.5。监管Apoptosis-Related mRNA表达HepG2细胞是治疗

定量实时PCR是用来分析细胞凋亡标记基因的表达水平(例如,伯灵顿,基类库2,p53岁,原癌基因,半胱天冬酶3)在HepG2细胞接触是在100年μg / mL 12 h。结果显示,apoptosis-related基因的表达水平显著改变在HepG2细胞由于是曝光。proapoptosis基因的表达水平,伯灵顿,半胱天冬酶3,肿瘤抑制基因p53显著调节;与此同时,antiapoptosis基因的表达水平基类库2,原癌基因显著下调(图6)。

3.6。是Mitochondria-Mediated HepG2细胞的凋亡诱导

众所周知,的变化伯灵顿,基类库2,半胱天冬酶3,p53表达和伯灵顿/基类库2比mitochondria-mediated凋亡通路的重要特征。为了确认到底HepG2细胞的凋亡通路是造成的,HepG2细胞处理62.5和125μ克/毫升是24 h和蛋白表达水平伯灵顿,基类库2,半胱天冬酶3,p53个被西方墨点法确定。结果表明,伯灵顿,半胱天冬酶3,p53,伯灵顿/基类库2比HepG2细胞暴露于是剂量依赖性的方式有显著增加(图7)。

3.7。是对ERK和一种蛋白激酶磷酸化的影响HepG2细胞

进一步探索mitochondria-mediated机制是诱导细胞凋亡,我们假定的可能角色ERK和AKT的过程中是对HepG2细胞的凋亡。结果表明,ERK和一种蛋白激酶表达的细胞没有影响,同时,p-ERK p-AKT表达,是对HepG2细胞的增殖和生存很重要,明显降低(图8)。它可以合理确认HepG2细胞诱导的细胞凋亡是与抑制ERK和PI-3K / AKT信号通路。

4所示。讨论

是,从构树树皮,主要由绿原酸,cryptochlorogenic酸,和cis-5-coffee acylchlorogenic酸,其次是少量的3、4,5-trimethoxyphenyl-1-O -β-D-glucopyranoside isoquercetin, 4, 5-dicaffeoylquinic酸。是抑制HepG2细胞的增殖和细胞周期G1期受阻。黄等。20.)也报告了类似的结果与isoquercetrin HepG2细胞的治疗。重要的是,一些研究发现HepG2细胞的生长可以被绿原酸(21),和相对有效的浓度是类似于我们的数据。然而,绿原酸对HepG2细胞增殖的影响是有争议的。Miccadei et al。22)声称,朝鲜蓟提取物(绿原酸和两个dicaffeoylquinic酸)活动proapoptotic HepG2细胞。相反,Granado-Serrano et al。23]发现活性氧的生产绿原酸对HepG2细胞减少,但没有突出的观察对细胞凋亡的影响。这是猜测,绿原酸可能通过不同的机制而发挥抗肿瘤活性直接诱导HepG2细胞凋亡。此外,总生物碱构树水果表现出较低的细胞毒性比某些正常的人类皮肤表皮细胞癌行(24]。除了绿原酸,其他是组件在诱导细胞凋亡的作用仍不清楚;我们假设绿原酸可能是与其他有效成分协同作用。

基类库2家庭成员包括proapoptosis蛋白(伯灵顿病因,彪马,荡妇,和报价),antiapoptosis蛋白(基类库2,基类库xl)发挥着至关重要的作用在控制细胞凋亡的线粒体途径25,26]。与伯灵顿/基类库2蛋白质比例增加,线粒体通透性转换孔的结构和渗透率注射(mPTP药物)的变化,最终导致mitochondrial-driven崩溃(27]。在这项研究中,伯灵顿表达显著调节PBP-treated HepG2细胞,而基类库2同时表达下调。此外,半胱天冬酶3也显著调节。因此,以上的差别,对这些基类库2、upregulation伯灵顿可能导致PBPs-induced HepG2细胞凋亡。我们得出结论,是抑制通过mitochondria-mediated HepG2细胞增殖的细胞凋亡途径。

p53个被诱导细胞凋亡和mitochondria-mediated细胞凋亡中起着重要的作用28]。在这项研究中,细胞周期PBP-treated HepG2细胞(p53野生型)在G1期,伴随着被捕p53表达式upregulation和原癌基因以上;差别表达对这些它可以推断出p53,原癌基因发挥着至关重要的作用,是HepG2细胞诱导的细胞凋亡过程。

线粒体是活性氧的主要来源之一。线粒体功能障碍会导致更多的活性氧的产生并引起mitochondria-mediated凋亡,导致一个恶性循环29日]。肿瘤细胞与更高层次的ROS往往比正常细胞更容易被杀死的ROS水平较低(30.]。在目前的工作,生产的细胞内ROS PBP-treated HepG2细胞是剂量依赖性的方式显著增加。线粒体是活性氧的主要来源,这暗示线粒体功能障碍是由于PBP治疗。因此,它承诺屏幕新的抗癌药物从天然化合物可能诱导肿瘤细胞的活性氧产量(31日]。草皮,是一种有效的抗氧化剂,扮演着一个重要的角色在消除过氧化物和自由基的细胞在体内的代谢过程中产生和维持细胞氧化还原内稳态的组织(32]。我们的发现表明,细胞内SOD活性PBP-treated HepG2细胞明显死去,和细胞氧化还原状态的失衡加剧,导致HepG2细胞的凋亡。

持续激活ERK,扮演一个重要的信号分子在细胞增殖33,34),也是很有必要对癌细胞的生存和增殖35]。抑制ERK有助于增加细胞死亡的发生。作为一种重要的下游的渠道c-Met(癌基因),ERK的磷酸化是必需的坏,一个凋亡蛋白基类库2家庭[36,37]。ERK抑制剂被认为是一个潜在的抗肿瘤剂(38]。我们的研究结果表明,ERK的磷酸化HepG2细胞治疗是被显著地抑制剂量依赖性的方式,支持的ERK差别的观点对这些活动有利于肝细胞癌治疗。

PI-3K / AKT信号通路对肿瘤细胞增长很重要,和一种蛋白激酶的磷酸化直接块不同的下游目标,比如proapoptotic蛋白质坏,伯灵顿,半胱天冬酶9 (39]。抑制一种蛋白激酶磷酸化被证明为小说在人类癌症治疗的目标代理(40]。因此,可以得出结论,减少磷酸化AKT是可能有助于促进细胞凋亡引起的由多个目标。

5。结论

总之,本研究表明是诱发mitochondria-mediated HepG2细胞凋亡通过ERK和一种蛋白激酶信号通路的失活。我们的研究结果可以应用特征和开发新的抗肿瘤挖构树提取物。

缩写

DMEM:	杜尔贝科鹰介质的修改
DCFH-DA:	2,7-dichlorofluorescin二乙酸
兵:	细胞外signal-regulated激酶
肝细胞癌:	肝细胞癌
合:	辣根过氧化物酶
的边后卫:	胎牛血清
FITC:	异硫氰酸荧光素
mPTP:	线粒体通透性转换孔
麻省理工:	(3)- 4 5-Dimethylthiazol-2-yl 2, 5-diphenyltetrazolium溴离子
女士:	质谱分析
是:	茶多酚的构树
PBS:	磷酸盐
PI:	Propidium碘化
ROS:	活性氧
SOD:	超氧化物歧化酶
UPLC:	终极高性能液相色谱法。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者声明没有潜在的利益冲突的研究,本文的作者,和/或出版。

确认

这项工作得到了广东省农业科技计划项目(没有。0809035)。

引用

1. 问:韩寒,h .赵y江,c .阴和j .张“HCC-derived液:关键球员和目标对癌症免疫逃避,“细胞,8卷,不。6,558年,页2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. a·g·信号和h . b . El-Serag”,从流行病学预防肝细胞癌:将知识转化为实践,“临床胃肠病学和肝脏病学,13卷,不。12日,第2151 - 2140页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. j·d·l·r·罗伯茨和杨“肝癌的流行病学和管理。”北美的传染病医院,24卷,不。4、899 - 919年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. m . Yarchoan p . Agarwal, a·维兰纽瓦et al .,“最近的进展和治疗策略对肝细胞癌癌症研究,卷79,不。17日,第4330 - 4326页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. s, s .元,问:赵,b . Wang x,和k·李,“槲皮素增强阿霉素化疗效果对人类乳腺癌细胞同时减少有毒副作用,”生物医学和药物治疗卷,100年,第447 - 441页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. h。许,M.-C。陈,r . Baskaran et al .,“铂电阻在结直肠癌细胞是通过激活介导ABCG2缓解ER应激诱导细胞凋亡,”细胞生理学杂志,卷233,不。7,5458 - 5467年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. 杜塔,s . Mahalanobish萨哈,s . Ghosh和p . c .银”天然产物:即将到来的治疗癌症的方法,”食品和化学毒物学卷,128年,第255 - 240页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. l . Dongjoo萨哈,i . y . Kim和k . s .崔”Paraptosis在天然产物的抗癌阿森纳,”药理学和治疗卷,162年,页120 - 2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. 板432 c·巴克。”构树。”柯蒂斯的& apo年代植物学杂志,19卷,不。1,仅8,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. H.-Y。孙,c . s . Kwon和k h .儿子,“抑菌效果prenylated黄酮醇,papyriflavonol,隔绝构树(l)发泄。对白色念珠菌微生物学和生物技术杂志》上,20卷,不。10日,1397 - 1402年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. >。徐,黄永发l . Wang。胡,s·k·李,M.-H。王,“抗氧化活动和相关的多酚成分甲醇从构树干树皮和木材,提取分数”食品科学与生物技术,19卷,不。3、677 - 682年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. L.-W。林,H.-Y。陈,C.-R。吴et al .,”与各个部分ofBroussonetia papyriferaas antinociceptive和抗炎活动在啮齿动物中,“生物科学、生物技术和生物化学,卷72,不。9日,第2384 - 2377页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. 邓h . m .郭x m . Wang, x张,Z.-Y。王”,小说抗癌剂Broussoflavonol B会使雌激素受体(ER)α36表达和抑制增长的er阴性乳腺癌mda - mb - 231细胞,”欧洲药理学杂志,卷714,不。1 - 3,56 - 64,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. n . Naveen Kumar h . Ramakrishnaiah诉克里希纳和m .完婚,“细胞毒性构树的活动(i) MCF-7发泄,海拉和HepG2细胞行,”国际药学和制药科学杂志》上》第六卷,没有。5,2014。视图:谷歌学术搜索
15. h·j·l . Wang的儿子>。徐,黄永发。胡,M.-H。王”,抗炎和抗癌特性的二氯甲烷和丁醇分数构树的干树皮,”朝鲜社会应用生物化学杂志》上,53卷,不。3、297 - 303年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. c·h·李,j . Chen, h, c .阴和j·阮总类黄酮诱导的细胞凋亡Arachniodes exilis通过活性氧species-mediated HepG2细胞线粒体功能障碍涉及MAPK激活,“以证据为基础的补充和替代医学ID 906941条,卷。2014年,11页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. l . Min,他和l .回族“增殖蛋白激酶在肝细胞癌的发展,“在癌症生物学研讨会,21卷,不。1,10 - 20,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. l . Zhang y, w .他,y,和z秋”小说的羽扇豆醇引起的肝癌细胞凋亡机制通过脑源性神经营养因子抑制和糖原合成酶激酶3β复活,”欧洲药理学杂志卷。762年,55 - 62、2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. m·艾哈迈德·m·j·艾克塔·m·a·西迪基et al .,“氧化应激介导的细胞凋亡引起镍铁氧体纳米粒子在培养A549细胞,”毒理学,卷283,不。2 - 3、101 - 108年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. 唐黄g . b . Tang k . et al .,“异槲皮苷抑制肝癌体内和体外的进展通过MAPK信号通路”肿瘤的报道没有,卷。31日。5,2377 - 2384年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. y燕:刘:侯,l .董和j·李,“绿原酸能抑制肝细胞癌在体外和体内,”《营养生物化学杂志》上,46卷,第73 - 68页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. s . Miccadei d·d·Venere a Cardinali et al .,“多酚提取物的抗氧化和凋亡特性的可食用部分洋蓟(Cynara scolymusl .)对培养大鼠肝细胞和人类肝癌细胞,”营养和癌症,60卷,不。2、276 - 283年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. a . b . Granado-Serrano m .洛杉矶马丁,m . Izquierdo-Pulido l·戈雅l·布拉沃和拉莫斯,“分子机制(−−)表儿茶素和绿原酸的调控凋亡和生存/增殖通路在人类肝癌细胞系,”农业与食品化学杂志》上,55卷,不。5,2020 - 2027年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. G.-Q彭日成树群。王,js。林,y刁,r。。许,“细胞毒性活性生物碱的构树水果,”生物制药,52卷,不。10日,1315 - 1319年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. m·c·魏”Bcl-2-related淋巴肿瘤的基因。”国际血液学杂志》,卷80,不。3、205 - 209年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. 问:陈和e . j . Lesnefsky”电子传递的封锁在缺血保存bcl - 2,抑制线粒体渗透性转换孔开放,”2月的信,卷585,不。6,921 - 926年,2011页。视图:谷歌学术搜索
27. m·泽田师傅s中岛美嘉y Banno et al .,”神经酰胺形成的订购、半胱天冬酶的激活和伯灵顿/ bcl - 2表达在etoposide-induced C6神经胶质瘤细胞凋亡,”细胞死亡与分化,7卷,不。9日,第772 - 761页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. n . t . Wickramasekera通用Das,“肿瘤抑制基因P53和雌激素受体在nuclear-mitochondrial通信中,“线粒体》16卷,26-37,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. k . Ito a Hirao, Arai f . et al .,“排错:活性氧物种法案通过p38 MAPK限制造血干细胞的寿命,”自然医学,16卷,不。1,第451 - 446页,2006。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. t . Paz-Elizur z Sevilya y Leitner-Dagan, d .鹅岭l . c . Roisman z . Livneh,“氧化DNA损伤的DNA修复人类致癌作用:癌症风险评估和预防潜在的应用程序”癌症的信,卷266,不。1、60 - 72、2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. d . Trachootham y, h . Zhang et al .,“选择性杀死oncogenically转化细胞通过ROS-mediated机制β异硫氰酸苯乙酯”,癌症细胞,10卷,不。3、241 - 252年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. a . Tahir”失衡的血清微量元素在急性白血病有助于pro和氧化应激通过ROS和SOD规定:基于人口的研究中,“国际牙髓学的期刊,34卷,不。1,11 - 15号,2015页。视图:谷歌学术搜索
33. l . Chang和m . Karin哺乳动物MAP激酶信号级联”,自然,卷410,不。6824年,37-40,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. x方,s, a·埃德尔et al .,“监管Ras-mitogen-activated坏112丝氨酸磷酸化的蛋白激酶通路,”致癌基因,18卷,不。48岁,6635 - 6640年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. b . a . Ballif和j . Blenis”分子机制调节哺乳动物增殖蛋白激酶(MAPK)激酶(MEK) -MAPK细胞生存信号,”细胞生长和分化,12卷,不。8,397 - 408年,2001页。视图:谷歌学术搜索
36. 邓z . j . Wang Gui, l . et al .,“c-Met移植人类胃癌细胞水通道蛋白3表达通过ERK信号通路”癌症的信,卷319,不。1,第117 - 109页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. j . h .公园,t·t·赵k h .公园,和m·k·李,“重复与多巴胺D1受体激动剂治疗skf - 38393调节细胞生存能力通过持续ERK-Bad-Bax激活多巴胺能神经元细胞,”大脑研究行为卷,367年,第175 - 166页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. b . h . O”尼尔·l·w·高夫,j·s·w·Kauh”第二阶段的研究增殖蛋白激酶1/2抑制剂selumetinib晚期肝细胞癌患者,”临床肿瘤学杂志卷,29号17日,第2356 - 2350页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. h·l .元,j . Wang, c·肖和刘x, y . Wang”Isoorientin通过线粒体功能障碍和凋亡抑制PI3K / Akt信号通路在HepG2癌症细胞,”毒理学和药理学应用,卷265,不。1,第92 - 83页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. t . f .因特网“PI3K / Akt:问题做了正确的事情。”致癌基因,27卷,不。50岁,6473 - 6488年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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