通过RhoA-Mediated信号ARHGEF10L促进宫颈肿瘤发生

文摘

背景。ρ鸟嘌呤核苷酸交换因子10-like蛋白质(ARHGEF10L)是鸟嘌呤核苷酸交换因子家族的一员,负责监管ρGTPase活动,从而导致肿瘤发生。我们之前的研究表明ARHGEF10L基因之间有一个强大的协会和宫颈癌的风险。本研究调查了ARHGEF10L宫颈肿瘤的致病作用和机制。方法。海拉细胞,来源于宫颈癌,与ARHGEF10L-overexpressing转染质粒或anti-ARHGEF10L核。细胞计数kit-8化验、愈合化验和细胞凋亡检测进行调查ARHGEF10L细胞活动的影响。ρ拉试验和RNA-sequencing分析进行调查ARHGEF10L参与宫颈肿瘤的致病途径。结果。ARHGEF10L超表达促进细胞增殖和迁移,减少细胞凋亡,诱导epithelial-to-mesenchymal过渡的差别(EMT)通过对这些钙粘蛋白和upregulation N-cadherin和蛞蝓转染海拉细胞。ARHGEF10L的超表达也调节GTP-RhoA, ROCK1, phospho-ezrin / radixin moesin (ERM)在海拉细胞表达。RNA-sequencing分析发现改变了31个基因的转录与ARHGEF10L海拉细胞过度。京都基因和基因组的百科全书(KEGG)和基因本体论(去)路径分析发现显著差异在细胞周期蛋白依赖性蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性,细胞反应维生素A, toll样受体信号通路。实时聚合酶链反应和免疫印迹证实70 kDa的增加表达热休克蛋白6 (HSPA6) ARHGEF10L-overexpressing海拉细胞。因为我们报道,ARHGEF10L通过RhoA-ROCK1-ERM信号发挥了作用,肿瘤发生的一个重要途径,和刺激EMT HSPA6表达式在肝肿瘤和胃肿瘤细胞,我们建议ARHGEF10L在许多肿瘤是一种新型的致癌基因。

1。介绍

ρgtpase家庭大约20小G蛋白的主要监管机构不同的细胞功能,如细胞生长、生存、能动性,形态发生和分化1]。最良好的成员Cdc42 Rac1, RhoA。主动GTP-bound状态和蛋白状态是两个不同的ρGTPase构象。GTP-bound蛋白质的构象可以与不同的效应蛋白的下游信号调解ρgtpase [2,3]。ρ鸟嘌呤核苷酸交换因子(RhoGEFs)为三磷酸鸟苷促进GDP的交换,导致GTPase激活。RhoGEFs导致肿瘤形成、遗传性疾病和传染性疾病(4]。

ρ鸟嘌呤核苷酸交换因子10-like蛋白质(ARHGEF10L),也叫GrinchGEF, RhoGEF家族的一员,在激活ρgtpase起着至关重要的作用。ARHGEF10L有典型的双同源性的结构域,一个假定的WD40-like域,和两个预测跨膜螺旋(5]。在全基因组单核苷酸多态性(SNP)协会研究中,斯泰西等人表明,苏格兰民族党rs7538876赋予皮肤基底细胞癌的风险,该地区周围rs7538876包含编码ARHGEF10L [6]。•厄普等人表明,snp rs2256787和rs10788679 ARHGEF10L基因与卵巢癌上皮(密切相关7]。最近,我们使用了Illumina公司GoldenGate化验,Sequenom MassARRAY,和TaqMan聚合酶分析可能在ARHGEF10L标记snp位点之间的相关性和各种肿瘤的风险。基因分型结果分析证明了一个强大的协会rs2244444和rs12732894 ARHGEF10L肝癌。研究还发现增加ARHGEF10L在肝癌组织的表达和证明,这种增加的表达促进肝癌细胞增殖和迁移通过激活RhoA-ROCK1-phospho-ERM通路和epithelial-to-mesenchymal过渡(EMT)两个小鼠肝脏肿瘤细胞系和肿瘤。这一发现表明,增加表达ARHGEF10L在肝细胞肿瘤发生中起着重要的作用8]。rs10888045,此外,这项研究表明,rs10788678 rs74059378, rs12562076显著差异在等位基因频率和/或宫颈癌组之间的基因型频率(n= 197)和控制(n= 384)[8]。验证Illumina公司微阵列基因分型结果,ARHGEF10L内七个snp位点的基因在一个独立的病例对照研究使用Sequenom MassARRAY。病例对照分析显示,基因型频率显著差异之间的rs12067869宫颈癌组(n= 258)和健康对照组(n= 760)。多个测试校正后,这些snp仍明显不同的等位基因频率和基因型频率。pcr分析表明ARHGEF10L基因也是基因与宫颈肿瘤风险的风险。因此,本研究旨在调查是否以及如何颈ARHGEF10L基因参与肿瘤发生。

2。方法和材料

2.1。ARHGEF10L-Expressing质粒的转染到海拉细胞

海拉宫颈癌细胞系培养在high-glucose杜尔贝科修改鹰的介质(美国Gibco DMEM)补充10%胎牛血清(美国Gibco的边后卫)和1%青霉素和链霉素(美国Gibco)。细胞培养在湿润的气氛中含5%的股份有限公司₂在37°C。海拉细胞(6×10⁵)与ARHGEF10L-encoding转染质粒(2µ使用PolyJet g)^TMDNA体外转染试剂(美国SignaGen)根据制造商的协议。建设ARHGEF10L-expressing质粒被描述在一项研究8]。pcDNA 3.1 (+) rfp用作控制质粒表达载体。在转染后48 h和72 h, ARHGEF10L表达式是使用实时聚合酶链反应和免疫印迹分析来验证转染效率。所有实验至少重复三次。

2.2。小干扰rna为海拉细胞转染的干扰

针对ARHGEF10 L SiRNA寡核苷酸基因(目标序列:5′-CCGCGTGAAGGAGATCCTG CA-3′)设计、合成了试剂盒(德国)。海拉细胞培养(6×10⁵)转染150 ng siRNA使用HiPerFect转染试剂(试剂盒、德国)根据制造商的协议。时候核,不对应目标序列在人类基因组中,被用作控制。ARHGEF10L表达式是使用实时聚合酶链反应和免疫印迹分析来验证转染效率。所有实验至少重复三次。

2.3。定量实时聚合酶链反应(存在)

转染后,从海拉细胞总RNA提取使用RNAprep纯细胞工具包(TIANGEN,中国)然后reverse-transcribed cDNA使用RNA PCR试剂盒(TOYOBO、日本)根据制造商的指示。实时PCR进行使用ViiA7 DX仪器(生活技术,美国)。反应是完成总量的10µl包含5µl SYBR绿色实时PCR反应混合液(TOYOBO、日本),2µl (ddH₂啊,1µl (cDNA, 1µ每个引物的l。使用以下条件:进行PCR扩增10 s在95°C和45周期15在95°C和60年代60°C。相对使用2 mRNA表达水平进行了分析^−ΔΔCT计算方法。glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶(GAPDH) mRNA表达水平是作为内生控制。正向引物和反向引物获得Sangon生物技术(上海,中国),和各自的序列如下:ARHGEF10L: 5′AGTGCCAGGTGGTGTTCTTC3′, 5′AAGAGGTCCCCGATCTTCTC3 ';GAPDH: 5′CAGAACATCATCCCTGCCTCTAC3′, 5′TTGAAGTCAGAGGAG ACCACCTG3 ';HSPA6: 5′ACTTTCACCACCTACTCGGA 3′, 5′CCCTCTCA CCCTCATACAC3”。所有实验至少重复三次。

2.4。免疫印迹分析

转染后,海拉细胞被细胞溶解在冰上了30分钟,然后离心机在4°C 12000 g 30分钟收集上层的。蛋白质浓度测定用bicinchoninic酸(BCA)蛋白质分析工具包(Solarbio,中国)。蛋白质样品(50µg)被转移到聚偏二氟乙烯膜(PVDF微孔,美国)在10% - -12%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds - page)。膜是孵化主要抗体在一夜之间在4°C。与辣根过氧化物酶-孵化后(合)共轭二次抗体,杂交与西方化学发光检测合衬底(美国微孔)。ARHGEF10L抗体商业从西格玛(产品目录号:HPA026426,圣路易斯,美国),和GAPDH(产品目录号:10494 - 1 - ap), N-cadherin(产品目录号:22018 - 1 - ap),钙粘蛋白(产品目录号:20874 - 1 - ap),和HSPA6(产品目录号:13616 - 1 - ap)抗体来源于Proteintech(美国);ROCK1(产品目录号:4035),蛞蝓(产品目录号:9585),ezrin / radixin / moesin,和phospho-ezrin (Thr567) / radixin (Thr564) / moesin (Thr558)抗体(目录号:3142年和3141年)从细胞信号技术(圣路易斯,美国),和bcl - 2(目录号:BA0412)和伯灵顿(产品目录号:BA0315)抗体获得博士德(中国)。ezrin / radixin / moesin抗体包括ezrin / radixin (80 kDa)和moesin (75 kDa)。所有实验至少重复三次。

2.5。细胞增殖的CCK-8化验

评估细胞增殖,细胞计数kit-8化验(CCK-8 Dojindo,日本)进行根据制造商的协议。转染海拉细胞(5×10³细胞每)被播种到96 -孔板和培养72 h。CCK-8解决方案(10µ为1 - 3 h l)添加和孵化37°C。OD值测定的吸光度的波长450 nm使用分光光度计(SpectraMax 190,分子设备)。所有实验至少重复三次。

2.6。愈合试验的细胞迁移

一个愈合试验进行评估细胞迁移。海拉细胞(10×10⁵)培养上six-well板在转染后的24小时,和一个伤口是通过使用微量吸液管细胞提示挠的。的细胞培养24 - 48 h。细胞迁移的图像是在光学显微镜获得的。所有实验至少重复三次。

2.7。赫斯特染色的细胞凋亡

赫斯特染色进行评估转染细胞的凋亡。海拉细胞被播种在24-well板封面上的眼镜。总共5×10⁵细胞被固定为0.5毫升的修复解决方案与PBS 20分钟,洗两次。这些细胞被染色0.5毫升赫斯特33258年从赫斯特染色设备(Beyotime生物技术,中国)5分钟在室温和洗两次与PBS根据制造商的协议。这些细胞被立即使用荧光显微镜成像(奥林巴斯FSX100)。所有实验至少重复三次。

2.8。ρ激活试验

ρ活化分析工具包(细胞骨架,丹佛,美国)是根据制造商的指示评估ρgtpase的活动。转染后,5×10⁶在冰冷的海拉细胞被洗两次PBS和收获与冰冷的细胞裂解缓冲补充1×蛋白酶抑制剂鸡尾酒。然后,溶解产物被离心立即澄清在4°C 10000克1分钟,之后,细胞上清液与15孵化µl rhotekin-RBD珠1 h在4°C使用温和的旋转。从海拉细胞总蛋白是混合了GST-tagged融合蛋白对应残留rhotekin 7 - 89。珠子是用冷洗缓冲和离心收集的。GTP-Rho包裹着rhotekin-RBD珠子被拆除。然后,珠子在2×resuspended Laemmli缓冲和煮。免疫印迹分析工具包中的特定RhoA抗体。GTP-Rho蛋白免疫印迹的anti-RhoA抗体设备。总蛋白与空白质粒转染的细胞被用作控制。所有实验至少重复三次。我们执行这个实验在我们之前的研究8]。

2.9。核糖核酸测序分析

海拉细胞与ARHGEF10L-expressing转染质粒或模拟表达式使用PolyJet向量^TMDNA体外转染试剂根据制造商的协议。6×10⁵转染细胞被洗冷PBS和收集试剂盒(英杰公司™,美国)。RNA序列是由OE生物科技公司(上海,中国)。库建立了使用TruSeq滞留mRNA LT样本准备工具包(Illumina公司、圣地亚哥、钙、美国)。这些库生成和测序Illumina公司测序平台(HiSeqTM 2500平台)。京都基因和基因组的百科全书(KEGG)和基因本体论(去)路径分析是用来预测的功能差异表达mrna。差异表达mrna被定义为与褶皱变化> 2和mrna值< 0.05。每组由三个重复样本。

2.10。统计分析

我们进行了统计分析与集体每个实验的三个或更多的数据复制。学生的t以及应用于分析使用SPSS软件统计显著性。数据表示为平均值±标准偏差(SD)。 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。ARHGEF10L表达对扩散的影响,移民,和海拉细胞凋亡

ARHGEF10L-expressing质粒和模拟表达载体转染到海拉细胞。的表达外源ARHGEF10L检测中存在和免疫印迹。存在结果显示增加mRNA水平的ARHGEF10L转染海拉细胞与细胞转染空白的表达质粒(模拟)(图1(一))。免疫印迹结果显示增加蛋白质含量的ARHGEF10L转染与mock-transfected相比海拉细胞细胞(图1 (b))。自重组ARHGEF10L与RFP的标记蛋白过表达,免疫信号的分子量在转染细胞高于模拟样本没有RFP标签。与此同时,anti-ARHGEF10L和小干扰rna转染到海拉细胞时候。中存在的ARHGEF10L mRNA水平下降的结果显示细胞和小干扰rna(图时候转染1 (c))。免疫印迹显示减少蛋白质含量的ARHGEF10L siRNA-transfected细胞相比,控制细胞(图1 (d))。

CCK-8分析是用来确定ARHGEF10L表达对细胞增殖的影响。与空白相比,海拉细胞转染表达向量(模拟),海拉细胞与ARHGEF10L-expressing质粒转染显示显著增加细胞增殖后转染48 h和72 h(图2(一个))。相比之下,减少在海拉细胞转染细胞增殖检测anti-ARHGEF10L siRNA 48 h和72 h与细胞转染核时候(图2 (b))。因为愈合试验没有发现明显的变化在迁移72 h抓挠后,我们并没有显示在72 h迁移数据。

ARHGEF10L表达对细胞迁移的影响确定使用愈合化验。与空白相比,海拉细胞转染表达向量,海拉细胞与ARHGEF10L-expressing转染质粒显示增加转染后48 h(数据迁移能力2 (c)和2 (d))。海拉细胞转染anti-ARHGEF10L siRNA显示减少迁移能力与细胞转染核时候(数字2 (e)和2 (f))。

ARHGEF10L表达对细胞凋亡的影响被赫斯特染色检测化验,通过测量bcl - 2蛋白的表达和伯灵顿用免疫印迹。与空白相比,在控制细胞转染表达向量(模拟),减少赫斯特33258年观察到的荧光信号与ARHGEF10L海拉细胞转染质粒(图3(一个)),这表明一个低数量的表达质粒的转染后细胞凋亡。凋亡蛋白bcl - 2,显示表达增加。伯灵顿,proapoptotic蛋白质,表现为ARHGEF10L-expressing表达降低海拉细胞(数字3 (b)和3 (c))。ARHGEF10L表达式的沉默与核后,海拉细胞显示荧光信号的增加相比,赫斯特33258年时候的细胞转染核(图3 (d)),这表明大量的小干扰rna转染后细胞凋亡。bcl - 2表达减少,和伯灵顿ARHGEF10L-silenced海拉细胞中表达增加(数据3 (e)和3 (f))。

上述结果表明,ARHGEF10L超表达升高的迁移和增殖,减少在海拉细胞凋亡。相比之下,沉默ARHGEF10L表达海拉细胞抑制迁移,在海拉细胞增殖和促进细胞凋亡。

3.2。ARHGEF10L效果超表达在海拉细胞ρ途径激活

我们使用了ρ激活试验测量的影响ARHGEF10L三磷酸鸟苷/ GDP-Rho gtpase海拉细胞。从海拉细胞总蛋白是混合了GST-tagged融合蛋白对应残留rhotekin 7 - 89。GTP-Rho包裹着rhotekin-RBD珠子被推倒,免疫印迹anti-RhoA抗体。相比之下,与空白质粒转染的细胞,激活的immunosignals GTP-RhoA在细胞显著增加overexpressing ARHGEF10L(图4(一))。这个结果表明,重组ARHGEF10L蛋白质在海拉细胞具有GEF活动,能具体地激活GTP-RhoA。

我们也调查了ROCK1的蛋白表达和phospho-ERM (phospho-ezrin / radixin / moesin),另外两个关键效应器ρ通路。免疫印迹分析发现ROCK1表达的增加和海拉细胞phospho-ERM overexpressing ARHGEF10L(数字4 (b)- - - - - -4 (d))。上述结果表明,过度的海拉细胞ARHGEF10L GTP-RhoA-ROCK1-pERM通路激活。

3.3。影响ARHGEF10L过度EMT在海拉细胞

因为EMT是主要的过程参与癌症入侵和转移,我们检查了ARHGEF10L在EMT的重要作用。我们研究了钙粘蛋白的表达、N-cadherin和蛞蝓,三个EMT的重要标志,在海拉细胞overexpressing ARHGEF10L。免疫印迹检测增加表达式N-cadherin蛞蝓和减少表达上皮钙粘蛋白标志的海拉细胞overexpressing ARHGEF10L(数字5(一个)和5 (b))。结果表明,upregulation ARHGEF10L导致感应EMT的海拉细胞。

3.4。RNA序列分析ARHGEF10L-Overexpressing海拉细胞

RNA序列分析进行与ARHGEF10L-expressing海拉细胞转染质粒或模拟质粒。差异表达mrna变化> 2折起来 被确定。差异表达基因的识别,22个基因的信使rna表达水平调节,和9个基因表达下调。补充图1所示的结果。京都基因和基因组的百科全书(KEGG)和基因本体论(去)路径分析是用来预测的功能差异表达mrna,结果呈现在图2的补充。分析确定了路径显示显著差异,包括细胞周期蛋白依赖性蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性,细胞对维生素A, toll样受体信号通路。

确认差异表达的基因,我们执行中存在和免疫印迹分析来验证70 kDa的表达热休克蛋白6 (HSPA6)因为我们RNA-sequencing试验也发现增加表达HSPA6 SGC7901细胞overexpressing ARHGEF10L [9]。存在结果显示增加的HSPA6 mRNA表达细胞overexpressing ARHGEF10L相比与空白质粒转染的细胞(图6(一))。蛋白免疫印迹细胞中也检测到蛋白表达增加HSPA6 overexpressing ARHGEF10L(数字6 (b)和6 (c))。目前的研究并没有证实任何重要的微分表达式的其他30个基因决定替代表达了RNA序列分析。

4所示。讨论

在目前的研究中,我们调查了使用CCK-8检测细胞增殖,细胞迁移使用愈合化验,细胞凋亡在海拉细胞使用赫斯特染色化验。这些结果表明,ARHGEF10L超表达促进细胞增殖,增强细胞迁移,在海拉细胞和抑制细胞凋亡。与此同时,bcl - 2蛋白水平的调节,伯灵顿的蛋白质水平表达下调。bcl - 2蛋白家族,包括抗凋亡蛋白(如bcl - 2、Bcl-xl和Bcl-w)和proapoptotic蛋白质(如伯灵顿,贝克和坏),控制所有主要类型的细胞死亡,包括细胞凋亡、坏死,自噬10- - - - - -12]。上述结果表明,ARHGEF10L表情刺激宫颈肿瘤发生通过促进细胞增殖和迁移和抑制细胞凋亡。

我们决定在EMT ARHGEF10L宫颈肿瘤的作用。EMT的适应是一个细胞去分化的过程涉及细胞的形态和行为。激活EMT可以通过诱导促进肿瘤转移细胞迁移和入侵13]。钙粘蛋白的差别在EMT过程,对这些基因的平衡N-cadherin表达的增加,导致“钙粘着蛋白开关”,改变细胞粘附(14,15]。许多转录因子发挥着重要作用在EMT的规定,如锌指蛋白SNAI1(蜗牛)和SNAI2(弹头),锌指E-box-binding同源框1和2 (ZEB1和ZEB2),和Twist-related蛋白1和2 (TWIST1和TWIST2)。这些因素激活特定的分子程序抑制上皮标记(钙)的表达和激活的表达间充质标记(波形蛋白)16]。RhoA-ROCK通路被发现促进细胞迁移和EMT在许多肿瘤(17- - - - - -19]。在这项研究中,我们发现ARHGEF10L调节的过度表达间充质标记N-cadherin蛞蝓和上皮钙粘蛋白标记的表达下调表达,这表明ARHGEF10L表达式通过促进EMT刺激宫颈肿瘤发生。

的Rho-associated卷曲螺旋蛋白激酶(岩石)的家庭,包括ROCK1和ROCK2,已经被证明可以发挥核心作用在促进上皮肿瘤的生长和发展20.,21]。RhoA工作取决于Rho-associated蛋白激酶(岩石)[22]。ERM家族蛋白被认为函数一般cross-linkers之间的质膜和肌动蛋白丝,和ERM的磷酸化作用主要是由岩石,已报道在调停RhoA的效果发挥重要作用[23- - - - - -25]。ρ和ROCK-dependent ERM磷酸化调节Fas-mediated Jurkat细胞凋亡(26]。Ezrin磷酸化调节乳腺癌细胞的浸润和转移27)和胰腺癌细胞(28],radixin调节细胞迁移,和粘附在前列腺癌(29日]。EMT过程中,肌动蛋白丝重塑取决于ERM蛋白表达的增加moesin [30.];moesin, EMT标记,支持moesin协会,蜗牛,EMT从而影响乳腺癌的预后(31日]。在目前的研究中,我们发现在海拉细胞激活GTP-RhoA overexpressing ARHGEF10L用ρ激活试验。我们还检测到蛋白表达增加ROCK1和转染海拉细胞烫。上面的结果支持发现ARHGEF10L激活GTP-RhoA-ROCK-pERM通路在海拉细胞激活肿瘤细胞在肿瘤发生。

在这项研究中,我们评估了RNA序列在ARHGEF10L-overexpressing海拉细胞表达谱。我们检测到变化在31个基因的转录表达转染细胞,包括增加HSPA6的转录。与mock-transfected细胞相比,差异表达mrna(褶皱变化> 2, )发现在细胞overexpressing ARHGEF10 L。其中mrna, 22个基因显著调节和9个基因表达下调。我们调查了下游通路的ARHGEF10L RNA序列分析SGC7901细胞起源于胃肿瘤。有趣的是,分析还发现增加表达的HSPA6研究[9]。很有可能,HSPA6 ARHGEF10L下游通路中的一个关键因素。因此,在本研究中,我们使用免疫印迹和实时PCR分析来验证增加HSPA6的转录和翻译。我们计划研究微分表达式的其他30个基因在未来的研究。

HSPA6 HSP70大家庭的一员,显著的调节,并被作为生物标志物细胞压力。HSP70家族分子伴侣’的热休克蛋白由大约70 kDa,它被认为作为有效的缓冲系统对细胞应激引起的生理、病毒、环境、replication-induced或致癌刺激(32,33]。卵巢癌HSP70超表达是一种未分化的标志(34),被发现与增殖和肿瘤大小增加子宫宫颈癌和结直肠癌35,36]。HSPA6基因的超表达与扩散、迁移和侵袭性膀胱癌细胞(37]。在他人研究的基础上,我们认为增加表达的检测ARHGEF10L-overexpressing HSPA6合理的海拉细胞。最有可能的是,ARHGEF10L超表达促进肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭性刺激HSPA6表达式,虽然HSPA6在肿瘤发生的确切功能并不是众所周知的。HSPA6被认为是一个重要的肿瘤基因ARHGEF10L的控制下。

RNA序列分析还发现了重大变化在细胞周期蛋白依赖性蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性,细胞对维生素A,并使用KEGG toll样受体信号通路,在海拉细胞通路分析overexpressing ARHGEF10L。细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDKs)是重要的蛋白质所需的监管和表达大量的细胞周期进程所必需的组件。增加细胞周期蛋白或CDK表达水平或减少内源性CDK调节器/抑制剂曾被观察到在各种肿瘤。因此,CDKs代表天然抗癌疗法的目标(38]。All-trans视黄酸(ATRA)是一种活性代谢物中维生素A类维生素A的家庭。类维生素a,通过同源核受体,施加强有力的影响细胞生长,分化,细胞凋亡和为癌症治疗和化学预防产生重大的承诺。ATRA日益包含在抗肿瘤治疗方案治疗各种肿瘤类型(39]。通常toll样受体,主要表达的先天免疫细胞,参与诱导和调节适应性免疫反应。的表达通常被发现在许多肿瘤,和这些受体的刺激导致肿瘤恶化或回归,根据TLR和肿瘤类型(40]。

我们报道了通过RhoA-ROCK1-ERM信号ARHGEF10L扮演了一个角色,肿瘤发生的一个重要途径,刺激EMT在肝肿瘤和胃肿瘤细胞(8,9]。我们还发现ARHGEF10L表达式刺激HSPA6表达式的SGC7901细胞来源于胃肿瘤(9]。目前的研究和研究胃肿瘤细胞RNA序列用于调查下游ARHGEF10L机制,发现增加HSPA6表达ARHGEF10L-expressing海拉细胞。结合本研究的结果,我们建议ARHGEF10L通过RhoA-ROCK1-ERM通路起着致瘤的作用,激活EMT,提升HSPA6表达式在许多肿瘤。在许多肿瘤ARHGEF10L新颖致癌基因。

人类乳头状瘤病毒(HPV)慢性感染的机制导致宫颈肿瘤已被公认。到目前为止,我们不明白ARHGEF10L表达式和人乳头状瘤病毒感染之间的关系。最有可能的是,在致癌HPV感染刺激ARHGEF10L表达式。目前的研究发现HSPA6表达的增加,HSPA6中检测出肝癌细胞癌。Upregulation的热休克蛋白与贫穷有关结果在乙型肝炎病毒(HBV)相关的早期肝细胞癌(41,42]。

5。结论

目前的研究表明,ARHGEF10L表达的增加促进宫颈细胞增殖和迁移,抑制细胞凋亡。这项研究还发现,ARHGEF10L表情刺激GTP-RhoA, ROCK1, phospho-ERM表达式和诱发EMT在海拉细胞。此外,我们的研究发现增加细胞过表达ARHGEF10L HSPA6的表达式。这些结果提供重要的数据支持的关键作用ARHGEF10L宫颈癌肿瘤发生的。因此ARHGEF10L小说肿瘤基因在肿瘤发生中起着重要的作用。

数据可用性

使用的数据和/或研究在当前的研究可从相应的作者在合理的请求。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

捐赠方Tang和Kehua同样导致了这项研究。

确认

这项研究是由山东省重点研发项目(GG2017 03080038和2017 cxgc1202)。

补充材料

图1:补充分析ARHGEF10L-overexpressing RNA表达谱的海拉细胞。(一)分层聚类分析差异表达的mrna。(b)的调节基因。样本人力资源代表对照组,样品哈代表了实验组。图2:补充KEGG去海拉细胞的通路分析overexpressing ARHGEF10L。京都百科全书(a)差异表达基因和基因组的途径分析mrna在海拉细胞overexpressing ARHGEF10L。(b)差异表达基因本体论注释的mrna在ARHGEF10L-overexpressing海拉细胞。(补充材料。)

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