NF - A20-Binding抑制剂κB 1改善神经炎症介导Antineuroinflammatory电针刺激在脑缺血/再灌注大鼠的影响

文摘

NF - A20-binding抑制剂κB 1 NF - (ABIN1)是一种抑制剂κB和发挥抗炎作用。电针刺激(EA)被认为是神经保护策略通过抑制脑缺血后神经炎症损伤。本研究进行探索的角色ABIN1和调查ABIN1是否在EA的机制参与脑缺血/再灌注(I / R)大鼠。男性Sprague-Dawley (SD)大鼠大脑中动脉闭塞受到/再灌注(MCAO / R)和接收EA再灌注后每天一次。Lentivirus-mediated ABIN1基因可拆卸的用于检测I / R后ABIN1在神经炎症的作用。ABIN1表达式,促炎细胞因子的水平,小胶质激活,神经功能,梗塞卷和NF -κB激活进行评估。ABIN1表达升高的peri-infarct皮层和被EA进一步调节。ABIN1击倒的促炎细胞因子的水平增加,活化的小胶质细胞,神经赤字恶化,扩大梗死体积。此外,ABIN1被部分扭转EA的神经保护作用,这治疗削弱抑制NF - EA的能力κB的活动。基于这些发现,ABIN1是一个潜在的抑制的神经炎症和ABIN1介导antineuroinflammatory EA在脑I / R大鼠的影响。

1。介绍

缺血性中风占84.4%的中风,导致高的全球负担(1]。随着血管内治疗的发展,急性缺血性中风的治疗已进入一个新阶段(2]。然而,可能导致脑缺血/再灌注损伤血管再通。因此,神经保护与再灌注疗法相结合是一个重要的下一步发展的缺血性中风治疗(3,4]。病理机制的脑缺血/再灌注(I / R)是复杂的。过度的脑I / R后神经炎症加重脑损伤的主要原因之一(5- - - - - -7),被认为是一个潜在的治疗目标(4,8]。NF -κB作为“分子开关”在缺血性中风,促进炎症的起始和放大级联(9]。最常见的NF -二聚的形式κB是p65 / p50和二聚体结合κB(我的抑制剂κ细胞质中的B),局部处于休息状态。根据脑缺血刺激我κ蛋白质磷酸化抑制剂的κB激酶(IKK)和退化,允许NF -κB进入细胞核,促进一系列促炎细胞因子的表达(9- - - - - -11]。

NF - A20-binding抑制剂κB 1 (ABIN1)是一种生理抑制剂的NF -κB结合Lys63和Met-1 polyubiquitin链高亲和力(12,13]。作为一个适配器蛋白质表达A20 ABIN1促进分子的deubiquitination上游NF -κB和抑制NF -κB激活(14,15]。ABIN1-deficient老鼠死在胚胎发生和老鼠的生存表现出免疫细胞激活和发展进步,lupus-like炎性疾病(16,17]。值得注意的是,ABIN1作为抑制剂各炎性疾病的炎症,如肝脏I / R,哮喘,系统性红斑狼疮,牛皮癣,骨关节炎(18- - - - - -22]。然而,ABIN1的作用在神经炎症损伤脑I / R后没有被报道。

电针刺激(EA)是现代科技的产物,增加了针灸电刺激,它的特点是成本低、副作用少,和控制参数。EA调节免疫反应和恢复体内平衡,这可能会成为它的使用作为治疗各种炎症性疾病(23- - - - - -25]。此外,EA是一种广泛使用的治疗缺血性中风和取得了好的结果26- - - - - -28]。EA的神经保护效应的抑制NF -密切相关κB (29日- - - - - -31日];然而,EA的具体调控机制尚未完全阐明。如图所示在我们先前的研究,EA抑制了我κBα磷酸化和NF -防止核易位κB p65通过移植神经deubiquitinating酶表达A20最终改善神经赤字在大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO / R)大鼠(32]。有趣的是,ABIN1是一个重要的成员表达A20复杂,也可能是受EA。考虑到ABIN1抑制NF -中扮演着关键角色κB-related炎症反应、EA可以抑制NF -κB激活和发挥神经保护作用通过上调ABIN1表达脑I / R的老鼠。因此,在本研究中,我们最初探索的影响ABIN1 MCAO / R鼠神经炎症损伤。然后,EA的可能机制调节ABIN1的表达抑制NF -κB激活了。

2。方法

2.1。动物

健康Sprague-Dawley (SD)大鼠体重280 - 300克购买从重庆医科大学实验动物中心(中国重庆)。动物是维持在一个特定的病原体自由(SPF)房间(12 h光/暗周期22±2°C,湿度60 - 70%)。老鼠被允许免费获得食物和水。老鼠一直在一个星期前适应实验。动物实验过程都是动物实验伦理委员会批准重庆医科大学(SYXK (Yu), 2018 - 0003年),并按照美国国立卫生研究院的执行指导实验室动物保健和使用的。

在第一项研究中,老鼠被随机分为4组:虚假的集团,MCAO / R组,MCAO / R + EA组,MCAO / R +假EA组调查的表达ABIN1 peri-infarct皮层。

第二项研究的影响阐明ABIN1 I / R后神经炎症损伤使用虚假的集团,MCAO / R组,MCAO / R + LV-Scramble组和MCAO / R + LV-shABIN1组。

第三个研究探索ABIN1是否参与EA的antineuroinflammatory机制使用MCAO / R组,MCAO / R + EA组,MCAO / R + EA + LV-Scramble集团和MCAO / R + EA + LV-shABIN1组。

2.2。MCAO / R模型的建立

总共208只老鼠被用在这个实验中,包括17个老鼠被排除由于死(n= 14)或不成功诱导缺血(n= 3)。SD大鼠接受MCAO / R(如前所述)(33]。简单地说,老鼠与戊巴比妥钠麻醉(60毫克/公斤,i.p)。插入一个尼龙单丝silicon-coated圆形的顶块右大脑中动脉。缺血2 h后,尼龙单丝摘除引起再灌注。老鼠被激光多普勒flowmetry (Perimed AB PeriFlux 5000年,瑞典),和地区脑血流量下降到20%和> 80%的基线恢复,表明MCAO / R模型的成功建立。老鼠在虚假的组进行相同的操作,除了单丝不插入阻塞大脑中动脉。大鼠直肠温度保持在37±0.5°C电热垫。

2.3。颅内慢病毒注入

慢病毒包含ABIN1成分(LV-shABIN1) ABIN1击倒和控制成分(LV-Scramble)由Genechem(上海,中国)。前两周的建立MCAO / R模型,正确的大鼠皮层注射慢病毒。注射部位如下:1,p 1.0毫米;马丁−2.0毫米;dv−1.2毫米,和站点2,p−3.0毫米;马丁−1.5毫米;dv−1.2毫米(34]。总共2.5μl LV-shABIN1或LV-Scramble注入每个站点。

2.4。EA治疗

再灌注后,老鼠每天处理EA一次直到牺牲。如前所述(执行EA32)和针灸针插入Baihui(问20)、风(李4),和Taichong (LR 3)(图1),与EA工具(模型没有。SDZ-III Hwato,中国)。构建一个电路,两个电极连接,分别在问20针,左耳(nonacupoint)。另两个电极连接,分别在李4和LR 3针。的刺激参数强度1 mA和20赫兹的频率为5分钟2赫兹30分钟紧随其后。虚假的EA组、针贴在穴位没有皮肤渗透,和动物没有收到电刺激(35]。

2.5。评估神经功能

在72 h和24、48和72 h脑I / R后,每只老鼠与修改后的评估神经严重程度评分(mns)和修改胶带测试由一个观察者(MST)实验是不可见的。mns是综合评分系统,包括电机、平衡、感官和反射测试和评分在0(正常)18(最大赤字)分(36]。修改后的胶带测试是用来评估躯体感觉障碍。粘纸胶带(长3厘米,宽1厘米)周围放置老鼠的爪子,和时间的老鼠撕胶带在30秒内被记录。每天每四肢测试5次,和修改胶带测试性能提出了左/右的比率(37]。

2.6。脑梗死体积的测量

老鼠安乐死的过量戊巴比妥钠(150毫克/公斤,i.p)。牺牲后,大脑被切成2毫米厚的连续冠状切片和沉浸在2、3,去除氯(TTC) 37°C在黑暗中15分钟。图像获取与ImageJ相机和分析软件。梗死体积的比例提出了完整的半球。

2.7。实时定量PCR (RT-qPCR)

如图2(一),苍白的区域被认为是梗塞核心。条梗塞核心周围的组织(2毫米厚)被认为是peri-infarct组织和解剖rt - pcr和免疫印迹分析38]。总RNA提取使用试剂盒从peri-infarct皮层(豆类、日本)。然后,互补dna合成使用PrimeScript RT试剂盒与gDNA橡皮擦(豆类)和用作RT-qPCR模板,在CFX96实时进行PCR检测系统(Bio-Rad有限公司美国)SYBR绿色。使用以下引物序列(5′,3′):GAPDH:转发:AAGTTCAACGGCACAGTCAAGG和反向:ACGCCAGTAGACTCCACGACAT, ABIN1:转发:TCGGCTGAAGGGAAAAATACA和扭转:CAAAGGAGACCAAGGAGGGAG。结果规范化水平的管家GAPDH基因。

2.8。免疫印迹分析

蛋白质提取使用缓冲区里帕从peri-infarct皮层(Beyotime,中国)。细胞质或核蛋白质提取工具包(Beyotime)被用来提取细胞质和核蛋白质。如前所述(执行免疫印迹39]。短暂、蛋白质凝胶分离在10%,转移到PVDF膜。与5%的脱脂牛奶,阻塞后膜在4°C主要抗体孵育过夜。以下主要使用特定的蛋白质抗体:ABIN1(# 4664,细胞信号技术,美国1:1000),A20(# 5630,细胞信号技术,美国1:1000),NF -κB p65(# 8242,细胞信号技术,1:1000),我κBα美国Proteintech (18220 - 1 - ap, 1: 000), phospho-IκBα(Ser32)(# 2859,细胞信号技术,1:1000),GAPDH(美国10494 - 1 - ap, Proteintech 1: 1000),和组蛋白H3(# 3638,细胞信号技术,1:1000)。膜用TBST洗净,浸在二级抗体在37°C 1 h。发现了与TBST洗后,免疫反应性的乐队使用WesternBright发射极耦合逻辑(美国Advansta)。膜进行扫描和分析使用一个融合FX5分析系统(Vilber Lourmat融合外汇7光谱,法国)。

2.9。ELISA

peri-infarct皮质收集24小时再灌注后,和肿瘤坏死因子的浓度α、MCP-1和il - 1β化验使用ELISA试剂盒(EK0526号、EK0902 EK0393,分别博士德,中国)。

2.10。免疫荧光染色

脑组织固定,脱水,然后切成冠状部分的厚度10μm。部分是permeabilized Triton x - 100年的0.3%。然后,脑片被封锁5%驴或山羊血清1 h和孵化一夜之间在4°C主要抗体:ABIN1 (bs - 9568 r, bios,中国,1:50),NeuN (MAB377、微孔、德国,1:200),A20(美国3 a11g6 Proteintech 1: 100), Iba-1 (nb100 - 1028,罗福斯、美国、1:50),和GFAP (BM0055博士德,中国,1:100)。然后,下面的荧光标记二次抗体被孵化的部分在37°C 1 h在黑暗中:CoraLite594-goat anti-rabbit (SA00013-4 Proteintech 1: 200), CoraLite488-goat anti-mouse (SA00013-1 Proteintech 1: 200), CoraLite594-donkey anti-rabbit (SA00013-8 Proteintech 1: 200), FITC-donkey抗体(SA00003-3 Proteintech 1: 200)和细胞核与DAPI染色。脑片激光共焦显微镜下观察(lsm) - - - 800年,卡尔蔡司影像有限公司,德国)。

2.11。Coimmunoprecipitation

peri-infarct皮层均质在IP裂解缓冲(Beyotime,中国)提取蛋白质。一微克anti-ABIN1抗体(# 4664,细胞信号技术),anti-A20抗体(# 5630,细胞信号技术),或正常大鼠免疫球蛋白被添加到每个毫克的上层清液总蛋白,和样品旋转在一夜之间在4°C。40毫升水中蛋白质A / G琼脂糖珠与上层清液混合和旋转在4°C 2 h。珠子是用裂解缓冲然后筛选了40μl (SDS加载缓冲区。免疫印迹的收集上清液。

2.12。统计分析

所有的数据进行了分析使用SPSS 21.0和8.0画使用GraphPad棱镜和表达为手段±sem。细胞定位的差异ABIN1评估使用未配对t以及。所有其他使用单向方差分析定量数据进行了分析。 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。ABIN1表达式是诱导大鼠MCAO / R

我们测量的水平ABIN1 peri-infarct皮层的信使rna和蛋白质在6小时,12小时,24小时,再灌注后48小时,72 h。ABIN1信使rna和蛋白质的表达达到顶峰MCAO / R组再灌注后24 h时,然后逐渐减少(数字2(b) -2(d))。ABIN1 mRNA和蛋白表达水平上高于MCAO / R组比虚假的组从12 h - 72 h(数字2(b) -2(d))。此外,与MCAO / R组相比,EA进一步增加了表达的ABIN1 6 h - 72 h(数字2(b) -2(d))。此外,ABIN1是利用免疫荧光染色检测在再灌注后24 h(数字2(e)和2(f))。虚假的组相比,ABIN1的数量⁺细胞peri-infarct皮层MCAO / R组显著增加(数据2(e)和2(f))。此外,ABIN1的数量⁺老鼠的细胞进一步增加接收EA(数字2(e)和2(f))。ABIN1表达没有观察到显著区别MCAO / R组和MCAO / R +假EA组(数字2(b) -2(f))。

3.2。分布的ABIN1 Peri-Infarct皮层

ABIN1被描述为一种NF -κB抑制因子通过与表达A20交互12];进一步验证A20之间的交互和ABIN1 peri-infarct皮层,免疫荧光染色和coimmunoprecipitation执行。免疫荧光染色显示许多ABIN1⁺和样子⁺peri-infarct皮层的细胞再灌注后24小时,和表达A20 ABIN1与细胞质(图3(一个))。coimmunoprecipitation结果进一步表明,ABIN1和表达A20相互绑定peri-infarct皮层在再灌注后24 h(图3 (b))。

接下来,在peri-infarct ABIN1皮层的细胞定位再灌注后24 h是评估使用双重免疫荧光标记。ABIN1与NeuN与(一个神经元标记)和Iba-1(小胶质细胞标记),但不与GFAP(一个星形胶质细胞标记)(图3 (c))。此外,ABIN1⁺NeuN⁺细胞占ABIN1 70.22±1.71%⁺细胞,ABIN1⁺Iba-1⁺细胞占ABIN1 26.83±2.75%⁺细胞peri-infarct皮层(数字3 (c)和3 (d))。这些结果表明,神经元和小神经胶质细胞来源的ABIN1 peri-infarct皮层。

3.3。ABIN1击倒的促炎细胞因子增加生产和小胶质激活

ABIN1沉默了皮质注射ABIN1 LV-shABIN1进一步探索这个角色的I / R后神经炎症。首先,ABIN1信使rna和蛋白质的水平测量再灌注后24 h时,确保ABIN1击倒的有效性。ABIN1的表达显著降低MCAO / R + LV-shABIN1集团(数字4(一)和4(b)),这表明ABIN1被成功地沉默。

然后,我们研究了促炎因子的生产和小胶质激活使用ELISA和免疫荧光染色,分别。典型的促炎因子TNF -α,il - 1β,上级和MCP-1产生MCAO / R组比虚假的组(图4(c))。更高水平的这些细胞因子被发现在MCAO / R + LV-shABIN1组比MCAO / R组(图4(c))。这些促炎因子的水平没有显著不同MCAO / R + LV-scramble组和MCAO / R组(图4(c))。

小胶质细胞的形态是其生物功能密切相关。小胶质细胞是hyperramified休息。活化的小胶质细胞的特点是放大细胞体短和厚过程和棒状细胞体,甚至一些展览一个科幻世界里的变形虫,细胞体(40]。我们通过量化评估小胶质细胞的激活端点的数量每细胞和细胞过程的长度,可作为神经炎症指标(41,42]。Iba-1免疫荧光染色法是用于检测小胶质细胞在peri-infarct皮层后24 h I / R。虚假的集团展出的小胶质细胞静息状态的表现型(hyperramification)(图4(d))。如数据所示4(d) -4(f),端点的数量每细胞和细胞过程的长度降低MCAO / R组与虚假的集团相比,表明有更多的活化的小胶质细胞在大鼠MCAO / R。此外,端点的数量每个细胞和细胞过程的长度降低MCAO / R + LV-shABIN1集团与MCAO / R组相比,表明封锁ABIN1表达增强小胶质激活(数字4(d) -4(f))。之间的显著差异,并未观察到MCAO / R + LV-scramble组和MCAO / R组(数字4(d) -4(f))。

3.4。ABIN1击倒加剧了神经赤字和扩大梗死体积

mns和MST用来评估大鼠的神经功能72 h和24之前,48岁的脑I / R后和72 h。再灌注前72 h时,大鼠的神经功能正常,各组之间差异无显著意义(数字5(一)和5(b))。mns和MST MCAO / R组的比例比虚假的小组在24日,48和72 h I / R后(数字5(一)和5(b))。与MCAO / R组相比,神经赤字MCAO / R + 72 h LV-shABIN1组显著增加,但不是在48小时或24小时(数字5(一)和5(b))。的神经赤字MCAO / R + LV-scramble组没有不同于MCAO / R组在24日,48和72 h I / R后(数字5(一)和5(b))。梗死体积是利用TTC染色评估在再灌注后72 h。脑梗死体积之间没有显著差异MCAO / R + LV-scramble组和MCAO / R组,但扩大MCAO / R + LV-shABIN1集团(数字5(c)和5(d))。

3.5。ABIN1击倒在某种程度上削弱了Antineuroinflammatory EA的效果

肿瘤坏死因子-的浓度α,il - 1β,和MCP-1 peri-infarct皮层被发现再灌注后24 h时用ELISA测定的影响ABIN1击倒antineuroinflammatory EA的影响。这些促炎细胞因子的水平显著降低MCAO / R + EA组相比,MCAO / R组(图6(a))。此外,ABIN1击倒受损antineuroinflammatory EA的影响,因为较高的肿瘤坏死因子-α,il - 1β,和检测到了MCP-1 MCAO / R + EA + LV-shABIN1组比MCAO / R + EA组(图6(a))。MCAO / R + + LV-scramble和MCAO / R + EA组显示类似的这些细胞因子的水平(图6(a))。此外,结果Iba-1 peri-infarct皮层的免疫荧光染色再灌注后24 h时表示,MCAO / R + EA组有更多的端点/细胞和细胞过程超过MCAO / R组;然而,ABIN1击倒在MCAO / R + EA + LV-shABIN1集团提升小胶质激活(数字6(b) -6(d))。小胶质细胞激活没有明显不同MCAO / R + EA + LV-scramble组和MCAO / R + EA组(数字6(b) -6(d))。

3.6。ABIN1击倒部分抑制EA的神经保护作用

mns和MST四组大鼠的评估在72 h和24,再灌注后48和72 h。再灌注前72 h时,大鼠的神经功能正常,观察组间无显著差异。神经损伤中观察到大鼠MCAO / R + EA组显著提高72 h但不是24和48 h后再灌注与大鼠MCAO / R组(数字7(一)和7(b))。大鼠MCAO / R + EA + LV-shABIN1组表现出神经赤字比大鼠MCAO / R + EA组72 h后再灌注(数字7(一)和7(b))。的mns和MST大鼠MCAO / R + EA组类似于大鼠MCAO / R + EA + LV-scramble集团(数字7(一)和7(b))。TTC染色在72 h后再灌注显示梗塞体积较小MCAO / R + EA组比MCAO / R组(数字7(c)和7(d))。然而,在MCAO / R + EA + LV-shABIN1集团ABIN1击倒增加梗死体积比MCAO / R + EA组(数字7(c)和7(d))。梗死体积之间没有显著差异MCAO / R + EA + LV-Scramble组和MCAO / R + EA组(数字7(c)和7(d))。基于这些结果,EA发挥保护作用的脑I / R后,但ABIN1击倒削弱EA的效果。

3.7。EA抑制NF -κB激活通过上调ABIN1

如前所述,NF -κB中扮演着重要角色在焦脑I / R-induced神经炎症。进一步探索ABIN1是否介导EA诱导抑制NF -κB激活,导出ABIN1的水平,κBα,我κBα,核/细胞质NF -κB p65蛋白测定peri-infarct皮层的再灌注后24 h时使用免疫印迹和NF -核易位κB p65使用免疫荧光染色观察。EA显著增加的水平ABIN1蛋白质和导出了下降κBα/我κBα比和NF -κB p65核易位与MCAO / R组(数字8(一)-8(d))。然而,ABIN1击倒的抗炎效应减弱EA发现》κBα/我κBα比增加,NF -κB p65核易位是增强MCAO / R + EA + LV-shABIN1组相比MCAO / R + EA组(数字8(一)-8(d))。这些蛋白质的水平没有显著不同MCAO / R + EA + LV-scramble组和MCAO / R + EA组(数字8(一)-8(d))。因此,EA可以抑制NF -κB激活通过上调ABIN1表达式。

4所示。讨论

在缺血性中风EA起着有益的作用,但是EA的机制需要进一步的研究(43]。在目前的研究中,我们首次显示,ABIN1诱导大鼠MCAO / R。ABIN1击倒加重脑I / R损伤促进小胶质细胞的激活和释放促炎因子(TNF -α,il - 1β和MCP-1)。此外,upregulation ABIN1表达式EA抑制NF -至关重要κB脑I / R后相关的神经炎症损伤。

ABIN1信使rna是人类周围淋巴细胞高表达,骨骼肌,脾脏,其多态性与自身免疫性疾病(15]。我们评估的表达ABIN1脑I / R的早期阶段。ABIN1 mRNA和蛋白表达的大脑皮层假组,表明ABIN1由表达观察大脑皮层在正常情况下。此外,ABIN1 peri-infarct皮层中诱导表达,达到24小时,然后逐渐下降。NF -κB是强烈激活等细胞在脑缺血神经元,小胶质细胞、星形胶质细胞和内皮细胞(11,44]。监管机构的NF -一些负面的表达κNF - B是监管κB以防止其连续激活(13,45]。样子是这些消极的监管机构之一。A20表达在低水平在大多数细胞在生理条件下,但它的表达式是快速诱导激活的NF -κB (46]。同样,ABIN1表达式也受NF -κb .人类ABIN1基因启动子包含了NF -κB响应元件,它的启动子活动受NF -κB (47]。ABIN1 mRNA的表达与NF -调节各种细胞类型κB激活(15]。因此,增加ABIN1表达式中观察到病灶的早期阶段脑I / R可能归因于NF -的激活κB,因此形成了一个负面反馈循环。

上级表达A20复杂的表达在神经元胶质细胞(45,48]。同样,如图所示在我们之前的研究中,表达A20主要表达在神经元在大鼠MCAO / R的皮质32]。在当前的研究中,我们发现ABIN1和A20与在细胞质中,互相peri-infarct皮层在24 h。此外,我们确定的空间分布ABIN1 peri-infarct皮层首次在大鼠MCAO / R。ABIN1突出局部神经元,其次是小胶质细胞,没有表达观察星形胶质细胞在I / R后24小时。ABIN1在神经元的机制主要表现尚不清楚,但这个微分分布可能是神经元的保护策略由于其高灵敏度缺血和缺氧和有限的宽容过度激活的NF -κI / R后[B和神经炎症49]。

早期阶段的脑I / R,受损的神经细胞释放细胞因子,趋化因子和有关的分子模式;小神经胶质细胞,大脑中的第一道防线,从神经元被激活后分钟内接收信号50,51]。在半影,促炎的小胶质细胞逐渐主导反应,导致促炎和抗炎作用之间的不平衡52,53]。过度的促炎的因素如TNF -α,il - 1β,和MCP-1导致神经元死亡和脑损伤的加重6,54]。ABIN1击倒lentivirus-mediated交付使用shABIN1调查ABIN1对焦脑I / R-induced神经炎症的影响。ABIN1击倒增加小胶质激活和促炎因子(TNF -生产α,il - 1β和MCP-1),恶化的神经功能,扩大了梗塞体积。因此,ABIN1可能具有神经保护通过减少炎性损伤在脑I / R。然而,MCAO / R组中,内源性ABIN1表达式的upregulation焦脑I / R是不足以抵抗强大的存在;因此,增加ABIN1表达式可能代表一个有前途的治疗策略,以缓解脑I / R后神经炎症。

EA是一个补充和替代治疗缺血性中风,是世界卫生组织推荐的26]。EA疗法需要结合特定的穴位和电刺激。穴位问20日李4,LR 3发挥镇定和复苏的影响和选择治疗缺血性中风中医(55,56]。我们之前的研究表明,EA治疗穴位问20日李4,LR 3发挥了神经保护作用在抑制NF -大鼠MCAO / RκB激活(31日]。随后,这是表明deubiquitinating酶表达A20被EA抑制我调节κBα磷酸化和防止NF -κB p65核易位(32]。作为一个适配器蛋白质表达A20, A20 ABIN1也有类似的生物功能。例如,A20——ABIN1-deficient老鼠过早死亡和严重的炎症,和单核苷酸多态性表达A20 ABIN1基因密切相关的自身免疫性疾病(12,13]。因此,是否参与ABIN1 EA的机制是对我们的极大的兴趣。目前的研究显示,EA治疗穴位问20日李4,LR 3的表达增加ABIN1 peri-infarct皮层。因为虚假的EA是缺乏重要的生物活性,因为EA元素,如针头插入穴位和电刺激(57- - - - - -60)的表达ABIN1 peri-infarct皮层被虚假的EA没有改变。此外,我们表明,羞于EA的我κBα磷酸化,阻止了NF -κB p65核易位,抑制神经炎症,改善神经赤字。然而,EA的神经保护效应被ABIN1击倒部分逆转。基于这些结果,建议ABIN1参与EA的机制减轻脑I / R炎性损伤。如前所述,ABIN1 peri-infarct皮层的神经元主要是本地化;因此EA可以抑制神经元NF -κB激活通过上调ABIN1表达式,最终间接抑制小胶质细胞聚集和激活。因为一些国家也用小胶质细胞表达,EA可以减少促炎因子的生产通过直接抑制NF -κB在小胶质细胞激活。进一步的研究将解决这些假设在体外,以确定在NF - ABIN1表达水平的影响κB在神经元和胶质细胞激活,分别。

5。结论

总之,ABIN1,诱导脑I / R,炎症抑制起神经保护作用。此外,这项研究表明,EA-induced upregulation ABIN1表达的可能是一个重要机制,NF - EA块κB激活脑I / R后缓解神经炎症。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

信息披露

这些机构没有参与的设计研究或收集、分析、解释数据,或者写的手稿。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项工作得到了国家自然科学基金(批准号30470606),国家自然科学基金青年基金项目(批准号81403243),中国医学科技项目重庆市卫生局格兰特(2012-2-128)。

引用

1. c·o·约翰逊,m .阮g·a·罗斯et al .,“全球、区域和国家的负担中风,1990 - 2016年:全球疾病负担的系统分析研究2016年”《柳叶刀》杂志上。神经学,18卷,不。5,439 - 458年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. m . Goyal b·k·梅农w·h·范Zwam et al .,“大舰艇缺血性中风后血管内血栓切除术:个别病人数据的荟萃分析从五个随机试验,”《柳叶刀》,卷387,不。10029年,第1731 - 1723页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. s . i萨维茨J.-C。男爵,m . a . Yenari: Sanossian, m·费舍尔重新考虑再灌注神经保护的时代,“中风,48卷,不。12日,第3419 - 3413页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. 一个。查莫罗人,Dirnagl、x Urra和a . m .本书“神经保护急性中风:目标会,氧化和nitrosative压力,和炎症,”《柳叶刀神经病学,15卷,不。8,869 - 881年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. h·a·塞弗特和k·r·Pennypacker”分子和细胞免疫反应对缺血性脑损伤,”平移中风研究,5卷,不。5,543 - 553年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. m·弗里克a . m . Tolkovsky诉Borutaite m·科尔曼和g·c·布朗,“神经元细胞死亡,”生理上的评论,卷98,不。2、813 - 880年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. 英国史,华盛顿特区。田,Z.-G。李,a . f . Ducruet m·t·劳顿,F.-D。释,“全球中风,脑部炎症”《柳叶刀神经病学,18卷,不。11日,第1066 - 1058页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. l .吴x, x吴et al .,“针对氧化应激和炎症,防止缺血再灌注损伤,”分子神经科学前沿,13卷,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. o . a .哈拉尔族人和j·k·廖”,NF -κ在缺血性中风B和先天免疫,”纽约科学院上,卷1207,不。1,32-40,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. 宫本茂,“核启动NF -κB信号:尼莫,ATM采取中心舞台。”细胞研究,21卷,不。1,第130 - 116页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. d·a·里德尔和m . Schwaninger NF -κ在脑缺血B信号”,神经科学,卷158,不。3、995 - 1006年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. r·t·G 'Sell下午加夫尼d·w·鲍威尔,“点评:A20-binding抑制剂的NF -κNF - B激活1是一个生理抑制剂κB:炎症和自身免疫的分子开关。”关节炎与风湿病学,卷67,不。9日,第2302 - 2292页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. 马a和b, a . Malynn“A20:复杂的ubiquitylation调节器与免疫和人类疾病,”自然评论免疫学,12卷,不。11日,第785 - 774页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. c·毛罗·f·预期,a Lavorgna et al .,“尼莫/ IKK ABIN-1绑定γ并与表达A20抑制NF -合作κB。”生物化学杂志,卷281,不。27日,18482 - 18488年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. l . Verstrepen Carpentier i、k . Verhelst和r . Beyaert”国家:A20 NF -抑制剂具有约束力κB和凋亡信号。”生化药理学,卷78,不。2、105 - 114年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. 周j . r ., a . a . et al。”NF - A20-binding抑制剂κB (ABIN1)控制toll样受体介导CCAAT / enhancer-binding蛋白β激活炎性疾病和保护,”美国国家科学院院刊》上,卷108,不。44岁的E998-E1006, 2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. 大岛渚,e . e .真正的j·a·卡拉汉et al .,“ABIN-1泛素传感器限制细胞死亡和维持胚胎发育,”自然,卷457,不。7231年,第909 - 906页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. x y, Lei, w·李et al .,“TNIP1减轻肝脏缺血/再灌注损伤通过TLR2-Myd88通路”生物化学和生物物理研究通信,卷501,不。1,第192 - 186页,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. k . El Bakkouri a . Wullaert m . Haegman k . Heyninck和r . Beyaert Adenoviral基因转移的NF -κB抑制蛋白质ABIN-1减少过敏小鼠哮喘模型气道炎症,”生物化学杂志,卷280,不。18日,第17944 - 17938页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. e·a·科特·d·j .施法者m·t·巴拉狄et al .,“ABIN1决定通过激活内在的肾小球肾炎的炎症,严重程度”美国病理学杂志》上,卷187,不。12日,第2810 - 2799页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. j·a·卡拉汉g . e .锤a Agelides et al .,“前沿:ABIN-1预防牛皮癣在树突细胞,通过限制MyD88信号”《免疫学,卷191,不。2、535 - 539年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. k .彭y, c,和美国胡ABIN-1保护软骨细胞免受lipopolysaccharide-induced通过失活的NF -炎症损伤κB信号。”临床和实验药理学和生理学卷,47号7,1212 - 1220年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. y, m . Zhang w·b·李,f, f·张,”机制参与电针刺激的神经保护治疗缺血性中风,”前>,12卷,p。929年,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. l . Ulloa s Quiroz-Gonzalez, r . Torres-Rosas”神经刺激:免疫调节和控制炎症,”分子医学的趋势,23卷,不。12日,第1120 - 1103页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. J.-Y。公园和美国Namgung”,电针刺激治疗炎症调控:目前的观点,”炎症研究期刊》的研究11卷,第237 - 227页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. l·m·查韦斯s . s .黄麦克唐纳,j·g·林,y . c . Lee和y . h·陈,“针灸治疗缺血性中风康复的机制:一个文献综述的基本研究,“国际分子科学杂志》上,18卷,不。11日文章ID E2270, 2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. l . Chi, k . Du, y . Bo, d . Liu和w·李,“电针刺激大脑保护在缺血性中风:副交感神经系统的作用,“脑血流量和代谢杂志》上,38卷,不。3、479 - 491年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. m·h·沈c . b . Zhang j . h . Zhang和p·f·李,“电针刺激减弱脑缺血和再灌注损伤大鼠大脑中动脉阻塞的通过调制的细胞凋亡、炎症,氧化应激,会引起,“以证据为基础的补充和替代医学卷,2016篇文章ID 9438650, 15页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. z, j .梁j . Wang和p . e . Kolattukudy“延迟引起的脑缺血耐受电针刺激预处理是通过MCP-induced介导蛋白1”《神经炎症,10卷,不。63年,文章ID 845, 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. l .局域网j . t a . Chen等人“电针刺激产生抗炎作用在脑缺血再灌注大鼠受伤通过抑制TLR4 / NF -κB通路。”国际分子医学杂志》上没有,卷。31日。1,第80 - 75页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. w . y .秦罗y, l . Chen等人“电针刺激可以调节NF -κB信号通路改善局灶性脑缺血/再灌注模型的炎性损伤老鼠,”以证据为基础的补充和替代医学924541卷,2013篇文章ID, 15页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. j .詹w·秦y . Zhang et al .,“Upregulation神经元锌指蛋白表达A20表达式需要电针刺激减弱大脑核factor-kB炎性损伤介导的信号通路在脑缺血/再灌注大鼠,”《神经炎症,13卷,不。1,p。258年,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. j .江、罗y . w .秦et al .,“电针刺激抑制NF -κB信号通路通过上调cylindromatosis减轻炎症损伤在脑缺血/再灌注大鼠,”分子神经科学前沿,10卷,p。363年,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. k .张问:张先生,j .邓小平et al。”ALK5信号通路介导神经发生和功能恢复后通过Gadd45b脑缺血/再灌注大鼠,”细胞死亡和疾病,10卷,不。5,360年,页2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. x汉,h·吴,p .阴et al .,“电针刺激恢复海马突触可塑性通过调制5 -受体在大鼠模型的抑郁症,”大脑研究公告卷,139年,第262 - 256页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. p . r . j . Chen Sanberg y,李et al .,“静脉管理人类脐带血减少卒中后行为缺陷的老鼠,”中风,32卷,不。11日,第2688 - 2682页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. m . e . r . j . Komotar g . h . Kim Sughrue et al .,”神经躯体感觉障碍的评估实验的啮齿动物模型脑缺血后,“自然的协议,卷2,不。10日,2345 - 2347年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. j . Agulla d .沥青f·坎波斯et al .,“体内脑缺血peri-infarct地区开展,“开展,4卷,不。1,第105 - 90页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. h .徐w·秦x胡锦涛et al .,“Lentivirus-mediated OTULIN改善通过抑制小胶质细胞激活和神经炎症的过度激活的NF -κB信号通路在脑缺血/再灌注大鼠,”《神经炎症,15卷,不。1,p。83年,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. s e·泰勒,c . Morganti-Kossmann j .谨言et al .,“杆小胶质细胞:一个形态的定义,“《公共科学图书馆•综合》,9卷,不。5篇文章ID e97096 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. h·w·莫里森和j . A . Filosa“定量时空分析小胶质细胞形态在缺血性中风和再灌注,”《神经炎症,10卷,p。2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. k .年轻和h·莫里森量化小胶质细胞形态使用ImageJ从免疫组织化学准备组织的显微照片,”《可视化实验:木星文章ID e57648卷。136年,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. w·朱,y, y刘et al .,“针灸治疗脑缺血的机制:一个以证据为基础的临床和动物实验复审脑缺血,”神经免疫药理学杂志》上,12卷,不。4、575 - 592年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. F.-P。黄,Z.-Q。王,华盛顿特区。吴,g . p . Schielke y太阳,G.-Y。早期NF杨。κB在interleukin-1激活抑制在局灶性脑缺血β转换酶缺乏的老鼠。”神经科学研究杂志,卷73,不。5,698 - 707年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. e . l . Pranski n . v . Dalal j . h . Herskowitz et al .,“神经无名指蛋白质11 (RNF11)调节规范NF -κB信号。”《神经炎症,9卷,p。247年,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. l . Catrysse l . Vereecke r . Beyaert, g . van厕所,“A20在炎症和自身免疫,”免疫学的趋势,35卷,不。1,22-31,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. 即展开磋商,c·张,p . c . Encarnacao c·p·Struzynski s e .生活和b . j . Aneskievich”PPARγ和NF -κB调节基因启动子活性的共享阻遏,TNIP1。”Biochim Biophys学报,卷1819,不。1、1 - 15,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. e . l . Pranski c·d·范·桑福德n v Dalal et al .,“比较A20 ubiquitin-editing复杂的蛋白质分布组件在正常人类的大脑,”神经学字母,卷520,不。1,第109 - 104页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. b . Puig s Brenna, t·马格努斯,“分子通信一个垂死的神经元在中风,”国际分子科学杂志》上,19卷,不。9篇文章ID 2834 2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. 傅y,问:刘,j . Anrather F.-D。施,“免疫干预中风,”自然神经学评论》,11卷,不。9日,第535 - 524页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. s . p . Gadani j . r . luken j·t·沃尔什和j . Kipnis”处理危险在中枢神经系统:免疫系统损伤的反应,”神经元,卷87,不。1,47 - 62、2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. L.-y。Ao, y y。燕,周l . et al .,“缺血性中风发作后免疫细胞:角色、迁移、和目标干预,”分子神经科学杂志》上,卷66,不。3、342 - 355年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. 李x, p . y .郭et al .,“小胶质细胞/巨噬细胞极化动力学揭示小说的局灶性脑缺血后损伤扩展机制,“中风,43卷,不。11日,第3070 - 3063页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. d . Amantea g . Nappi g .贝尔纳迪g . Bagetta和m·t·科拉萨尼蒂”Post-ischemic脑损伤:病理生理学和炎症介质的作用,“2月期刊,卷276,不。1、13 26,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. f . Wan x妞妞,杨绍明。关铭歌,和研究。如果,“中草药和针灸的作用在脑缺血后炎症反应,”当前的药物设计,22卷,不。6,709 - 719年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. r·马b .元,j·杜et al .,“电针刺激减轻神经损伤后大脑缺血大鼠通过抑制细胞凋亡和改变MMP-9 / TIMP-1表达式的平衡,”神经学字母卷,633年,第164 - 158页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. 陈z . x, y, x g . Zhang et al .,“虚假的电针刺激在随机对照试验方法,”科学报告ID 40837条,卷。7日,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. r·沙b .张x汉et al .,“电针刺激减轻缺血性脑损伤通过抑制mir - 223 / NLRP3途径,”医学科学监控25卷,第4733 - 4723页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
59. 刘黄j . x, w . et al .,“电针刺激改善中风后认知障碍通过抑制peri-infarct astroglial巨噬细胞和小胶质/ P2 purinoceptors-mediated神经炎症、增生,”BMC补充和替代医学,17卷,不。1,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. 惠普林沈y, y, z, y y . Chen和s .王”Large-conductance Ca(2 +)激活K(+)通道参与抑制脑缺血/再灌注损伤后电针刺激Shuigou (GV26)穴位在老鼠,”神经再生研究,11卷,不。6,957 - 962年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2020 Xueling周et al。这是一个开放分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。