通过PKG-I途径黄岑素减少内皮功能障碍

文摘

目的。在这个报告中,我们调查了黄岑素的保护机制(并)在体外和在活的有机体内可参与内皮cGMP-dependent蛋白激酶(PKG),血管舒张药刺激磷蛋白质(VASP)通路,和血管内皮功能障碍(等)。方法。人脑微血管内皮细胞(HBMECs)和缺氧复氧(人力资源)治疗和脑缺血再灌注大鼠(CIR)治疗应用。蛋白质和mRNA的表达包裹,VASP p-VASP免疫印迹和rt - pcr方法进行评估。血管等评估用钢丝myography确定endothelium-dependent孤立的鼠基底动脉(BA)的血管舒张。结果。在培养HBMECs,并(0.1、1和10μM)增加细胞活力,信使rna,蛋白质含量和phosphorylative活动的包裹和VASP HR受伤。在英国航空公司的人力资源管理模型,并增加P-VASP的蛋白质水平。在鼠CIR模型中,线myography证明并(45和90毫克/公斤,增长值)显著降低缺血性大小通过部分恢复英航的内皮依赖的血管舒张;PKG抑制剂Rp-8-Br-cGMPS (50μ克/公斤,增长值)逆转保护并在CIR老鼠。结论。并防止脑血管等通过内皮PKG途径激活。

1。介绍

血管内皮细胞具有复杂的生理功能,比如维持血管张力,抑制血小板聚集,减少内皮通透性,减少粘附分子的表达,抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖(1]。内皮细胞,容易损坏的解剖功能界面,首先受到各种各样的伤害包括缺血再灌注(IR),刺激作用导致结构完整性的破坏和减少函数然后内皮功能障碍(等)发生。等可能是一个重要的基础疾病(1,2]。血管张力调节紊乱和粘附分子的异常表达的主要表现等。研究表明,红外产生血管等所定义的废除endothelium-dependent扩张(2]。此外,先前的研究表明,缺氧复氧(人力资源)使反应的选择性抑制乙酰胆碱(ACh)脑动脉(3]。

缺血再灌注(IR)在不同病理生理条件下导致组织损伤。红外直接影响血管的血管壁和支架表面,引起损害赔偿包括出血、毛细管堵塞,附着力和粒细胞浸润,受损的血管渗透性,内皮功能障碍(等)4]。内皮细胞,而对红外是非常敏感的损伤,发挥积极作用在IR-induced器官损伤(5]。等减少灌注缺血区域,从而加剧了组织损伤和随后的损害(6]。

cGMP-dependent蛋白激酶(PKG)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性的环鸟苷酸。积累证据证明包裹磷酸化许多生物学上重要的目标需要完成多个细胞功能和其失调有罪在许多疾病,如高血压、动脉粥样硬化、慢性心力衰竭、左心室肥厚、心室重塑,红外损伤,糖尿病和癌症7]。三种亚型的PKG-I之一α,PKG-Iβ,PKG-II PKG-Iα是最强的血管张力调制器调节细胞活性、迁移、增殖和血管张力8]。

此外,有报告说,包裹是参与testosterone-induced人类脐动脉血管舒张(9]。激活后,包裹磷酸化VASP,进而激活下游离子通道,导致血管平滑肌放松和血管舒张。先前的报道表明,vasorelaxant黄芩苷的影响主要是由于压敏电阻器^{2 +}通道(VDCC)抑制并通过PKA BKCa通道激活和PKG通路(10]。

血管舒张药刺激磷蛋白质(VASP)属于Ena / VASP蛋白质家族,是一个重要的PKG-I衬底和肌动蛋白调控蛋白质。研究[11]建议在丝氨酸磷酸化VASP 239 (p-VASP)已被证明是一个有用的监测PKG-I活动完整的细胞。

黄岑素(并),4′,5、6-trihydroxy flavonoid-7-glucuronide,据报道breviscapine的主要活性成分,这是一个混合的类黄酮苷分离出一种中药植物飞蓬属植物breviscapus(Vant)。的手。Mazz。(12]。植物提取物,并在中国已被用于治疗各种疾病,包括心血管、脑血管和炎性疾病多年来(13]。在动物实验中,并据报道在鼠神经保护脑缺血再灌注(CIR)模型(14)通过增强抗氧化防御能力(13]。此外,并阻止了要领在糖尿病大鼠和抑制蛋白激酶C的易位糖尿病鼠胸主动脉(15]。我们以前的研究(16,17)显示,松弛效应的主要地位并对动脉内皮依赖性和部分涉及catalase-sensitive一氧化氮合酶信号通路。

根据这些观察,我们假设并通过PKG-I途径降低等。为了验证这一假设,我们测试PKG-I的蛋白质含量和mRNA表达,VASP, p-VASP人脑微血管内皮细胞(HBMECs)。的影响并对脑基底动脉(BA)的要领和梗塞尺寸检查有圆形的损伤的老鼠。

2。材料和方法

2.1。化学品和药物

并获得了从昆明龙津药业有限公司(中国昆明)。细胞培养试剂DMEM、修改rpmi - 1640中,从Hyclone获得和胎牛血清(美国热科学)。其他物品包括线肌动描记器系统DMT(丹麦Myo科技公司、丹麦)和实验室数据记录和分析系统(ADInstruments有限公司、澳大利亚)。HBMECs买来Yangsen生物有限公司(上海,中国)。U46619从开曼化学公司购买。PKG抑制剂Rp-8-Br-cGMPS购买从圣克鲁斯生物技术(美国达拉斯,TX)。(3)- 4 5-Dimethylthiazol-2-yl 2, 5-diphenyltetrazolium溴化(MTT),氯化三苯四唑(TTC),和空调采暖从Sigma-Aldrich购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。

2.2。动物

Sprague-Dawley老鼠(180 - 220 g,男性和女性在每一半)是由昆明医科大学动物中心提供。所有的动物都被安置在microisolation恒定的温度和控制照明的条件下在12小时光/暗周期(光)。食物和水都可以随意。所有的动物用于实验得到人道关怀。手术和实验过程都是按照制度动物保健指南。动物研究是通过昆明医科大学动物保健和使用委员会和符合标准设定的云南实验动物管理委员会。

2.3。方法

2.3.1。内皮细胞培养和人力资源的治疗

HBMECs得到从上海Yangsen生化科技公司(上海,中国),生长在1640中补充10%胎牛血清和抗生素青霉素、链霉素的1%。紧密融合性的层的HBMECs从4日−15通道被用于实验。在实验中检查的影响并在正常条件下,细胞治疗与车辆控制(NS)或并(0.1、1.0和10.0μ米)在不同浓度26小时。与人力资源部治疗实验,细胞被分成5组,包括控制、人力资源模型,人力资源+并0.1μ米,人力资源+并1μ10 M,人力资源+并μM组。并行控制细胞培养和保持正常的文化条件整个时间段(h 26日)。模拟人力资源损伤诱导按照先前描述的程序(18与一些细微的修改。简要HBMECs被放置在一个湿润低氧室(HF100,治愈力生物技术有限公司、上海、中国)12 h(缺氧(5%股份有限公司₂+ 2%啊₂N + 93%₂)与媒体自由的血糖和血清在37°C,其次是12 h的复氧(5%股份有限公司₂+ 95%的空气)含有葡萄糖和血清的完全培养基。对于人力资源+并组,细胞被孵化并在不同浓度2 h缺氧治疗前和在缺氧(12 h)和复氧(12小时)受伤。为对照组,细胞治疗与车辆控制(NS) 26 h,并组织,细胞有不同浓度的地位并分别为26个小时。在实验的最后,细胞生存能力检查使用MTT分析如下所述。此外,细胞每组也收集了rt - pcr检测和免疫印迹分析如以下部分所述。所有实验进行了一式三份。

2.3.2。MTT测定细胞的生存能力

MTT测定,细胞被镀在96 -平底的盘子在3×10的密度⁴细胞/毫升和90μ信用证。细胞培养在正常文化条件或模拟处理人力资源伤害如上所述。治疗后,20μL (MTT(5毫克/毫升)被添加到每个好,盘子被孵化4 h 37°C。然后,100年μL(裂解缓冲(20%十二烷基硫酸钠(SDS)在50% N, N-dimethylformamide,含有0.4% [v v): 1 N盐酸和0.5% [v v): 80%乙酸)被添加到每个孵化过夜。细胞生存能力是决定通过测量新陈代谢的能力活跃细胞将肝癌和黄色四唑盐(5毫克/毫升,PH = 7.4)到紫色甲瓒水晶标在570海里。(每三个独立的实验结果进行了一式三份)被用于统计分析。

2.3.3。免疫印迹分析

PKG-I, VASP, p-VASP lyzed细胞中蛋白质含量是西方分析检查。蛋白质浓度测定采用BCA蛋白质分析工具包(Beyotime生物技术、海门、江苏、中国)。总蛋白(20μ10% sds - page和g)分级分离转移到硝化纤维膜。膜被封锁脱脂奶粉10%溶液在室温下2 h和孵化一夜之间在4°C兔抗体VASP(浓度1:500年,细胞信号技术,Inc .)、美国),p-VASP (Ser239)(浓度1:2000年,圣克鲁斯生物技术,美国),和PKG-I(浓度1:1000年,圣克鲁斯生物技术,美国)。三个洗后,膜被孵化与辣根过氧化物酶共轭山羊anti-rabbit IgG抗体(美国圣克鲁斯生物技术)在室温下为1.5 h。然后四个洗重复,增强化学发光的蛋白质可视化工具包(σ,美国)。乐队的密度值是由光密度扫描图像分析量化(Scion图像4.03)。蛋白质的相对比例计算通过确定每个治疗组的乐队的整体强度的比值控制条件。

2.3.4。rt - pcr

从细胞总rna分离用试剂盒试剂(豆类、日本)。引物的序列(人类PKG-Iα在这项研究中被PKG-I和GAPDH)使用α(向前、AGCGGATCGAAGCAGGAGGC和反向TGACGGTCGCTGTCC GGGTA, 728个基点)和GAPDH(向前,AATCCC ATCACCATCTTCC和反向,GAGTCCT TCCACGATACCAA, 309个基点),分别。

总RNA (1μg)是reverse-transcribed cDNA使用Quantscript RT工具包(Tiangen,中国)。PCR进行使用PCR MasterMix工具包(BioTeke,中国)GeneAmp PCR系统9600 (ABI Int)。互补脱氧核糖核酸是放大在热循环条件下如下:3分钟初始变性在94°C(1周期),30年代变性在94°C(35周期),30年代退火57人的包裹和VASP°C,和45 s在72°C扩展。最后放大之后,最后的7分钟孵化72°C。PCR产物分离通过1%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,可视化的紫外线透照Tocan凝胶成像系统(Tocan有限公司中国上海)。GAPDH是作为内部控制。mRNA水平确定的乐队的整体强度计算每个治疗组的比例控制。每个样品一式三份和均值阈值测定周期(Ct)值的计算。

2.3.5。老鼠CIR模型和评价脑梗死体积

在室温下(°C)条件下,大鼠10%水合氯醛(0.035毫升/公斤)腹腔内注射麻醉的掌心向上地固定在手术台上,使尾静脉注射的药物而开始手术。右颈外动脉的结扎,然后给出了右大脑中动脉闭塞再灌注24小时后的1 h [19]。在再灌注结束后,老鼠被斩首。大脑被迅速删除和冷冻立即−20°C,持续15分钟,然后大脑被切成2毫米厚日冕部分沾1% TTC 37°C 10分钟后用4%多聚甲醛固定为1小时。无污点的区域被定义为缺血性病变,而正常组织被染成红色。梗塞区域跟踪和量化与IPP软件。梗塞区域的所有部分都添加到推导出总梗塞面积,由大脑部分的厚度增加获取梗塞体积。为了弥补脑水肿的影响,纠正梗塞体积计算(如前所述20.]。纠正梗塞体积等于总同侧半球梗塞体积乘以侧半球体积/体积。

评估的影响并在CIR受伤SD大鼠分为四组(-12每组):骗局,CIR模型和两个并组(45或90毫克/公斤,注射)。在另一项实验中,包裹抑制剂的影响的影响并进行评估。老鼠被分为四组(-15):CIR模型并(90毫克/公斤,注射。),PKG抑制剂(50μ克/公斤,增长值),并(90毫克/公斤,增长值)+ PKG抑制剂(50μ克/公斤,注射治疗组。手术中注入了静脉注射的药品通过尾静脉(2毫升/小时)。虚假和CIR模型组被给予生理盐水(NS)。

2.3.6。评价了要领的孤立的英航CIR老鼠

上述治疗老鼠牺牲,英航轻轻切除和冲洗掉血在4°C PSS缓冲溶液(4.7毫米140毫米氯化钠,氯化钾,1.6毫米CaCl₂,1.2毫米MgSO₄拖把,1.2毫米,1.4毫米Na₂HPO₄5.6毫米、0.02毫米EDTA和葡萄糖。PSS是预调的PH值7.4 37°C)。脂肪和周围组织的BA打扫干净了,然后是切成大约1 - 2毫米的戒指。

一个集成线肌动描记器系统(模型620,DMT亚洲有限公司,上海,中国)是应用Motic SMZ168-TL立体显微镜对60英航山环μ米钢丝分离组织浴张力线肌动描记器系统的记录。组织浴满心PSS (PH值7.4)的解决方案°C与O充气₂。冲刷是由排水使用注射器和取代沐浴的解决方案。等长张力信号记录和数据收集由PowerLab数据采集系统(ADInstruments亚洲,上海,中国)。每个环拉伸1 mN和允许的最佳张力平衡90分钟在实验开始之前。戒指被U46619收缩(1μmol / L)和轻松使用累积增加课时(0.001 -1000μmol / L)测试计算EC endothelial-dependent血管舒张₅₀和值。

2.3.7。准备人力资源模型的孤立的英航和地位并治疗

老鼠牺牲的腹腔内注射10%(0.1毫升/ 100 g)聚氨酯。英航摘除并从脑组织解剖免费。孤立的英航段被安置在厌氧无糖生理盐溶液(PSS)和3 - (N-morpholino) propanesulfonic酸聚苯乙烯磺酸钠(拖把),导致氮缺氧2小时;然后英航段变成正常MOPS-PSS解决方案恢复氧气和葡萄糖为2小时。在人力资源破坏,并(50μ米、100μ米)是在孵化并组,而人力资源模型组给予车辆(NS)。对照组正常英航。年底人力资源损伤,英航转移到一个包含200的预冷玻璃均质器μL预冻里帕缓冲区(50毫米Tris-HCl, 150毫米氯化钠,EDTA 1毫米,1毫米PMSF, 1毫米Na₃签证官₄Na-deoxycholate NP-40 1毫米的氟化钠,1%,0.25%,10%,甘油和1毫克/毫升的磷酸酶抑制剂抑肽酶,亮抑酶肽和抑肽素,PH值7.4)。船组织被均质10分钟,转移到1.5毫升埃普多夫管,在18000转离心10分钟在4°C。倾注的上层清液收集并存储在−80°C到免疫印迹分析。

2.3.8。计算和统计分析

数据表示为±SEM手段。执行统计分析使用统计软件3.5σ统计。的值代表药物引起的最大vasodilative响应;电子商务₅₀药物的浓度是50%的最大vasodilative效果。非线性回归分析对个人进行量效曲线使用希尔算法在σ图10.0中,允许单个几何”电子商务₅₀“价值计算。=[(最大应力precontraction−最小应力)/ precontraction]的最大压力100%。比较了使用单向方差分析分析。被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。的影响并在正常培养HBMECs PKG-I和细胞生存能力

从数据看1(一),1 (b),1 (d),并(0.1,1和10μ米)治疗增加了蛋白质含量PKG-I, p-VASP, VASP在正常HBMECs与对照组相比。此外,p-VASP比VASP显示包裹的活动也在增加(图并治疗1 (c))。特别是PKG-I蛋白质含量有明显增加,P-VASP, VASP,包裹正常HBMECs活动并(1和10μ米)治疗。

如数据所示2(一个)和2 (b)在正常状态下,并(0.1、1和10μM)孵化PKG-I mRNA水平的增加α,尤其是在并1μM组。

在我们的初步实验检查正常HBMECs的地位并对细胞生存能力的影响,并与剂量< 0.1μ米没有造成重大变化在细胞生存能力并与剂量> 100μM表现出细胞毒性(数据没有显示)。因此,并在剂量的0.1,1,10μ用于本研究。如图2 (c)MTT测定,结果显示,并10μM孵化明显提高细胞生存能力在正常培养条件,在没有重大变化并0.1和1μM组。

3.2。并对PKG-I和细胞生存的影响在HBMECs人力资源处理

PKG-I的地位并对蛋白表达的影响,VASP,磷酸化VASP (p-VASP)人力资源受伤被显示在图3。与控制相比,人力资源伤害减少p-VASP VASP,和包裹,尤其是p-VASP;与模型相比,并预培养可以显著提高p-VASP蛋白表达,VASP和PKG-I(数字3(一个),3 (b),3 (d))。人力资源损伤也减少包裹活动模型组(p-VASP比和VASP)虽然并预处理可以明显增加,尤其是在并10μM(图3 (c))。

从数据看4(一)和4 (b),PKG-Ι的表达α信使rna在人力资源模型组显著降低,而地位并(0.1、1和10μ米)预处理(图大幅增加它4 (b))。结果显示并可以上调PKG-I的mRNA表达α得罪了HR-induced受伤。

如图4 (c)、人力资源大大减少受伤细胞HBMECs的可行性,并和预处理(0.1、1和10μ米)可以保护细胞免受HR-induced损伤,尤其是并(10的明显效果μM)可行性(图4 (c))。数据显示,并对人力资源HBMECs损伤有保护作用。

3.3。的影响并包裹抑制剂在老鼠背景治疗

从数据看5(一)和5(b),与模型组相比,并(90毫克/公斤)减毒梗塞大小的老鼠的CIR治疗尤其是并45毫克/公斤。此外,血管张力减少的值并(90毫克/公斤)组(图5(c)),而血管张力的值并(45毫克/公斤)没有明显的变化。

有类似的BA cumulative-response值曲线的变化,电子商务₅₀,在圆形的老鼠。CIR英航EC造成的损害₅₀和要高,而在CIR老鼠并处理(90毫克/公斤)预处理、BA cumulative-response曲线的值,EC₅₀,明显较低。以上结果表明,并(90毫克/公斤)预处理对血管有保护作用等引起的背景,和endothelium-dependent血管舒张,以应对ACh在英航暴露在CIR治疗明显受损,这表明CIR模型成功。

为了检查并的机制,使用PKG抑制剂之前CIR老鼠并治疗。结果表明,包裹抑制剂逆转的影响并改善梗死大小和英航的EC值₅₀和在圆形的老鼠并处理。如数据所示5(d)和5(e)、梗塞大小的老鼠接受并和PKG抑制剂是比老鼠大处理并独自一人。与此同时,类似的变化发生在欧盟₅₀,,英航cumulative-response曲线的值ACh在CIR老鼠并处理和PKG抑制剂(图5(c)和表1)。结果表明,包裹抑制剂逆转的影响并对英航的老鼠通过抑制与贵会治疗改善内皮血管舒张和建议并可能防止CIR通过PKG信号通路。

3.4。的影响并在孤立的英航p-VASP人力资源处理的老鼠

磷酸化的地位并对蛋白表达的影响VASP (p-VASP)人力资源损伤如图6(一)和6 (b)。人力资源损伤显著降低p-VASP虽然地位并治疗可以显著增加p-VASP的蛋白质水平。这说明,并可以在孤立的英航对抗人力资源损伤血管参与PKG通路。

4所示。讨论

本研究的进步不仅是我们了解VASP和PKG-I的规定,但也有利影响的机制并在治疗脑血管疾病。在目前的研究中,我们发现,首先,我们的知识,并增加了蛋白质和mRNA表达的包裹和VASP HBMECs人力资源处理。此外,与模型组相比,并增加了细胞的生存能力,同时提高了治疗在HBMECs PKG-I人力资源的可行性。这个建议并对损伤的保护作用与人力资源参与HBMECs PKG-I / VASP信号通路。在细胞实验中,我们发现,并对正常HBMECs大幅下挫的影响比HBMECs人力资源处理;这一结果显示,并能对抗HR受伤。

在圆形的老鼠,并预培养可以显著降低脑梗塞面积,血管张力,和BA cumulative-response曲线的值,EC₅₀,和增加蛋白质的p-VASP HR英航。以上结果表明,并(90毫克/公斤)预处理对血管有保护作用等引起的背景,和endothelium-dependent血管舒张,以应对ACh在英航暴露在CIR治疗明显受损,这表明CIR模型成功。此外,我们的研究结果显示,并降低了脑梗塞大小;这是与之前的研究一致,林等。21,22]。

为了检查并的机制,使用PKG抑制剂之前CIR老鼠并治疗。结果表明,包裹抑制剂逆转的影响并改善梗死大小、血管张力,英航的EC值₅₀和在圆形的老鼠并处理。这一结果表明,包裹抑制剂逆转的影响并对英航的老鼠CIR治疗通过抑制内皮血管舒张的改进和建议并防止CIR部分通过包裹的信号通路。

内皮细胞发挥重要作用在控制局部血管张力。在这项研究中,我们提出的机制之一SCU-attenuated等引起的红外通过PKG-I / VASP信号通路。我们的研究结果显示,并减毒欧共体₅₀和孤立的BA诱导的空调采暖背景值,但是包裹抑制剂逆转并改善电子商务的影响₅₀和英航在CIR老鼠的价值观。这证实了我们的假设,并通过PKG-I减毒等引起的红外/ VASP信号通路和支持我们组的先前的研究,并涉及血管舒张是主要内皮依赖性和一氧化氮合酶信号通路(17]。与此同时,我们发现包裹抑制剂阻止了并对减少脑梗死的影响大小。这种机制的贡献,至少部分阐明的有利影响并通过PKG-I信号通路在圆形的损伤。

并可能在红外起到保护作用,防止代ROS,直接清除活性氧或间接通过增强细胞抗氧化酶(23,24]。此外,并能促进内皮细胞的血管生成(25),抑制细胞凋亡,细胞凋亡诱导因子通路(26- - - - - -28),和减弱粘液在体外和在活的有机体内涉及PKC-ERK信号通路的抑制29日]。并苄酯对心肌缺血性损伤有显著的保护作用和保护机制可能与凋亡效应通过抑制炎症细胞色素C的释放和caspase-3激活和减弱(30.,抗肿瘤31日,32],抗病毒[33],和神经保护作用[24]。长期管理并改善心肌梗死大鼠心脏功能的抑制间质纤维化的机制可能涉及TGF profibrotic细胞因子的抑制β1表达和抑制p38 MAPK和ERK1/2磷酸化22]。并对红外损伤产生保护作用,通过抑制PKC [15,34]。然而,目前的研究表明,包裹/ VASP通路中发挥着重要作用的药理研究并在活的有机体内结合在体外IR模型。这个观察可能进一步药店的影响,因为它可能导致观察到背后的澄清机制减少cardiocerebral心血管发病率和死亡率在患者接受并或其他类黄酮。从另一个类黄酮黄芩苷的研究结果表明,血管舒张性能归因于endothelium-dependent放松通过包裹通路(10]。有证据表明缺血后再灌注引起当地障碍包括等(35]。缺氧和再氧化两种基本要素的缺血和再灌注损伤。人力资源可能导致不同形式的血管损伤,如出血、血管通透性的改变,和要领,包括endothelium-dependent受损血管舒张。我们的研究显示,红外等引起的英航与背景,并有保护作用在英航的要领在活的有机体内。这个观察也按照我们之前的结果,并可以放松隔离大鼠主动脉环(17]。

PKG-I的角色同功酶已经被记录在许多过程包括胃肠蠕动、血流量、神经可塑性,勃起功能,降低尿路功能,内皮渗透性和心脏保护(7,36- - - - - -38]。此外,有报告说,包裹是参与testosterone-induced人类脐动脉血管舒张(9]。激活后,包裹磷酸化VASP,进而激活下游离子通道,导致血管平滑肌放松和血管舒张。先前的报道表明,cGMP / PKG / ROS / / CaMKII钙调蛋白信号通路调节心肌细胞兴奋性可以通过打开渠道和促进心脏保护红外损伤(39]。在血管内皮细胞中,PKG-I调节细胞活性、迁移和增殖。据报道,这些功能对血管通透性和血管生成是必要的。最近实验PKG-I缺乏血管模型系统建立,没有donor-induced VASP磷酸化作用主要是由PKG-I [11]。我们的结果表明,PKG-I / VASP信号的行为可能是一个新颖的治疗目标红外英航的损伤。

包裹的下游目标之一是vasodilator-stimulated磷蛋白质(VASP),蛋白质与细胞骨架动力学和细胞迁移的控制(40]。PKG Ser239是主要的行动。在Ser239 VASP包裹的磷酸化抑制血管平滑肌的增长(41),在某种程度上,通过限制肌动蛋白丝,导致纤维收缩(42,43]。的决心P-VASP水平可能是小说指示器PKG-I活动和内皮完整性在人体组织的生理和病理生理条件下11]。我们的研究表明VASP和P-VASP蛋白质含量在IR模型组抑郁,但后升高并治疗,这是伴随着PKG-I波动和英航的变化等。我们的结果表明,PKG-I / VASP信号的行为可能是一个新颖的治疗目标红外英航的损伤。

总之,并产生显著药理作用和调节细胞功能通过多种途径。首先我们目前的研究提供了重要的证据,并诱导表达和激活PKG-I和增加VASP表达在正常培养和人力资源HBMECs治疗。在圆形的老鼠,并治疗降低脑梗塞大小和增强endothelium-dependent放松在孤立的英航等引起的背景,而保护作用并可以逆转的PKG抑制剂。这些建议并保护内皮细胞对人力资源损伤和改善endothelium-dependent放松包括PKG / VASP信号通路。我们的研究提供一种新的机制来解释并脑保护作用。

缩写

并:	黄岑素
人力资源:	缺氧复氧
背景:	脑缺血再灌注
红外光谱:	缺血再灌注
包裹:	cGMP-dependent蛋白激酶
要领:	内皮功能障碍
芭:	底动脉
哦:	乙酰胆碱
HBMECs:	人脑微血管内皮细胞
p-VASP:	磷酸化VASP
VASP:	血管舒张药刺激磷蛋白质。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

维铭杨设计实验和修正。小华Du写道。其他作者进行实验。小华Du陈和陈这项研究同样起到了推波助澜的作用。

确认

这项工作部分是由中国国家自然科学基金(30960450和30960450号)和云南省科学技术厅(2012号。2011 fa022 2014 fa010 bc012, 2014 fb037 cd054 2008和2014 bc012)。作者感谢方人张先生和西安的礼物并化合物。他们也感谢Yongxiao曹博士和他的小组成员的技术援助和钢丝myography呀王教授和他的团队的技术援助与圆形的动物模型评估。

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