文摘
客观的。潜在的草药提取物之间的相互作用和细胞色素P450 (CYP)系统导致严重不良事件或减少药物功效。采用verniciflua斯托克(旅游房车)及其成分已报告有不同的药理特性。我们评估了抑制潜在的旅游房车及其成分主要CYP亚型。方法。过敏原的影响了旅游房车(arv)标准化的提取和主要组件,fustin和非瑟酮与抗逆转录病毒药物,进行评估CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19、CYP2D6, CYP3A4由发光CYP重组人类酶同工酶活性测定。结果。抗逆转录病毒药物提取显示相对有效的抑制对CYP2C9(集成电路的影响50,< 0.001μg / mL), CYP2C19 (IC50,9.68μg / mL), CYP1A2 (IC50,10.0μg / mL)。然而,它显示弱CYP2D6 CYP3A4和抑制。Fustin显示适度抑制影响CYP2C19 (IC50,64.3μg / mL)和弱抑制其他CYP亚型与抗逆转录病毒药物相似。非瑟酮对CYP2C9显示有效的抑制影响,CYP2C19、CYP1A2。非瑟酮CYP2D6显示适度抑制和弱CYP3A4的抑制。结论。这些结果表明,抗逆转录病毒药物,临床上可用的草药,可能导致herb-drug交互时口头coadministered用药物代谢,CYP2C9 CYP2C19、CYP1A2。
1。介绍
如今,在癌症化疗患者的范式的发展改变了卡培他滨等化疗和靶向制剂包括酪氨酸激酶抑制剂(TKI)和哺乳动物雷帕霉素靶(mTOR)抑制剂1,2]。这些口头管理规定在许多癌症的治疗化疗药物代谢由肝细胞色素P450酶(CYP)。因此,在癌症患者必须注意药物相互作用,因为它可能导致用药或处理不足导致严重的临床后果相比,传统的有时限的细胞毒性化疗(3,4]。另外,大多数草药的口头管理可能影响肠道的活动影响coadministered药物的生物利用度(5,6]。此外,一些草药能增加潜在的有害的相互作用靶向制剂(7]。
采用verniciflua斯托克斯(旅游房车)Anacardiaceae家庭,俗称漆树,几个世纪以来一直被用于韩国医学治疗消化系统疾病,包括肿瘤(8]。几个临床前研究的类黄酮和其他提取报道,它有抗氧化,抗炎,抗增殖和抗癌活动9- - - - - -18]。然而,旅游房车的临床应用受到限制,因为漆酚(图1(a))都可能引起过敏性皮疹接触,称为urushiol-induced在敏感个体接触性皮炎19]。因此,漆酚,这是一个混合的几个儿茶酚的衍生品,应该从旅游房车制药使用。最近,几个标准化提取物的临床报告删除过敏原旅游房车(arv)基于传统方法显示,晚期癌症病人有前途的结果(20.- - - - - -25]。因此,aRVS-drug交互的潜在影响应做化疗患者并发。
在这项研究中,抗逆转录病毒药物标准化提取和它的一些主要和商用选民,包括fustin抗逆转录病毒药物(> 13.0%)和非瑟酮在抗逆转录病毒药物(> 2.0%)(数据1(b)和1(c)),选择研究他们的抑制性影响五大CYP亚型(CYP1A2, CYP3A4, CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6)参与大多数药物的肝脏代谢。
2。材料和方法
2.1。植物材料
标准化提取物旅游房车准备如下。旅游房车茎,10岁和Wonju增长,韩国,没有暴露在阳光直射和干切碎。碎片提取两次10倍体积的水在90°C到95°C根据韩国专利号为6小时0504160。提取与绘画纸GF / B滤纸过滤和集中在真空下将水。集中注意力是冻干褐色粉末。提取收益率从100克切碎的材料是3.3克。一个组件使用高效液相色谱分析方法表明,抗逆转录病毒药物提取包含fustin,非瑟酮,sulfuretin和butein等。抗逆转录病毒药物提取的质量测试和控制根据质量标准的韩国食品与药品管理局和我们医院的标准(fustin > 13.0%,非瑟酮> 2.0%,漆酚不检测)(8]。标准的抗逆转录病毒药物组成的样本8系列稀释的抗逆转录病毒药物,范围在-10000 - 0.001之间μ克/毫升甲醇溶解在50%。Fustin (3,3′, 4′, 7-Tetrahydroxyflavanone, C15H12O6)是一种黄酮,是13 - 30% (w / w)的抗逆转录病毒药物。fustin提取抗逆转录病毒药物的高效液相色谱质谱法的纯度> 95%。的标准样本由8系列稀释的fustin,介于0.001和10000μ克/毫升甲醇溶解在10%。非瑟酮(3,3′,4′,7-Tetrahydroxyflavone, C15H10O6)也是一个类黄酮,是2 - 5% (w / w)的抗逆转录病毒药物。非瑟酮购买从西格玛化工有限公司(圣路易斯,密苏里州,美国)的纯度> 95%,因为非瑟酮提取抗逆转录病毒药物很难确保其纯度。的标准样本由8系列稀释的非瑟酮,介于0.001和5000μ克/毫升甲醇溶解在70%。
2.2。Luminogenic P450酶抑制试验
进行了分析使用Promega P450-Glo扫描系统(Promega Inc .)、威斯康辛州的麦迪逊。美国)。它包含重组人类CYP1A2、CYP2C9 CYP2C19、CYP2D6、和CYP3A4酶膜产生的杆状病毒表达系统,具体luminogenic细胞色素酶底物(6-deoxyluciferin荧光素6-methyl醚、荧光素6-benzyl醚,乙二醇酯6-deoxyluciferin,和荧光素6-methyl醚乙二醇酯)、消极控制膜、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氢(NADPH)再生系统含有辅酶ii + glucose-6-phosphate氯化镁(MgCl2)和glucose-6-phosphate脱氢酶(功能启动和维持CYP450反应通过维护一个参考NADPH系统),反应缓冲区,荧光素检测试剂,和Luciferin-Free水。CYP的消极控制膜没有活动。luminogenic抑制进行了分析后,从Promega公司协议(技术公告,P450-Glo化验,Promega Corp . 2009)和先前的研究26,27]。
不同浓度样品的抗逆转录病毒药物提取和两个化合物的准备。首先,12.5μL的4×抗逆转录病毒药物提取或测试化合物(适合每个酶)被添加到“治疗”井。12.5μL luciferin-free水添加单独的“未经处理”井代表总CYP的价值活动和“minus-P450控制”井代表的值CYP-independent背景发光。其次,12.5μL的4×反应混合物(包含人类CYP膜制剂,适当的luminogenic衬底和磷酸钾缓冲)添加到“治疗”和“未经处理”井。12.5μL 4×控制反应混合物(含膜制剂没有CYP酶,适当的luminogenic衬底和磷酸钾缓冲)被添加到“minus-P450控制”井。板是preincubated在室温(25°C) 10分钟,然后25μL 2×NADPH再生系统的添加到启动的反应。这是在室温下孵化后30分钟CYP2D6(45分钟),50μL的被荧光素检测试剂添加到停止反应,产生发光信号。所有的样品的发光测量使用标作为相对光单位(RLU) 20分钟后孵化稳定发光信号。测定实验重复三个独立的时期。
2.3。统计分析
产生的光量成正比的CYP酶活性。未经处理的CYP的净信号反应代表总CYP活动(100%)。CYP的调制测试化合物是由活动的比较从未经处理的CYP的平均净信号变化反应观察从测试化合物的变化。的集成电路50值显示超过50%抑制计算通过绘制cyp酶活性的抑制百分比与日志提取或化合物浓度使用GraphPad棱镜(5.01版。美国)。
3所示。结果
抗逆转录病毒药物的抑制效力提取及成分对CYP450取决于评估集成电路50值。的效能测试化合物可以分类的IC50值根据以下规模:强大的集成电路50< 20μ如果IC g / mL,温和50= 20 - 100μ如果IC g / mL,或弱50> 100μ克/毫升(26]。抗逆转录病毒药物提取被发现具有活性的抑制对CYP2C9, CYP2C19、CYP1A2(表1),最有效的抑制CYP2C9 (IC50< 0.001μg / mL)。在组件中,非瑟酮显示更抑制活动对所有cyp fustin相比。抗逆转录病毒药物提取、非瑟酮被发现具有活性的抑制对CYP2C19、CYP1A2和CYP2C9(表1),最有效的抑制CYP2C19 (IC50< 0.001μg / mL)。然而,像抗逆转录病毒药物,非瑟酮显示疲弱抑制对CYP3A4和CYP2D6(表1)。
4所示。讨论
重组体人CYP酶的研究发现,抗逆转录病毒药物提取强有力地抑制CYP2C9少所以CYP2C19 CYP1A2和弱抑制CYP3A4 CYP2D6。此外,主要的类黄酮,非瑟酮,强有力地抑制CYP2C19 CYP1A2和CYP2C9,适度抑制CYP2D6、弱抑制CYP3A4。另一方面,fustin显示对CYP酶除了CYP2C19微不足道的抑制。上面的测试结果表明,非瑟酮负责抑制CYP亚型的抗逆转录病毒药物提取。
CYP抑制会导致更高水平的细胞毒性药物,导致可辨认的,更大的毒性,而不活跃的高活性化合物,如环磷酰胺或异环磷酰胺经常导致治疗失败,因为化疗药物的血浆水平较低(2,6]。在CYP酶,CYP3A4和CYP2D6是最重要的抗癌药物的代谢酶1,2]。CYP3A4,最丰富的酶(~ 80%)肠道粘膜,应该是最重要的因素在药物代谢28]。因为大多数草药包括抗逆转录病毒药物的口服药物,提取高浓度CYP3A4的肠道可能会导致显著的抑制作用。然而,我们的研究结果表明,抗逆转录病毒药物提取和测试化合物不太可能抑制消除化疗药物代谢的主要途径是通过CYP3A4或CYP2D6。
CYP2C9包括大约15%的CYP的肠道粘膜,参与一些化疗药物如卡培他滨的新陈代谢,环磷酰胺、和异环磷酰胺,药物治疗指数窄如华法林和苯妥英,和其他药物如苊香豆醇、甲苯磺丁脲、洛沙坦,格列吡嗪,一些非甾体类抗炎药(2,4,29日]。黄酮和黄酮醇两类主要的类黄酮、多酚类次生代谢产物,也作为有效的CYP2C9抑制剂(30.]。
在我们的研究中,fustin (2 - (3, 4-dihydroxyphenyl) 3, 7-dihydroxy-2, 3-dihydrochromen-4-one)是采用一种黄酮类。(非瑟酮(2)- 3 4-dihydroxyphenyl 3 7-dihydroxychromen-4-one)是一种黄酮醇,结构不同的多酚的化学物质,属于类黄酮组。据报道有多个,如抗衰老的药物特性,抗炎、抗癌、抗病毒效果在不同的文化中细胞(11,31日]。一些草药已报告显示CYP2C19以及CYP2C9的抑制26,32]。因此,抑制CYP2C9和CYP2C19抗逆转录病毒药物提取主要是由于非瑟酮。
此外,基因多态CYP2C9和CYP2C19显示不同的药物排泄率和最终的血清浓度在不同的人。一个广泛的代谢有野生型等位基因的两个副本,而可怜的代谢有变异的等位基因的两个副本,导致酶活性降低(33,34]。CYP2C9 * 2和CYP2C9 * 3,公认为主要CYP2C9变异人类,降低了催化活性与野生型相比CYP2C9 * 1。CYP2C19 * 2和CYP2C19 * 3变异等位基因占大多数的穷人代谢表型。考虑到贫困的代谢与CYP2C9和CYP2C19变异更突出亚洲人口(15 - 20%)比白种人和非裔美国人的人口(3 - 5%)35),进一步抑制CYP2C9和CYP2C19草药,包括抗逆转录病毒药物提取、可能导致临床上重要的亚洲人口中的herb-drug交互。
CYP1A2能够代谢部分多环芳烃(多环芳烃)、前致癌物致癌的中间体,因此,高CYP1A2活动可能影响肺癌和乳腺癌的风险36,37]。CYP1A2也参与了抗抑郁药物的代谢和抗精神病药物(29日]。饮食类黄酮预防癌症的重要贡献者,由于其抑制CYP1A2活性(38]。因此,抗逆转录病毒药物的抗癌作用机制在实践中提取可能解释的观点CYP1A2抑制或其基因多态性。
我们的体外结果表明,抗逆转录病毒药物提取强有力地抑制CYP2C9 CYP2C19、CYP1A2,这意味着抗逆转录病毒药物提取结合化疗药物如卡培他滨、环磷酰胺、或异环磷酰胺,或者上述药物可以增加或减少药物的血浆水平,这可能导致重大的临床后果。相比之下,并发管理抗逆转录病毒药物,顺铂是报道不改变顺铂的抗癌功效。此外,抗逆转录病毒药物预防cisplatin-induced毒性体外和体内通过抗氧化活性39]。
因此,抗逆转录病毒药物的体内调查提取抑制CYP2C9和CYP2C19需要研究drug-herb交互。CYP2C9基因多态性和CYP2C19也应该学习,因为一个更好的理解会指示ultraextensive还是贫穷的人新陈代谢在临床上重要herb-drug交互。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
承认
目前的研究是由2013年Dankook大学研究基金。