文摘

蓼属植物研究方面是马来西亚民族植物与各种治疗效果。本研究旨在确定水叶提取物的预防效果p .摘要针对ethanol-induced在大鼠胃粘膜损伤。斯普拉格Dawley老鼠被分为7组。正常和溃疡对照组口服接种与蒸馏水。参照群体是口头管理奥美拉唑与20毫克/公斤。实验小组获得了提取62.5,125,250,和500毫克/公斤,因此。60分钟后,蒸馏水和绝对乙醇(5毫升/公斤)和其他人正常的控制,分别。除了组织学、免疫组织化学和高碘酸希夫(PAS)污渍,脂质过氧化水平,丙二醛(MDA)、抗氧化酶、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。溃疡组表现出严重的粘膜损害。实验组显著降低胃损伤和MDA含量,增加SOD水平。实验组织的免疫组织化学显示upregulation Hsp70和伯灵顿的差别,对这些基因的蛋白质,分别。PAS染色在这些群体表现出强烈的染色和溃疡组。 Acute toxicity study revealed the nontoxic nature of the extract. Our data provide first evidence thatp .摘要提取物能显著防止胃溃疡。

1。介绍

胃炎是一种炎症,刺激或腐蚀发生在粘膜屏障的内生防御机制不能妥善保护器官。通常,暴露在超过酸和胃蛋白酶造成侮辱胃肠墙上(1]。几个因素增加消化性溃疡疾病的发病率,包括幽门螺杆菌很少感染和其他感染,如肺结核、梅毒、病毒感染、真菌感染、寄生虫、细菌和虫子。一些药物,如非甾体抗炎药(如阿斯匹林、类固醇和非甾体类抗炎),钾,铁补充剂,已报告风险对消化性溃疡疾病的患病率。此外,医疗和手术条件,一些像慢性胰腺炎、自身免疫性疾病、恶性贫血、恶性贫血、情感或生理不适,食物(重型饮酒),和吸烟增加疾病的共性的机会在人口(2]。许多产品通常用于治疗胃炎。一般协议胃炎的治疗是减少酸分泌(3]。传统上,在不同的国家植物药用的。如今,研究人员和公司都倾向于研究更多关于草药,和许多植物antiulcerogenic属性被发现由不同的组织(4- - - - - -7]。

属蓼属植物属于蓼科,由大约150个物种。它包含各种生物活性化合物和phytopharmaceutical重要性(8]。然而,没有发表关于gastroprotective效应的研究p .摘要在老鼠身上。本研究评估的gastroprotective潜力进行水提物对ethanol-induced这种植物在大鼠胃粘膜出血。

2。材料和方法

2.1。奥美拉唑

在这项研究中,抗溃疡的药物奥美拉唑用作参考,获得了马来亚大学医疗中心(UMMC)药房。药物溶解在蒸馏水和口服药物的老鼠在一个剂量20毫克/公斤体重(5毫升/公斤)的推荐Mahmood et al。9]。

2.2。植物提取的标本和制备

新鲜的p .摘要树叶从人种获得资源有限公司Sdn,雪兰莪州,马来西亚、沉积的标本Rimba Ilmu,马来亚大学生物科学研究所吉隆坡(凭证标本。KLU 47125)。树叶在阴凉处一周干,和干叶子粉使用电动搅拌器。细粉(200克)在1000毫升蒸馏水浸泡在一个锥形瓶和热板加热1小时(85°C)。当其温度降低,它是通过棉花过滤两次。然后,提取存储在冰箱中。冷冻提取进行了冷冻干燥过程产生的深棕色粉末(23.04 g, 11.52%)。提取被溶解在蒸馏水和口服(5毫升/公斤)的老鼠在剂量为62.5,125,250,500毫克/公斤的推荐Mahmood et al。10]。

2.3。实验动物和急性毒性研究

急性毒性研究是用来确定一个安全剂量p .摘要。36健康斯普拉格Dawley老鼠(18岁男性和18个女性)从实验动物获得房子,马来亚大学医学院。他们被分配同样分成3组:车辆(蒸馏水),2克/公斤,5克/公斤的提取p .摘要,分别。这些动物禁食过夜(食物而不是水)前剂量。食物是保留进一步剂量后3到4小时。动物被观察到30分钟和2,4,24,48小时后,政府对任何临床或毒性的发病症状2周。动物被牺牲在第15天。血清生化和组织学(肝脏和肾脏)参数测定11]。这项研究是由动物实验伦理委员会批准,医学院,与道德没有马来西亚马来亚大学。PM / 07/05/2011 / MMA (a) (R)。在整个实验中,所有的动物都收到了人类保健根据标准中“指导护理和使用实验动物”由出版的美国国家科学院和国家健康研究所(11]。

2.4。胃溃疡的实验动物

健康的成年人斯普拉格Dawley两性的老鼠(年龄在6 - 8周,体重200 - 220克)是准备从动物医学院,吉隆坡,马来西亚马来亚大学。标准实验室条件下饲养的动物,笼在不锈钢笼子了层宽钢丝网防止食粪性,在温度和安置在一个12小时的光暗周期。他们用标准实验室颗粒和水随意。治疗前的动物禁食24小时,以确保他们的胃是空的。在禁食期间,老鼠被允许有免费的水。他们的水是抑制实验前2小时触发。这个协议是基于动物保健和使用委员会的指导方针从实验室动物科学中心,医学院,吉隆坡,马来西亚马来亚大学。

2.4.1。感应的胃溃疡

以下预处理的建议Mahmood et al。9]。禁食大鼠随机分成7组6老鼠。组编号1 - 7和相应的预处理开始。第1组作为正常的控制和收到口头蒸馏水。组2标记“溃疡对照组”收到口头蒸馏水作为预处理。组3,参考组,收到20毫克/公斤奥美拉唑口服。实验小组(4 - 7)收到水叶中提取的p .研究方面,剂量的62.5,125、250和500毫克/公斤。预处理后一个小时,蒸馏水(5毫升/公斤)是口头管理组1,和绝对乙醇(5毫升/公斤)是口头组2 - 7日。1小时后,所有的动物安乐死的过量甲苯噻嗪和氯胺酮麻醉之后,颈椎错位技术来确保他们的安乐死。他们的胃立即切除,并保存在生理盐水的容器(6]。

2.4.2。测定胃壁粘液

胃壁粘液是评估根据修改后的科恩等程序。12]。

2.4.3。总评价胃损伤

溃疡的胃粘膜表现为细长的出血性病变胃的长轴平行。每个大鼠胃粘膜检查以评估损失。溃疡的长度和宽度(毫米)测量求积仪(毫米²=溃疡面积)在解剖显微镜下(1.8 x)。溃烂面积计算通过总额小方块的数量(毫米²)覆盖溃疡乐队。病变区域之和为每个胃是应用于溃疡面积的计算(UA)、“小平方的总和= UA(毫米²”据马哈茂德的建议等。10]。抑制百分比是由以下公式计算:

2.4.4。制备匀浆

胃组织样本用冰冷的生理盐水彻底清洗。匀浆(10% (w / v))然后用冰冷的50 mM磷酸盐缓冲剂(pH值7.4)包含哺乳动物蛋白酶抑制剂鸡尾酒。匀浆是离心机在10000 g×30分钟(4°C)。上层清液用于进一步的实验。

2.4.5。SOD活性的测定

根据协议的阳光SOD活性测定et al。13]。

2.4.6。MDA的测量

组织MDA(更易/ L)是决定基于该方法开发的德雷伯和哈德利14]。

2.4.7。蛋白质含量的测量

双缩脲反应测定蛋白质浓度的主要协议,所描述的Gornall et al。15]。

2.5。胃黏膜的组织学研究

2.5.1。准备组织部分

标本的胃墙壁缓冲福尔马林固定在10% 18个小时在室温和处理组织处理机器(德国徕卡)。胃的部分采用的厚度5μm。

2.5.2。苏木精和伊红

胃部分被苏木精和伊红染色组织学评价(16]。

2.5.3。粘膜糖蛋白的研究

腺胃的一部分是沾过碘酸希夫(PAS)为每一个每组大鼠(17]。

2.6。免疫组织化学染色

组织切片的幻灯片在60°C加热大约25分钟在干热灭菌器(Venticell,嗯,Einrichtungen,德国)。组织部分与分级酒精deparaffinized二甲苯和水化。抗原检索过程中执行10毫米柠檬酸钠缓冲。免疫组织化学染色法是根据制造商的协议(美国Dakocytomation)。短暂,内源性过氧化物酶被过氧化物酶块(0.03%过氧化氢含叠氮化钠)为5分钟。组织部分轻轻洗了洗,然后孵化的缓冲区Hsp70(1: 500)和伯灵顿(1:200)生物素化的主要抗体,持续15分钟。部分被轻轻冲洗清洗缓冲和放入缓冲池。幻灯片被放置在一个湿室和足够的streptavidin-HRP(链霉亲和素结合辣根过氧化物酶在PBS含有抗菌剂)添加和孵化15分钟。然后,组织部分被轻轻冲洗清洗缓冲和放入缓冲池。Diaminobenzidine-substrate-chromagen被加入到组织部分和孵化进一步洗5分钟后,与苏木精复染色5秒。 The sections were then dipped in weak ammonia (0.037 Mol/L) 10 times and then rinsed with distilled water and cover slipped. Positive findings of the immunohistochemical staining should be seen as brown stains under light microscope.

2.7。统计分析

所有的值被报告为均值±S.E.M.组之间的差异的统计意义与单向方差分析评估(事后分析)。的值被认为是显著的。

3所示。结果

3.1。急性毒性研究

确定的急性毒性p .摘要提取,提取的动物治疗剂量的2 g /公斤或5克/公斤。他们的健康状况筛查的时间14天。所有的动物都很健康,没有表现出任何在这些剂量毒性的迹象。血清生化和组织学的肝脏和肾脏指标没有任何异常。

3.2。总评价胃损伤

的抗肿瘤活性p .摘要在ethanol-induced提取出血性粘膜病变模型如图1和表1。病变是长,出血性,局限于腺部分。结果表明,这些老鼠的预处理提取显著降低胃溃疡形成的地区相比,溃疡组(图1)。绝对乙醇引起的广泛,可见出血性损伤胃粘膜。的p .摘要提取显著抑制溃疡的形成,尤其是最高剂量,令人惊奇地平胃粘膜褶皱剂量500毫克/公斤的提取(图1)。提取显著降低溃疡大小剂量依赖性的方式和严重程度。的保护属性提取最高剂量(500毫克/公斤)出现类似于参照组(图1)。

3.3。的影响p .摘要在Ethanol-Induced胃壁粘液的变化

溃疡对照组、正常对照组相比,乙醇明显减少Alcian-blue-binding胃壁粘液的能力。在实验小组,预处理p .摘要提取显著增强胃粘膜的Alcian-blue-binding能力(表1)。

3.4。的影响p .摘要SOD活性的测量

乙醇能够降低SOD活性所示溃疡对照组,与正常对照组相比。在实验小组,提取的p .摘要导致的SOD酶活性显著增加(表1)。

3.5。的影响p .摘要在组织MDA提取

乙醇MDA活动增加明显与正常组相比。然而,提取的p .摘要显著降低MDA的活动,类似于参照组(表1)。

3.6。的影响p .摘要提取的蛋白质浓度

溃疡对照组,乙醇明显减少胃粘膜匀浆的蛋白质浓度与正常对照组相比。然而,蛋白质含量增加明显的实验小组在这些老鼠接受奥美拉唑(表1)。

3.7。组织学评价胃损伤

组织学观察溃疡的胃损伤对照组显示相对广泛的损害胃粘膜,和粘膜坏死病变渗透深入。也广泛水肿和白细胞的入渗的黏膜下层出现镜下(图2)。老鼠接受的提取p .摘要最好减少对胃粘膜的保护或没有溃疡面积,粘膜下水肿、白细胞浸润(图2)。提取显示其潜力发挥gastroprotective效应剂量依赖性的方式。

3.8。高碘酸希夫(PAS)粘膜糖蛋白

的提取p .摘要胃粘膜的PAS染色,增加明显,如图3(红色的颜色),溃疡相比对照组,表明胃粘膜糖蛋白含量的增加。在其他词,p .摘要提取保留绝对乙醇引起的减少PAS染色(图3)。

3.9。免疫组织化学

免疫组织化学结果表明的预处理p .摘要提取upregulation Hsp70蛋白引起的。同样,奥美拉唑增强Hsp70的表达。Hsp70蛋白的表达在溃疡的对照组相比差别进行了对这些实验(图组4)。伯灵顿蛋白质,另一方面,在动物的预处理p .摘要提取(以及这些老鼠在参照组)表达下调。相比之下,伯灵顿的表达蛋白在溃疡组调节(图5)。伯灵顿的棕色染色阳性细胞具有胃腺上皮细胞的细胞质中。

4所示。讨论

急性毒性测试没有任何应用剂量中毒或死亡的迹象。口服胃绝对乙醇是有害的。它引起的局部破坏胃粘膜屏障,引起显著的血管变化在几分钟内(16]。绝对乙醇也产生线性出血性病变广泛的粘膜下水肿,粘膜脆弱,炎症细胞浸润,上皮细胞失去进入胃腔,酒精伤害的典型特征(18]。粘液分泌是假定一个至关重要的防御因素从胃损伤保护胃粘膜19]。

管理乙醇,在溃疡对照组,蛋白质含量降低,但口服蛋白质含量与植物提取物预处理保持胃匀浆。乙醇可能会破坏上皮细胞,导致蛋白质含量减少(20.]。胃的粘膜,第一个卫冕层组织,可以通过乙醇被侵蚀。胃粘膜防止直接接触的消化酶(20.]。的提取p .摘要可以提高代的上皮细胞进而显著增加胃匀浆的蛋白质浓度。

过氧化物和羟基自由基氧化应激的重要介质,在一些临床疾病发挥至关重要的作用。任何化合物(天然或合成)与抗氧化活动可能影响对全部/部分减轻这样的伤害。因此,消除超氧化物和氢氧自由基可能有助于捍卫一个活生生的身体免受疾病21]。随后SOD超氧化物转化为过氧化氢,过氧化氢酶过氧化氢转化为水。胃粘膜溃疡对照组中匀浆SOD的活性降低。这可能是导致他们利用超氧化物阴离子的分解,产生的脂质过氧化作用。这种酶活性降低可能会大量的有害的结果。的预处理p .摘要提取SOD的活性增加。在胃里匀浆,p .摘要提取显著降低丙二醛的浓度、脂质过氧化作用的指标。脂质过氧化是公认的氧化损伤,影响细胞膜的例子。之间的不平衡造成的氧化损伤和抗氧化防御系统。减少脂质过氧化的提取指出,其抗氧化活性。此外,p .摘要提取可能保护/防止重要生化参数的变化和形态学变化绝对乙醇胃粘膜的管理。溃疡组MDA水平显著增加SOD抗氧化酶活性降低。

胃组织的组织学评估显示,ethanol-induced病变的特点包括出血、水肿、炎性浸润,上皮细胞的损失之前报道的其他研究[22,23]。本研究的结果证明的gastroprotective属性p .摘要提取物的抑制白细胞渗透保护胃壁。无水酒精可以广泛损害胃粘膜,可能增加胃粘膜嗜中性粒细胞浸润。氧自由基,源自渗透中性粒细胞在胃组织溃烂,有抑制作用在大鼠胃溃疡愈合。中性粒细胞也通过生产超氧化物阴离子调节脂质过氧化(24]。中性粒细胞炎症介质的主要来源可以释放强大的活性氧(如过氧化物、过氧化氢和髓过氧化酶派生氧化剂)。这些活性氧高细胞毒性,能引起组织损伤(25]。

在这项研究中,压扁的粘膜褶皱作为最大的gastroprotective效果出现p .摘要叶提取物可能是由于降低了胃的蠕动。胃蠕动的变化可能会影响胃损伤的发生率[4]。放松的圆形肌肉可以保护胃粘膜的压扁的粘膜褶皱可能增加粘膜面积接触坏死性代理和将减少胃的体积刺激物rugal波峰(6]。乙醇触发一个了不起的圆形肌肉的收缩,导致粘膜压缩粘膜波峰的折叠,导致坏死和溃疡10]。

PAS染色法显示出特征洋红染色的胃分泌黏多糖的地区。我们的研究澄清的p .摘要提取增强激烈从胃的腺体分泌的粘液。粘液生产的一个主要地方胃粘膜防御机制(24]。在各种因素提高溃疡预防胃、粘液和碳酸氢盐分泌可能是溃疡预防过程中极其重要的,因为他们产生粘液/重碳酸盐层保护新形成的细胞刺激(如酸和消化性伤害)26]。

通过DNA分裂,细胞凋亡,细胞程序性死亡细胞收缩和扩张的内质网通常是紧随其后的是细胞变性和膜囊泡的形成,称为细胞凋亡的身体。乙醇本身能够诱导细胞凋亡在胃上皮细胞阶段的后期实施。的upregulation proapoptotic因子,抗凋亡bcl - 2是两个差别伯灵顿蛋白质,对这些基因的细胞凋亡的主要指标。Hsp70,另一方面,是最保守和大量生产的蛋白质在不同形式的压力(27),如热,有毒代理人,感染,和扩散28]。这些蛋白质之间的相互作用是非常重要的在维持细胞稳态状态(29日]。Hsp70蛋白保护细胞免受氧化应激或热休克。Ethanol-generated活性氧通常采取行动抑制Hsp70的表达,增加伯灵顿的表达。Hsp70可以防止这些部分变性蛋白聚合,并允许他们再折起。Hsp70的过度注意到在这个研究可以表明p .摘要保护胃组织Hsp70的老年病。

Hsp70家族作为分子伴侣功能,减少精神压力引起的胞内蛋白变性和聚合。除了陪伴活动,Hsp70一直建议发挥gastroprotective采取行动保护线粒体和通过干扰压力诱导的凋亡程序(30.]。动物预处理的p .摘要提取显示了伯灵顿蛋白质的表达。伯灵顿蛋白质被发现上调溃疡对照组。伯灵顿的bcl - 2家族和已知主要通过线粒体损伤细胞凋亡相关的蛋白质(31日]。细胞凋亡的敏感性取决于apoptosis-promoting之间的平衡和抑制因素(32]。凋亡细胞死亡中扮演重要的角色在胃粘膜的完整性的丧失引起的各种积极因素(33]。重要的感应gastroprotective Hsp70在被发现p .摘要管理的老鼠,这表明恢复的蛋白质可能有助于预防ethanol-induced出血性胃粘膜病变。因此,建议这种植物对ethanol-induced胃损害有保护作用Hsp70的诱导。

5。结论

我们的研究显示,p .摘要叶提取物可以显著保护胃粘膜免受ethanol-induced胃粘膜损伤。这种保护被总值显示为确定外观,组织学,私人助理,和胃组织匀浆免疫组织化学染色,相关部分的保护胃粘液分泌和抗氧化活性。

作者的贡献

i f·伊斯梅尔和美国Golbabapour同样这项工作。

确认

作者要感谢马来亚大学,吉隆坡,马来西亚PPP格兰特(PS338/2010A) UMRG格兰特(RG040/10BIO)和高研究资助(HIR格兰特没有影响。f000009 - 21001)。