体内中草原均匀和反红虫药物对骨质疏松症的药理相互作用的研究

摘要

抗再吸收药物阿仑膦酸钠和雷洛昔芬可有效降低绝经后妇女的骨密度（BMD）损失。然而，长期治疗可能伴随着严重的副作用。我们的研究小组最近发现，在动物和人类研究中，一种中草药配方ELP可以显著减少骨密度的损失。因此，本研究旨在研究不同草药组合对去卵巢大鼠骨保护的潜在协同效应。为了评估不同组合的疗效，在8周的每日口服治疗过程中，每两周监测一次总骨密度。8周后还测定了骨微结构、骨强度和脱氧吡啶啉水平。从我们的结果来看，ELP和雷洛昔芬合用可使胫骨总骨密度增加5.26%（2.5%） 雷洛昔芬mg/kg/天；)和5.94%(0.25毫克/公斤/天)raloxifene;)与单用雷洛昔芬各剂量组比较。在远端股骨骨密度增加中也观察到类似的协同效应(0.25 mg/kg/day;),reduction in urinary deoxypyridinoline crosslink excretion (2.5 and 0.25 mg/kg/day; both）.然而，在所有阿仑膦酸治疗组中并不能观察到这种相互作用。我们的数据首次提供了ELP可以协同增强雷洛昔芬的治疗效果，从而减少雷洛昔芬的临床用量的证据。

1.介绍

骨质疏松症是一种退化性疾病，其特征为低骨质量和骨的微架构的劣化，这增加了骨脆性和易感性骨折[1］.这些骨折会对老年人产生发病率和死亡率。骨质疏松症是欧洲和美国最严重的老年健康问题之一[2那3.］.在欧洲和美国，大约30%的绝经后妇女患有骨质疏松症。据估计，全世界有超过2亿人患有这种疾病[4.］.到2050年，全球骨质疏松性髋部骨折的发病率预计将增加240%，男性增加310% [5.］.经济成本，由于骨质疏松性骨折在过去十年中急剧增加，并预计将增长。需要采取措施，以减少骨质疏松症的患病率和骨质疏松性骨折的发生率。许多药物，目前被认为是有效的预防或治疗骨质疏松症。阿仑膦酸盐和雷洛昔芬是两个已被广泛使用的药物。两者都是有效降低骨矿物质密度（BMD）的损失和减少骨折的风险[6.］.他们的抗骨质疏松行动抑制骨吸收过程，导致整体骨形成的增加十分相似。然而，有越来越多证据显示这两种药物有引起了许多在长期服用副作用的潜力。例如，长期双膦酸盐治疗会导致颚骨坏死[7.］.用雷洛昔芬治疗可能会增加静脉血栓形成的风险[8.］.虽然这些副作用并不常见，但仍然仍然有关于使用这些反红剂的长期使用。

在过去的几年里，我们的研究组发现了一些可以有效预防和治疗骨质疏松症的中药。草药配方ELP，包含三种“补肾”草药:Epimedii草(E), Ligustri Lucidi果实(L)和补果实(P)的重量比5:4:1,已被证明是著名的在促进大鼠间充质干细胞的成骨分化增强骨碱性磷酸酶等活动活动和矩阵钙沉积(9.］.此外，该配方可抑制老年去卵巢骨质减少大鼠脊柱骨密度损失，且无任何不良反应[10］.此外，我们完成了一项临床试验，发现ELP可以减少绝经后妇女的骨丢失和髋部骨折。这项随机对照临床试验表明，每天44 mg/kg的ELP提取物显著抑制绝经后妇女脊柱骨量的渐进性损失经过12个月的草药治疗后[11］.也有报告显示，ELP的一种活性化合物淫羊藿苷可以缓解去卵巢动物的骨丢失，并促进成骨细胞UMR-106的骨形成[12］.机制研究证明，淫羊藿苷与helioxanthin衍生物（其他骨合成试剂）担任可协同地增强骨形成[13］.因此，ELP的抗骨质疏松的行动是由双膦酸盐和雷洛昔芬相当不同。据推测，它刺激骨形成，而不是在骨代谢的平衡抑制骨吸收。

骨质疏松症是骨重建失衡的结果，骨吸收率高于骨形成率。增强成骨细胞的活性，同时降低破骨细胞的活性，可能有助于恢复骨代谢平衡，并限制骨质疏松症发展过程中的骨丢失[14］.由于ELP和西药在骨代谢中作用于不同的细胞/分子靶点，我们假设患者同时服用ELP和西药会产生协同作用。这些药物可以很好地结合在一起，以补充或弥补彼此各自的缺陷。为此，需要对中西药相互作用进行广泛的研究，并应避免可预测的不良反应。这种草药组合可能会增强整体的骨保护作用，因此这些抗骨吸收药物的剂量可以被最小化。我们使用去卵巢的大鼠模型，研究ELP和抗骨吸收药物之间是否有协同作用(其作用大于抗骨吸收药物单独作用)，以增加骨形成和减少骨吸收。

2.材料和方法

2.1。化学品和试剂

所有化学品和试剂购自Sigma（USA），除非另有指明购买。分别从Merck（GmbH）和美国礼来公司（USA）获得的alendronate钠和盐酸雷洛昔芬。

２.２.草药提取与鉴定

中草药原料均由香港一家知名供应商采购。形态学、显微和化学鉴定均按照中国药典进行[15］.测试草药的Herbenulium凭证标本沉积在香港中文大学中医研究所，凭证标本号如下：2004-2547（E），2004-2566（L），2004年 -2568（p）。Epimedii Herba，Ligustri lucidi果肉和牛肝菌的原料草药，重量比为5：4：1，在沸水中的回流下萃取1小时，重复萃取两次。收集含水提取物并过滤。然后将滤液在50℃的减压下浓缩并冻干成粉末。该公式进行标准化。使用紫花素（对于epimedii Herba），Salidroside（对于Ligustri Lucidi Fructus）等代表性标记进行研究，使用液相色谱 - 质谱（LC-MS）（6530 -质量Q-TOF LC / MS，Agilent Technologies，USA）。将ELP含水提取物（1mg / ml）注入ACQUITY UPLC C18柱（2.1×100mm ID，粒度1.7 μ米）（美国Waters公司）。采用梯度洗脱进行了使用下列溶剂体系：流动相A-双蒸水/甲酸（99.9 / 0.1; V / V）;流动相B-乙腈。The linear gradient elution system was 100% A to 100% B for 30 min, following by standing at 100% A for 10 min. The flow rate was set at 0.3 mL/min. Identification of the chemical markers was carried out by comparing the retention times of unknown peaks to those of the standards with matched ionization products’ size. Detection of ionization products was performed by monitoring positive ions of the combined parent and product compounds in multiple reaction monitoring mode (MRM). The theoretical m/z values of the parent and product ions [M+H]⁺分别设定在677.66为淫羊藿苷，[M +的Na]⁺红景天苷为323.304，[M+H]⁺补骨脂素及其异构体异补骨脂素的187.16。定量测定了ELP提取物中各标记物的丰度。

2.3。模型的建立和治疗方案

已获香港中文大学动物实验伦理委员会批准(编号09/068/MIS)。88只3月龄雌性SD大鼠，每笼4只，饲养在一个22°C、12小时光-暗周期的房间。这些大鼠被平均分成8只一组。OVX组大鼠双侧切除卵巢，Sham组大鼠进行假手术。在实验期间，大鼠维持在含有0.9%钙和0.7%磷酸盐的标准鼠粮中，并提供蒸馏水自由．卵巢切除术3周后，每只大鼠灌胃给予ELP提取物和两种抗吸收药物(阿仑膦酸(A)和雷洛昔芬(R)) 8周，见表1．每周记录大鼠体重，评估变化。在处死前将动物置于单独的代谢笼中一天，采集24小时空腹尿液样本。尿液样本用2ml 1 M盐酸酸化，并在1200×g下4°C下离心10分钟以去除污染物，等量尿液在−20°C下保存直到检测。献祭后，从腹腔腔静脉抽取血液样本。然后取血清样本，在3000 ×g 4°C下离心20分钟，在−80°C下保存，然后评估生化参数。子宫被取出并立即称重。卵巢切除术的成功是在尸检时，通过未发现卵巢组织和观察明显萎缩的子宫角。

将动物分成11组，如表1．1组为假手术组，其余10组均行卵巢切除(OVX)。实验用ELP剂量(0.35 g/kg/d;第3组和8-11组)在我们之前的研究中被证明是有效的[10］.The dose (equivalent to an adult human intake of 6–12 g crude herb) was calculated from the human equivalent dose table [16，乘以萃取率。也提出了类似的理由和．我们的初步研究表明，最佳浓度和分别为0.5 mg/kg/d(组4)和2.5 mg/kg/d(组6)。每种抗吸收药物的低剂量(最佳浓度的1/10)，（低;组5）和R（低;组7），还测试了以建立每种药物的剂量依赖性效果。对于组8至11，联合治疗ELP的高或低剂量的或在为了研究每个选择的草药的药物对之间的相互作用建立。

２.４.骨密度测定

在实验期间的8周内，每隔两周使用外周定量计算机断层扫描(pQCT) (XCT2000, strategy Medizintechnik, GmbH)监测大鼠腰椎(L5)、胫骨近端和股骨远端骨密度(BMD)的变化。治疗开始当天为第0天。标准测量值的变异系数(CV%)小于3%。首先，用氯胺酮和噻嗪(分别为100 mg/kg体重和10 mg/kg体重)的混合物对大鼠进行肌肉麻醉。然后它被固定在一个定制的半透明塑料支架上。在pQCT内置研究模式下扫描腰椎(L5)、右侧胫骨近端、股骨远端。扫描速度为25 mm/秒，体素分辨率为0.2 mm。总骨密度(包括皮质区和小梁区)产生并呈现。

2.5。骨微架构分析

在大鼠安乐死后，使用microCT (Micro CT 40, Scanco Medical, Switzerland)分析左侧远端股骨的微结构。简单地说，将股骨垂直于扫描轴对齐。扫描在55 kVp和144 kVp下进行μA以16票的决议通过 μm每体素。在每个二维（2D）切片上，用半自动绘制的轮廓识别股骨远端的小梁骨。分割参数固定为：Sigma=0.5，Support=1.0，Threshold=245。在50个连续切片内确定感兴趣的体积（VOI）。利用micro CT工作站的图像分析程序，通过三维重建图像获得VOI的微结构参数。分析直接模型的参数（骨体积密度（BV/TV）、骨小梁数（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）和骨小梁板分离（Tb.Sp））。

2.6。生物力学测试

大鼠被牺牲后右股骨收获。它被包裹着的0.9％盐水浸泡的纱布并立即置于放在密封的塑料袋中。所有样品储存在-20℃。在试样的室温（24℃）过夜解冻生物力学试验之前被允许。使用的Hounsfield材料试验机（KM25，红山，UK）进行弯曲试验三点。A load cell with maximum 250 N was mounted. The span of the lower supports was 20 mm. The midshaft of the bone was loaded at a constant speed of 5 mm/min in medial-lateral approach until failure. Strengths at yield, maximum, and break were recorded for analysis.

2.7。血清、尿生化指标测定

血清骨钙素（OC）浓度使用来自生物医学科技公司（美国）大鼠OC ELISA试剂盒测定。的脱氧吡啶啉交联（DPD）尿水平通过ELISA试剂盒体（Quidel，USA）测定。从每个试剂盒产生标准曲线，并从标准曲线计算浓度。

2.8。统计分析

根据数据分布情况，采用单因素方差分析(ANOVA)或Kruskal-Wallis检验，然后分别采用Posthoc Dunnet或Dunn检验来检验处理组与对照组之间的差异。分别比较阿仑膦酸组和雷洛昔芬组。所有的协变量都进行了调整以进行统计分析。所有统计分析均使用Windows的社会科学统计软件包(SPSS) 15.0版本，并在5%显著性水平下进行．数据表示为平均值（SEM）的平均值±标准误差。

3.结果

3．1.ELP提取物的化学表征

在ELP水提取物的标记化合物通过LC-MS测定该组合物在图中示出1．红景天苷、淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素的保留时间分别为4.68、10.99、11.45和11.81 min(图)1（a）). 使用这种洗脱条件，补骨脂素和异补骨脂素的异构体得到了很好的分离。所有标记化合物的存在表明，经过一系列制备过程后，ELP提取物中存在淫羊藿、女贞子和补骨脂。在提取物样品中，红景天苷含量最高，其次是淫羊藿苷、异补骨脂素和补骨脂素（图1）1（b））.

３．２．模型建立与体重

在模型建立过程中，切除卵巢使腰椎、股骨和胫骨的总骨密度分别降低6.5±2.7%、9.65±3.0%和14.37±3.4%。在接下来的8周治疗中，我们发现ELP、A和R不同组合与未处理的OVX相比，没有引起大鼠体重的显著变化，如图所示2(一个)和2 (b)．

3.3。总BMD分析

在OVX组的腰椎，卵巢切除对降低总骨密度的效果显著。在8周的治疗期间，总骨密度从基线检查（第0天）持续下降至8.2%（图3（a））.然而，股骨远端和胫骨近端的总骨密度与基线没有变化(图)3（c）和3（e））.这可能提示去卵巢大鼠非承重骨(即腰椎)的骨密度减少期比承重骨(即股骨和胫骨)的骨密度减少期更长。对于假手术组，在第8周(数据未显示)，所有研究区域的总骨密度从基线到6.0%(腰椎)、11.07%(股骨远端)和14.16(胫骨近端)均有所增加。

从第6周开始，9个治疗组的腰椎骨密度均明显高于OVX组。ELP显著降低了5.3%的BMD损失(第6周;）和3.4％（在第8周;)，与相应OVX组比较(图3（a））.这一发现与我们之前的报告一致[10］.然而，在整个实验过程中，当ELP与OVX在股骨远端和胫骨近端进行比较时，没有观察到显著差异(图)3（c）和3（e））.这一观察结果表明，ELP在预防非负重骨骨丢失方面比在负重骨骨增重方面更有效。对于抗吸收药物，其剂量依赖效应和在所有腰椎、股骨远端和胫骨近端观察。这种效应在其他动物研究中也有报道[17-19］.这两个（数字3（a）那3（c）， 和3（e）),（数字3（b）那3（d）， 和3（f）)的最佳剂量与OVX相比，均能显著提高骨质减少大鼠3个区域的总骨密度。在最佳剂量下，A在所有研究区域的保护效果均高于R。

对于联合研究，我们的数据表明，ELP提取物可以与雷洛昔芬协同作用，增加骨质减少骨的BMD。当骨量减少大鼠接受0.25 雷洛昔芬mg/kg/天，(低)，观察到腰椎和股骨远端总骨密度损失显著减少，但从第4周开始，其最佳剂量的效果降低。然而,(Low)在减少胫骨近端总骨密度损失方面没有显著效果，与ELP组相似。ELP和ELP联合治疗骨质减少大鼠(低)，股骨总骨密度显著增加(图)3（d））和胫骨（图3（f）)，从第2周到第8周，而OVX。有趣的是，从第2周开始，ELP + R (Low)在最佳剂量下的骨保护作用优于R单独。在腰椎也发现了类似的观察，ELP + R (Low)完全消除了卵巢切除术导致的BMD下降(图)3（b））.ELP与R (Low)联合治疗，骨密度明显高于对照组在整个实验过程中的负重骨骼。此外，在腰椎和胫骨中观察到ELP + R和ELP + R（低）的剂量依赖性的效果。ELP合用和胫骨总骨密度增加5.26% (2.5 mg/kg/d)；)和5.94%(0.25毫克/公斤/天)；)，与各剂量组比较一个人。其中ELP + R治疗组疗效最佳或单独在脊柱和胫骨近端进行ELP提取。然而，ELP和阿仑膦酸钠联合治疗组均无这种协同作用。

3．4．骨微体系结构分析

虽然总骨密度一直被认为是骨强度的替代指标，但微结构特性提供了更全面的信息，以评估不同组合对股骨小梁骨质量的影响。与OVX相比，各治疗组骨小梁的骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)和骨小梁厚度(Tb.Th)均有提高，但骨小梁间距(Tb.Sp)降低。ELP治疗显示BV/TV、Tb轻度升高，但不显著。N,结核病。结核病发病率降低。Sp，与股区总骨密度增加不显著直接相关，如图所示3（c）．相反，a和R在骨质减少大鼠股骨远端骨体积增加中存在剂量依赖效应。A组大鼠BV/TV较高(；数字4（a）），tb.n（；数字图4（c））但是TB.SP（；数字4 (g)比OVX)。结核病。N和结核病。Sp，在r治疗组中未观察到显著差异(图4（d）和4 (h)）.

类似于总BMD分析，ELP提取物能协同增强疗效所有剂量的卵巢切除大鼠。然而，在与A联合治疗的所有组中，这种协同效应均不存在。当大鼠与ELP和R（低）共处理时，BV/TV有增加趋势（图1）4（b））和Tb.Th（数字4 (f)），但未实现统计显着性，可能由于变化的较小程度和进行了有限的重复试验。较高浓度同时，ELP + R处理后的微结构性能也得到了进一步改善一个人。BV/TV有显著性差异(；数字4（b））和Tb.Th（；数字4 (f))，与OVX组比较。

3．5．生物力学测试

我们的骨骼力学测试数据显示，所有以最佳剂量给予ELP、阿仑膦酸或雷洛昔芬的组均可增加骨质减少大鼠股骨中轴的生物力学特性(图)5.）.这两个ELP和与OVX相比，其破坏强度、极限强度和刚度均有显著提高增加失败和最终优势显著。两种抗骨质疏松药物对生物力学性能的影响均呈剂量依赖关系）.

在联合用药研究中，ELP提取物可提高中药的疗效在所有剂量水平。相反，只有在失效强度和极限强度的参数中呈现为单剂量的群体的这种改进。当大鼠用ELP和ELP酸化时(低)，破坏强度有增加的趋势(图5（b）)，极限强度(图5 (d)）和刚度（图5 (f)）.在那些与ELP联合治疗的组中也发现了类似的观察结果．这些发现进一步证实了ELP能增强脑功能呈剂量依赖性。然而，ELP与自的任何剂量的联合作用不被认为是协同的比单独ELP弱。这种相互作用被认为是一个简单的添加剂。

3.6。血清、尿生化指标测定

为了阐明ELP和ELP的协同作用对骨代谢的骨形成标记物骨钙素血清水平和骨降解标记尿DPD水平进行了分析。数字6(一)在治疗8周后显示出血清骨钙素水平的相应变化。在ELP治疗组中观察到骨钙素水平的显着增加，但不是两者都是组。与生物力学测试相似，ELP提取物似乎能增强在所有剂量水平，虽然没有达到显著水平。数字6 (b)治疗8周后尿DPD水平出现相应变化。脱氧吡啶啉交联(脱氧吡啶啉交联，DPD)是由破骨细胞吸收引起的骨结构降解的表征在0.25毫克/公斤/天和2.5 毫克/千克/天．ELP治疗组DPD水平有下降趋势。有趣的是，ELP与在两个剂量显著（R（低）可协同降低DPD水平，；那)，与之相比单独地总的来说，这些发现证明了ELP主要通过抑制骨吸收和部分通过促进骨形成来增强R的作用。

4.讨论

采用液相色谱-质谱联用技术测定了ELP水提物中标记物的组成。结果表明，红景天苷含量最高，淫羊藿苷、异补骨脂素和补骨脂素次之。这可能是由于红景天苷水溶性高，而淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素在性质上不溶于水。

对比我们在实验中使用了两种抗骨吸收药物，我们发现，阿仑膦酸钠是降低整体总BMD损失比雷洛昔芬更有效。如在总BMD分析所示，阿仑膦酸开始产生从OVX组从第2周的显著差异，而从雷洛昔芬4周开始这些发现符合那些以前报道，阿仑膦酸盐在减少对风险较高的疗效比雷洛昔芬骨质疏松性骨折[20.］.该发现还回应了骨微架构分析的结果，这表明Alendronate增加骨骨骨形成的骨形成的疗效优于Raloxifene的功效。它还可以支持目前的临床审查，报告的临床审查报告，通过反季酸盐减少12个月，但通过雷洛昔芬减少36个月[21]. 霍普金斯等人也报道了阿仑膦酸钠（而非雷洛昔芬）显著降低髋部骨折率[22］.然而，对于组合的研究，我们发现，ELP提取物能协同雷洛昔芬在增加骨量的BMD工作。这些发现由骨微结构分析进一步证实并透露ELP曾与雷洛昔芬有协同作用，但不是阿仑膦酸钠，骨小梁表面上增加了新的骨沉积。这个观察将组织学分析进一步证实。

有趣的是，尽管ELP提取物本身对股骨的材料（BMD）和建筑（微体系结构）性能没有引起显着的骨质保护作用，但它可以显着提高股骨皮质骨强度，如生物力学测试所示。这种无与伦比的观察可能是由于骨骼的生物力学性质不仅取决于材料和建筑因素，而且还取决于长骨中轴皮质骨的几何参数[23］.骨折载荷与骨骼的BSI（CSA）（包括皮质BMD和横截面积）的BSI（CSA）（包括皮质BMD和横截面积）优于皮质BMD或全部BMD在中轴股骨和山羊肱骨中的总BMD。ELP可能会影响长骨皮质的几何形状。没有测量几何参数是本研究的限制。

此前，它已经被证明，ELP提取物的老龄去卵巢大鼠促进骨骼健康[占有有利影响10，尾悬鼠[9.]，绝经后骨质减少妇女也有[11］.为了健康补充剂和/或药品开发的目的，ELP和标准抗骨吸收药物之间草药-药物相互作用的信息是必要的，因为一些骨质减少的人可能同时服用它们。在本研究中，我们已经证明ELP提取物本身能够显著减少腰椎的总骨密度损失，增加骨的生物力学强度和血清骨钙素水平。鉴于ELP和抗骨吸收药物作用于骨代谢的不同分子靶点，我们推测，当个体同时服用ELP和抗骨吸收药物时，可以产生协同效应，从而减少这些抗骨吸收药物的用量。在本研究中，我们发现ELP可以选择性地增强雷洛昔芬的治疗效果，而阿仑膦酸则不能。此外，ELP即使在最佳剂量的1/10时也能增强雷洛昔芬的作用。

为了阐明ELP作用的选择性，我们需要研究动物模型的特点以及阿仑膦酸和雷洛昔芬的基本工作机制。卵巢切除术引起的雌激素缺乏导致(i)抑制成熟成骨细胞并促进更快的成骨细胞凋亡;(ii)刺激破骨细胞形成和骨吸收;最终导致骨质减少的净效应[24那25］.阿仑膦酸与雷洛昔芬的抗吸收机制不同。阿伦膦酸盐是一种无机焦磷酸盐，优先抑制破骨细胞介导的骨吸收而不影响骨形成[26]. 雷洛昔芬是一种口服选择性雌激素受体调节剂（SERM），对骨骼有雌激素作用，对子宫和乳房有抗雌激素作用。它在骨组织中起着类似于雌激素的作用，其成骨作用最近已被证明[27］.据报道雷洛昔芬需要成骨细胞来实现其抗破骨作用[28］.之前，我们发现ELP不仅能抑制破骨细胞的形成，还能通过增加间充质干细胞的成骨而促进骨形成[9.以及成骨细胞的增殖(未发表数据)。ELP的额外成骨作用可能有利于雷洛昔芬抑制骨吸收的抗破骨活性，这与DPD水平的降低有关(图)6 (b)). 在所有研究参数中，ELP的存在总是协同增强雷洛昔芬对雌激素缺乏性骨丢失的骨保护作用，这可能提供了一个可能的解释。这一建议将通过使用不同的其他已知合成代谢剂（如雷奈酸锶或甲状旁腺激素）与雷洛昔芬联合应用于卵巢切除大鼠进行验证。还需要进一步的实验来了解ELP对雷洛昔芬协同作用的基本机制，即使用单核细胞/巨噬细胞和成骨细胞共培养系统[28］.

5.结论

这项工作的主要目的是检查从骨破骨保护草药，ELP产生的药物相互作用潜力。我们发现ELP提取物可以（i）协同增强Raloxifenes的骨保护作用;（ii）减少雷洛昔芬的剂量以实现其生物学效应。ELP的共同分析还可以最大限度地减少雷洛昔芬的不良反应。ELP的作用特定于雷洛昔芬，但不是反常膦酸盐。ELP可以作为一种新的互补药，用于接受罗昔离治疗的那些骨型骨折。据我们所知，这是骨质疏松症管理中的草药互动第一综合研究。这些发现证明了使用ELP和标准的反射剂在一起的临床研究，以抵消骨质疏松症。

缩写

Anova：	单因素方差分析
接待员:	雷洛昔芬
A：	Alendronate
pQCT:	外围定量计算断层扫描
μCT:	微型计算机断层扫描
LC / MS:	液相色谱 - 质谱
弹道导弹防御:	骨密度
BV /电视:	骨体积与组织体积之比
公司:	Deoxypyridinoline。

作者的贡献

C.-h.ko和w.-s.SiU在这项工作中同样贡献。

利益冲突

作者声明他们在这项研究中没有利益冲突。

承认

这项研究是由财政食物及卫生局，香港特别行政区，卫生及医护服务研究基金（编号08090301）的支持。

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