伴随的α-和一个土耳其男孩Gamma-Sarcoglycan缺陷小说在Alpha-Sarcoglycan基因删除

文摘

肢带肌萎缩症2型d (LGMD-2D)是由常染色体隐性缺陷alpha-sarcoglycan基因位于染色体17温度系数。在这项研究中,我们提出一个孩子alpha-sarcoglycanopathy和描述小说alpha-sarcoglycan基因的删除。一个5岁的男孩有一个非常高的血清肌酐磷酸激酶水平,顺便说一下,确定和消极分子测试抗肌萎缩蛋白基因。肌肉活检显示营养不良的特性。免疫组织化学显示,表达α-和gamma-sarcoglycans减弱。DNA分析揭示出小说7 bp纯合子缺失alpha-sarcoglycan基因的外显子3。他的父母血缘的杂合的运营商相同的删除。我们相信这是第一次确诊病例的主要alpha-sarcoglycanopathy小说删除在土耳其。此外,这项研究表明,肌活检和DNA分析保持肌肉营养不良的鉴别诊断的重要方法,因为dystrophinopathies sarcoglycanopathies是如此相似。

1。介绍

肢带肌萎缩症2型d (LGMD-2D)是一种常染色体隐性遗传缺陷引起的肌肉疾病sarcolemmalαsarcoglycan (α国网公司)糖蛋白。Alpha-SGC或adhalin四sarcoglycans(国网公司),对肌肉收缩过程中膜的完整性至关重要和提供了一个重要的信号分子的脚手架1- - - - - -3]。Alpha-SGC sarcoglycanα基因编码的17号染色体(SGCA)位于温度系数(1,4]。LGMD-2D主要影响在肩胛的近端肌肉和骨盆带。LGMD-2D非常异构表型。发病的年龄、进展率和疾病的严重程度也不同,在受影响的家庭。临床上最严重的课程通常是sarcolemmal时观察到的α国网公司完全缺席而温和的表型观察到当存在残余蛋白(1- - - - - -4]。有趣的是,任何国网公司基因的突变会导致减少或没有其他国网公司(4- - - - - -7]。之前报道,SGCA基因必须首先评估如果有相伴的缺失α国网公司和γ- (γ-)国网公司(4]。

LGMD-2D的鉴别诊断包括杜乡和贝克肌营养不良(DMD / BMD)和不可能得出诊断临床理由。因此,免疫组织化学染色的肌肉活检的正确诊断和分子遗传分析是强制性的(3,5,8,9]。在这份报告中,患者的基因型是一个未知的7 bp外显子3中删除。这一发现增加了日益增长的频谱alpha-sarcoglycan基因的突变。最后,我们还讨论重要考虑的鉴别诊断肌肉营养不良。

2。病例报告

一个5岁的男孩有二级血缘的父母从土耳其没有祖先的神经肌肉疾病的历史。没有孕期并发症,产前的迹象,如羊水过多和减少肌肉疾患胎儿运动并没有指出。认知和运动发育是正常的。在演讲时,他先前未被发现的轻微的主要近端肌肉无力。深部腱反射存在,且他没有挛缩。他通常走路但他爬楼梯和运行时轻微的困难。肺功能测试正常。他的肌酐磷酸激酶(CPK)水平在9000年和15000年之间单位每升(正常< 250 U / L),有痛肌电图变化。由于肌酸磷酸激酶水平非常高,肌肉萎缩症被怀疑,知情同意后,样本获得的组织病理学、免疫组织化学和分子遗传学检测。

肌肉活检标本从左边腓肠肌肌肉的病人被冻结在异戊烷预冷在液氮−160°C。Cryosections应用的抗肌萎缩蛋白使用多克隆抗体(Neomarkers),与单克隆抗体血影蛋白(Novocastra)作为控制。新生儿肌凝蛋白重链(新生儿肌凝蛋白Novocastra)抗体被用于病理未成熟肌纤维识别。国网公司和反检测α-,-β-,-δ-,-γ国网公司的抗体(Novocastra)。

从渊源者外周血标本收集和父母。基因组DNA是使用一个商业从全血中提取DNA提取工具包(美国试剂盒)标准的制造商的协议。样品DNA的浓度是由NanoDrop分光光度计(NanoDrop技术,威明顿、德)。外显子区域和侧翼短intronic SGCA基因序列被放大使用聚合酶链反应(PCR),其次是PCR直接测序产品(ABI、美国)(NCBI的参考序列:NG_008889.1)。迄今为止报道LGMD-2D列在表中基因异常1。

3所示。结果

肌肉活检显示营养不良的变化收缩,再生(图1)、变性、坏死,核内化和纤维化。此外,许多病理未成熟肌纤维都使用新生儿肌凝蛋白染色(图可视化2)。基于免疫染色,抗肌萎缩蛋白和血影蛋白表达是正常的。除了孤立的纤维不足,β(β)sarcoglycan和δ(δ)sarcoglycan出席正常水平,而α国网公司和γ国网公司广泛地缺席(图3)。

基于渊源者的分析,我们已经确认了先前待定纯合子bp删除第3外显子(图74)。类似的杂合的删除在父母(数据被发现5和6)。这个删除是还表示在表的位置1。此外,没有异常的肌营养不良蛋白基因和其他sarcoglycan基因(SGCB, SGCD, SGCG)病人和他的父母。

4所示。讨论

人类SGCA cDNA从人类骨骼肌图书馆在1993年被孤立和测序。该基因由10个外显子。SGCA基因的蛋白质产物与细胞外的n端由387个氨基酸组成,一个跨膜域和胞内糖基。北部污点分析表明,人类adhalin mRNA表达了在骨骼肌的最高水平。也表达了在心肌和肺,但以低得多的水平。相反,adhalin mRNA大脑中没有检测到。也报道,adhalin信使rna从心肌短相对于骨骼肌,碱基序列编码跨膜域是缺席。众所周知,LGMD-2D主要影响骨骼肌在脑和外周神经功能在很大程度上保留了下来。短暂,严重的心脏功能障碍和缺乏精神发育迟滞患者LGMD-2D可能解释为低表达α国网公司在心脏肌肉和大脑中缺乏adhalin表达式(1,3,10]。在这个报告中描述的病人中,我们没有发现心脏介入的临床证据,智力下降,或者去神经(证明了肌电图)。疾病的课程在这种情况下,这部小说表明,删除可能会导致一个更温和的表型的LGMD-2D尽管没有扩散α国网公司和γ国网公司。

免疫组织化学分析sarcolemmal蛋白质在肌营养不良蛋白等肌肉活检,国网公司,merosin, dysferlin诊断评估的一个重要组成部分肌肉萎缩症患者。减少或缺失sarcolemmal表达的一个4国网公司可以在任何类型的患者找到LGMDs dystrophinopathies患者。它曾被建议不同模式的国网公司表达式可以预测的主要遗传缺陷和遗传分析可以由这些模式(5- - - - - -8]。然而,Klinge et al。9)报道,剩余国网公司表达可能是高度可变的和准确的预测基因型可能无法实现。Babameto-Laku et al。4还决定,随之而来的缺乏α国网公司和γ国网公司SGCA表达式是由缺陷的基因。因此,他们建议使用抗体所有四个国网公司联用骨骼肌的部分。同样,相应的肌营养不良蛋白和国网公司的任何可能说明的重要性考虑共存dystrophinopathies患者sarcoglycan-deficient LGMD [9- - - - - -13]。由于这个原因,它是不容易决定是否有缺陷的表达式的病是一种dystrophinopathy国网公司或LGMD有缺陷的肌营养不良蛋白的表达。然而,在这个报告中描述的病人,,如DMD和BMD,被排除在外的表达是因为sarcolemmal肌营养不良蛋白是广泛存在和分子检测抗肌萎缩蛋白基因是正常的。

目前,已经有超过70个突变SGCA基因的报道,引起的变化α国网公司糖蛋白。大约三分之二的突变是错义突变,产生一个完整的蛋白质与单个残渣替换,而其他突变如核苷酸替换,重复,删除或插入产生截断,不完整,或异常蛋白质。几乎所有的错义突变映射到细胞外的领域是一个关键地区的组织与dystroglycan国网公司和他们的联系。只有一个错义突变映射到胞内域和导致LGMD-2D纯合子的情况下。类似地,两个突变造成的缺失产生的正常细胞外部分α国网公司和截断细胞内的尾巴。目前,没有数据的胞内的尾巴α国网公司蛋白质及其功能(1,10- - - - - -14]。在这个报告中描述的家庭中,我们发现了一个小说在TACACCC网站删除会导致一个框移突变的外显子3。过去的文献强调了预测与SGCA基因的不同变异相关的病理后果是非常复杂的。目前还不清楚这部小说删除生成一个严重的疾病表型是否还有额外的、不确定的后果。

患者的任何LGMDs可能临床区别那些主dystrophinopathies。LGMD的流行很可能被低估了,很多的男性患者错误地诊断为DMD或弹道导弹防御13]。确诊有赖于执行适当的免疫组织化学检查以及做分子分析。一个正常的肌营养不良蛋白染色模式应被视为一个常染色体隐性方式遗传。相比之下,患者可能显示变量发现一项正常的区域没有马赛克的模式或sarcolemmal染色与anti-SGCs抗体对应异常组织cell-membrane-associated肌营养不良蛋白糖蛋白复杂。因此,有必要进行仔细检查,免疫组织化学染色以及基因研究,以作出正确的诊断。

总之,这份报告描述了一个新颖的删除,增加了越来越多的缺陷与LGMD-2D,进一步强调所有相关基因的系统分析的重要性,而不是限制假设的分析国网公司的基因异常的原因。在这项研究中,我们也强调染色模式的复杂性与sarcolemmal蛋白质和仔细分析这个染色模式的重要性,为了缩小鉴别诊断肌肉营养不良。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

引用

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