文摘
目标。确定Gd-EOB-DTPA可以识别的药代动力学参数的差异肝功能在鼠肝切除术模型。方法。共有56个八周大的男性Sprague-Dawley老鼠被分成以下组:对照组没有肝切除术( ),70%肝切除术组( ),90%肝切除术组( )。术后第二天,Gd-EOB-DTPA(0.1更易/公斤)静脉注射和系列血样。使用noncompartmental药代动力学分析方法。执行统计分析使用单向方差分析和事后两两组比较。结果。扣除6老鼠意外身亡后,血液样本从16日14日和20个老鼠在对照组,70%肝切除术组和90%肝切除术组。有显著增加,曲线下的面积从零到时间上可测量的浓度之间的70%和90%肝切除术组( )。在稳定状态下的体积分布显著下降之间的控制和70%肝切除术组( )。所有成对的间隙明显不同组的比较( )。结论。Gd-EOB-DTPA可以识别不同的血管间隙肝功能在鼠肝切除术模型。
1。介绍
评估肝功能很重要决定慢性肝病患者的预后,建立最优时机移植或transjugular肝内门体静脉的并联插入,并最小化的风险主要肝切除后肝衰竭(1,2]。在日常临床实践中,血清胆红素水平,血清白蛋白水平,凝血酶原时间是简单和常用的方法来评估肝脏功能。然而,这些定性肝功能测试不能完全反映肝功能,因为一个活动或一种物质的浓度测量血液中不提供数据的分布、数量的生产,或数量的消除2]。因此,当更精确的评估肝功能是必需的,例如,在主要的肝切除术,定量肝功能测试,如吲哚菁绿(ICG)支持(2]。
肝摄取和胆汁排泄的协调小组涉及有机阴离子转运蛋白(OAT)系统也越来越被视为一个主要运输路线的阴离子外源性物质和内源性物质进入胆汁(3]。燕麦在肝脏的表达变化在急性和慢性肝脏疾病,因此它被认为是肝功能的一个重要指标4,5]。Gd-EOB-DTPA,有趣的是,这是一个广泛使用的造影剂对肝脏成像,使用相同的燕麦作为协调小组(6- - - - - -8]。最近的研究使用Gd-EOB-DTPA-enhanced肝脏成像评价肝脏功能[先生9- - - - - -17]。这些研究主要集中在增强肝实质的Gd-EOB-DTPA-enhanced肝脏成像先生。然而,肝实质增强Gd-EOB-DTPA-enhanced肝脏先生与降低血清浓度的对比剂。因此,测量血清Gd-EOB-DTPA浓度可以代表一个更直接的方法来评估肝脏功能比评估肝实质增强肝脏成像先生。
肝脏的多个和各种功能排除一个简单的单参考标准评估肝功能(18]。在鼠肝切除术模型中,定义的组合肝脏叶被删除,这是基于近似分类相对切除肝脏质量为30%,50%,70%,和90%肝切除术(19,20.]。肝功能的参考标准基于鼠肝切除术模型可能代表整体肝脏功能和肝切除术与增加叶切除术是一种方便的模型来评估肝脏功能。本研究的目的是确定是否Gd-EOB-DTPA的药代动力学参数可以确定肝功能在鼠肝切除术模型的差异。
2。材料和方法
本研究回顾和批准的机构动物保健和使用委员会(IACUC)生命科学研究所医疗中心。委员会遵守研究所实验动物资源(ILAR)指南。
2.1。动物
共有56个八周大的男性Sprague-Dawley (SD)大鼠(Orientbio Inc .、韩国)。几个主要的外科组织建立了指导方针,建议至少20%的正常肝与完整的血管和胆管树应该保持手术切除的肝脏肿瘤(21]。因此,我们将老鼠分成以下组:对照组没有肝切除术( ),70%肝切除术组( ),90%肝切除术组( )。70%肝切除术组设计代表肝切除术与生存但足够的肝功能异常。90%肝切除术组设计代表肝切除术与边际肝功能为生存。
2.2。鼠肝切除术
每个老鼠重手术前。麻醉和鼠肝切除术是由一位有经验的兽医(S.H.H.有8年的经验在动物手术)。异氟烷麻醉的蒸发器(美国Vetequip RC2)异氟烷浓度的-4%和1%的氧气流量使用0.5升/分钟。原油结扎切除的宽叶中值和右优越叶可能会引起收缩的腔静脉和随后的残余肝脏的功能障碍(19]。因此,我们使用提出的夹紧和穿孔缝合技术Madrahimov et al。19]。之后,他们将一个蚊子夹在每个叶的基础,肝组织切割略高于夹。穿孔缝合,渗透到整个实质是放置下夹。立即手术后,动物收到1.5毫升10%葡萄糖和1.5毫升生理盐水皮下注射,以及肌内0.2毫升庆大霉素(Choongwae、韩国)和0.2毫升双氯芬酸钠(Samjin、韩国)。动物们自由获取水和饲料。
2.3。血液采样
取血样进行术后2天(POD)。每个老鼠血液采样前称重。股动脉管子进行血液取样。Gd-EOB-DTPA (Primovist;拜耳医疗保健,柏林,德国)(0.1更易与钆每公斤体重,0.4毫升/公斤)用于药代动力学分析。Gd-EOB-DTPA使用生理盐水稀释15倍,注入到尾静脉。120年血液样本μL获得1、3、5、10、20、30、60、90分钟后注入Gd-EOB-DTPA。每120μL的血液,50μL是用于测量钆和70年μL是保留的。
2.4。肝脏重量测量
所有的动物都使用一个牺牲室完成后血液采样。在每一组中,湿式肝脏移植后体重测量。总湿肝脏重量测量后删除下腔静脉和门静脉。确定每个肝脏叶的绝对重量,每个的重量肝脏叶解剖后还测量了每个叶对大鼠肝切除术相同的技术。每个叶的相对权重计算使用以下公式:叶的相对重量(%)=重量的叶(g) /总肝重量(g)。
2.5。钆测量和药代动力学分析
血液样本化验钆使用电感耦合等离子体质谱法(icp)。血样离心收集所有材料底部的帽子。我们增加了50μL内部标准(100 nM Terbium-nitrate)。混合干在90°C。然后,20μl 30%过氧化氢和50μL添加了浓硝酸和混合物加热到120°C约30分钟增加压力。冷却后,成交量由1毫升水。解决方案是进一步稀释取决于预期的钆浓度样本。最后稀释注射到icp获得浓度测量。icp(安捷伦7900)校准使用稀释的商业,认证标准(默克公司)为0,1,10,100 nmol Gd / L和10 nM结核病。所有样品在校准范围内进行了测量。空白消解时(空帽)也包括在程序和导致Gd浓度远低于量化的极限。使用我们的新icp,量化的极限是0.1 nmol Gd / L。线性测量范围的上限是20μ摩尔Gd / L。串行钆的血清浓度时间配置文件为每个老鼠进行了分析使用noncompartmental方法WinNonlin 6.3 (Pharsight公司,山景、钙、美国)。所有分析都是基于实际采样的时期。使用noncompartmental药代动力学分析方法(22,23]。个体浓度曲线下面积(AUC)从0到时间的可测量的浓度是表示和与时间曲线从零到时间的可测量的浓度是表示 。这些 , 和时间的产品估计线性提升时期梯形求和和日志/线性梯形求和下行时期。的AUC时间零外推到无限的时间和AUMC时间零外推到无限的时间计算的总和吗和 的总和和 ,分别为,对应于最后预测浓度。和终端阶段的速率常数计算的线性回归的终端部分的斜率对数转换血清浓度与时间曲线和血清吗分别与时间曲线。间隙(CL)的计算 。在终端的体积分布阶段(CL / ,终端阶段指的是邮政分销或消除阶段),和在稳定状态下的体积分布 阶段,稳态是指分布在等离子体自由浓度等于自由组织中的浓度)。平均停留时间(捷运)AUMC / AUC计算。终端消除半衰期计算每个主题吗 ,有效半衰期被计算为 。
2.6。统计分析
数据表示为±标准差。比较三组的,连续变量使用单向方差分析比较。一个值小于0.050被认为是表明一个显著差异。当数据显示三组之间存在显著差异,事后成对使用学生的组进行了比较测试Bonferroni调整。斯皮尔曼相关测试执行和散点图是用来显示CL之间的相关性和三组。所有使用SPSS分析21(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。
3所示。结果
3.1。主题
对照组由16 SD雄性大鼠和16个动物的血液抽样是可行的。70%肝切除术组由14 SD雄性大鼠和所有14动物的血液抽样是可行的。90%肝切除术组由26 SD雄性大鼠和20个动物的血液抽样是可行的。两只老鼠死于肝切除术由于出血和四大鼠术后期间去世。最后,整体50老鼠药代动力学分析中。
3.2。肝脏重量
前和术后的身体重量和移植的肝脏重量每组表进行了总结1。在对照组( ),总肝脏的重量 g,左外侧叶 g,平均叶 g,右叶 g,尾状叶 g, paracaval部分 g。相对权重如下:左外侧叶,30.9%;叶,中值33.1%;右叶,17.4%;尾状,6.4%;和paracaval部分,11.0%。相对权重之和的左侧面和叶中值为64.1%。相对权重之和的左侧面,中位数,和右叶是81.4%。在70%肝切除术组( ),剩余肝脏的重量在2仓 g。在90%肝切除术组( ),剩余肝脏的重量在2仓 g。
3.3。药物动力学的Gd-EOB-DTPA
总结Gd-EOB-DTPA血清浓度时间剖面的三组如图1。从这些数据中获得药代动力学参数总结在表2。总体和两两组结果比较三组的总结表3。血清Gd-EOB-DTPA浓度迅速下降,在前10分钟,然后慢慢下降,直到90分钟后注入在对照组(图1),表示非线性药物动力学。这个初始快速降低血清Gd-EOB-DTPA浓度在70%和90%肝切除术组相似。两两组比较,所有药物动力学参数显示显著差异在70%和90%之间肝切除术组和控制到90%肝切除术组。只有CL, ,和显示控制和70%肝切除术组之间的显著下降。CL, ,和在所有两两组比较明显不同。散点图显示相关的CL三组有显著的负相关 )(图2)。
4所示。讨论
我们目前的研究表明,测量血清Gd-EOB-DTPA浓度可以识别肝功能在鼠肝切除术模型的差异。在药代动力学参数,AUC参数有显著增加70%至90%肝切除术组。显著下降之间的控制和70%肝切除术组。所有成对的CL显著不同组比较。
的体积分布参数(和)显示控制和之间的显著下降70%肝切除术组,他们略微表现出显著差异在70%和90%之间肝切除术组。和代表表观分布容积Gd-EOB-DTPA在稳定状态和终端阶段。肝脏体积更大的差异之间的控制和70%肝切除术组比之间的70%和90%肝切除术组,这或许可以解释的差异和在三组。有趣的是,移植肝脏重量的差异之间的控制和70%肝切除术组与肝切除术组之间的70%和90%。移植的肝脏重量的70%或90%肝切除术组不是正常肝重量而是再生肝脏重量。在我们的研究中,再生率70%和90%肝切除术组约65%和37%,豆荚2,类似于70%和90%肝切除术组(70%和40%)在前面的文献[24,25]。在日常临床实践中,计算再生肝脏体积后门静脉栓塞并不总是与肝功能(18]。因此,不同的和三组之间可能代表肝脏体积的差异引起的大鼠肝切除术而不是再生肝的绝对重量2仓。
另一方面,AUC及其相关参数之间的显著增加70%和90%肝切除术组而不是控制到70%肝切除术组。的和noncompartmental是重要的药代动力学参数分析,因为他们经常用来确定其他药代动力学参数。这些结果表明,药物动力学的一个临界点Gd-EOB-DTPA之间可能存在70%和90%肝切除术。,肝脏30%残余体积可能是足够的为生存而肝脏10%残余体积可能生存的边缘。我们的鼠肝切除术模型来验证这些发现是非常有用的。
CL可以被定义为一个测量等离子体的体积,单位时间(从物质完全清除26]。CL是主之一,独立的药代动力学参数。的全身CL Gd-EOB-DTPA等于肝CL +肾CL,全身CL的显著差异可能源于不同肝功能在鼠肝切除术模型。
我们目前的研究表明,直接测量血清Gd-EOB-DTPA浓度可能代表小说定量肝功能试验。在各种药代动力学变量,CL显示在所有两两组比较显著的差异。然而,与大型患者临床研究队列需要确定CL Gd-EOB-DTPA可能代表一个新的定量肝功能测试。如果血液样本可以在执行Gd-EOB-DTPA-enhanced肝脏成像先生,前提数据肝脏手术之前,如肝功能,体积,和解剖,同时可以获得。
我们目前有几个局限性的研究。首先,我们没有评估Gd-EOB-DTPA的尿排泄。在雄性SD大鼠膀胱导管是不可能,因为尿道的漫长而曲折的过程。第二,Gd-EOB-DPTA用于我们的研究的剂量(0.1更易/公斤)4倍大于人类使用的剂量(0.025更易/公斤)。我们使用高剂量的Gd-EOB-DTPA补偿比人类更快的SD大鼠的代谢率(27]。一项研究还显示,血清浓度时间剖面的剂量0.05更易/公斤是0.5更易/公斤的类似实验,使用大鼠(28]。第三,每组SD大鼠的数量是不同的。最初,SD大鼠没有不必要的事件的预期数量在每组12。然而,排除SD大鼠的意外事件,如出血、炎症、或各种除了尾静脉注射部位,可能会导致选择性偏差。所以,我们决心要包括所有的SD大鼠血液采样实现成功防止偏见提出的任意选择的病例。
总之,测量血清Gd-EOB-DTPA浓度可以识别显著差异在鼠肝切除术模型的肝脏功能。各种药代动力学参数,CL Gd-EOB-DTPA将最合适的参数来识别不同肝功能和公用事业可能作为小说定量肝功能试验。
缩写
| SD: | Sprague-Dawley |
| AUC: | 曲线下的面积 |
| : | 测量血浆浓度峰值 |
| 肤色线: | 间隙 |
| : | 稳态的体积分布 |
| : | 终端的体积分布 |
| : | 终端半衰期 |
| : | 有效半衰期 |
| 圆荚体: | 术后一天。 |
附加分
要点。药代动力学分析Gd-EOB-DTPA血清浓度可能效用作为肝功能试验。的Gd-EOB-DTPA显示肝切除术组显著增加70%至90%。显示控制和70%肝切除术组之间的显著下降。间隙显示负相关程度的增加鼠肝切除术。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
确认
本研究支持由拜耳韩国有限公司钆浓度分析支持MR和CT造影剂在拜耳医药保健有限公司的研究团队(SOP ID;bsp - sop - 040)。作者感谢Seung-Ho Heo,峨山研究所生命科学、韩国蔚山大学医学院,首尔,韩国,在鼠肝切除术技术支持。