表观遗传调制由Apabetalone计数器Cytokine-Driven急性期反应在体外在老鼠和心血管疾病患者

文摘

慢性全身性炎症导致心血管疾病(CVD)和与丰富的急性期反应(APR)在肝脏和血浆蛋白质。Bromodomain和extraterminal读者(打赌)蛋白质表观遗传调节炎性基因转录。我们表明,选择由小分子抑制apabetalone减少4月在人类肝细胞基因和蛋白质表达,小鼠模型和等离子体CVD患者。稳态的血清淀粉样蛋白P的表达,血浆铜蓝蛋白、纤溶酶原激活物抑制剂1日4月蛋白质与心血管疾病风险,减少apabetalone培养肝细胞和人性化的小鼠肝脏。apabetalone cytokine-stimulated肝细胞,降低c反应蛋白(CRP)的表达,alpha-2-macroglobulin,血清淀粉样蛋白p .后两个也减少了apabetalone endotoxemic小鼠的肝脏。打赌击倒在体外计数器cytokine-mediated感应的c反应蛋白基因。从力学上看,apabetalone减少cytokine-driven增加BRD4打赌的入住率c反应蛋白转录的启动子,确认c反应蛋白BET-dependent。稳定的冠状动脉疾病,患者血浆APR蛋白CRP, il - 1受体拮抗剂和纤维蛋白原γ减少apabetalone治疗与安慰剂后,4月的差别导致预测对这些通路和细胞因子的目标。我们认为CRP和组件的APR通路是由打赌蛋白质,apabetalone计数器慢性患者细胞因子信号。

1。介绍

Liver-derived (APR)急性期反应蛋白的核心组件是由病原体引起的炎症反应,创伤,环境压力,或无菌组织损伤(1]。促炎细胞因子,肝细胞表达下调几个稳态蛋白质的合成(称为“负面”4月蛋白质)和移植“积极的”4月的分泌蛋白(2]。il - 6和il - 1β信号通过肝细胞跨膜受体膜4月基因转录激活核转录因子控制,包括信号传感器和3 (STAT3)和转录激活的核因子κB (NF -κB) (2]。聚集有关il - 6和il - 1β导致NF -协调加载κB和STAT3基因增强子上,增加组蛋白的乙酰化3赖氨酸27残留物(H3K27ac),导致协同诱导基因表达(3]。组蛋白乙酰化作用是由bromodomain成员发现,extraterminal(打赌)蛋白家族,呈现的可能性押注也扮演了一定的角色在4月基因转录4]。打赌蛋白质乙酰化赖氨酸结合通过两个短肽主题叫做bromodomains (BD) 1和24]。打赌蛋白BRD4还包含一个独特的c端域,结合积极转录延长因子P- - - - - -TEFb,直接刺激RNA聚合酶II-dependent转录(5,6]。值得注意的是,BRD4-dependent转录与转录程序驱动感应的致病条件包括慢性炎症(7,8]。是否BRD4起着直接作用在调节4月在急性和慢性炎症基因转录目前未知。

Apabetalone (rvx - 208)是打赌蛋白质的小分子抑制剂(BETi)选择性目标第二BD (BD2)打赌蛋白质,减少他们的转录活动(9,10]。临床前和临床研究表明,apabetalone调节促炎和proatherosclerotic基因的表达在动脉粥样硬化模型和冠状动脉或慢性肾脏疾病患者(11- - - - - -17]。Apabetalone也影响4月的转录基因在人类肝细胞(收购PHH),主要包括c反应蛋白(CRP) (12,13,16]。考虑到c反应蛋白是一个关键的生物标志物的心血管疾病(CVD)风险评估和治疗18),重要的是要了解其肝脏转录调控在急性和慢性炎症。在这项研究中,我们使用apabetalone在体外和在活的有机体内进一步描绘打赌蛋白质的作用在4月的转录调控途径,尤其关注CRP。第一次,我们表明,cytokine-mediated感应的c反应蛋白基因表达是BET-dependent。此外,我们表明,BRD4入住率c反应蛋白启动子增加细胞因子刺激后,这个协会是由BETi抑制。最后,我们提供证据表明apabetalone治疗患者的心血管疾病(CVD)减少了大量的蛋白质在细胞因子和4月途径,可能减少炎症与心血管疾病相关的风险。

2。方法

2.1。化学合成

Apabetalone和JQ1被NAEJA合成制药(埃德蒙顿,加拿大)或IRIX制药(佛罗伦萨,SC) [12]。

2.2。组织培养

基因表达和蛋白质分泌研究低温贮藏的主要人类肝细胞从成人捐助者被镀推荐(CellzDirect,生活技术)。细胞治疗化合物溶解在DMSO溶液(0.05 -0.1%)±细胞因子(10 ng / mL)在媒体有10%胎牛血清(的边后卫)( )但是没有地塞米松(CellzDirect,生活技术)72 h。蛋白质分泌研究、文化媒体收集的最后24小时的实验。镀HepaRG™细胞被推荐(ThermoFisher科学)。6天postplating,细胞和细胞因子治疗±化合物2 - 24 h。短期治疗,细胞preincubated打赌抑制剂1 h之前添加细胞因子;治疗时间超过6小时同时收到两个代理。

2.3。量化的RNA表达

主要的肝细胞和基因表达研究HepaRG™细胞收获使用信使rna捕手+工具包(ThermoFisher科学)。基因表达是由RNA量化UltraSense™一步中存在系统(ThermoFisher科学)。水平的信使核糖核酸(mRNA)的利益衡量人类TaqMan™基因表达分析(ThermoFisher科学)相对于内生控制还有一分之一双反应。数据获得使用ViiA-7 rtPCR系统(ThermoFisher科学)。

2.4。ELISA

评估4月蛋白质分泌,文化媒体主要人类肝细胞收集文化在治疗的最后24小时,在液态氮被迅速冻结,并存储在分析前-80°C。分泌蛋白被发现与AssayMax™ELISA试剂盒(AssayPro)。

2.5。西方的屁股

针对嵌合体蛋白水解作用(PROTAC) MZ-1 (Tocris)增加了0.1 - -0.8μ细胞因子治疗前M 24 h。HepaRG™细胞溶解产物是准备在PBS + 2% SDS和用 年代,布兰森SLPt超声发生器(布兰森超声学)。不溶性材料被离心分离和蛋白质含量是评估DC™蛋白质化验(Bio-Rad)。蛋白质被解决通过sds - page,转移到硝基,探测和抗体BRD2、BRD3,或BRD4 (Bethyl),其次是合- - - - - -耦合的二次抗体(Calbiochem)。β肌动蛋白和抗体检测耦合合(Sigma-Aldrich)。发光信号显示了Amersham ECL +化学发光试剂(通用电气医疗集团生命科学)和量化与数量1 d分析软件(Bio-Rad)。

2.6。染色质免疫沉淀反应

评估选择蛋白质染色质入住率,HepaRG™细胞用打赌抑制剂预处理前1小时的il - 6和il - 1β(10 ng / mL) 2 h coincubation时期。细胞与甲醛交联,活动主题Inc . (CA)卡尔斯巴德执行染色质隔离和免疫沉淀反应与BRD2或BRD4抗体(Bethyl)。一式三份样本处理。统计学意义是通过双向方差分析的图基紧随其后的多个比较测试会比较或Sidak测试群体间的比较。一个值≤0.05被认为是具有统计学意义。

2.7。小鼠模型

2.7.1。人性化的嵌合小鼠模型

Urokinase-type纤溶酶原激活物(uPA) /重度联合免疫缺陷(SCID)小鼠肝脏利用人类肝细胞生成如前所述[13](Higashihiroshima PhoenixBio,有限公司,日本)。协议的动物实验是实验动物伦理委员会的批准,PhoenixBio有限公司有限公司(0740号决议)。在活的有机体内实验设施办公室批准的实验室动物福利(OLAW)。老鼠收到apabetalone 150毫克/公斤b.i.d.或车辆通过口服填喂法连续3天。动物与异氟烷麻醉和牺牲通过心脏穿刺放血。接下来,整个肝脏是收获,冲洗在寒冷的PBS,瞬间冷冻在液态氮,并存储在-80°C。从嵌合肝总RNA提取试剂盒®试剂,反向转录与高容量cDNA逆转录工具包,紧随其后的是与人类TaqMan rtPCR™基因表达分析和TaqMan™基因表达主人混合(ThermoFisher科学)。

2.7.2。内毒素小鼠模型

有限合伙人管理之前,八周大的雄性C57BL / 6小鼠获得车辆(11]或apabetalone b.i.d(150毫克/公斤。,formulation EA006) by gavage for 6 days (AraVasc Inc., Moffett Field, CA). On day 7, mice received apabetalone 4 h prior to an intraperitoneal injection of大肠杆菌0111:B4有限合伙人(10μg /鼠标)(Sigma-Aldrich)有限合伙人注入的时候。动物牺牲后24 h有限合伙人注入8天。肝脏和血浆(Li-heparin)收获对基因表达和蛋白质分析。总RNA提取肝脏(试剂盒®)反向转录与高容量cDNA逆转录工具包(ThermoFisher科学)。基因表达测定如前所述[16)使用鼠标β肌动蛋白作为一种内生的控制。统计学意义是通过1路的方差分析其次是图基的多重比较检验; 被认为是具有统计学意义。

2.8。SOMAscan™蛋白质组学分析

完整的设计和维护的基本原理研究(NCT01058018)已经出版之前19]。稳定患者冠状动脉疾病(CAD)和他汀类药物治疗接受安慰剂或100毫克apabetalone每天两次。基线和研究结束时,(12周)血浆样本维护进行了分析使用SOMAscan™1.3 k蛋白质组技术(SomaLogic Inc .)、博尔德有限公司)措施的相对丰度1305蛋白(20.]。Shapiro-Wilk测试被用来确定数据分布。对于正态分布参数,成对的学生的- - - - - -测试是用来计算统计学意义与基线,而对于非正态的分布参数,Wilcoxon符号秩测试应用和基线。Mann-Whitney测试是用来比较值之间的变化百分比apabetalone-treated病人和安慰剂。蛋白质受到apabetalone治疗(安慰剂)10%以上( )分析了IPA®软件使用规范途径和上游监管机构分析。

3所示。结果

3.1。Apabetalone会使人类肝细胞基底APR基因的表达

以前,我们报道,apabetalone治疗基因的表达减少集内补,凝固,4月通路在人类肝细胞(主要12,13,16]。在这里,我们确认4月的几个基因差别apabetalone-driven对这些nonstimulated肝细胞获得人类捐助者(如图72 h治疗1(一))。基底APR已知蛋白质的分泌与心血管疾病(21- - - - - -23),包括血清淀粉样蛋白P(编码装甲运兵车)、血浆铜蓝蛋白(编码CP)和纤溶酶原激活物inhibitor-1(编码SERPINE1),也显著降低apabetalone治疗(26 - 82%,图1 (b))。因此,押注抑制通过apabetalone可以下调4月基因转录和蛋白质丰富检测不到发炎的迹象,基底条件在体外。

评估apabetalone对基底APR基因表达水平的影响在活的有机体内,我们管理apabetalone纯合子白蛋白增强器/ promoter-driven urokinase-type纤溶酶原激活物/严重联合免疫缺陷小鼠(uPA / SCID)与人性化的肝脏(24]。在这种嵌合肝模型,替代收购PHH小鼠肝细胞的范围从90%到70,允许人类肝细胞的研究在活的有机体内。老鼠服用150毫克/公斤b.i.d. apabetalone或车辆紧随其后的是肝脏mRNA分析。Apabetalone减少人类APR基因的表达A2M(编码α2-macroglobumin),装甲运兵车,CP,F2(凝血酶编码),IL1RN(编码il - 1受体拮抗剂)IL18,ORM1(编码α-酸性糖蛋白1),SERPINA1(编码α1抗胰蛋白酶),SERPINE1,c反应蛋白( ,除了后者两个基因 )(图1 (c))。总的来说,这4月数据表明apabetalone可以表达下调基因转录nonstimulated人类主要细胞和人性化的小鼠肝脏。

3.2。4月Apabetalone会使细胞因子诱导的基因表达在肝细胞中

研究肝细胞反应抑制炎症条件下,我们主要治疗人类肝细胞与细胞因子(10 ng / mL il - 6和il - 1β)和apabetalone 72 h和评估mRNA转录和分泌4月蛋白质。c反应蛋白,SAA1/2 (编码血清淀粉样蛋白A),CP,A2M,惠普(编码结合珠蛋白),装甲运兵车,ORM172 h曝光后被诱导il - 6(图2(一个)),而c反应蛋白,SAA1/2,ORM1与il - 1表达也增加了β治疗(图2 (c))。的c反应蛋白apabetalone治疗的mRNA水平是最敏感的。Apabetalone降低il - 6介导c反应蛋白感应69%在mRNA水平和78%分泌蛋白质水平(数字2(一个)和2 (b))[16),而il - 1β介导的诱导c反应蛋白基因和蛋白表达降低了apabetalone 77%和70%,分别为(数字2 (c)和2 (d))。IL-6-inducedA2M和装甲运兵车apabetalone表达式不敏感,在蛋白质水平(图<减少50%2 (b))。因此,4月由不同的细胞因子基因刺激打赌抑制剂不同敏感。

评估选择的影响抑制肝脏炎症反应对复杂的细胞因子信号在活的有机体内老鼠使用150毫克/公斤apabetalone(6天)在系统性炎症引起的脂多糖(LPS)注入。作为c反应蛋白基因调控小鼠与人类之间的不同(25),其他模型4月基因的表达是检查在肝脏post-LPS注入。装甲运兵车,Saa1,A2m基因诱导注射LPS后24 h,共同服用apabetalone的抑制装甲运兵车和A2m分别为44%和88%(图2 (e))。评估的影响apabetalone肝脏中先天免疫反应,我们调查了免疫细胞标记表达式在24小时post-LPS注入(图2 (f))。分析显示apabetalone的抑制效应Cd14信使rna(编码一个LPS受体表达的单核细胞,中性粒细胞,枯氏细胞,正弦内皮细胞和肝细胞)Ccr2信使rna(编码对单核细胞趋化因子受体表达,枯氏细胞和肝星状细胞)。Apabetalone治疗不影响巨噬细胞和枯氏细胞标志物的表达Cd68,Aif1,马可(图2 (f))。结果表明在活的有机体内4月的敏感性和先天免疫基因在肝脏炎症蛋白质药物抑制打赌。

3.3。打赌蛋白质调解的感应c反应蛋白基因表达对细胞因子的反应

检查的机制c反应蛋白基因诱导炎症条件下,我们使用了HepaRG™细胞株,建立代理对人类原发性肝细胞,提供健壮的炎症反应刺激没有interdonor可变性(26]。il - 6和il - 1β是为了调节吗c反应蛋白表达在几小时内肝细胞的刺激2,3]。在这里,短期(2 h)个人细胞因子治疗HepaRG™细胞适度增加c反应蛋白表达式(图3(一个))。同时接触到il - 6和il - 1β(双细胞因子治疗)进一步增加的水平c反应蛋白信使rna(66倍)(图3(一个))。预处理与apabetalone,紧随其后的是一个2 h与细胞因子,cotreatment显著压抑的双重细胞因子诱导c反应蛋白信使rna 52%(图3(一个))。c反应蛋白mRNA水平类似的,虽然不太强劲,调制在初级人类肝细胞(图3 (b)),确认HepaRG™细胞适合研究肝细胞对细胞因子信号的反应。预培养的HepaRG™细胞apabetalone不干扰直接(0到30分钟)信号通过il - 6和il - 1β受体的磷酸化STAT3 Tyr705和NF -κB p65 Ser536是明显的在几分钟内细胞因子在apabetalone(补充图1)。在一起,这些数据表明打赌蛋白在早期的直接参与c反应蛋白基因转录的下游细胞质炎性信号。

确认在cytokine-mediated打赌蛋白质发挥作用c反应蛋白基因调控,HepaRG™细胞暴露在蛋白水解作用针对嵌合化合物(PROTAC) MZ-1指导打赌蛋白质通过蛋白酶降解[27]。24小时孵化与0.1μ米或0.8μM MZ-1减少BRD2 BRD4蛋白质丰度在细胞溶解产物(分别为30%或75%)。0.1 BRD3水平并不敏感μ0.8 M MZ-1但却减少了μM MZ-1(数据3 (c)和3 (d))。0.1μM MZ-1-driven BRD2 BRD4蛋白质减少是伴随着双细胞因子诱导的下降了60%c反应蛋白基因表达(图3 (e)),表明这些赌注贡献显著的细胞因子诱导的转录的蛋白质c反应蛋白。

以确定是否直接参与BRD2和BRD4蛋白质c反应蛋白基因转录,我们执行染色质免疫沉淀反应化验(芯片)。双(2 h)诱导细胞因子刺激浓缩BRD2的3.2倍c反应蛋白子,但这增加竞争BD抑制(图并不敏感3 (f))。细胞因子治疗也诱发显著增加BRD4协会的5.3倍c反应蛋白启动子区域(CRP TSS,图3 (g))。这种浓缩反驳通过预处理apabetalone(减少25%)或JQ1(减少44%)表明这是BD-dependent(图3 (g))。总的来说,数据显示BRD4的主要贡献的增加c反应蛋白肝细胞的基因转录后细胞因子刺激。BRD4抑制剂,包括apabetalone对抗BRD4交互c反应蛋白子,与减少一致c反应蛋白基因转录水平测量治疗后(图3(一个))。

3.4。Apabetalone APR通路和细胞因子信号的循环会使目标在CAD患者

升高循环4月蛋白质标记的慢性炎症和与心血管疾病(28]。评估选择的影响抑制apabetalone循环炎症介质,SOMAscan™1.3 k蛋白质组学分析(20.)进行血浆样本稳定CAD患者标准治疗疗法,治疗与安慰剂或100毫克b.i.d. apabetalone 12周( ;如[19])。血浆蛋白质丰度变化具体apabetalone治疗(> 10%的差异与安慰剂, )分析使用“规范途径”和“上游调节器”生物信息学工具与聪明才智®通路分析(IPA®)软件。“规范途径”分析工具将“4月信号”列为最高通路显著下调apabetalone等离子体从CAD患者(与安慰剂,值= , )(表1)。出来®“上游调节器”分析被用来治疗组血浆蛋白受到apabetalone上游转录目标特定的催化剂。这种分析强调了下游信号由有限合伙人,白介素、干扰素γ(干扰素γ),il - 1α细胞因子,IL-6-like制瘤素M (OSM)和核转录因子κB亚基1 (NFKB1),显著抑制apabetalone与安慰剂的差别(预测对这些 , 值< 0.05)(表1)。没有显著变化在血浆il - 6的水平,发现干扰素γ(干扰素γ),il - 1β安慰剂-和apabetalone-treated CAD患者(没有显示)。然而,随着表示出来®“上游监管者”分析,许多循环血浆蛋白由这些细胞因子,包括c反应蛋白,IL-1R拮抗剂和纤维蛋白原γ(图,减少apabetalone治疗4)。这些是liver-derived APR蛋白,这表明apabetalone影响4月从人类肝细胞分泌的蛋白质。综上所述,从CAD患者血浆蛋白质组学数据展示了调节apabetalone对循环的影响4月蛋白和炎症通路与心血管疾病的进展。

4所示。讨论

系统性炎症信号伴随慢性疾病导致改变生产4月由肝脏蛋白(1]。转录组和蛋白质组的变化与肝细胞细胞因子信号都进行了广泛的调查,但控制4月基因转录机制并不完全了解。这是由于肝细胞细胞因子反应的复杂性,糖皮质激素,生长因子分泌在4月导致激活多个平行通路(2,29日]。转录因子之前涉及的规定4月之间基因表达本质上的区别和显示动态时间-和stimulus-dependent反应(2,29日]。统计的成员,NF -κ肝细胞的核因子B, C / EBP, AP-1, Smad蛋白质家族4月已发现基因启动子,其中包括c反应蛋白,在原发性肝细胞肝癌细胞和2,29日- - - - - -32(其中和引用)。这里,我们确定打赌蛋白质表观遗传读者4月调节基因转录。我们使用打赌抑制剂apabetalone,治疗心血管疾病的发展,作为一种工具化合物反赌的活性蛋白质检测不到发炎的迹象,在肝细胞炎症条件在体外、老鼠和CAD患者。

最好的特点选择蛋白质,BRD4,在炎症反应中起着至关重要的作用[7,8]。BRD4占据转录活跃的染色质区域通过其与H3K27ac相互作用[29日,30.,33]。在小鼠肝细胞il - 1β和细胞因子il - 6双信号可以增加大量的H3K27ac, STAT3, NF -κB, RNA聚合酶II诱导4月附近的基因(3]。BRD4配合STAT3和NF -κB transactivate RNAPII nonhepatocytes [31日,32,34];因此,可以想象,它在激活肝细胞中扮演类似的角色。在这里,我们提供的证据表明,BRD4是一种新型转录监管机构要求c反应蛋白刺激肝细胞中表达。打赌蛋白质的降解proteolysis-inducing复合MZ-1强有力地抑制c反应蛋白基因诱导il - 6和il - 1β,加强认为打赌stimulation-dependent转录所需的蛋白质。这可能是一个直接影响,BRD2 BRD4招聘的c反应蛋白启动子是早期发现在双细胞因子刺激(2 h),和一个短期治疗与apabetalone或JQ1(与不同的支架pan-BETi)计数器c反应蛋白启动子入住率BRD4和CRP基因诱导细胞因子。进一步的调查将决定BRD2 BRD4配合其他转录因子促进肝c反应蛋白转录过程中炎症。

我们还表明,长期押注抑制apabetalone治疗(72小时)会使基底的几个4月在人类肝细胞基因水平。这个4月协调敏感性基因表达apabetalone表明打赌涉及蛋白质(直接或间接)这个键在调节肝脏功能。值得注意的是,4月基因的抑制apabetalone在肝细胞模型是一致的,包括在体外主要培养的人类细胞和嵌合小鼠与人性化的肝脏。此外,4月的信使rna和蛋白质表达蛋白质与心血管疾病有关,包括血清淀粉样蛋白P,血浆铜蓝蛋白、纤溶酶原激活物inhibitor-1 [21- - - - - -23),也是降低apabetalone治疗。尽管血清淀粉样蛋白P和纤溶酶原激活物inhibitor-1没有减少CAD患者稳定分析,apabetalone以前观察到的差别他们对这些先进的CAD患者(16和慢性肾脏疾病患者17),分别。因此,疾病类型和严重程度可能影响apabetalone APR蛋白质的敏感性。

在内毒素,apabetalone对LPS抑制肝细胞反应,如图所示的差别,对这些基因的小鼠模型4月基因装甲运兵车和A2M。这在活的有机体内基因转录的影响可能直接调制的结果apabetalone中演示在体外实验刺激肝细胞。然而,apabetalone可能也间接影响渗透或liver-resident先天免疫细胞,刺激肝细胞产生内毒素期间4月蛋白质。先天免疫标记分析表明,apabetalone抑制炎症的表达Cd14基因编码一个有限合伙人coreceptor显示在单核细胞,中性粒细胞,枯氏细胞,正弦内皮细胞和肝细胞35,36]。正如之前报道的(37),Cd14在正常肝脏中表达水平相对较低但大幅增加后LPS处理(也见图2 (f)),促进有限合伙人被细胞吸收。Downregulation的Cd14信使rna BETi治疗可能减少肝脏中LPS信号,经肝细胞炎症反应(38,39]。Apabetalone的mRNA水平也减少Ccr2,一个关键的趋化因子受体主要发现表面浸润的单核细胞、巨噬细胞和居民枯氏细胞(40]。Ccr2函数来招募这些细胞的炎症,由apabetalone可能减弱免疫细胞活动和减少其在肝脏。BETi炎症治疗肝病的好处目前正在调查(41,42]。

增强炎症信号伴随一些慢性人类疾病包括心血管疾病,4月,升高血浆蛋白被用作生物标记的系统性炎症(35]。稳定的CAD患者研究hsCRP水平升高( mg / L)尽管标准治疗(16),反映系统性细胞因子信号升高。研究apabetalone CAD患者的影响,我们检查了1300 +血浆蛋白,以应对变化的药物治疗3个月,与安慰剂。血浆蛋白质组生物信息学分析预处理和后处理显示,apabetalone显著调节水平的多个组件的规范”4月信号通路,导致预测4月通路的抑制治疗患者(表1)。4月蛋白质最重要的表达下调到了apabetalone IL-1R拮抗剂(-13.8%, ),纤维蛋白原γ链(-16.9%, ),和c反应蛋白(-42.3%, )(图4),每一种都积极与心血管疾病的风险增加(18,36]。Apabetalone-mediated减少这些liver-derived等离子APR蛋白质支持细胞和动物实验观察(这份报告,12])。此外,血浆蛋白质组生物信息学分析表明,循环4月受apabetalone蛋白质转录的目标炎症介质白介素、干扰素γ,il - 1α制瘤素M (OSM)、有限合伙人和NF -κB(表1)。符合这一发现,其他几个也表达下调的细胞因子目标apabetalone患者血浆(表中1)包括stromelysin-2 / MMP10 (-29%, ),咆哮/ CCL5 (-29%, ),调整/ TNFSF12 (-21%, ),骨桥蛋白/ SPP1 (-16%, ),epiregulin / EREG (-13%, ),帕洛阿尔托研究中心/ CCL18 (-13%, ),和轻型/ TNFSF14 (-11%, )。这些蛋白与动脉粥样硬化斑块发展和破裂,和他们的循环水平与心血管疾病风险18,36- - - - - -42]。的差别,对这些细胞因子通路,导致4月蛋白表达可能降低心血管疾病风险apabetalone-treated患者(43,44]。

5。结论

打赌apabetalone计数器细胞因子信号的抑制肝细胞,导致4月减少基因表达和蛋白质分泌,包括c反应蛋白。减少的c反应蛋白基因表达的apabetalone在早期细胞因子信号至少部分由BRD4删除的c反应蛋白启动子。Apabetalone治疗会使循环细胞因子的目标,包括4月路径组件,在稳定CAD患者标准治疗治疗,可能抑制慢性炎性疾病的信号。Apabetalone对炎症介质的影响可能有助于降低心血管疾病风险和疾病的结果43,44]。

缩写

A2M:	α2-macroglobulin
美联社- - - - - -1:	激活蛋白1
装甲运兵车:	血清淀粉样蛋白P组件
4月:	急性期反应
双相障碍:	Bromodomain
注:	Bromodomain和extraterminal
BETi:	押注抑制剂
BRD:	Bromodomain和extraterminal
计算机辅助设计:	冠状动脉疾病
C / EBP:	CCAAT /增强子结合蛋白
芯片:	染色质免疫沉淀反应
CKD:	慢性肾脏疾病
CP:	血浆铜蓝蛋白
c反应蛋白:	c反应蛋白
心血管疾病:	心血管疾病
H3K27:	3组蛋白赖氨酸27
食物:	肝细胞的核因子
惠普:	结合珠蛋白
HsCRP:	高灵敏度c反应蛋白
IL:	白介素
IL-1RA:	白介素1受体拮抗剂
异丙醇®:	聪明才智®途径分析
有限合伙人:	脂多糖
梅斯:	主要急性心脏事件
NF -κB:	核转录因子κB
ORM1:	α-酸性糖蛋白1
OSM:	制瘤素M
聚合酶链反应:	聚合酶链反应
收购PHH:	主要人类肝细胞
P-TEFb:	积极转录延长因子b
PROTAC:	针对嵌合体蛋白水解作用
RNAPII:	RNA聚合酶II
rtPCR:	实时聚合酶链反应
南非航空公司:	血清淀粉样蛋白一
SAP:	血清淀粉样蛋白P
STAT3:	信号传感器和转录激活3
肿瘤坏死因子:	肿瘤坏死因子。

数据可用性

期间生成的数据集和/或分析在当前的研究中可在这个手稿。

伦理批准

随后的过程都是按照道德标准的负责任的人体试验委员会(机构和国家)和1975年的赫尔辛基宣言,就像2000年的修订。动物研究进行Aravasc Inc . (CA)桑尼维尔国立卫生研究院的指导方针和NASA动物保健和使用委员会(IACUC)政策批准协议ara - 16 - 001日元。

同意

知情同意是获得所有患者被纳入研究。

的利益冲突

所有作者都Resverlogix集团的员工和股东。

作者的贡献

S.W.,D.G., and E.K. designed the experiments. S.W. and D.G. performed the experiments, analyzed the data, and interpreted the results. R.J., S.W., D.G., and E.K. designed the mouse study. E.D. analyzed the mouse tissues. C.H., R.J., M.S., J.J., and N.C.W.W. participated in the clinical trial data analysis and interpretation. S.W., D.G., L.M.T., L.F., C.H., B.D.R., and E.K. analyzed the plasma proteomics data. S.W. and S.C.S. wrote the manuscript. All authors read and approved the final manuscript.

确认

我们要感谢Resverlogix实验室成员的知识输入和手稿审查。这项工作被Resverlogix集团支持。

补充材料

补充图1:apabetalone并不影响早期信号通过il - 6和il - 1的步骤β。(补充材料)

引用

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