重组α和重组ζ:比较研究在刺激血管生成和伤口修复的实验模型燃烧伤害

文摘

深二级烧伤特点是延迟肉芽组织的形成和受损的血管生成。促红细胞生成素(EPO)是能够刺激血管生成和有丝分裂,激活血管化和细胞周期。我们的研究的目的是调查是否两个生物仿制重组人红细胞生成素、促红细胞生成素-αEPO-Z,可以促进这些过程的实验模型燃烧伤害。总共使用了84个老鼠,烫伤烧伤是产生在剃须后,在80°C水10秒钟。老鼠被随机分配接受促红细胞生成素-α(400台/公斤/天/ sc)或EPO-Z(400单位/公斤/天/ sc)或他们的车辆(100μL /天/ sc 0.9%氯化钠溶液)。12天后,EPOα和EPO-Z VEGF蛋白表达增加。促红细胞生成素-α增加引起的细胞周期蛋白D1 / CDK6和细胞周期素E / CDK2表达式与车辆和EPO-Z ()。我们的研究表明,促红细胞生成素-α和EPO-Z加速伤口闭合和血管生成;然而EPO -α了更有效地实现完整的皮肤再生。我们的数据表明,促红细胞生成素-α和EPO-Z不是生物仿制药的伤口愈合的影响。EPO的更高的功效α可能会由于其不同的构象结构导致一个更高效的细胞增殖和皮肤改造。

1。介绍

促红细胞生成素(EPO)是一种肾糖蛋白激素,调节红细胞生产红细胞前体细胞通过抑制细胞凋亡,但也参与造血组织中增殖和分化的机制1,2]。促红细胞生成素作用通过其特定的细胞因子受体,促红细胞生成素受体(EPOR),分配在细胞表面3,4)许多不同nonhaematopoietic造血组织和细胞(5]。EPOR已被确定在神经元,星形胶质细胞、小胶质细胞、内皮细胞、巨噬细胞,成纤维细胞,角质细胞,肥大细胞,黑色素细胞、肝脏和子宫。当激活时,受体促进Janus激酶(激酶)/信号传感器和转录激活(STAT)通路,促进有丝分裂和分化在所有这些细胞系(6,7]。

几项研究已经表明,促红细胞生成素可能参与调节生理伤口愈合过程。它已经证明了局部促红细胞生成素政府钱伯斯进入皮下纤维蛋白能够促进伤口肉芽组织的形成在伤口愈合的老鼠模型8]。这种效应是归因于生理的刺激血管生成和upregulation伊诺表达在皮肤上。

此外,其他研究已经表明,促红细胞生成素可能与血管内皮细胞和血管内皮生长因子(VEGF),参与血管生成过程,从而刺激在内皮细胞的能动性和有丝分裂,形成新的毛细血管(9,10]。这些实验证据提示使用促红细胞生成素在改善受损的伤口愈合;事实上,我们的团队已经证明重组促红细胞生成素的功效在糖尿病和改善皮肤修复烧伤病人(11,12]。

重组人红细胞生成素(rHuEPO)已经被广泛的用于临床和新配方合成,如重组α(EPO -α)和重组Z (EPO-Z) [13- - - - - -15]。促红细胞生成素-α是第一代重组促红细胞生成素使用相同的氨基酸序列作为人类促红细胞生成素和皮下接种时发挥最大疗效[16]。EPO-Z是新一代生物仿制EPO的相同的氨基酸序列α和重叠的碳水化合物组成;它可能被用来作为另一种选择治疗终末期肾脏疾病和贫血患者。EPO-Z开发和注册同意欧洲药品局(EMEA)的指导方针。EPO-Z都是基于广泛的监管批准理化/分子,临床前,和临床特征研究和全面上市后监测计划,按要求对所有欧洲“生物仿制药”。

然而,生物仿制药可能有一些不同的材料的准备和可能显示在制造过程变异性,,此外,活性形式可能不同的大小和结构的复杂性17]。生物技术技术用于制备化合物的分子更多的异类,这是结构变化的结果,如糖基化和/或氨基酸序列的改变。这些变化通常是负责免疫效应(18- - - - - -20.]。

自从新EPO-Z从来没有测试它的皮肤修复效果,我们的研究的目的是调查是否EPOα和EPO-Z可能显示重叠的具体行动的实验模型燃烧伤害。

2。材料和方法

2.1。动物和实验燃烧模型

协议评估并接受了大学的伦理委员会梅西纳和所有动物程序进行了根据指南的护理和使用实验动物。共有84名男性C57BL / 6小鼠体重- g被用于这项研究和购买的查尔斯河意大利(意大利Calco)。动物被安置和维护控制环境条件下(12 h光/暗周期,温度大约23°C)和标准实验室提供食物和水随意。皮肤损伤进行小鼠的经费:全身麻醉后戊巴比妥钠(80毫克/公斤/ i.p。),头发是背面刮使用脱毛霜,以减少任何可能伤害由于脱毛。烧伤病人产生了80°C的水,和老鼠沉浸10秒钟燃烧模板,这样背被暴露在热水通过窗口2×3厘米。通过这种方式,我们生产deep-dermal二级燃烧;postburn镇静和镇痛提供安定(50 mg / L添加到饮用水)7天来减轻疼痛。热损伤后,动物被分成3组,随机接受促红细胞生成素-α(400国际单位/kg/day in 100 μL 0.9%氯化钠皮下注射),EPO-Z(400国际单位100年/公斤/天μL 0.9%氯化钠皮下注射),或车辆(100μL每天0.9%氯化钠皮下注射)。剂量选择在这项研究中已被证明有效的促红细胞生成素-α在先前的研究治疗伤口愈合(11,12]。低剂量方案和不同的时间治疗显示,初步实验有利影响(结果未显示)。在3、6和12天7每组动物牺牲,其余7从每组动物观察和治疗评估时间最后的伤口缝合。牺牲的时候血液通过心脏穿刺收集,和燃烧区域被切除,用于组织学和分子分析。

2.2。红细胞计数和血红蛋白水平

红细胞和血红蛋白(Hb)水平进行评估从血液样本烧伤后12天。红细胞计数进行染色涂片根据鼠标的标准形态标准(11,12]。

2.3。免疫印迹测定VEGF、细胞周期蛋白D1 CDK6,细胞周期素E, CDK2、p15和p27

皮肤样本均质裂解缓冲(Triton X100 1%, 20毫米三羟甲基氨基甲烷/盐酸,液pH值8.0,137毫米氯化钠,10%的甘油,EDTA 5毫米,1毫米phenylmethylsulfonyl氟化物,1%抑肽酶,和15μg / mL亮抑酶肽)。蛋白质样品(30μg)在减少缓冲变性(62更易/ L三pH值6.8,10%甘油、2% SDS, 5%β巯基乙醇,0.003%溴酚蓝),通过电泳分离钠十二烷基硫酸盐(SDS)聚丙烯酰胺凝胶(10%或12%)。分离蛋白转移到PVDF膜使用传输缓冲区(39更易与甘氨酸,48更易与L三,和pH值8.3,20%甲醇)在100 V 1小时。膜被沾染了朱红色年代(0.005%,1%乙酸)确认吸掉,阻止tbs脱脂奶粉5% - 0.1%渐变1小时在室温下,洗3次各10分钟tbs - 0.1%渐变,然后孵化主要抗体对细胞周期蛋白D1, CDK6,细胞周期素E, CDK2、p15或p27(细胞信号,贝弗利,MA)和VEGF在tbs (Abcam,剑桥,英国)- 0.1%渐变一夜之间在4°C。后的第二天,抗体是被洗膜3 * 10分钟每个渐变在tbs - 0.1%。膜与二次抗体peroxidase-conjugated孵化(皮尔斯,罗克福德,IL)在室温下1小时。洗后,膜被增强化学发光分析系统根据制造商的协议(Amersham,小都,英国)。VEGF、细胞周期蛋白D1 CDK6,细胞周期素E, CDK2、p15, p27蛋白信号被扫描量化使用bioimage微分析系统(Bio-Profil Celbio,米兰,意大利)。等于加载的蛋白质在剥夺了墨迹的评估β肌动蛋白染色与兔单克隆抗体(细胞信号,贝弗利,MA)。

2.4。组织学评价

动物的皮肤样本删除每个实验组和缓冲福尔马林固定在10%在室温下至少24小时。垂直部分的前后轴燃烧面积在分级乙醇脱水,二甲苯清除,嵌入在石蜡按照例行程序。Five-micrometer-thick石蜡包埋组织的部分是安装在玻璃幻灯片,水化蒸馏水,然后用苏木精和伊红染色。特别是,组织学幻灯片进行10××20放大(即观察形态学改变或改进。,presence or absence of reepithelialization, crusting, blistering, granulation tissue and collagen matrix organization, inflammation, congestion, and edema), as previously reported [11,12]。评估从病理学家没有知识获得的治疗。

2.5。为CD31免疫组织化学

石蜡包埋组织切片(5μ米)和水化,抗原暴露是由使用0.05柠檬酸钠缓冲(pH值6.0)。标本用3%过氧化氢阻断内源性过氧化物和马正常血清(美国向量实验室,伯林盖姆,CA),以避免非特异性染色。幻灯片在一夜之间被孵化在4°C在潮湿的盒子里主要抗体检测CD31 (Abcam,剑桥,英国)。后的第二天,部分与PBS清洗,使用二次抗体(向量实验室),和反应是显示添加少量的解决方案(diaminobenzidine tetrahydrochloride,σ,米兰,意大利)1 - 3分钟。幻灯片与苏木精复染色、脱水、安装和检查病理学家没有知识的治疗,通过使用蒙面幻灯片从10××40放大与徕卡显微镜(徕卡微系统、米兰、意大利)。

2.6。统计分析

所有数据表示为意味着±。比较不同治疗之间被单向方差分析Bonferroni紧随其后的多重比较分析测试。组织学评分分析是由双向方差分析Bonferroni紧随其后的多重比较测试。是错误的可能性它被认为是具有统计学意义。图是用GraphPad棱镜Windows(版本5.0)。

3所示。结果与讨论

3.1。血液红细胞计数和Hb

因为促红细胞生成素是有效刺激红细胞血统,我们计算红细胞的数量和Hb实验小组,确认EPO -α和EPO-Z可以促进红细胞和血红蛋白的生产。我们已经观察到在我们先前的研究,rHuEPO刺激红细胞血统(11,12]。正如所料,EPO的管理αEPO-Z增加循环红细胞的数量和Hb在12天(数据没有显示)。没有观察到这两个化合物之间的区别。我们的研究结果证实这两个分子同样刺激红细胞血统,在临床研究报道,作为生物仿制药品(15]。

3.2。皮肤修复

伤口愈合的特点是不仅刺激血管生成,而且矩阵的形成和改造部件,在此设置中,巨噬细胞生长因子的生产负责。自EPOR位于表面的这些细胞,促红细胞生成素刺激巨噬细胞,这种作用机理解释了皮肤修复过程中促红细胞生成素的作用(21]。

此外,一个在体外研究中,评价促红细胞生成素和促红细胞生成素受体的影响在人类头发毛囊(HFs) [22),也表明毛囊细胞原位合成促红细胞生成素蛋白和促红细胞生成素受体表达。这些结构是众所周知的不仅生产头发还通过reepithelialization组织修复的重要贡献,研究人员和临床医生指出,多年来,长出毛发地区往往比地区缺乏毛囊(康复得更快23,24]。兰顿et al。25)表明,在缺乏HFs中急性伤口愈合延迟。在伤口愈合(HFs-derived角质细胞负责reepithelization26),而高频真皮鞘细胞的主要来源成纤维细胞伤害和有一个角色在更换皮肤真皮27]。

在我们的研究中,在第三天,对照组和治疗组与促红细胞生成素α和EPO-Z显示广泛的皮肤缺损、坏死和炎症细胞的皮下层,和缺乏毛囊和皮肤腺体。在6天,对照组显示持久性的地壳和坏死和炎性区域。EPO治疗α促进炎性浸润的减少和部分恢复真皮结构决定的毛囊和汗腺的存在;相反EPO-Z治疗皮肤只显示部分再生在地壳的存在,一些地区的坏死和炎性细胞浸润(图1)。

实验周期结束时(12天),控制动物的皮肤坏死的收缩包围膜carnosus以及混乱真皮层。我们观察到动物与促红细胞生成素治疗α展示了良好的再生与角蛋白层和重组皮下的组织结构。动物对待EPO-Z仍然显示不完整的愈合过程与促红细胞生成素-α治疗组(图2)。

因此,EPO的使用α减少炎症引起的,恢复皮肤层,和加速完成治疗”restitutio广告integrum“皮肤结构,如毛囊。相比之下,EPO-Z没有确定一个完整的愈合与EPO相比α:组织结构是组织,减少炎症和矩阵组件可见但不完全形成。

3.3。血管生成:VEGF的表达

深二级烧伤的特点是整个表皮的破坏和改变;此外,燃烧区域显示了nonregenerating mesenchyma-mediated伤口愈合、延迟肉芽组织的形成,减少胶原的沉积,受损的血管生成。EPO能保护表皮,真皮,及其重要的结构,尤其是毛细血管和血管,从进一步损害后燃烧伤害28]。事实上,它已经表明,红细胞生成素也可能作用于通过EPOR nonhaematopoietic组织,促进组织愈合,尤其是受伤后(29日,30.]。

血管生成过程是几个因素之间的相互作用的结果和VEGF在伤口愈合编排一个关键的角色,促进内皮细胞增殖从第一时刻。在之前的研究中我们之间的合作表明,VEGF和促红细胞生成素促进血管生成过程,确认rHuEPO作为生长因子的作用在伤口愈合的实验模型(11]。

在目前的实验中我们比较EPO -α和EPO-Z刺激血管生成。生理上,烧创伤的愈合导致增加VEGF与正常条件下相比。出于这个原因,我们研究VEGF表达在天3伤口,治疗后6、12。如图3,促红细胞生成素α和EPO-Z刺激VEGF表达的时间点,和EPO-Z刺激是重要的在天3和12。这种明显的差异的原因可能是由于这样的事实,VEGF不是唯一和一个因素参与新血管的形成,实际上在受损的伤口愈合情况的VEGF受体表达下调(VEGF-R2)和其他生长介质。事实上,尽管增加降低VEGF (EPO-Z相比),促红细胞生成素-α导致更快和更有组织皮肤愈合底层VEGF增加仅仅是不够的。为了证明血管生成刺激的功效,除了VEGF合成,我们调查了新成立的毛细血管通过CD31免疫染色在皮肤样本调查天6 - 12。6天没有CD31染色观察到皮肤组织(数据没有显示)。作为显示在图4在12天未经处理的动物提供了一个积极的染色(图4(一))和EPO的管理α进一步提高了染色小毛细血管,表明持续的血管生成(图4 (b))。EPO-Z没有改善neovascularisation在12天,确认延迟愈合与圆)染色(图观察4 (c))。

3.4。细胞周期调节机械

(我)血管生成的过程,(2)矩阵改造,和(3)伤口愈合是被激活的细胞周期和细胞增殖及时、有序地执行。哺乳动物细胞的细胞周期各个阶段控制的不同类型的细胞周期蛋白。细胞周期蛋白,cyclins-dependent激酶(CDKs)和消极的监管机构,如细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂属于p16和p21家庭,共同调节细胞周期进程。细胞周期蛋白D1和细胞周期素E基本在G1期的激活。细胞周期蛋白D1和细胞周期素E增加后跟相应upregulation CDK6和CDK2活动。两个配合物引发的G1期进入S期。细胞周期负监管机构分为2个家庭,p21家族(p21 p27和p57)和p16家族(p18 p15, p16, p19)。任何改变细胞周期蛋白之间的复杂平衡/ CDK复合物和消极监管机构可以负责一个受损的细胞生长,反过来,延迟组织修复(31日,32]。

已经证明,EPO基因表达与细胞周期蛋白/ CDK的upregulation EPO的政府可能促进DNA合成,细胞增殖,以及移植细胞周期蛋白的表达(33]。同意这一发现,它也表明,改进neovascularisation诱导的促红细胞生成素可能归因于直接影响VEGF介导不仅,而且通过内皮细胞增殖(34]。

在我们的实验中我们不仅检测EPO -α和EPO-Z同样的功效在促进伤口愈合在实验性烧伤伤口还这些影响是否依赖于激活的细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)。细胞周期积极监管机构评估在3天,6和12后燃烧伤害。老鼠的烧伤创面处理车辆显示适度的表达细胞周期蛋白D1和CDK6天3、6和12(数字3 (b)和3 (c))。EPO的管理α显著调节细胞周期蛋白D1的表达在天6 - 12 ()相比,使用车辆和EPO-Z(图进行治疗3;)。

CDK6,细胞周期蛋白激酶激活负责的D,显示趋势类似于细胞周期蛋白的伤口处理车辆(数字3 (b)和3 (c))。EPO的管理α决定在CDK6的表达显著增加天6 - 12 ()。EPO-Z没有造成显著差异CDK6的表达。

细胞周期素E的表达在皮肤的老鼠接受车辆增加只有6天。EPO治疗α显著增强细胞周期素E的表达在所有时间点;EPO-Z管理增加了细胞周期素E表达只在12天(图5(一个))。CDK2表达式没有任何明显的upregulation EPO治疗后α和相比EPO-Z动物治疗只有车辆(图5 (b))。

有趣的是,我们观察到相反的p15蛋白的表达情况:事实上,在这种情况下,治疗与EPO-Z减少的表达抑制剂p15以显著的方式在所有时间点,虽然EPO-Z没有修改细胞周期蛋白的表达(图5 (c))。然而,唯一的表达减少抑制剂p15不足以激活细胞周期,加快伤口愈合过程后燃烧伤害。

另一方面,与EPO治疗α没有修改这抑制剂在重要的表达方式。p27的表达增加在天6 - 12烧伤小鼠接受车辆和促红细胞生成素-α在第三天,只有老鼠EPO-Z处理(图5 (d))。

在正常情况下,肉芽组织的发展和细胞增殖是由细胞周期素D₁/ CDK6和细胞周期素E / CDK2复合物。我们的数据表明,促红细胞生成素-α更有效的细胞周期蛋白的表达增加。这样,细胞周期肯定是促进和这个事件导致燃烧组织的再生和受损结构。因此很容易推测,EPO的伤口愈合效果更好α是由于更大的主要细胞周期机械的能力。

4所示。结论

已经证明,促红细胞生成素代表特别有前途的方法治疗烧伤的伤口(35- - - - - -37]。促红细胞生成素-α和EPO-Z生物仿制药品,他们应该有重叠的治疗效果。事实上这两个化合物Hb水平差异不显著,红细胞数量和VEGF的表达。促红细胞生成素-α和EPO-Z也加速伤口关闭和血管生成,但EPO -α了更有效地实现完整的皮肤再生。我们假设的优势在这个特定的EPO治疗效果α关于EPO-Z可能与一个更健壮的激活细胞周期的机器。此时此刻,我们没有一个明确的解释”不同。“这可能是假设制造工艺用于制备的分子差异这两个配方或结构的变化,例如,在一些残留的糖基化,可能会导致不同的细胞周期激活,也许可以解释不同的伤口愈合效果。此外,这些可能构象变化负责受体亲和力较低,决定了一个变更相关的受体结合,因此信号的响应。

但是还需要进一步的实验来充分阐明分子机制这两个生物仿制药品的区别。

所有这些数据提出,伤口愈合的异常燃烧损伤可能是由于细胞周期发生重大变化的机械维修组织,促红细胞生成素和政府可能建议作为一个潜在的战略,恢复受损的伤口愈合,促进血管生成和细胞周期的燃烧组织受损。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

娜塔莎Irrera和亚历山德拉Bitto同样导致了这项工作。

引用

1. 促红细胞生成素的w . Jelkmann”,生物学,”临床研究员,卷72,不。6,S3-S10, 1994页。视图:谷歌学术搜索
2. m . Piagnerelli J.-L。文森特:“使用erythropoiesis-stimulating代理在重症监护室,”急救护理诊所,28卷,不。3、345 - 362年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. h . Youssoufian g .朗莫·d·诺伊曼,a . Yoshimura和h . f . Lodish”结构、功能和促红细胞生成素受体的激活,“血,卷81,不。9日,第2236 - 2223页,1993年。视图:谷歌学术搜索
4. j . Rossert K.-U。的时候,“促红细胞生成素受体:他们的角色除了红细胞生成,“肾脏透析移植,20卷,第1028 - 1025页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. m .卤水和a·赛拉米,“发现红细胞生成素extra-hematopoietic功能:生物学和临床承诺,“肾脏国际,卷70,不。2、246 - 250年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. f . p . Barbone d·l·约翰逊,f . x法雷尔et al .,“新重组分子和新颖的治疗方法,”肾脏透析移植,14卷,不。2、80 - 84年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. p . j . Connolly s . k .潮湿,w . v . Murray et al .,“合成和促红细胞生成素受体结合亲和力的N, N-disubstituted氨基酸,”生物有机和药物化学字母,10卷,不。17日,第1999 - 1995页,2000年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. 江z . A . Haroon k·阿明,x,和m . o . Arcasoy”小说角色促红细胞生成素在fibrin-induced愈合反应,”美国病理学杂志》,卷163,不。3、993 - 1000年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. d . Ribatti m . Presta a Vacca et al .,“人类促红细胞生成素诱发pro-angiogenic表型在培养的内皮细胞和体内刺激新血管形成,”血,卷93,不。8,2627 - 2636年,1999页。视图:谷歌学术搜索
10. m . Buemi a . Lacquaniti d Bolignano et al .,“促红细胞生成素和再生医学:从鱼,”欧洲临床研究杂志》上,39卷,不。11日,第999 - 993页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. m .五一d . Altavilla d Cucinotta et al .,“重组人红细胞生成素刺激血管生成和伤口愈合的基因糖尿病老鼠,”糖尿病,53卷,不。9日,第2517 - 2509页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. m .五一d . Altavilla a Bitto et al .,“重组人红细胞生成素能改善血管再生和伤口愈合实验烧伤口,“危重病医学,34卷,不。4、1139 - 1146年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. c . Baldamus s Krivoshiev m . Wolf-Pflugmann m . Siebert-Weigel r . Koytchev和a . Bronn”长期应用重组ζ的安全性和耐受性,静脉注射管理,维持治疗肾性贫血,”先进的治疗,25卷,不。11日,第1228 - 1215页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. 诉Wizemann资助,c . Baldamus p . Scigalla和r . Koytchev”比较治疗效果的重组ζ重组在肾性贫血治疗的维护阶段,“目前的医学研究和意见,24卷,不。3、625 - 637年,2008页。视图:谷歌学术搜索
15. s . Krivoshiev诉诉托多罗夫,j . Manitius s Czekalski p . Scigalla和r . Koytchev”比较重组ζ的疗效和应用重组校正的肾贫血,”目前的医学研究和意见,24卷,不。5,1407 - 1415年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. j·s·t·麦高文n . m . Vaccaro海狸,j . Massarella m·沃尔夫森,“药代动力学和药效学资料扩展剂量重组的贫血患者透析慢性肾脏疾病,不,”临床美国肾脏病学会杂志》上,3卷,不。4、1006 - 1014年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. s·d·罗杰,“生物仿制药品:他们是相似或不同?”肾脏学,11卷,不。4、341 - 346年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. g . Barosi a . Bosi m p Abbracchio et al .,“关键概念和关键问题对重组人红细胞和白细胞生成素生物仿制药品:意大利社会血液学的意见书,意大利社会实验血液学和意大利对骨髓移植组,“Haematologica,卷96,不。7,937 - 942年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. a . s . Tsiftsoglou鲁伊斯,和c·k·施耐德,“发展和生物仿制药品的监管:当前状态和未来的挑战,”BioDrugs,27卷,不。3、203 - 211年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. s . Tamilvanan n . l . Raja b . Sa和k·巴苏,“临床问题产生的免疫原性的细胞水平生物制药注射用进入人体后,“药物杂志》的目标,18卷,不。7,489 - 498年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. 江z . A . Haroon k·阿明,x,和m . o . Arcasoy”小说角色促红细胞生成素在fibrin-induced愈合反应,”美国病理学杂志》,卷163,不。3、993 - 1000年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. m . h . b . m .康s h . Shin Kwack et al .,“促红细胞生成素促进培养的人类头发毛囊和毛干增长调节头发生长在老鼠身上,“皮肤病学的科学杂志卷,59号2、86 - 90年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. g . h .主教,“再生实验后去除皮肤的人,”美国解剖学杂志》,卷76,不。2、153 - 181年,1945页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. 诉Martinot诉米切尔·Fevrier a·杜哈梅和p . Pellerin”比较研究分裂厚度的皮肤移植来自儿童的头皮和大腿,“伯恩斯,20卷,不。2、146 - 150年,1994页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. a·k·兰顿,s·e·赫里克和d . j .迎面的“延长表皮反应治疗皮肤伤口在缺乏毛囊干细胞的贡献,”皮肤病学研究杂志》上,卷128,不。5,1311 - 1318年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. 杨m . Ito y, z . et al .,“毛囊干细胞的膨胀导致伤口修复表皮的而不是体内平衡,”自然医学,11卷,不。12日,第1354 - 1351页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. c . a . b . Jahoda和a·j·雷诺兹毛囊真皮鞘细胞:无名参与者在伤口愈合,”《柳叶刀》,卷358,不。9291年,第1448 - 1445页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. c . i Gunter A巴德,Dornseifer et al .,“多中心研究促红细胞生成素的再生效果在燃烧和滚烫的伤害:随机对照试验的研究方案,“试用,14卷,不。1,第124条,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. e·博多,a . Kromminga w . Funk et al .,“人类头发毛囊extrarenal源和nonhematopoietic促红细胞生成素的目标,“美国实验生物学学会联合会杂志,21卷,不。12日,第3354 - 3346页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. m . v . a .阿罗约m·a·卡斯提拉f·r·g·帕切科et al .,”作用的血管内皮生长因子erythropoietin-related内皮细胞增殖,”美国肾脏病学会杂志》上,9卷,不。11日,第2004 - 1998页,1998年。视图:谷歌学术搜索
31. p .护士”,长二十世纪的细胞周期,”细胞,卷100,不。1,第78 - 71页,2000。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. j . Bartkova b Grøn、大肠Dabelsteen和j . Bartek”细胞循环调节蛋白在人类伤口的愈合速度。”档案口腔生物学,48卷,不。2、125 - 132年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. H.-S。彭,X.-H。徐,r . Zhang et al .,“多个低剂量的促红细胞生成素延迟肝细胞的增殖,但促进肝功能的老鼠模型小计肝切除术,”今天手术,44卷,不。6,1109 - 1115年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. h . Sorg, c·克鲁格,t·舒尔茨·m·d·门格尔f .施密茨和b . Vollmar”促红细胞生成素在皮肤伤口愈合的影响剂量相关,”美国实验生物学学会联合会杂志,23卷,不。9日,第3058 - 3049页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. d . Schmauss f . Rezaeian t . Finck h . g .麦臣r··维特斯坦和y困难,“二级烧伤创面治疗进展联系消耗系统评价的实验方法,”烧伤治疗与研究》杂志上,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. m . Tobalem y困难、f . Rezaeian和r·维特斯坦,“二次燃烧过程减少了促红细胞生成素,”危重病医学第41卷。。4、963 - 971年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. a·巴德·艾伯特,s Giri et al .,“皮肤再生和锥形的毛囊结构深度二级滚烫的伤害通过结合促红细胞生成素受体的表达和β共同受体纳米rhEPO局部皮下注射,”国际期刊的纳米7卷,第1237 - 1227页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2015娜塔莎Irrera et al。这是一个开放的访问分布在条知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。