来自脂肪组织衍生的间充质干细胞的调节培养基诱导CD4 + Foxp3 +细胞并增加IL-10分泌

摘要

间充质干细胞(MSCs)是一种新的、有前途的治疗自身免疫性疾病的工具。近年来对其参与调节免疫反应的可能性进行了讨论。MSCs实现免疫调节的确切机制尚不清楚，但可能与其他免疫调节细胞的相互作用参与了这一过程。研究MSCs对T辅助细胞FoxP3表达和细胞因子分泌的影响是本研究的目的。用磁选法从PBMCs中分离辅助T细胞，从人脂肪组织中分离MSCs，用MSCs条件培养基培养CD4+ T细胞。采用的方法包括流式细胞术、ELISA和人蛋白组分析试剂盒。结果表明，MSCs条件培养基中的分泌因子导致T辅助剂诱导FoxP3表达增加，IL-10分泌增加。这些结果为我们讨论两种免疫调节细胞间的相互作用提供了机会:MSCs和FoxP3+ T辅助细胞。我们认为这种相互作用导致分泌IL-10的免疫抑制助手数量增加。MSCs的一些免疫抑制功能作用于T调节性细胞，我们认为MSCs分泌的IL-6参与了这一过程。

1.介绍

免疫调节过程对维持机体免疫稳态至关重要，深入了解这一过程的确切机制有助于更好、更有效地治疗自身免疫性疾病。免疫反应的调节是由许多细胞亚型和分泌因子完成的，在过去的几年里，很多注意力都集中在间充质干细胞(MSCs)的作用上[1-3.］.众多论文报告了证明人体MSCs的重要免疫调节功能的数据。已经确定MSCs抑制T和B细胞的增殖，H₂O.₂从中性粒细胞，分泌免疫球蛋白，T和NK细胞毒性以及单核细胞分化成熟成树突状细胞。此外，MSCs引起的免疫抑制影响细胞因子的分泌，偏向Th2主导，分泌IL-10和IL-4，分泌IFNγ.和tnf.α.是抑制3.-7.］.MSCs免疫抑制作用的确切机制尚不清楚。分泌因子如IDO、IL-6、TGF的具体作用β， LIF, INOs, PGE2, HLA-G [3.那5.-8.]并讨论了MSCs与靶细胞直接接触的作用[9.那10.］.但是，除了MSCs的直接抑制作用的数据外，也有发表的一些间接抑制作用的数据，这些间接抑制作用是通过影响其他免疫调节细胞介导的。本实验室前期研究表明，MSCs可抑制单核细胞向树突状细胞分化，下调抗原提呈相关分子表达及CCL-3、CCL-4表达。这些实验表明，从脂肪组织分离的MSCs (AT-MSCs)比从人骨髓分离的MSCs (BM-MSCs)的作用更强[11.］.MSCs的一些间接免疫抑制作用似乎是由于它们对通常称为Tregs的经典免疫调节CD4 + Foxp3 +细胞的影响。过去十年目睹了T监管细胞的想法的重大发展。以及分泌TGF的TH3细胞βTr1分泌IL-10[12.那13.]， CD4+CD25+ T淋巴细胞通过CTLA-4、TGF发挥免疫抑制作用β，和/或IL-10[14.-17.］.后来在细胞内转录因子Foxp3被鉴定为T调节群的更精确标记[18.-20.］.已经确定约2％的CD4 +细胞表达FOXP3 [18.]它与Treg的分化有关，并发挥直接的功能性免疫抑制作用[13.那17.那21.］.最近，CD25分子作为抑制亚群标记的作用引起了一些质疑。显然，CD127表面表达的缺失更准确地与FoxP3相关，甚至在CD25阴性细胞中也可以发现这一点[18.那22.那23.］.鉴定了甚至更多的患有系统性红斑狼疮（SLE）的患者CD4 + CD25 + Foxp3 +和CD4 + CD25-Foxp3 +细胞已鉴定出具有表达的免疫抑制性质的[24.那25.］.这就是Tregs更常用为CD4 + Foxp3 +的原因。通过CD4 + Foxp3 +细胞施加的免疫抑制的分子机制尚未鉴定，但它们非常明显，这些机制包括TGF的分泌β和/或IL-10 [12.那17.-19.］.

一些发表的数据似乎表明，在MSCs的影响下，CD4+FoxP3+细胞的数量增加，这些细胞产生免疫抑制因子IL-10，因此MSCs具有间接的免疫抑制作用[2那7.那9.那10.那26.］.

本研究的目的是分析AT-MSCs条件培养基对CD4+ T淋巴细胞亚群FoxP3分子表达和细胞因子分泌的影响。此外，还分析了AT-MSCs分泌的因子对CD4+ T淋巴细胞群变化的推测影响。

2.材料和方法

2.1。材料

采用静脉穿刺法采集12例健康志愿者的外周血，并在髋关节手术期间采集12例人体脂肪组织。在这两种情况下，根据该国的规定，样本都是在捐赠者签署知情同意书后采集的。

2.2。间充质干细胞

从脂肪组织中分离、培养间充质干细胞，并严格按照普遍接受的实验室协议和我们实验室制定的大部分协议进行表型研究[4.］.

２.３.条件培养基

在形成单层后，经胰蛋白酶EDTA（1 : 250）（PAA，奥地利）并在浓度为3–5×10的6孔板（第1代）中播种^4.细胞/井在DMEM培养基中添加10%胎牛血清和抗生素(PAA，奥地利)。每48小时更换一次培养基，培养细胞至融合度达到80%。最后一次更换培养基后，将80%汇合的细胞进一步培养48小时，收集指定为“条件AT-MSC培养基”的培养基。因此，条件化的AT-MSC培养基含有DMEM、胎牛血清和未激活的AT-MSC分泌的任何因子。在12个独立的实验中，严格遵循这一程序，从12个个体供体和上述获得的12个不同条件培养基样本中分离和纯化T细胞。

2.4。T辅助淋巴细胞的分离

采用密度梯度离心法(Ficoll-Paque PLUS, GE Healthcare)从外周血中分离出PBMCs(外周血单核细胞)。将分离的细胞用MACS试剂盒(Miltenyi Biotec, bergishi - gladbach, Germany)磁性分离纯化CD4+ T淋巴细胞。首先，通过抗CD14-微珠的阳性选择从PBMCs中去除CD14+单核细胞，收集流过的部分。使用抗CD4-微珠从得到的CD14−细胞部分富集CD4+细胞，并通过流式细胞术进一步对富集的CD4+细胞部分进行表征，主要是关于CD3/CD4标记物的表达。

2．5．细胞培养

将分离的T助佣金（Th）在第一次培养48小时的第一通道中在条件培养基中培养48小时。控制T辅助细胞在补充有10％胎牛血清（Paa，奥地利）的DMEM低葡萄糖培养基中培养。将细胞浓度接种细胞/孔进入24孔板（Paa，奥地利）。

2.6。流式细胞仪

用单克隆抗体抗人CD3 FITC和抗人CD4 PE证明了纯化的T辅助群的均匀性。抗人CD4 FITC，抗人HLA-DR PE和抗人CD69 PE抗体用于评估活化标志物的CD4 + T淋巴细胞的表面表达，CD4 + T淋巴细胞在AT-MSC条件培养基中以及对照T助手中文化。使用CD4 PERCP-CY 5.5，抗人CD25 FITC，抗人FOXP3 PE和FOXP3缓冲液组成，进行表达表面CD25和细胞内FOXP3的T辅助细胞的鉴定。所有使用的抗体和机器（FacScalibur）购自美国加州加州北迪金森购物。

2.7. 酶联免疫吸附试验（ELISA）

用AT-MSCs条件培养基培养的Th淋巴细胞或对照Th细胞培养的上清以及AT-MSCs条件培养基样品检测IL-2、IFN的存在γ.严格制造商的指示，IL-10和人类即时ELISA（BENDER MEDSYSTEMS，奥地利）的TGFB。

2.8。蛋白质组分析器工具

使用Human Cytokine array panel A array kit (R&D Systems, MN, USA)分析AT-MSCs培养上清中的细胞因子，该试剂盒可检测36种不同的细胞因子、趋化因子和生长因子(C5a, CD40L, G-CSF, GM-CSF, GRO)α.，I-309，SICAM-1，IFNγ., il - 1α., il - 1β，IL-1ra，IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL-8，IL-10，IL-12 p70，IL-13，IL-16，IL-17，IL-17E，IL-23，IL-27，IL-32α.， ip-10, i-tac, McP-1, mif, mip-1α., MIP-1β，serpine1，RANTES，SDF-1，TNFα.TREM-1)。

目的是评估的任何迹象凋亡AT-MSCs CD4 + T细胞培养的条件培养基或CD4 +控制细胞蛋白质组分析器人类细胞凋亡工具包(研发系统、MN、美国)被用来作为这个测试能够建立细胞内的表达不好,伯灵顿,bcl - 2, Bcl-x, Pro-Caspase-3, Caspase-3裂解,过氧化氢酶,clap-1,Claspin, Clusterin, Cytochrome C, TRAIL R1/DR4, TRAIR R1/DR5, FADD, Fas/TNFSF6, HIF-1α.，HO-1 / HMOX1 / HPS32，HO-2 / HMOX2，HSP27，HSP60，HSP70，HTRA2 / OMI，LIVIN，PON2，P21 / CIP1 / CDNK1A，P27KIP1，磷光P53（S15），磷酸P53（S46），磷酸-P53（S392），磷酸-RAT17（S635），SMAC /暗黑破坏神，Survivin，TNF RI / TNFRSF1A，XIAP。

2.9。软件

程序CellQuest和WinMDI 2.9用于分析流式细胞术数据。Image J Program（NIH，Bethesda，MD，USA）用于分析人细胞因子阵列面板的结果A阵列试剂盒和蛋白质组分布者人凋亡试剂盒。

2.10。统计数据

使用配对的学生进行细胞因子浓度的统计分析T.-测试。数据显示为平均值±标准偏差（SD）。统计显着性成立于。

3.结果

3.1。在MSCs条件培养基中存在的分泌因子导致表达FOXP3的T辅助细胞的数量增加

我们的实验中随后的程序导致分离非常均匀的CD3 + CD4 + T辅助淋巴细胞（图1（a）和1（b））．在-MSCS条件培养基中培养这些细胞不会导致活化标志物CD69和HLA-DR的表达中的任何改变（数据未显示）。然而，条件培养基中的Th细胞的培养导致表达Foxp3的CD4 + T淋巴细胞的数量增加（图1（d）)与控制单元格中的相同参数进行比较(图1（c））．发现该效果对于CD25的表面表达和CD25的阴性助剂产生阳性，并记录在各个供体检测的所有样品中（表1）．因此，很明显，在-MSCs条件培养基中存在的一些分泌因子诱导转录因子Foxp3的特异性上调，所述转录因子Foxp3定义Treg亚泊素，无论CD25的表达如何。

3.2。在MSCs条件培养基中存在的分泌因子导致T辅助淋巴细胞的IL-10分泌的上调

对分泌的细胞因子的研究发现TGF的存在β在在-MSCS条件培养基中培养的CD4 + T细胞中的非常低的浓度并在所有案例中对CD4 + T中等样品进行控制（图2（a）). 未发现IFN浓度的统计显著差异γ.或在每个实验中的实验或对照样品中的IL-2，供体淋巴细胞的实验中（图2（b）和2（c））．与这些结果相比，在AT-MSCs条件培养液中培养的CD4+ T细胞的上清中检测到的IL-10浓度高于对照上清(图)2（d））．在MSC条件培养基中培养的所有病例中，记录了IL-10的这种增加的分泌。应该指出的是，AT-MSCS条件培养基本身不含任何IL-10，这使我们得到了地面，得出结论，在-MSCS条件培养基中培养的T佣金的T助剂的增加浓度是由于其分泌通过活化的TH淋巴细胞。

３．３．AT-MSCs条件培养液中分泌因子对辅助T淋巴细胞促凋亡因子和抗凋亡因子无明显影响

骨髓间充质干细胞改变辅助性T细胞的可能途径之一是影响凋亡过程，为了验证这种可能性，在相同的实验设计中检测了细胞内促凋亡或抗凋亡因子的存在和变化。然而，在AT-MSCs培养基中培养的Th细胞与对照细胞之间未发现显著差异（数据未显示）。

3.4. 在骨髓间充质干细胞条件培养基中含有一些趋化因子和IL-6

重复AT-MSC的条件培养基表明它含有多种趋化因子与T辅助细胞已知的效果，只是证明了免疫调节作用的单个细胞因子的测试。趋化因子是groα.， RANTES, Serpin E, IL-8和SDF-1，从细胞因子中发现IL-6在AT-MSCs条件培养基中浓度相当高。这些趋化因子和IL-6在对照培养基中浓度可忽略，这表明它们是由AT-MSCs分泌的(图)3.）．

4。讨论

得到的结果表明，当在MSC条件培养基中培养CD4 + T淋巴细胞的均匀群时，表达FOXP3的T助剂的百分比随着CD25 +和CD25-细胞亚群而增加。CD4 + CD25 + Foxp3 +细胞作为主要免疫抑制因子的作用是相当长的时间已知的。已经描述了这些细胞可以直接从胸腺发起，并且被称为天然（NTREGS），或者可以在周边细胞因子的影响下分化，并且称为诱导（ITREGS）[13.那19.那27.］.负责诱导ITREG的分化的主要细胞因子最可能是IL-2和TGFβ[28.]. 我们无法在AT-MSCs条件培养基中检测到这些细胞因子，但从CD4+CD25+FoxP3+的增加百分比来看，可以推测其他细胞因子可能参与了这一过程，如下所述。

进一步，我们的结果显示，在AT-MSCs条件培养基的影响下，最近描述的CD4+CD25−FoxP3+亚群的百分比也增加了。这些细胞在SLE患者中增加，被认为是CD25+细胞的祖细胞[24.］.在专业文献中讨论了不同的意见，因为一些作者表示一些怀疑这种亚贫困是自身免疫调节的[18.]但主流观点是CD25的表达独立，FoxP3本身发挥功能抑制作用[13.那17.那21.那29.］.基于这种假设，调节细胞更常用为CD4 + Foxp3 + [18.那19.］.通常接受CD4 + Foxp3 +细胞通过TGF的分泌表达其免疫抑制作用β和/或IL-10 [12.那15.那17.那18.]. 在我们的研究中，我们没有记录到TGF分泌增加β通过在MSC培养基中培养的CD4 + T淋巴细胞。这是很可能的是下在我们的实验中所用的实验设计该细胞因子被表示为在CD4 + T淋巴细胞的表面膜结合形式作为这种机构已为CD4 +的FoxP3 +细胞所述，并且仍然能够表达它的抑制影响 [14.那19.］.而在AT-MSCs条件培养液中，CD4+ T淋巴细胞分泌的IL-10显著增加。CD4+FoxP3+细胞分泌IL-10被认为是该细胞亚群发挥免疫抑制功能的最重要机制之一[30.那31.那31.]. IL-10是一种抗炎细胞因子，可抑制巨噬细胞和树突状细胞分泌促炎细胞因子[30.]. 它抑制Th17的活性[31.]血液单核细胞的分化为树突细胞[11.那30.]. 最重要的免疫调节作用之一是通过抑制B7复合物等对抗原呈递至关重要的分子，诱导树突状细胞产生耐受[11.］.此外，IL-10直接抑制Th表面CD28的表达，该分子是B7复合物的特异性配体。我们之前的研究结果表明，AT-MSCs上调单核树突状细胞IL-10的分泌[11.］.然而，在所描述的实验条件下，不能要求CD4 + Foxp3 +电池是IL-10的唯一来源，但是考虑到这些细胞的数量增加，因此增加了增加的致病联系CD4 + Foxp3 +细胞的数量和培养基中的IL-10的增加浓度。它可进一步推测，AT-MSC的影响下条件培养基CD4 +的FoxP3 +细胞的数量分泌IL-10的增加，并且这可能导致共刺激分子表达的抑制树突细胞和T的表面上助手是在T辅助细胞中诱导盲肠的最重要条件。因此，与免疫抑制的其他机制一起AT-MSC的实现通过影响其它免疫调节细胞，例如树突状细胞和CD4 +的FoxP3 +淋巴细胞的间接免疫抑制（图4.）．AT-MSCs通过CD4 + Foxp3 + T细胞诱导IL-10的分泌。该细胞因子抑制抗原呈递关键分子的表达，并且该过程导致T淋巴细胞的盲肠。可以推测由AT-MSCs分泌的IL-6是负责这种效果的关键元件之一。

众所周知，与其抗炎作用平行，IL-10对树突细胞具有促凋亡效应，如前一篇论文所示[11.]. 目前的研究没有发现CD4细胞内促凋亡或抗凋亡因子的表达有任何变化+ 在AT-MSCs条件培养基中培养的T淋巴细胞。据报道，骨髓间充质干细胞通常通过细胞间的直接接触实现其免疫调节功能[6.]或者通过分泌细胞因子。

如上所述，我们的实验使用的是AT-MSCs条件培养基，这意味着观察到的效果是由于培养基中存在分泌因子。趋化因子如Groα.影响T淋巴细胞的趋化性的咆哮，衍生物E，IL-8和SDF-1存在于调节培养基样品中存在。因此，可以假设通过将T淋巴细胞作为该方法的第一步，开始通过募集T淋巴细胞来启动由AT-MSCS实现的免疫抑制过程。

在文献中报道了MSCs分泌的几种类型的分泌因子，可以影响CD4 + Foxp3 +细胞的形成，并且这些包括IDO，TGFβ，Inos，PGE2，HLA-G5，I-309，IL-10，IL-6 [6.-9.那31.］.

在我们的实验中，虽然我们搜索了TGF，但IL-6的存在仅记录在AT-MSC条件培养基的样本中β，I-309和IL-10。对此事实的可能解释是假设MSCs在被其他细胞因子刺激后分泌许多细胞因子[3.］.因此，在IFN刺激后γ.MSCs分泌I-309，在其一侧诱导treg的形成[8.]而直接接触和IL-10分泌在诱导HLA-G5分泌中起着关键作用，两者的作用相同[9.］.我们的结果表明，通过AT-MSCs的IL-6分泌不需要这样的诱导。IL-6的普遍接受的观点认为，它是一种促炎细胞因子，其在抑制Tregs和Th17免疫反应的刺激中具有作用[18.那32.]. 然而，其他数据认为，由于IL-6具有免疫抑制活性，因此应重新评估其功能。IL-6引起IL-10分泌增加，并可发挥抗凋亡活性[7.那33.］.据报道，MSCs分泌高水平的IL-6，并且这种分泌直接与T细胞的抑制相关，抑制树突细胞的分化，以及抑制促炎细胞因子的分泌[34.］.类似地，IL-6通过通过自分割机制作用的MSC增加了其他免疫抑制因子的分泌，例如INOS和PGE2 [35.[还直接导致新描述的CD8 + Foxp3 +免疫调节细胞的数量增加[29.那36.］.IL-6的许多活动提到地讨论其作为抗炎细胞因子的作用。与上述数据和我们自己的结果一致，可以推测，在IL-6的影响下，在非刺激的AT-MSCs分泌的IL-10分泌的CD4 + FoxP3 +细胞的数量增加，因此在-MSCS实现一个通过Tregs间接免疫抑制作用。真的不应该声称IL-6是该过程中唯一的一个细胞因子，因为调节CD4 + Foxp3 +细胞功能的大多数因素尚未在我们的实验中进行测试。最重要的是MSCs分泌免疫抑制因子的细胞因子诱导以及与随后的HLA-G5分泌的直接细胞对细胞接触是高度的。我们实验室的先前结果显示了在MSC的细胞质中存在HLA-G5 [37.由于在几篇论文中描述了该分子关于Tregs细胞的影响[1那5.-7.］.

5.结论

总之，得到的结果表明，在通过AT-MSCs分泌的因子的影响下，增加CD4 + Foxp3 +淋巴细胞的数量，并且在纯化的CD4 + T细胞群中上调IL-10的分泌。可以假设IL-6的存在对于该过程非常重要。MSCs对FoxP3 +细胞的类似效果并在其他论文中描述了IL-10的分泌[2那6.-9.]但骨髓间充质干细胞和脐带间充质干细胞已被使用，并与异质性PBMC细胞混合物共培养。我们实验的原始特征是使用AT-MSCs条件培养基和均匀的CD4+T淋巴细胞群。在这些条件下，没有可能通过其他细胞类型激活AT-MSCs的直接细胞间接触，并且观察到AT-MSCs“自然”或“被动”分泌细胞因子及其对纯化的T辅助细胞的影响。

参考

1. P. Fiorina, M. Jurewicz, A. Augello等，“实验性自身免疫性1型糖尿病中骨髓间充质干细胞的免疫调节功能”，免疫学杂志，卷。183，没有。2，pp。993-1004,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
2. Y.刘，R.Mu，S. Wang等，“人脐带间充质干细胞的治疗潜力在治疗类风湿性关节炎”中，“关节炎研究与治疗，第12卷，第2期6, p. R210, 2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
3. Y. Shi，G. Hu，J. Su等人，“间充质干细胞：免疫抑制和组织修复的新策略”细胞研究，第20卷，第2期。5，页510-518,2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
4. I. Bochev, G. Elmadjian, D. Kyurkchiev等人，“来自人类骨髓或脂肪组织的间充质干细胞在体外不同地调节有丝分裂原刺激的b细胞免疫球蛋白的产生”，国际细胞生物学，第32卷，第4期，第384-393页，2008年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
5. F. Djouad，C. Bouffi，S. Ghannam，D.noël和C.Jorgensen，“间充质干细胞：风湿病的创新治疗工具。”自然评论，第5卷，第5期。7，第392-399页，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
6. E. Bassi, C. Aita, N. Camara，“多功能间充质间质细胞的免疫调节特性:我们的立场是什么?”世界干细胞杂志，卷。3，不。1，pp。1-8，2011年。视图:谷歌学术搜索
7. E.本ami，S.Berrih-Aknin和A. Miller，“间充质干细胞作为自身免疫疾病的免疫调节治疗策略”自身免疫综述，第10卷，第7期，第410-415页，2011年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
8. R. E. Newman, D. Yoo, M. A. LeRoux和A. Danilkovitch-Miagkova，《用间充质干细胞治疗炎症性疾病》，炎症和过敏，卷。8，不。2，pp。110-123，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
9. Z.Selmani，A. Naji，I. Zidi等，“人间充质干细胞的人白细胞抗原-G5分泌抑制T淋巴细胞和天然杀伤功能，并诱导CD4 + CD25HighfoxP3 +调节T细胞”干细胞，卷。26，不。1，pp。212-222,2008。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
10. Z是的，是的。王，H。Y谢和S。s郑，“大鼠间充质干细胞的免疫抑制作用：CD4+CD25+调节性T细胞的参与，”肝胆和胰腺疾病国际，第7卷，第6期，第608-6142008页。视图:谷歌学术搜索
11. E. Ivanova-Todorova，I. Bochev，M. Mourdjeva等，“脂肪组织衍生的间充质干细胞是与骨髓衍生的间充质干细胞相比的树突细胞分化的更有效的抑制剂”免疫学的信，卷。126，没有。1-2，第37-42,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
12. 邹伟，“调节性T细胞、肿瘤免疫与免疫治疗”，免疫学，第6卷，第4期，第295-307页，2006年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
13. L. R. Guerin, J. R. Prins, and S. a . Robertson，“妊娠期调节性t细胞和免疫耐受:不育治疗的新靶点?”人类繁殖更新，第15卷，第5期。5，第517-535页，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
14. D. Dieckmann, C. H. Bruett, H. Ploettner, M. B. Lutz，和G. Schuler，“人类CD4+CD25+调节性，接触依赖性T细胞诱导产生白介素1，接触依赖性1型调节性T细胞，”实验医学杂志，第196卷，第2期，第247-253页，2002年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
15. C. BaeCher-Allan，V.Viglietta和D.A.Hafler，“人CD4 + CD25 +调节T细胞”研讨会在免疫学，第16卷，第5期。2，页89-97,2004。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
16. T.L.Holm，J.Nielsen和M.H.Claesson，“CD4 + CD25 +调节T细胞：I.表型和生理学”，APMIS.，卷。112，没有。10，pp。629-641,2004。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
17. H. Jiang和L. Chess，“免疫调节中抑制T细胞亚群的综合观点”，临床研究杂志，第114卷，第9期，第1198-1208页，2004年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
18. D. A. Horwitz，“Systemicic Lupus红斑狼疮的监管T细胞：过去，现在和未来，”关节炎研究与治疗，卷。10，没有。6，p。227,2008。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
19. R. E.Cone和S. Bhowmick，“细胞因子和同情：控制调节性T细胞”，“国际干扰素，细胞因子和调解员研究，第2卷，第2期1，第41-47页，2010。视图:谷歌学术搜索
20. J.A. Bluestone，“宽容的机制”免疫审查，第241卷，第2期。1, pp. 5-19, 2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
21. A. Y. Rudensky，《调节性T细胞和Foxp3》免疫审查，第241卷，第2期。1，pp。260-268，2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
22. W刘，A。L普特南，Z。徐宇等人，“CD127表达与FoxP3和人类CD4+T细胞的抑制功能呈负相关，”实验医学杂志，卷。203，没有。7，pp。1701-1711,2006。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
23. “CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞表达Foxp3，抑制效应T细胞增殖，促进胃癌进展，”临床免疫学，卷。131，没有。1，pp。109-118，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
24. B.燕和Y.刘，“循环CD4 + CD25 -FOXP3 + T细胞的性质在全身性红斑狼疮患者中：一个小说假设”开放风湿病学杂志，第3卷，第22-24页，2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
25. D. A. Horwitz，“系统性红斑狼疮中神秘的CD4+CD25-Foxp3+细胞的身份”关节炎研究与治疗，第12卷，第2期1，p。101,2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
26. E. Gonzalez-Rey, P. Anderson, m.a. González, L. Rico, D. Büscher，和M. Delgado，“从脂肪组织中提取的人类成体干细胞可以防止实验性结肠炎和败血症，”肠胃，第58卷，第2期7, pp. 929-939, 2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
27. S. F. Ziegler和J. H. Buckner，“FOXP3与Treg/Th17分化的调控”，微生物和感染，卷。11，不。5，pp。594-598,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
28. M. a . de Lafaille和J. J. Lafaille，“自然的和适应性的Foxp3+调节性T细胞:更多的相同还是分工?”免疫，卷。30，没有。5，pp。626-635,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
29. T. Nakagawa，M. Tsuruoka，H. Ogura等，“IL-6积极调节体内Foxp3 + CD8 + T细胞”，“国际免疫学第22卷第2期2、文章编号dxp119, pp. 129 - 139,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
30. A. O'Garra和P. Vieira，“TH1细胞通过产生白细胞介素-10来控制自己，”免疫学，卷。7，不。6，pp。425-428,2007。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
31. Y.J. Heo，Y.B.Jo，H.J.H.H等，“IL-10抑制Th17细胞并促进了类风湿性关节炎患者的CD4 + T细胞群中的调节性T细胞”免疫学的信，第127卷，第2期，第150-156页，2010年。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
32. A.木村和T。Kishimoto，“IL-6：调节Treg/Th17平衡，”欧洲免疫学杂志，第40卷，第5期。第7页，1830-1835页，2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
33. A. Steensberg，C.P.Fischer，C.Keller，K.Møller和B.K.Papersen，“IL-6增强了人类的血浆IL-1RA，IL-10和皮质醇”美国生理内分泌代谢杂志，第285卷，第2期，第E433-E437页，2003年。视图:谷歌学术搜索
34. F. Djouad，L. M. Charbobnier，C.Bouffi等，“间充质干细胞通过白细胞介素-6依赖性机制抑制树突细胞的分化”干细胞，第25卷，第2期8, pp. 2025-2032, 2007。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
35. C. Bouffi，C.Bony，G. Courties，C.Jorgensen和D.noël，间充质干细胞的IL-6依赖性PGE2分泌抑制实验性关节炎的局部炎症“普罗斯一体，第5卷，第5期。12、文章编号e14247, 2010。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
36. C. T. Mayer, S. Floess, A. M. Baru, K. Lahl, J. Huehn, and T. Sparwasser，“CD8+Foxp3+ T细胞与经典CD4+Foxp3+调节性T细胞具有共同的发育和表型特征，但缺乏有效的抑制活性，”欧洲免疫学杂志号，第41卷。3, pp. 716-725, 2011。视图:出版商网站|谷歌学术搜索
37. E.Ivanova-todorova，M. Mourdjeva，D.Kyurkchiev等，“HLA-G表达是由孕酮在间充质干细胞中调节的”，“美国生殖免疫学杂志，卷。62，没有。1，pp。24-33,2009。视图:出版商网站|谷歌学术搜索

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